Burada sunulan kemirgen gözlere biyolojik uzun süreli teslimat için ölümsüzleştirilmiş hücrelerin mikrokapsülasyonu bir polimer olarak aljinat kullanımı için bir protokoldür.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Fare Gözüne Biyolojik Teslim için Kapsüllü Hücre Teknolojisi
Bu makalede
Özet
Özet
Gözün arka kutbu hastalıkları için geliştirilmekte olan birçok mevcut tedavi biyolojiktir. Bu ilaçların sık sık uygulanması gerekir, genellikle intravitreal enjeksiyonları yoluyla. Tercih edilen biyolojik ifade kapsüllü hücreler yerel protein üretimi ve salınımı için bir araç haline gelmektedir (örneğin, uzun süreli ilaç teslimatyoluyla). Buna ek olarak, kapsülleme sistemleri besin, atık ve terapötik faktörlerin hücre içine ve dışarı difüzyon sağlayan geçirilebilir malzemeler kullanır. Bu konak bağışıklık yanıtı hücreleri maskeleme sırasında oluşur, konak bağışıklık sisteminin baskılanması için ihtiyaç kaçınarak. Bu protokol, mikrokapsüllemede polimer olarak aljinat kullanımını, elektrosprey yöntemi ile birleştiğinde mikrokapsülleme tekniği olarak tanımlar. ARPE-19 hücreleri, kendiliğinden ortaya çıkan insan RPE hücre hattı, yaşam boyu işlevselliği nedeniyle uzun vadeli hücre tedavisi deneylerde kullanılmıştır, ve kapsüllerin kapsülleme ve fare gözlerine teslimi için burada kullanılmaktadır. El yazması hücre mikrokapsülasyonu, kalite kontrolü ve oküler teslimat için adımları özetler.
Giriş
Hücre temelli tedaviler tıpta yaygın olarak uygulanan devrimci biyolojik teknikleri temsil eder. Son zamanlarda, onlar başarıyla nörodejeneratif hastalıkların tedavisinde uygulanmıştır, göz hastalıkları, ve kanser. Hücre tedavileri hücre protezinden ilaç dağıtımına kadar geniş bir alanı kapsamaktadır ve bu protokol ikincisine odaklanır. Biyobozunur aljinat mikrokapsüller (MC) bir dağıtım sistemi olarak etkinliğini göstermiştir, ve yaygın biyomedikal alanda kullanılmaktadır. Aljinat basit jelleşme işlemi, biyobozunurluk, mükemmel biyouyumluluk ve in vivo koşullar altında stabilite nedeniyle mikrokapsülasyon kullanılmıştır1,
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm deneyler, Göz Ve Görme Araştırmalarında Hayvanların Kullanımına İlişkin ARVO Bildirimi uyarınca gerçekleştirildi ve Güney Carolina Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi Tarafından 00399 protokolü altında onaylandı.
1. Hücre Kültürü
- İnsan retinapigment epitel hücreleri oluşturmak (ARPE-19) hücre hattı stably yayınlanan protokollere göre tercih edilen geni ifade14,15.
- Dulbecco'nun Modifiye Kartal Orta (DMEM)%10 fetal sığır serumu (FBS) ile desteklenen hücreleri koruyun.
- Hücreleri 37 °C ve %5 CO2'dekuluçkaya yatırın.
- Orta yı 2-3 günde ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
ARPE-19 hücreleri kapsüllerin göze yerleştirilmesi üzerine kapsülleme ve uzun süreli sağkalım için uygun olduğu gösterilmiştir bir spontan ölümsüzleştirilmiş insan RPE hücre hattı vardır. Aljinat kapsülleme araçları Şekil 1'degösterilmiştir. Bu çalışmada aljinat kapsüllerinin kapsüllenmesi üzerine aljinit kapsüllü hücrelerin parlak alan görüntüleme ile doğrulanmış olduğu gösterilmiştir(Şekil 2A
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu hücre kapsülleme tekniği nispeten hızlı ve gerçekleştirmek kolaydır; ancak, doğru downstream sonuçları elde etmek için bazı noktalar akılda tutulmalıdır. Hücreler kapsülleme den önce bir Petri kabında kültür de muhafaza edilmeli ve uygun bir araya tutulmalıdır. Kapsülleme, mümkünse düzenlenmiş hava akışı ile uygun bir havalandırma kaputunda yapılmalıdır. Çok güçlü bir hava akımı kapsül oluşumunu etkileyebilir, özellikle uzun vadeli deneylerde. Steril gereçler ve çözümler kapsül içindeki hücrelerin uzun süreli bakımı i.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarları beyan.
Teşekkürler
Çalışma kısmen Ulusal Sağlık Enstitüleri (R01EY019320), Gazi İşleri Bakanlığı (RX000444 ve BX003050) ve Güney Carolina SmartState Vakfı tarafından B.R.'ye verilen hibelerle desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 3 mL Şırınga | BD | 309656 | |
| 30 G 1 "Künt iğne | SAI İnfüzyon teknolojisi | B30-100 | |
| Kahverengi alglerden aljinik asit sodyum tuzu | Sigma | A0682 | |
| Atropin Sülfat Oftalmolik çözelti (% 1) | Akorn | NDC 17478-215-15 | öğrenci dilatasyonu için |
| BD 1 mL Şırınga 26 G x 3/8 (0,45 mm x 10 mm) | Becton, Dickinson ve Şirket | DG518105 500029609 REF 309625 | kılavuz deliği oluşturmak için |
| Kalsiyum klorür, Susuz, granül | Sigma | C1016 | |
| GenTeal Gözyaşları | Alcon | NDC 0078-0429-47 | anestezi sırasında gözleri yağlamak için |
| Goniotaire: Hipromelloz (%2,5) Oftalmolik Yatıştırıcı Çözelti (Steril) | Altaire İlaç A.Ş. | Anestezi sırasında gözleri yağlamak için | NDC 59390-182-13 |
| Hamilton İğne / şırınga Ucu: 27 G, Küçük Hub RN NDL, custum uzunluğu (12 mm), nokta stili 3, 6 / PK | Hamilton | 7803-01 | kapsüllerin intravitreal iletimi için |
| Hamilton Şırınga: 2.5 ve mikro; L, Model 62 RN SYR, NDL Ayrı Satılır | Kapsüllerin intravitreal iletimi için | Hamilton | 7632-01 |
| HEPES tamponu, 1 M | Fisher Bioreagents | BP299100 | |
| Yüksek gerilim jeneratörü | ESD EMC Teknolojisi | ES813-D20 | |
| CANLI/ÖLÜ Canlılık/Sitotoksisite Kiti | Thermofisher Scientific | L3224 | |
| L-Ornitin hidroklorür, %99 | Alfa Aesar | A12111 | |
| Neomisin ve Polimiksin B Sülfatlar ve Deksametazon Oftalmolik Merhem | SANDOZ | NDC 61314-631-36 | intravitreal enjeksiyon sonrası enfeksiyonu önlemek için antibiyotik |
| Fenolefrin Hidroklorür Oftalmolik Çözelti (% 2.5) | Akorn | NDC 17478-201-15 | öğrenci dilatasyonu için |
| Sodyum Klorür | Sigma | S-5886 | |
| Steril şırınga filtreler, 0.2 & mu; m | VWR | 28143-312 | |
| Şırınga pompası | GRASEBY | MS16A |
Kaynaklar
- Allen, T. M., Cullis, P. R. Drug delivery systems: entering the mainstream. Science. 303 (5665), 1818-1822 (2004).
- Tonnesen, H. H., Karlsen, J. Alginate in drug delivery systems. Drug Development and Industrial Pharmacy. 28 (6), 621-630 (2002).
- Vilos, C., Velasquez, L. A. <....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
