Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Migrastatik İnhibitörlerin 3Boyutlu Tümör Spheroid İnvazyonu Üzerine Etkilerinin Yüksek Çözünürlüklü Konfokal Mikroskopi Ile Karakterizasyonu

6.4K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/60273

⸱

16 Eylül 2019

 ,  , 
1School of Applied Sciences, University of Huddersfield, 2Laboratory of Radiotherapy and Experimental Radiation Oncology, Humbertus Wald Tumorzentrum, University Cancer Center Hamburg, University Medical Center Hamburg-Eppendorf

Bu makalede

Özet

Histon deasetilez (HDAC) inhibitörü kullanılarak yapılan üç boyutlu (3D) invazyon tahlillerinde migrastatik inhibitörlerin glioma kanser hücresi göçü üzerindeki etkileri yüksek çözünürlüklü konfokal mikroskopi ile karakterizedir.

Özet

Kanser araştırmalarında ilaç keşfi ve gelişimi giderek 3D formatında ilaç ekranları üzerinde kuruluyor. Kanser hücrelerinin göçmen ve invaziv potansiyelini ve dolayısıyla hastalığın metastatik yayılımını hedefleyen yeni inhibitörler, gliomas gibi yüksek invaziv kanserlerde keşfedilmekte ve tamamlayıcı tedaviler olarak kabul edilmektedir. Bu nedenle, bir ilacın eklenmesinden sonra 3Boyutlu bir ortamda hücrelerin ayrıntılı analizlerini sağlayan veri üretmek gereklidir. Burada açıklanan metodoloji, yüksek çözünürlüklü görüntü yakalama ve konfokal lazer tarama mikroskopisi (CLSM) ile veri analizi ile küresel invazyon tahlilleri birleştirerek, potansiyel anti-göçmen inhibitörü etkilerinin ayrıntılı karakterizasyonu sağladı Mi-192 glioma hücrelerinde. Sferoidler düşük yapışık 96-iyi plakalar invazyon tahlilleri için hücre hatlarından üretildi ve daha sonra CLSM analizi için hazırlandı. Açıklanan iş akışı, hem kolaylık hem de tekrarlanabilirlik nedeniyle yaygın olarak kullanılan küresel üretim tekniklerine göre tercih edilebildi. Konfokal mikroskopi ile elde edilen gelişmiş görüntü çözünürlüğü ile birlikte konvansiyonel geniş alan yaklaşımları, göçmen hücrelerdeki farklı morfolojik değişikliklerin tanımlanmasına ve analiz inanılmaktadır. migrastatik ilaç MI-192 ile tedavi.

Giriş

Preklinik ilaç keşfi ve potansiyel kanser ilaçlarının geliştirilmesi için üç boyutlu küresel teknolojiler giderek geleneksel ilaç ekranları üzerinde tercih edilmektedir; böylece, migrastatik daha fazla gelişme var - göç ve işgali önleme - uyuşturucu. Kanser tedavisindeki bu gelişmelerin ardındaki mantık açıktır: 3D küresel tahliller, 3D tümör mimarisini hücre monokatmanlı kültürlere göre daha sadık bir şekilde taklit ettikleri için potansiyel anti-kanser ilaçlarının taranması için daha gerçekçi bir yaklaşım dır. ilaç-tümör etkileşimlerini (kinetik) daha doğru bir şekilde özetler ve tümörle ilgili bir ortamda ilaç aktivitesinin karakterizasyonuna izin verir. Buna ek olarak, birçok kanser türünde kemotoksik ilaçlara karşı direncin artması ve kanser hücrelerinin uzak tümör bölgelerine göç etme yeteneği ile güçlü metastaz nedeniyle kanser hastaları arasında yüksek ölüm oranları kemoterapötik ajanların dahil edilmesini destekler gelecekteki klinik kanser çalışmalarında adjuvan tedavi olarak kanser hücrelerinin göç potansiyelini hedefleme1. Bu durum özellikle yüksek dereceli glioblastomlar (GBM) gibi yüksek invaziv kanserlerde geçerlidir. GBM yönetimi cerrahi, radyoterapi ve kemoterapi içerir. Ancak, kombinasyon tedavisi ile bile, çoğu hasta 11-15 ay ortanca sağkalım ile ilk tanı 1 yıl içinde nüks2,3. 3D teknolojisi alanında büyük gelişmeler son birkaç yıl içinde yapılmıştır: rotatif sistemler, mikrofabrikasif yapılar ve 3D iskeleler, ve diğer bireysel tahliller sürekli büyük ölçekli rutin test sağlamak için geliştirilmektedir4, 5,6,7. Ancak, veri yorumlama genellikle 2B görüntü analiz sistemleri ile 3D oluşturulan verileri analiz girişimleri tarafından engellenir, çünkü bu tahlillerden elde edilen sonuçlar anlamlı bir şekilde analiz edilmelidir.

Görüntü edinme hızı ve azaltılmış foto-toksisite açısından tercih edilmesine rağmen, en geniş alan sistemleri çözünürlük8ile sınırlı kalır. Bu nedenle, uyuşturucu etkinliğiyle ilgili veri okumalarının yanı sıra, geniş alan sistemi kullanılarak görüntülendiği takdirde, uyuşturucu eyleminin göç eden hücrelerin 3B hücresel yapıları üzerindeki ayrıntılı etkileri kaçınılmaz olarak kaybolmaktadır. Buna karşılık, confocal lazer tarama mikroskobu (CLSM) bilgisayar yazılımı kullanılarak 3D satın alma sonrası yeniden inşa edilebilir ve işlenebilir yüksek kaliteli, optik kesitli görüntüler yakalar. Böylece CLSM, kompleks 3D hücresel yapıların görüntülenmesi için kolayca uygulanabilir ve böylece anti-migrastatik inhibitörlerin 3Boyutlu yapılar üzerindeki etkilerinin sorgulanmasını ve hücre geçiş mekanizmalarının derinlemesine analizlerinin incelenmesini sağlar. Bu şüphesiz gelecekteki migrastatik ilaç gelişimine rehberlik edecektir. Burada, küresel nesil kombine bir iş akışı, ilaç tedavisi, boyama protokolü, ve yüksek çözünürlüklü konfokal mikroskopi ile karakterizasyon açıklanmıştır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

1. Hücre Spheroids Üretimi

1. Gün

  1. Araştırma altındaki hücre hattının gerektirdiği standart kültür ortamını hazırlayın.
  2. Steril işleme tekniklerini kullanarak doku kültürü ile ilişkili tüm adımları bir doku kültürü başlık yürütmek.
  3. Kanser hücrelerini deneyin ve sayın. Plaka başına 20 mL hücre süspansiyonu kullanın. Hücre süspansiyonlarını açıkça etiketli steril evrensel tüplerde tutun.
  4. Her kuyuya önceden belirlenmiş sayıda hücre ekleyin. Hem ilk hücre sayısı hem de gerekli olan nihai küresel boyut araştırılan hücre hattının çoğalma hızına bağlıdır.
    NOT: U251 ve KNS429,10,5 x 103 hücre/mL gibi glioma hücre hatları için 4 günlük kuluçkadan sonra mikroskobik olarak görünür bir sferoid (200 veya 800 m) üretecektir.
  5. Hücre kümelenmeönlemek için nazik inversiyon ile evrensel tüplerhücreleri resuspend. Pipet 96 kuyulu bir plakanın her kuyuya hücre süspansiyonunun 200°L.'si. Tüm kuyular gerekli değilse, buharlaşmayı önlemek için her boş kuyuya 200 μL 1x PBS eklemeniz tavsiye edilir.
  6. Hücreleri 37 °C'de normal bir kuvözde kuluçkaya yatırın.
    NOT: Glioma kanser hücre hatları gibi hücre hatları içinde spheroidler oluşturacak 24 saat. 3D hücresel mimari 72 saat için spheroid kuluçka tarafından oluşturmak için izin verir.

2. Gün

  1. Hücreleri 24 saat sonra parlak alan mikroskobu ile kontrol edin.
    NOT: Kurulan glioma kanser hücre hatları kolayca 24 saat içinde spheroids formu. Hasta kaynaklı glioma kanser hücre hatları kadar sürebilir 1-2 hafta.

2. Kollajen İstilası Tsası

3. Gün

  1. Buz üzerinde kollajen, 5x kültür orta, 1 M NaOH ve bir 20 mL tüp yerleştirin.
  2. Dikkatle ve yavaş yavaş soğutulmuş bir kültür tüpü içine soğuk kollajen 10.4 mL ekleyin. Kabarcıklar kaçının. Kollajen bu miktar bir 96-well plaka için yeterlidir. Yükseltme mümkündür, ancak her bir seferde plaka başına 20 mL tüp hazırlanması önerilir.
  3. Hafifçe soğuk steril 5x kültür orta 1,52 mL ekleyin. Kabarcıklar kaçının.
  4. Kullanımdan hemen önce, 72 μL soğuk steril 1 M NaOH ekleyin. Çözeltiyi buzda tut.
  5. Pipetleme yaparak hafifçe karıştırın. Kabarcıklar kaçının. Verimli karıştırma, ortamda bir renk değişimine (kırmızıdan turuncu-kırmızıya (pH 7.4) yol açar. Kullanıma kadar buz üzerinde karışımı bırakın.
  6. Önemli adım: 1. günde hazırlanan 96 kuyulu plakadan 190 μL supernatant'ı çıkarın. Kuyunun dibinde oluşan küreselleri rahatsız etmemek için çok dikkatli olun. Pipeti kuyunun ortasına değil, yan tarafına doğru bir açıyla kullanın.
  7. Kollajen karışımından 100 μL'yi her kuyuya hafifçe ekleyin. Herhangi bir küresel bozulmayı önlemek için, pipet kuyunun yan aşağı karışımı. Kabarcıklar kaçının. Polimerizasyonu değerlendirmek için kalan kollajen karışımını oda sıcaklığında 20 mL tüpte saklayın.
  8. Kollajen polimerize sağlamak için en az 10 dakika kuluçka plakası. Bir kılavuz olarak, kalan kollajen ayarlanmış ise, yarı katı ve sünger gibi olma, küresel ler inhibitör ile tedavi edilmesi için hazırız.
  9. Kültür ortamına 2x konsantrasyonunda ilaç veya inhibitörlerekleyin. Ortayı her kuyuya hafifçe ekleyin (kuyubaşına 100°L). Yine, pipet spheroid bozukluğu önlemek için kuyunun yan aşağı orta.
  10. İlaç aktivitesini değerlendirmek için her küresel spheroidi t = 0 h, 24 h, 48 h ve 72 h zamanlarında parlak alan mikroskobu ile gözlemleyin ve görüntüleyin. Sonra tabağı kuvöze geri ver.
    NOT: Hücre hattının invaziv davranışına bağlı olarak, orijinal küresel çekirdekten uzak göç 24 saat itibaren görülebilir.

3. Kollajen Gömülü Spheroidlerin ve Göçmen Hücrelerinin Konfokal Mikroskopi İçin Hazırlanması

  1. Plakayı bir doku kültürü başlığına yerleştirin ve süpernatantı (200 μL) yavaşça çıkarın. Yine, bu kollajen fişi ile müdahale edebilir gibi, küresel rahatsız ve kollajen dokunmaktan kaçınmak dikkat edin.
  2. Supernatant'ı 1x PBS'nin 100 μL'si ile değiştirin. Bu yıkama adım 3x tekrarlayın.
  3. Son yıkamayı çıkarın ve 1x PBS'de (kuyu başına 100°L) %4 formaldehit ile değiştirin.
    DİkKAT: Formaldehit potansiyel bir karsinojendir. Sağlık ve güvenlik yönergelerine uygun olarak özenle işleyebilir.
  4. 96 kuyulu plakayı bir laboratuvar bankına yerleştirin, folyo ile kaplayın ve oda sıcaklığında 24 saat bekletin.
  5. Formaldehiti dikkatlice çıkarın ve 1x PBS ile değiştirin. Bu 1x PBS yıkama 3x tekrarlayın.
  6. 1x PBS%0.1 Triton X-100 hazırlayın. 1x PBS yıkamayı çıkarın ve Triton X-100 çözeltisinin 100 μL'si ile değiştirin. Oda sıcaklığında 30 dakika kuluçka. Bu arada, 1x PBS ve% 0.05 yağsız süt tozu ile engelleme çözeltisi hazırlamak ve iyice karıştırın.
  7. Triton X-100'ü çıkarın ve 1x PBS ile 3x yıkayın. Her kuyuya 100 μL engelleme çözeltisi ekleyin ve 15 dakika kuluçkaya yatırın.
  8. Önceden belirlenmiş konsantrasyonda tampon engelleme gerekli birincil antikor seyreltmek. Burada, anti-fare IgG asetiltli tubulin antikor (1:100) kullanın.
  9. Santrifüj birincil antikor engelleme tampon karışımı için 5 dk 15,682 x g. Engelleme çözeltisini dikkatlice çıkarın ve her kuyuya süpernatant (25−50°L) ekleyin. 1 saat oda sıcaklığında karanlıkta kuluçka.
  10. Antikor solüsyonunu çıkarın ve 3x 1x PBS (kuyu başına 100°L) ile yıkayın.
  11. Herhangi bir ek floresan lekelere ek olarak, önerilen veya önceden belirlenmiş konsantrasyonda bloke edici tampon ikincil antikor seyreltin. Burada, actin boyama için 1:500 anti-fare florofor-488 konjuge antikor, phalloidin-594 (1:500) ve DNA lekesi (DAPI) kullanın.
  12. Yine, 13.000 rpm 5 dakika için ikincil antikor çözeltisi santrifüj.
  13. Her kuyudan blokaj çözeltisini çıkarın ve ikincil antikor/phalloidin/DAPI karışımından 25−50 μL ekleyin. Oda sıcaklığında 1,5 saat karanlıkta kuluçka.
  14. İkincil antikor boya çözeltisi çıkarın ve 1x PBS (kuyu başına 100 μL) ile 3x yıkayın.
  15. Yüksek kaliteli düz cam kaydırak merkezine plastik pipet (200 μL) ile emme ile bireysel kollajen fişleri dikkatlice kaldırın.
  16. Kollajen fişe uygun bir montaj antünün bir damlasını ekleyin, fişin tamamen kapalı olmasını sağlar. Kabarcıklar kaçının.
  17. Görüntüleme için kullanılacak ve bir gecede ayarlanabilmesine izin verecek olan mikroskop hedefi için en uygun kalınlıkta kapak kaymasını uygulayın. Slaytları karanlıkta oda sıcaklığında saklayın.

4. Floresan Mikroskopisi

  1. Uygun bir konfokal mikroskop kullanarak floresan görüntüleri yakalayın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Üç boyutlu küresel teknoloji kansere özgü ortamın daha fazla temsilcisi olduğu için ilaç-tümör etkileşimleri anlayışı nı ilerletmektedir. Küresel lerin üretimi çeşitli şekillerde elde edilebilir; bu protokolde düşük yapışma 96-kuyu plakaları kullanılmıştır. Farklı üreticilerin çeşitli ürünleri test ettikten sonra, burada kullanılan plakalar sürekli başarılı küresel üretim ve tekdüzelik açısından en iyi performans çünkü seçildi. Büyüme ortamının kollajen matrisle değiştirildiği değiştirme ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Yüksek çözünürlüklü konfokal mikroskopi kullanarak migrastatik ilaç aktivitesinin belirlenmesi için kanser hücresi küresel oluşturmak için yeni bir yol açıklanmıştır. Diğer teknikler üzerinde düşük yapışkan plakaların kullanımı, bu tür damla asılı15, kollajen göç ve istila tahlilleri kullanılmak üzere tekrarlanabilir ve tek tip sferoidler üreten bir araç kolaylaştırmıştır. Bu protokoldeki kritik noktalar, kollajen matrisine hücre küresel katıştırma işleminden önce 96 kuyulu plakadan büyüme ortamın...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan etmezler.

Teşekkürler

Profesör Chris Jones'a KNS42 hücre hattına katkıda bulunanlara teşekkür ederiz. Bu çalışmada kullanılan AiryScan ile Zeiss LSM880 konfokal mikroskobu Huddersfield Yenilik ve Kuluçka Projesi (HIIP) Leeds City Region Enterprise Partnership (LEP) Büyüme Anlaşması ile finanse bir parçasıdır. Mikroskop görüntüsü için Kredi Şekil 3: Carl Zeiss Mikscopy GmbH, microscopy@zeiss.com.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Kollajen I, sıçan kuyruğu, gliomaCorning354236; Bu, birçok distribütör / üretici tarafından sunulmaktadır ve hem amaçlanan test türü hem de kullanılan hücre hatları için belirlenmesi gerekecektir. Glioma kanseri hücre hatları için Kollajen sıçan kuyruğu tip 1 (örneğin Corning) tercih edilen seçimdir. Kollajen 4 ° C'de saklanmalıdır; C, karanlıkta, gerekene kadar. Polimerize kollajenin kıvamını etkileyebileceğinden, kollajenin farklı partilerden karıştırılması tavsiye edilmez.    
Glioma
DMEM tozuSigmaD5648;   Bu, toz halinde satın alınabilir, çift damıtılmış suda yapılabilir ve büyüme ortamının nihai bileşimine bağlı olarak, gerekli herhangi bir katkı maddesi ile tamamlanabilir. Komple 5x çözelti bir şırınga filtre sisteminden (0.22 & mu; m) kullanmadan önce.
Glioma hücre hatlarının hücre kültürü için gereklifetal buzağı serumuSigmaF7524-500ML
Mikroskopi görüntüleme içinçeşitlicam slaytlar
Yüksek glikozlu DMEMGibco41965062glioma hücre hatlarının hücre kültürü için gereklidir
İnhibitörTocrisçeşitliçeşitli - deneysel tasarıma göre; inhibitörler Selleckchem ve Tocris gibi üreticilerden satın alınabilir. Bu üreticiler, inhibitör özelliklerinin ayrıntılı açıklamasını, ilgili referanslara bağlantılar ve çalışma konsantrasyonları önerilerini sunar. Tüm inhibitörlerde olduğu gibi, potansiyel olarak toksik olabilirler ve sağlık ve güvenlik yönergelerine göre ele alınmalıdırlar. İnhibitörler, üretici tarafından tavsiye edildiği şekilde stok çözeltileri olarak hazırlanır. Örnek olarak, bu tür inhibitörlerin kullanımını göstermek için migrastatik inhibitör MI-192'yi kullandık. Bu şekilde bir dizi migrastatik inhibitörü karşılaştırılabilir sonuçlarla test ettik.
Mikroskobik görüntüleme içinçeşitli
montaj NaOH (1 M)çeşitli çeşitliNaOH, gerekli molaritede satın alınabilir veya katı formdan hazırlanabilir. Hazırlanan çözelti, bir şırınga filtre sistemi kullanılarak filtre ile sterilize edilmelidir. Bir M NaOH aşındırıcıdır ve çözelti hazırlanırken dikkatli olunmalıdır.
Paraformaldehit sferoidleri ve hücreleri sabitlemek için çeşitli çeşitli; % 4'te makyaj yapın, sağlık tehlikesine dikkat edin, sağlık ve güvenlik düzenlemelerine uyulduğundan emin olun İstila testi için kollajen çözeltisi
Pastetler (dereceli pipet, 3 mL)istila testi içinçeşitliçeşitli
PBS, doku kültürü için sterilSigmaD1408-500ML & nbsp;  Glioma hücre hatlarının hücre kültürü için gereklidir ve boyama için yıkamalar
Kalem / strep (antibiyotikler)Glioma hücre hatlarının hücre kültürü için gerekliSigmaP4333
Birincil antikor, ikincil antikor, DAPI, Phalloidinçeşitlibureaktifler için birçok üretici vardır, ikincil etiketli antikorlar için Alexa Fluor (Moleküler Problar) öneririz. Burada primer antikorlar için fare anti-asetillenmiş tübülin antikoru (1/100, Abcam) kullandık. İkincil antikorlar için 1/500 anti-fare Alexa Fluor 488 konjuge antikor, Moleküler Problar kullandık. Nükleer leke için DAPI (birçok üretici) ve aktin boyası Phalloidin (birçok üretici) kullandık, her ikisi de önerilen 1/500 seyreltmede kullanıldı.
5x konsantrasyonda glioma invazyon testi için kollajen çözeltisi için gereklisodyum bikarbonatSigmaS5761
Sodyum piruvatSigmaP52805x konsantrasyonda glioma invazyon testi için kollajen çözeltisi
Tripsinizasyon için tripsinSigma T4049
Ultra düşük bağlantı plakalarıSigma / NuncCLS7007-24EAglioma invazyon testi için; İncelenen bileşiklerin büyük ölçekli taranmasına izin vermek için tercih edilen 96 oyuklu plakalar ile düşük yapışkan bir plaka gereklidir. Piyasada bulunan birkaç düşük yapışma plakası vardır; Optimum sferoid üretimi için çeşitli plakaların test edilmesi tavsiye edilir. Deneyimlerimize göre, kapaklı, yuvarlak tabanlı Costar Ultra Low Cluster, %100 sferoid oluşumu ve tekrarlanabilirlik açısından glioma kanser hücrelerinden sferoid üretimi için en iyi sonucu verir. Bu plaklar ayrıca laboratuvarımızda hasta kaynaklı materyal, mesane ve yumurtalık kanseri hücrelerinden glioma sferoidlerinin üretilmesi için başarıyla kullanılmıştır. Ek olarak, standartlaştırılmış nörosfer sferoidlerinin oluşumunu kolaylaştırmak için bu plakalarda kök veya progenitör nöroküreler kullanılabilir
Striptizler (serolojik pipetler, steril, 5 mL ve 10 mL)çeşitli, örneğin CostarCLS4488-50; Dokukültürü ve kollajen hazırlama için
Çeşitli çok kanallı (50 - 250 μ L) ve tek kanallı pipetler (10 μ L, 50 μ L, 200 μ L 1 mL)hücre ve sferoid kullanımı içinçeşitli
Geniş alan mikroskobuçeşitli sferoid oluşumunun ve sferoid görüntülemenin gözlemlenmesi için çeşitli; burada geniş alanlı floresan görüntüleri, bir EVOS FL hücre görüntüleme sistemi (Thermo Fisher Scientific) kullanılarak yakalandı.Plan
Apochromat 63x 1.4 NA yağ objektifi ile donatılmış Zeiss LSM 880 CLSMÜreticidenZeissConfocal görüntüler, Plan Apochromat 63x 1.4 NA yağ objektifi ile donatılmış bir Zeiss LSM 880 CLSM kullanılarak çekildi. Diyot 405nm, 458/488/514 nm argon multiline ve HeNe 594nm lazerler sırasıyla Phalloidin 594, Alexa Fluor 488 ve DAPI'yi uyarmak için kullanıldı. Her görüntü için tek bir temsili optik bölüm yakalandı ve hem görüntü yakalama öncesi hem de sonrası tüm ayarlar karşılaştırmalı amaçlar için korundu. Tüm görüntüler daha sonra ilgili Zen görüntüleme yazılımı ve Adobe Photoshop kullanılarak işlendi.
invazyon testi için 100 mg invazyon testi için kollajen çözeltisi için 5x konsantrasyonda gerekli olan mikroskopi görüntüleme için çeşitli lameller, çözelti çıkarma, CLS4487-50 teklifi

Kaynaklar

  1. Gandalovičová, A., et al. Migrastatics-anti-metastatic and anti-invasion drugs: promises and challenges. Trends in Cancer. 3 (6), 391-406 (2017).
  2. Delgado-López, P. D., Corrales-García, E. M. Survival in glioblastoma: a review on the impact of treatment modalities. Clinical and Translational Oncology. 18, 1062(2016).
  3. Foreman, P. M., et al. Oncolytic virotherapy for the treatment of malignant glioma. Neurotherapeutics. 14, 333(2017).
  4. Rodrigues, T., et al. Emerging tumor spheroids technologies for 3D in vitro cancer modelling. Pharmacology and Therapeutics Technologies. 184, 201-211 (2018).
  5. Sirenko, O., et al. High-content assays for characterizing the viability and morphology of 3D cancer spheroid cultures. Assay and Drug Development Technologies. 13 (7), Mary Ann Liebert, Inc. (2015).
  6. Wu, Q., et al. Bionic 3D spheroids biosensor chips for high-throughput and dynamic drug screening. Biomedical Microdevices. 20, 82(2018).
  7. Mosaad, E., Chambers, K. F., Futrega, K., Clements, J. A., Doran, M. R. The microwell-mesh: a high-throughput 3D prostate cancer spheroid and drug-testing platform. Scientific Reports. 8, 253(2018).
  8. Jonkman, J., Brown, C. M. Any way you slice it-a comparison of confocal microscopy techniques. Journal of Biomolecular Techniques. 26 (2), 54-65 (2015).
  9. Pontén, J. Neoplastic human glia cells in culture. Human Tumor Cells in Vitro. , Springer US. Boston. 175-206 (1975).
  10. Takeshita, I., et al. Characteristics of an established human glioma cell line, KNS-42. Neurologica Medico Chirurgica. 27 (7), 581-587 (1987).
  11. Bance, B., Seetharaman, S., Leduc, C., Boëda, B., Etienne-Manneville, S. Microtubule acetylation but not detyrosination promotes focal adhesion dynamics and cell migration. Journal of Cell Science. 132, (2019).
  12. Bacon, T., et al. Histone deacetylase 3 indirectly modulates tubulin acetylation. Biochemical Journal. 472, 367-377 (2015).
  13. Jackman, L., et al. Tackling infiltration in paediatric glioma using histone deacetylase inhibitors, a promising approach. Neuro-Oncology. 20, i19-i19 (2018).
  14. Bhandal, K., et al. Targeting glioma migration with the histone deacetylase inhibitor MI192. Neuro-Oncology. 19, i12-i12 (2017).
  15. Del Duca, D., Werbowetski-Ogilvie, T. E., Del Maestro, R. Spheroid preparation from hanging drops: characterization of a model of brain tumor invasion. Journal of Neuro-oncology. 67 (3), 295-303 (2004).
  16. Bender, B. F., Aijian, A. P., Garrell, R. L. Digital microfluidics for spheroid-based invasion assays. Lab on a Chip. 16 (8), 1505-1513 (2016).
  17. Vinci, M., et al. Advances in establishment and analysis of three dimensional tumor spheroid-based functional assays for target validation and drug evaluation. BMC Biology. 10, 29(2012).
  18. Härmä, V., et al. Quantification of dynamic morphological drug responses in 3D organotypic cell cultures by automated image analysis. PLOS ONE. 9 (5), e96426(2014).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

3B T m r SferoidiSferoid nvazyon AnaliziKollajen Polimerizasyonula Uygulama ProtokolH cre Morfoloji AnaliziMikrot b l AsetilasyonuGliom H cre HatlarY ksek z n rl kl G r nt leme
Migrastatik İnhibitörlerin 3Boyutlu Tümör Spheroid İnvazyonu Üzerine Etkilerinin Yüksek Çözünürlüklü Konfokal Mikroskopi Ile Karakterizasyonu
Bize ulaşın
Kütüphaneye tavsiye et

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Telif hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.