Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Sıçan Merkezi Sinir Sisteminde Antisense Oligonükleotidlerin İntinal Teslimi

18.8K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/60274

⸱

29 Ekim 2019

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Biogen, Inc., 2Ionis Pharmaceuticals

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Burada, omurganın lomber intratekal uzayına bir kateter yerleştirerek sıçan merkezi sinir sistemine ilaç teslim etmek için bir yöntem açıklıyoruz. Bu yöntem diğer terapötik yöntemlerin de teslimi için uygun olsa da, antisense oligonükleotidlerin teslimatına odaklanıyoruz.

Özet

Kan beyin bariyeri (BBB) merkezi sinir sistemi (CNS) içine kan potansiyel toksik veya patojenik ajanların girişine karşı önemli bir savunmadır. Ancak, varlığı da önemli ölçüde CNS için sistematik olarak yönetilen terapötik ajanların erişilebilirliğini düşürür. Bunun üstesinden gelmek için bir yöntem, beyin omurilik sıvısı (BOS) içine doğrudan bu ajanları enjekte etmektir, böylece BBB atlayarak. Bu bir ozmotik pompa kullanarak sürekli infüzyon için bir kateter implantasyonu yoluyla yapılabilir, ya da tek bolus teslimat için. Bu makalede, cns hedefleyen antisense oligonükleotidlerin (ASOs) yetişkin sıçan omurgasının kauda equina alanına doğrudan yerleştirilen bir kateter aracılığıyla teslimi için bir cerrahi protokol açıklanır. Temsili sonuçlar olarak, sıçan CNS'nin farklı bölgelerinde hedef RNA'yı devirmede bu kateterizasyon sistemi ile tek bir bolus ASO intratekal (BT) enjeksiyonunun etkinliğini gösteriyoruz. Prosedür güvenli, etkili ve pahalı ekipman veya cerrahi aletler gerektirmez. Burada açıklanan teknik, diğer yöntemlerde de ilaç teslim etmek için uyarlanabilir.

Giriş

Merkezi sinir sisteminin vasküler sistemi (CNS) homeostaz kritik bir düzenleyici olarak gelişti, moleküllerin trafiğini kontrol, besin temini ve atık kurtulmak. Bu sistem aynı zamanda endotel hücrelerinin duvarları boyunca sıkı kavşakların yoğun dağılımı sayesinde, dış patojenlerin saldırılarına karşı ilk savunma hattıdır. Bu sıkı kavşaklar kan beyin bariyerinin bir yönünü oluşturan (BBB). BBB besin ve enerji taleplerini karşılamak için gerekli moleküllerin taşınmasına izin verirken (örneğin, iyonlar, glikoz), aynı zamanda seçici olarak patojenlerin yanı sıra toksik kimyasalların geçişini de sınırlandırır1,2,3.

İronik olarak, bbb'nin patojenlerin ve toksik kimyasalların geçişini sınırlayan aynı koruyucu işlevi de, organizmaya sistemik uygulamadan sonra cns'ye terapötik tedaviler ile kolayca erişebilme yeteneğimizin önündeki en büyük engeldir2, 4,5. BBB'nin bu rolü, yeni uyuşturucu dağıtım teknolojilerinin bir bolluk ve yaklaşımlar bir bolluk gelişimini yol açmıştır6.

Bu engeli aşmak için bir yolu sürekli beyin ve omurilikhemde perfuses beyin omurilik sıvısı (BOS) içine doğrudan ilaç enjekteetmektir 7 ,8,9,10. Bu makalede, kateterin iç ucunu tamamen sıçan omurgasının kauda equina alanına yerleştirerek ajanları lomber intratekal alana başarılı bir şekilde teslim etme yöntemini açıklıyoruz. Bu prosedürün bir açıklaması daha önce Mazur ve ark. başka bir yerde11tarafından yayınlanmıştır .

Protokol çok etkilidir ve hedef gen knockdown8kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu (qPCR) analizi ile değerlendirildiğinde CNS'ye antisense oligonükleotid (ASO) teslimatının %90'dan daha büyük bir başarı oranı üretir. İşlem hayvanlar için en az rahatsızlığa neden olur, çünkü sıçanların %100'ü ameliyattan sağ kurtulur ve cerrahi yaranın etrafında en az şişlik ve herhangi bir sıkıntı belirtisi göstermez (örn. hiperaktivite, dehidratasyon, daire çizme, denge kaybı, gıda alımında azalma ve dehidratasyon) post-op gözlem sırasında. Burada açıklanan yöntemin bir diğer avantajı pahalı ekipman, ne de herhangi bir özel araçlar gerektirmez.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm in vivo prosedürleri Biogen Kurumsal Hayvan Kullanımı ve Bakım Komitesi (IACUC) onaylı protokoller altında laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımı için Amerika Birleşik Devletleri Ulusal Sağlık Enstitüleri kılavuzu tarafından belirlenen yönergeleri takip yapıldı.

1. Malzeme ve alet hazırlama

  1. Özel rehber kanüllerini hazırlayın.
    1. 19 G iğnenin iki ucunu kesmek için kesme tekerleği (veya keskin testere) olan bir döner alet kullanın ve bu da ~1,5−2 cm uzunluğundaki kılavuz kanülle sonuçlanır (Şekil 1Aiii). İki ucunu düzeltmek için döner aletin taşlama çarkını kullanın.
      NOT: Alternatif olarak, önceden yapılmış ve steril kılavuz kanüller ticari bir satıcıdan satın alınabilir (Malzeme Tablosu).
  2. Kateter/tel tertibatını hazırlayın.
    1. İntekkal kateter olarak hizmet vermek için 8 cm uzunluğunda bir PE-10 boru (polietilen boru, çap 0,011 inç) kesin. Etanol dirençli marker kalem ile bir ucundan 2 cm bir işaret yapın. Politetrafloroetilen kaplamalı paslanmaz çelik telden 11 cm uzunluğunda bir stylet telkesin. PE-10kateterinlüne stylet teli (Şekil 1Aii)yerleştirin (Şekil 1Ai).
      NOT: Her hayvan için bir kateter/tel montaj seti(Şekil 1Av)gereklidir. Alternatif olarak, kateterler ve stylet tellerticari bir satıcıdan satın alınabilir(Tablo Malzemeler).
  3. Teslimat kateter montajını hazırlayın.
    1. Pe-50 kateter (5−10 cm, polietilen boru, çapı 0,023 inç)(Şekil 1Bi)bir parça kesin. PE50 kateterin bir ucuna 23 G boru adaptörü(Şekil 1Biv)takın. Bu uç, ameliyat sırasında 100 μL'lik bir şırıngaya(Malzeme Tablosu)bağlanır. Göbek kesilmiş modifiye edilmiş 30 G iğneyi(Şekil 1Biii)yaklaşık 0,5 cm'lik PE-10 boru parçasına(Şekil 1Bii)yerleştirin ve PE-10 boruyu kateterin diğer ucuna bağlayın.
    2. Doğum kateter tertibatının 30 G iğne ucu(Şekil 1Bv)ameliyat sırasında sıçanda implante edilen PE-10 kateterin distal ucuna bağlanır.
      NOT: Alternatif olarak, teslimat kateter montajı(Şekil 1Bv)ticari bir satıcıdan(Malzeme Tablosu)satın alınabilir.
  4. Kılavuz kanül-iğne tertibatını(Şekil 1Avi)23 G iğnenin ucuna bir kılavuz kanül(Şekil 1Aiii)yerleştirerek hazırlayın.
  5. Kılavuz kanül ve tel/kateter setleri dahil olmak üzere tüm cerrahi aletleri 12 saat boyunca etilen oksit sterilizatörü kullanarak sterilize edin.
    NOT: Kateter dışındaki tüm cerrahi aletler otoklavlanabilir; kateter yüksek sıcaklıkta eriyecektir.

2. Cerrahi hazırlık

NOT: Bu işlem rutin olarak erkek ve dişi Sprague Dawley sıçanlarında vücut ağırlıkları 200 g ile 400 g arasında yapılır. İki sıçan, yiyecek ve suya ücretsiz erişim ile 12 saat açık / karanlık döngüsü altında kafes başına ev sahipliği vardır.

  1. Ağırlık bir sıçan ve anestezi ikna etmek için bir isofluran odasına yerleştirin (1−5% isofluran O2, etkisi titrated).
    NOT: Sıçan daha sonra sürekli işlem boyunca bir burun konisi ile derin anestezi korumak için isoflurane ile anestezi edilir. Alternatif anestezi yöntemi (örneğin, ketamin 100 mg/kg ve ksilazin 10 mg/kg) IACUC tarafından onaylanmış olarak kullanılabilir.
  2. Sıçan bir parmak sıkışma yanıt başarısız olduğunda, kaudal torasik omurga için kuyruk sırtını tıraş ve bir ısıtma yastığı üstüne koydu steril bir levha üzerine tıraş lı sıçan yerleştirin.
  3. Lomber bölgede omurgayı esnetmek için farenin karnının altına 50 ml'lik konik santrifüj tüpü yerleştirin(Şekil 2A) ve gözlere oftalmik merhem uygulayın.
  4. Enjekte sürekli salınım buprenorfin (1.0 mg/kg; Malzeme Tablosu) sıçanda deri altı. Alternatif povison ve alkol önlük ile maruz kalan cildi temizleyin ve bu üç kez tekrarlayın.
    NOT: Alternatif bir ağrı kesici IACUC protokolü tarafından onaylanmış olarak kullanılabilir.
  5. Cerrahi bölge üzerinde fenestrated olan steril şeffaf bir perde ile hayvan drape.

3. Cerrahi

  1. 50 mL konik tüp tarafından desteklenen fare ile, pelvis üzerindeki kaslar arasındaki iki doğal çukuru tanımlayın (Şekil 2A'dakioklar). Bir elinizbu çukurları tutarken, diğer elinizi kaudal yöne hafifçe basmak ve hissetmek için diğer elinizi kullanın ve omurlar arasındaki ilk büyük girintiyi bulmak ve bu S1 ve L6 omurları arasındaki intervertebral boşlukdur (Şekil 2B ).
  2. Bir sonraki girintiyi, L5 ve L6 omurları ile enjeksiyon bölgesi arasındaki intervertebral boşluğu (Şekil 2A'daki*) tanımlamak için hafifçe rostrally hareket ettirin. Enjeksiyon bölgesinin kesinin merkezinde olması için rostral'dan kaudal'a kadar orta hat boyunca deride en fazla 2 cm uzunluğunda bir kesi yapmak için neşter kullanın (Şekil 2A'dakinoktalı çizgi).
  3. Kas tabakasını görselleştirmek için bağ dokusunu parçalamak için diseksiyon makası kullanın. Sonra l6 lomber vertebra dorsal spinal süreci hemen lateral kas kapsülü 1 cm kesi olun.
    NOT: Bu noktada L6 lomber vertebra kemikleri görüntülenebilir.
  4. Kılavuz kanül-iğne tertibatını 6. İğne boyunca kılavuz kanülitini yerine itin ve 23 G iğneyi çıkarın ve sadece kılavuz kanülleri yerinde bırakarak.
    NOT: İğneyi takmadan önce L6 lomber vertebranın dorsal prosesini bulmak için künt forceps kullanmak faydalıdır. Genellikle, BOS sıvısı iğne göbeğine girerken görülebilir (bu sıvı bir kan parçasıyla karıncalanabilir, ancak bu zararın meydana geldiğini veya iğnenin doğru yerleştirilmediğini göstermez). Yazarlar bu işlem sırasında kan veya şiddetli kanama büyük miktarda görmedim. Herhangi bir durumda, uygun tedavi belirlemek için bir veteriner başvurulmalıdır ve hayvanlar ötenazi olmalıdır.
  5. Kateter teli tertibatını kılavuz kanüle takın. Kateter-tel tertibatını yaklaşık 45° açıyla omurilik kanalına doğru açılayın ve ucunu yaklaşık 0,3 cm'lik bir açıyla omurilik kanalına doğru zorlayın.
  6. Kılavuz kanülleri çıkarın, kateteri stylet teli ile yerinde bırakarak. Stylettelini kateterin intratekal ucundan yaklaşık 2,5 cm çıkarın ve 2 cm işareti kanalın girişinde (kas ın hemen altında görünür) Şekil 1Bvi'degösterildiği gibi olana kadar kateteri omurilik kanalına ilerletin.
    NOT: Eklenen kateter subaraknoid alana rostrally genişletmelidir. Başarılı yerleştirme bu alanda kateter serbest hareket için izin vermelidir.
  7. Stylet telini tamamen geri çekin ve BOS implante kateteri girerken görülebilir.
  8. Doğum kateter tertibatını 30 G iğne ucu ile implante edilen kateterin distal ucuna bağlayın(Şekil 1Bv,vi).
  9. 100 μL şırınga (şırınga yıkama) içine 60 μL steril salin yükleyin. Test bileşiğinin 30 μL'lik bir bolus'u (örn. ASO çözeltisi) ikinci bir şırıngaya (enjeksiyon şırıngası) yükleyin.
  10. Yıkama şırıngasını (tuzlu su yla yüklenmiş) dağıtım kateter tertibatının boru adaptörü ucuna bağlayın(Şekil 1Bv). İntertekal alana 20 μL steril salin enjekte edin (enjeksiyon öncesi yıkama).
  11. Enjeksiyon şırıngını (test bileşiği ile yüklenmiş) doğum kateter tertibatının boru adaptörü ucuna bağlayın(Şekil 1Bv). 30 s'nin üzerinde intratekal uzaya 30 μL test bileşiği enjekte edin.
    NOT: ASO'nun rutin enjeksiyon hacmi omurilikte ve kortekste iyi bir nakavt elde etmek için 30 μL'dir. Farklı enjeksiyon hacimleri test edilmemiş olsa da enjeksiyon hacimleri bileşik dağılım12etkileyebilir bildirilmiştir. Diğer bileşik veya hacim kullanılırsa, güvenlik ve etkinliğin ampirik olarak belirlenmesi gerekir.
  12. Adımı 3.10'u tekrarlayın ve kateteri 40 μL daha steril salin (enjeksiyon sonrası kızarma) ile yıkayın. Daha sonra doğum kateter tertibatını implante edilen kateterden ayırın.
    NOT: Enjeksiyon öncesi ve sonrası floş bileşiklerin lokal sekestrasyonunu azaltmak ve rostral yapılara dağılımlarını artırmak için düşünülmektedir12.
  13. Aseptik kesilmiş ve ısı mühür implante kateter: Onlar çok sıcak olana kadar bir boncuk sterilize sterilize bir çift steril diseksiyonu yerleştirin, sonra forceps sıcak ucu ile tüp aşağı kıskaç.
    NOT: Bu eylem kateteri eritir. Böylece, tüp delik çöker ve her iki taraf birbirine sopa, bir aseptik moda tüp mühürleme ve daha sonra deri altı uzaya yerleştirilir.
  14. Kalan ısı yalıtımlı kateteri bağ dokusuna sabitlemek için emilebilir monofilament sütürler kullanın. Daha sonra, cildi güvenli ısı yalıtımlı kateter üzerinde kapatmak için emilemez monofilament sütürler kullanın.
    NOT: Yara klipleri IACUC protokolü tarafından onaylandığı şekilde de kullanılabilir. Bu teknik, ellerimizde sadece bir kerelik enjeksiyonlar için kullanılmış olsa da tekrarlanan enjeksiyonlarla uyumludur. Tekrarlanan enjeksiyonların fizibilitesi IACUC onayı ile ampirik olarak değerlendirilmelidir.
  15. Deriden herhangi bir kan yıkamak için gazlı bez ve tuzlu kullanın ve mobil kadar ısıtılmış bir kuvöz anestezi kurtarmak için hayvan izin, hangi noktada kendi ev kafesi (kafes başına iki sıçan) döndürülür.
    NOT: Aynı gün birden fazla sıçanüzerinde ameliyat lar gerçekleştirirken, su kullanarak temiz aletler kan çıkarmak ve hayvanlar arasında ısıtmalı kuru boncuk sterilizatörü (en az 20 s, soğumasüresi ile) kullanarak yeniden sterilize. Her 5 hayvanda yeni bir alet seti kullanılır.
  16. Ameliyattan sonra hayvanları günlük olarak en az 3 gün boyunca takip edin ve IACUC protokolüne göre ameliyattan sonra her hafta hayvanları izlemeye devam edin.
    NOT: Herhangi bir komplikasyon (idrar tutma, kesi enfeksiyonları, nöbet veya felç gibi nörolojik bozukluk) meydana gelirse, uygun tedaviyi belirlemek ve hayvanların ötenazi yapılması gerekiyorsa bir veterinere başvurulmalıdır. Sürekli salınım lı buprenorfin kullanılmazise, Ameliyat sonrası IACUC protokolüne göre her gün ağrı kesici verilmelidir.

4. BT enjeksiyonu sonrası dokuya özgü nakavtın değerlendirilmesi

  1. Asos BT bolus enjeksiyonundan iki hafta sonra, beynin farklı bölgelerini (yani serebral korteks, striatum ve serebellum) ve omuriliğin farklı bölümlerini (yani servikal, torasik ve lomber) toplayın. Ticari bir RNA ekstraksiyon kiti kullanarak toplam doku RNA ayıklayın ve daha önce açıklandığı gibi cDNA sentez reaksiyonu gerçekleştirmek13.
    NOT: Standart reaktifler qPCR için aşağıdaki tahlillerle kullanılmıştır: sıçan Malat1 ve sıçan GAPDH. Bağıl transkript düzeyleri 2-ΔΔCT yöntemi(CT = eşik döngüsü) kullanılarak hesaplanmıştır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Burada açıklanan yöntemi kullanarak, iki grup yetişkin dişi sıçana (250−300 g; n = 10/grup) iki grup fosfat tamponlu salin PBS veya uzun kodlamaz (linc) RNA Malat1'i hedefleyen 300 μg aso enjekte ettik; Laboratuarımızda rutin bir araç bileşeni olarak Malat1 ASO kullanın, Malat1 her yerde ifade edilir çünkü ve tüm dokularda yüksek düzeyde14, beyin ve omurilik de dahil olmak üzere. Malat1 ASO, RNA'yı alçaltan ve yıkılmaya (KD) yol açan RNa1 aracılı mekanizma

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu makalede sıçan CNS doğrudan terapötik ajanlar sunmak için güçlü bir yöntem gösterir. Teorik olarak, benzer bir teknik farelerde de yapılabilir, ancak küçük boyutu nedeniyle, yöntem daha zor olabilir. Bu nedenle, grubumuz, farklı bir uygulama yolu ile aynı hedeflere ulaşan CNS ilaç teslimatı için farelerde intracerebroventricular (ICV) enjeksiyonları gerçekleştirmelidir. Bu yöntem başka bir çalışmada16tanımlanmıştır.

Burada açıklanan yöntemin avantajı pahalı ekipman, ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların hepsi Biogen, Inc. veya Ionis Pharmaceuticals'ın çalışanlarıdır. Yazarlar Ionis İlaç makalede açıklanan antisense oligonükleotidalırsınız.

Teşekkürler

Ionis Pharmaceuticals'a makalede açıklanan AsO'ları temin ettiği için teşekkür ederiz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
3M Steri-Drape Yapışkanlı Açıklıklı Küçük Örtü3M1020
%70 etanolDecon Laboratories, Inc8416-160Z
Alkollü çubuk çubuklarıDynarexNO 1204
BD Genel Kullanım Şırıngaları 1 mL Luer-Lok ucuBD1ml TB Luer-Lok ucuBD 302830
BD Intramedic PE BoruBDPolietilen boru PE50 Çap 0.023 BD427400 (10ft, Fischer Scientific 22-204008) veya 427401 (100ft, Fischer Scientific 14-170-12P)
BD Intramedic PE BoruBDPolietilen boru PE10 Çap 0.011 BD427410 (10ft, Fischer Scientific 14-170-11B) veya 4274011 (100ft, Fischer Scientific 14-170-12B)
BD Intramedic PE Boru AdaptörleriBD23 gauge intramedic luer saplama adaperBD 427565 veya Fisher Scientific 14-826-19E
BD PrecisionGlide Tek Kullanımlık İğneler 30GBDBD
Buprenorfin Sürekli Salım LaboratuvarıZooPharmReçetesi gerekli
Etilen oksit sterilizatörüAndersen Sterilizatör INC.AN 74i, gaz sterilizatörüAN 74i
Kılavuz kanülBD19G x 1 WT (1,1 mm x 25 mm) iğneBD 305186
Hamilton şırınga 100ulHamilton şirketiHamilton şırınga 100ul
Sıcak boncuk SterilizatörGüzel Bilim AraçlarıSTERILIZATÖR MODELNO FST 250
Oftalmik merhemDechra veterranery ürünü17033-211-38
Pocket Pro Pet DüzelticiBraintree ScientificCLP-9931 B
Povidone ovmaPDIS48050
TuzluBaxterSodyum Klorür% 0.9 İntravenöz İnfüzyon BP 50ml
FE1306G NeşterTüyütek kullanımlık neşterNo. 10
Küçük hayvan ısıtma yastığıK & H Üretim Modeli# 1060
Stile TelMcMaster-Carr1749T14LH-36233780
Cerrahi Havlu örtüDynarex4410
Cerrahi makas ve forsepsFST ve Fisher Scientific Sütürler
Ethicon4-0 veya 5-0
Kılavuz kanül yapmak içinalet GraingerDöner alet (Dremel)14H446 (Mfr: EZ456)
EZ kilit kesme Tekerlek1PKX5 (Mfr: 3000-1/24)
Taşlama Taşı, Alüminyum Oksit38EY44 (Mfr: EZ541GR)
EZ kilit Mandrel1PKX8 (Mfr: EZ402-01)
Elmas tekerlek zemin Karosu3DRN4 (Mfr: EZ545)
< > Bu prosedür için önceden hazırlanmış ve sterilize edilmiş malzemeler için alternatif kaynak
Dozaj kateter sistemiSAI İnfüzyon SistemleriRIDC-01
Kılavuz kanülSAI İnfüzyon SistemleriRIDC-GCA
Dahili KateterlerSAI İnfüzyon SistemleriRIDC-INC
Stile TelSAI İnfüzyon SistemleriRIDC-STY
305128

Kaynaklar

  1. Abbott, N. J. Dynamics of CNS barriers: evolution, differentiation, and modulation. Cellular and Molecular Neurobiology. 25 (1), 5-23 (2005).
  2. Greene, C., Campbell, M. Tight junction modulation of the blood brain barrier: CNS delivery of small molecules. Tissue Barriers. 4 (1), e1138017(2016).
  3. Daneman, R., Engelhardt, B. Brain barriers in health and disease. Neurobiology of Disease. 107, 1-3 (2017).
  4. Ballabh, P., Braun, A., Nedergaard, M. The blood-brain barrier: an overview: structure, regulation, and clinical implications. Neurobiology of Disease. 16 (1), 1-13 (2004).
  5. Cardoso, F. L., Brites, D., Brito, M. A. Looking at the blood-brain barrier: molecular anatomy and possible investigation approaches. Brain Research Reviews. 64 (2), 328-363 (2010).
  6. Larsen, J. M., Martin, D. R., Byrne, M. E. Recent advances in delivery through the blood-brain barrier. Current Topics in Medicinal Chemistry. 14 (9), 1148-1160 (2014).
  7. Brinker, T., Stopa, E., Morrison, J., Klinge, P. A new look at cerebrospinal fluid circulation. Fluids Barriers CNS. 11, 10(2014).
  8. Standifer, K. M., Chien, C. C., Wahlestedt, C., Brown, G. P., Pasternak, G. W. Selective loss of delta opioid analgesia and binding by antisense oligodeoxynucleotides to a delta opioid receptor. Neuron. 12 (4), 805-810 (1994).
  9. Wahlestedt, C., et al. Antisense oligodeoxynucleotides to NMDA-R1 receptor channel protect cortical neurons from excitotoxicity and reduce focal ischaemic infarctions. Nature. 363 (6426), 260-263 (1993).
  10. Wahlestedt, C., Pich, E. M., Koob, G. F., Yee, F., Heilig, M. Modulation of anxiety and neuropeptide Y-Y1 receptors by antisense oligodeoxynucleotides. Science. 259 (5094), 528-531 (1993).
  11. Mazur, C., et al. Development of a simple, rapid, and robust intrathecal catheterization method in the rat. Journal of Neuroscience Methods. 280, 36-46 (2017).
  12. Wolf, D. A., et al. Dynamic dual-isotope molecular imaging elucidates principles for optimizing intrathecal drug delivery. Journal of Clinical Investigation Insight. 1 (2), e85311(2016).
  13. Becker, L. A., et al. Therapeutic reduction of ataxin-2 extends lifespan and reduces pathology in TDP-43 mice. Nature. 544 (7650), 367-371 (2017).
  14. Zhang, X., Hamblin, M. H., Yin, K. J. The long noncoding RNA Malat1: Its physiological and pathophysiological functions. RNA Biology. 14 (12), 1705-1714 (2017).
  15. Crooke, S. T., Witztum, J. L., Bennett, C. F., Baker, B. F. RNA-Targeted Therapeutics. Cell Metabolism. 27 (4), 714-739 (2018).
  16. DeVos, S. L., Miller, T. M. Direct intraventricular delivery of drugs to the rodent central nervous system. Journal of Visualized Experiments. (75), e50326(2013).
  17. McCampbell, A., et al. Antisense oligonucleotides extend survival and reverse decrement in muscle response in ALS models. Journal of Clinical Investigation. 128 (8), 3558-3567 (2018).
  18. Schoch, K. M., Miller, T. M. Antisense Oligonucleotides: Translation from Mouse Models to Human Neurodegenerative Diseases. Neuron. 94 (6), 1056-1070 (2017).
  19. Lane, R. M., et al. Translating Antisense Technology into a Treatment for Huntington's Disease. Methods in Molecular Biology. 1780, 497-523 (2018).
  20. Wurster, C. D., Ludolph, A. C. Antisense oligonucleotides in neurological disorders. Therapeutic Advances in Neurological Disorders. 11, (2018).
  21. Haché, M., et al. Intrathecal Injections in Children With Spinal Muscular Atrophy: Nusinersen Clinical Trial Experience. Journal of Child Neurology. 31 (7), 899-906 (2016).
  22. Goodkey, K., Aslesh, T., Maruyama, R., Yokota, T. Nusinersen in the Treatment of Spinal Muscular Atrophy. Methods in Molecular Biology. 1828, 69-76 (2018).
  23. Wurster, C. D., Ludolph, A. C. Nusinersen for spinal muscular atrophy. Therapeutic Advances in Neurological Disorders. 11, (2018).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Kateter mplantasyonuSpinal Kanal EnjeksiyonuSerebrospinal S vS an Hastal k ModelleriFarmakokinetik De erlendirmeFarmakodinamik De erlendirmeTerap tik Etkinlik
Sıçan Merkezi Sinir Sisteminde Antisense Oligonükleotidlerin İntinal Teslimi
Bize ulaşın
Kütüphaneye tavsiye et

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Telif hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.