Bu protokol sentetik idrar ve insan serumlarında sıtma önleyici primaquine (PMQ) tespiti için yeni bir kolorimetrik yöntemi açıklar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Anti-sıtma Primaquine UV-Vis ve Çıplak Göz Tayini için Optimize Griess Reaksiyon
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Primaquine (PMQ), önemli bir anti-sıtma ilaç, Dünya Sağlık Örgütü (WHO) tarafından P. vivax ve ovaleneden olduğu hayatı tehdit eden enfeksiyonların tedavisi için tavsiye edilmiştir. Ancak, PMQ glukoz-6-fosfat dehidrogenaz (G6PD) eksikliği olan hastalarda akut hemoloz yol istenmeyen yan etkileri vardır. Dozaj takibi amacıyla PMQ tayini için basit ve güvenilir yöntemler geliştirilmesi gerekmektedir. 2019'un başlarında, PMQ kolorimetrik nicelleştirme için UV-Vis ve çıplak gözle dayalı bir yaklaşım bildirdik. Algılama, RENKLI azo ürünleri üretebilen PMQ ve aneninler arasındaki Griess benzeri reaksiyona dayanıyordu. Sentetik idrarda PMQ doğrudan ölçümü için algılama sınırı nanomolar aralığındadır. Ayrıca, bu yöntem klinik olarak ilgili konsantrasyonlarda insan serum örneklerinden PMQ nicelliği için büyük bir potansiyel göstermiştir. Bu protokolde, renkli azo ürünlerinin sentezi ve karakterizasyonu, reaktif hazırlığı ve PMQ tayini prosedürleri ile ilgili teknik detayları açıklayacağız.
Giriş
PMQ en önemli sıtma ilaçları biridir, bu nüks önlemek için bir doku şizontosit olarak değil, aynı zamanda hastalıkiletimikesmek için bir gametositocide olarak sadece çalışır 1,2,3,4. İntravasküler hemoliz PMQ ilgili yan etkilerinden biridir, G6PD bu eksik son derece ciddi hale gelir. Sıtma endemik bölgelerinde G6PD genetik bozukluğunun %3-30 arasında bir gen frekansı ile dünya çapında dağıtıldığı bilinmektedir. PMQ zayıflığının şiddeti G6PD eksikliğinin derecesine ve pmq maruziyetinin dozuna ve süresine bağlıdır5....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. Renkli Azos Sentezi
- 25 mL yuvarlak alt şişede (RBF), anilin (0.1 mmol) ve primaquine bifosfatı (45.5 mg, 0.1 mmol) 10 mL H3PO4 çözeltisine (%5 v/v) çözünür. Bir buz banyosu Üzerinde RBF koyun, çözelti içine uygun boyutta bir karıştırma çubuğu ekleyin ve bir karıştırma plakası üzerinde RBF koyun.
NOT: Azo 3g sentezi için(Şekil 2),primaquine bifosfat 0.2 mmol kullanın. - NaNO2 (6.9 mg, 0.1 mmol) 1 mL soğutulmuş su çözün ve daha sonra damla reaksiyon karışımı içine ekleyin. Buz banyosunu çıkarın ve reaksiyon karışımını oda sıcaklığında karıştırın. ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Tepkime koşullarını optimize etmek için(Şekil 2),Griess reaksiyonu ile PMQ ile çift için çeşitli anilinler kullanıldı. Farklı renklerde bir dizi azos elde ettik. Bu bir elektron bağış ikame ile anisiline UV-vis emilim spektrumunda bir kırmızı kayma neden olabilir bulunmuştur. Kuramsal hesaplamalar zamana bağımlı yoğunluk fonksiyonel teorisi (TD-DFT) ile yapılmıştır. Şekil 2A'dasunulduğu gibi, hesaplama sonucu ortalama %3,1 hata ile optik ölçümlerle iyi bir uyum .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Uygun PMQ ölçümü için kolorimetrik bir yöntem tanımladık. Potansiyel olarak en basit ve uygun maliyetli akım yöntemidir. Daha da önemlisi, bu yöntem herhangi bir ekipman kullanmadan çıplak gözle respq ölçümü sağlar.
PMQ algılama için optimize edilmiş Griess reaksiyonu 504 nm maksimum emilimi ile kırmızı renk azo üretebilir. Endojen biyomoleküllerin UV-vis emiliminin potansiyel etkisi sınırlıdır, böylece biyolojik sıvılarda PMQ'nun doğrudan ölçümü için söz veren yöntem dir. Sonuç olarak,0-.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların beyan etmek için hiçbir şeyi yok.
Teşekkürler
Yazarlar Çin Tıbbı Guangzhou Üniversitesi'nden Start-Up Hibe ve GZUCM gençlik bilimsel araştırma eğitim projesi (2019QNPY06) kabul. Ayrıca tesisleri desteklemek için Guangzhou Çin Tıbbı Üniversitesi Lingnan Tıbbi Araştırma Merkezi kabul ediyoruz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 4-Metoksiyanolin | Aladdin | K1709027 | |
| 2,4-Dimetoksiyanolin | Heowns | 10154207 | |
| 3,4-Dimetoksiyanilin | Bidepharm | BD21914 | |
| 4-Metilanilin | Adamas-beta | P1414526 | |
| 4-Nitroanilin | Macklin | C10191447 | |
| 96 kuyulu, Flat Botton | Labserv | ||
| Gaussian@16 yazılımı | Gaussian, Inc | Sürüm:x86-64 SSE4_2 etkin/Linux | |
| Hidroklorik asit | GCRF | 20180902 | |
| Marvin eskiz (yazılım) | CHEMAXON | ücretsiz sürüm: 15.6.29 | |
| Fosforik asit | Macklin | C10112815 | |
| Primaquine bisifosfat | 3A Kimyasalları | ||
| Sodyum nitrit | Alfa Aesar | 5006K18R | |
| Sülfonamidler | TCI (şangay) | GCPLO-BP | |
| Varioskan LUX Plaka okuyucu | Thermo Fisher | SkanIt Yazılımı 4.1 ile Birlikte Verilir |
Kaynaklar
- Fernando, D., Rodrigo, C., Rajapakse, S. Primaquine in vivax malaria: an update and review on management issues. Malar Journal. 10, 351(2011).
- Deng, C., et al. Large-....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
