Bu protokol, Drosophila larva fototaktik davranışını araştırmak için ışık noktası bir test sunar. Bu testte, ışık stimülasyonu olarak bir ışık noktası oluşturulur ve larva ışıktan kaçınma işlemi kızılötesi ışık tabanlı görüntüleme sistemi tarafından kaydedilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Drosophila Larva Fototaksisanalizi için Hafif Nokta Tabanlı Tahlil
Bu makalede
Özet
Özet
Drosophila melanogaster larvaları, yem leme aşamasında açık ışıktan kaçınma davranışı gösterir. Drosophila larva fototaksiler hayvan kaçınma davranışı çalışma için bir model olarak kullanılabilir. Bu protokol larva fototaktik davranışını araştırmak için bir ışık noktası teşp. Deneysel kurulum iki ana bölümden oluşur: ışık noktasını oluşturan bir görsel stimülasyon sistemi ve larva ışıktan kaçınma işlemini kaydeden kızılötesi ışık tabanlı görüntüleme sistemi. Bu teşbit, larvanın ışık noktasını girmeden, karşılaşmadan önce ve ışık noktasından ayrıldıktan sonra izlenmesini sağlar. Yavaşlama, duraklama, baş dökümü ve tornalama gibi larva hareketinin ayrıntıları bu yöntemle yakalanabilir ve analiz edilebilir.
Giriş
Drosophila melanogaster larvaları, yem leme aşamasında açık ışıktan kaçınma davranışı gösterir. Drosophila larva fototaksis, özellikle son 50 yıl içinde1,2,3,4,5,6,7 soruşturma altında olmuştur ,8. Son yıllarda, 1) larva ışık kaçınma aracılık birçok nöronlar tespit edilmiştir olmasına rağmen4,5,9
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. Drosophila larvalarının hazırlanması
- Haşlanmış mısır unu (73 g), agar (5,6 g), soya küse (10 g), maya (17,3 g), şurup (76 mL) ve sudan (1000 mL) oluşan standart ortam hazırlayın.
- 12 h/12 h açık/koyu çevrimli bir odada standart ortamda tüm sinekleri 25 °C'de kaldırın.
2. Agar plakalarının hazırlanması
- %1.0 agar çözeltisi hazırlayın. Bir denge ile 500 mL beher agar 3 g tartın, sonra distile su 300 mL ekleyin. Suyun buharlaşmasını önlemek için kırıcının üzerine folyo bir kağıt yerleştirin. Kaynamaya bir mikrodalga içinde beher ısı.
- Kabı alın ve bir cam çubuk ile iyice karıştırın, sonra ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Protokole göre, ışık noktası teşbi, 12 h/12 h ışık/karanlık çevrimi olan bir odada standart ortamda 25 °C'de yükseltilen üçüncü yıldız larvasının ışık kaçınma davranışını araştırmak için kullanılmıştır. Tek bir w1118 larva sıcanda 25.5 °C'de ışık noktası testi kullanılarak test edilmiştir. 460 nm LED tarafından üretilen ışık noktasının ortalama ışık yoğunluğu 0,59 μW/cm2idi. Larva giriş ve ışık nokta çıkarken tüm süreç kaydedildi ve SOS yazılımı ve özel yazılı komut12
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu protokol, Drosophila larvalarının ışıktan kaçabilme yeteneğini test etmek için ışık noktası testini sunuyor. Bu teşbit, larvaların girilmeden önce, karşılaşma sırasında ve ışık noktasını terk ettikten sonra davranışlarının izlenmesini sağlar. Larva hareketinin ayrıntıları yakalanabilir ve analiz edilebilir. Işık nokta sıcazarlığı çok basittir ve güçlü pratiktedir. Tüm cihazın maliyeti yüksek değildir. Deneyde, LED ışığı ışık kaynağı olarak kullanılır. Gerekirse farklı dalga boylarındaki ışık kaynakları ile de.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.
Teşekkürler
Bu çalışma Çin Doğa Bilimleri Vakfı (31671074) ve Zhejiang İl Üniversiteleri (2019XZZX003-12) için Temel Araştırma Fonları tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 850 nm ve artı; 3 nm kızılötesi ışık üreten LED | Thorlabs, ABD | PM100A | Uyumlu Sensörler: Fotodiyot ve Termal Optik Güç Aralığı: 100 pW - 200 W Mevcut Sensör Dalga Boyu Aralığı: 185 nm-25 μ m Ekran Yenileme Hızı: 20 Hz Bant genişliğia: DC-100 kHz Fotodiyot Sensör Aralığıb: 50 nA-5 mA Termopil Sensör Aralığıb: 1 mV-1 V |
| AC - DC dönüştürücü | Thorlabs, ABD | S120VC | Diyafram Boyutu: Ø 9,5 mm Dalga Boyu Aralığı: 200-1100 nm Güç Aralığı: 50 nW-50 mW Dedektör Tipi: Si Fotodiyot (UV Genişletilmiş) Doğrusallık: ± %0,5 Ölçüm Belirsizliğic: ± % 3 (440-980 nm), ± % 5 (280-439 nm), ± %7 (200-279 nm, 981-1100 nm) |
| bant geçiren filtre | Thorlabs, ABD | DC2100 | LED Akım Aralığı: 0-2 A LED Akım Çözünürlüğü: 1 mA LED Akım Doğruluğu: ± 20 mA LED İleri Gerilim: 24 V Modülasyon Frekans Aralığı: 0-100 kHz Sinüs Dalgası Modülasyonu: İsteğe Bağlı |
| Kolimasyonlu LED mavi ışık | USBFHD01MÇözünürlük | : 1920X1080 F6.0 mm Sensör: 1/2.7" CMOS OV2710 | |
| Kompakt güç ölçer konsolu ve nbsp; | Ocean Optics, USA | USB2000+(RAD) | Boyutlar: 89.1 mm x 63.3 mm x 34.4 mm Ağırlık: 190 g Dedektör: Sony ILX511B (2048 elemanlı doğrusal silikon CCD dizisi) Dalga boyu aralığı: 200-850 nm Entegrasyon süresi: 1 ms – 65 saniye (tipik olarak 20 saniye) Dinamik aralık: 8,5 x 10^7 (sistem); Tek bir çekim için 1300:1 Sinyal-gürültü oranı: 250:1 (tam sinyal) Karanlık gürültü: 50 RMS sayım Izgara: 2 (250 – 800 nm) Yarık: SLIT-50 Dedektör toplama lensi: L2 Sipariş sıralama: OFLV-200-850 Optik çözünürlük: ~2.0 nm FWHM Dağınık ışık: < 600 nm'de %0,05; < 435 nm 'da %0,10 Fiber optik konektör: SMA 905 - 0,22 sayısal açıklık tek telli fiber |
| Yüksek Güçlü LED Sürücü | Minhongshi, Çin | MHS-48XY | Çalışma voltajı: DC12V Merkezi dalga boyu: 850nm |
| yüksek çözünürlüklü web kamerası | Thorlabs, ABD | MWWHL4 | Renk: Sıcak Beyaz İlişkili Renk Sıcaklığı: 3000 K Tipik LED Gücü için Test Akımı: 1000 mA Maksimum Akım (CW): 1000 mA Bant Genişliği (FWHM): N/A Elektrik Gücü: 3000 mW Görüş Açısı (Tam Açı): 120× Verici Boyutu: 1 mm x 1 mm Tipik Kullanım Ömrü: >50 000 h Çalışma Sıcaklığı (Yoğuşmasız): 0 ila 40 derece > C Depolama Sıcaklığı: -40 ila 70 ° C; C Risk Grubu: RG1 – Düşük Risk Grubu |
| LED Sıcak Beyaz | Mega-9, Çin | BP850 / 22K | & Oslash; 25.4 (+0 ~ -0.1) mm < br / > Bant genişliği: 22 artı; 3nm < br / > tepe geçirgenliği:% 80 < br / > Merkezi dalga boyu: 850nm ve plusmn; 3nm |
| Spektrometre | Noel Danjou | Amcap9.22 | AMCap gelişmiş önizleme ve kayıt özelliklerine sahip bir fotoğraf ve video yakalama uygulamasıdır. Windows 7 SP1 veya sonraki sürümleri çalıştıran bilgisayarlar için tasarlanmış bir Masaüstü uygulamasıdır. En Windows için Videove DirectShow uyumlu cihazlar, ucuz web kameraları veya gelişmiş video yakalama kartları olsun, desteklenir. |
| Standart fotodiyot güç sensörü | Super Dragon, Çin | YGY-122000 | Giriş: AC 100-240V ~ 50 / 60Hz 0.8A < br / > Çıkış: DC 12V 2A |
| Termal güç sensörü ve nbsp; | Thorlabs, ABD | M470L3-C1 | Renk: Mavi Nominal Dalga Boyu: 470 nm Bant genişliği (FWHM): 25 nm Maksimum Akım (CW): 1000 mA İleri Gerilim: 3.2 V Elektrik Gücü (Maks): 3200 mW Verici Boyutu: 1 mm x 1 mm Tipik Ömür: 100.000 h Çalışma Sıcaklığı (yoğuşmasız): 0 ila 40 ° C; C Depolama Sıcaklığı: -40 ila 70 ° C; C Risk Grubub: RG2 – Orta Risk |
| Grubu Termal güç sensörü | Thorlabs, ABD | S401C | Dalga boyu aralığı: 190 nm-20 μ m Optik güç aralığı: 10 μ W-1 W (3 Wb) < br / > Giriş açıklığı boyutu: Ø 10 mm Aktif dedektör alanı: 10 mm x 10 mm Maksimum optik güç yoğunluğu: 500 W/cm2 (Ort.) Doğrusallık: ± %0,5 |
Kaynaklar
- Grossfield, J. Geographic distribution and light-dependent behavior in Drosophila. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 68, 2669(1971).
- Godoy-Herrera, R. C. L. D. The behavi....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
