Burada insanlaşmış farelerde HIV enfeksiyonu dinamikleri incelenmesi için üç deneysel yaklaşımlar açıklanmıştır. İlk ivedi kronik enfeksiyon olaylarının incelenmesine izin vererken, ikincisi primer enfeksiyon veya viral reaktivasyon sonrası akut olayların incelenmesine izin verir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Humanized Immunoficient Mouse Modellerinde Kronik, Akut ve Yeniden Aktive HIV Enfeksiyonu
Bu makalede
Özet
Özet
Humanized NOD/SCID/IL-2 reseptör γ-chainnull fareler bulaşıcı hastalıklar üzerinde temel ve klinik öncesi araştırmalarda yararlanılabilir insan bağışıklığı, bazı özellikleri recapitulate. Burada açıklanan HIV enfeksiyonu dinamikleri incelemek için insanlaşmış immüneksik farelerin üç modeli vardır. Bunlardan ilki, yeni doğan farelerde CD34+ hematopoetik kök hücrelerin intrahepatik enjeksiyonuna dayanır, bu da birkaç kan ve lenfoid doku ile sınırlı hücrelerin yeniden yapılandırılmasına olanak sağlar ve bunu referans HIV türü ile enfeksiyon takip eder. Bu model enfeksiyon sonrası 36 haftaya kadar izlenmesine olanak sağlar ve bu nedenle kronik model olarak adlandırılır. İkinci ve üçüncü modeller, periferik kan mononükleer hücrelerinin erişkin farelere intraperitoneal enjekte edildiği akut ve reaktivasyon modelleri olarak adlandırılır. Akut modelde, sağlıklı bir donörden hücreler intraperitoneal yol ile engrafted, bir referans HIV suşu ile enfeksiyon takip. Son olarak, reaktivasyon modelinde, antiretroviral tedavi altında HIV ile enfekte donör hücreleri intraperitoneal rota ile engrafted. Bu durumda, fare bir ilaç içermeyen ortam virüs reaktivasyonu ve viral yük artışı sağlar. Burada sağlanan protokoller HIV enfeksiyonu insanlaşmış, immüneksik fare modelleri için geleneksel deneysel yaklaşım açıklar.
Giriş
Humanized NOD / SCID / interlökin (IL)-2 reseptör γ-chainnull (bundan böyle huNS γ-chainnullolarak anılacaktır) fare modeli yaygın enfeksiyonların patogenezi incelemek için kullanılmıştır, otoimmünite, ve kanser, yanı sıra ilaçların ve insan hücre tabanlı tedavilerin pre-klinik çalışmalar için1,2. Bu fareler, il-2 reseptör γ-chain locus (IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 ve IL-21 için ortak γ-chain) scid mutasyon ve hedeflenen mutasyon ile, obez olmayan bir diyabetik (NOD) arka plan dayanmaktadır, hangi fare T-, B-ve doğal katil gelişiminde ciddi bir bozulmaya neden (NK) hücreleri
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Bu çalışmada, Maryland Üniversitesi Tıp Fakültesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından incelenen ve onaylanan protokollere göre tüm hayvan bakımı ve prosedürleri gerçekleştirilmiştir (protokol numaraları 1018017, 1018018 ve 0318009).
1. İnsan CD34+ HSC yenidoğan farelerin engraftment
- Steril önlükler, eldivenler, özel ayakkabılar, ayakkabı kılıfları, maske, gözlük, saç/sakal kaputu ve steril laboratuvar önlükleri dahil olmak üzere her zaman tek kullanımlık kişisel koruma ekipmanı (PPE) kullanın.
- 1x 106 dondurulmuş CD34+ HSC'yi (malzeme tablosunabak....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Yukarıda açıklandığı gibi, 14 hafta post-HSC enjeksiyon (kronik model) veya 3 hafta post-PBMC enjeksiyon (akut ve reaktivasyon modelleri), fareler akış sitometri ile insan hücrelerinin engraftment düzeyini taramalar için kanayan vardır. 1) insan CD45+ hücrelerin yeniden yapılandırılması ve 2) CD4+ ve CD8+ T-hücrelerinin yüzdesi için temsili bir gating stratejisi Şekil 1A'dagösterilmiştir. Tipik olarak, engraftment düzeyi (insan CD45yüzde.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
İnsanlaşma için immünoeksik fare suşlarının geliştirilmesinde önemli ilerlemeler sağlanmıştır, araştırma ilgi1göre kullanılabilecek farklı seçenekler bir dizi ile. Burada ns γ-zincirnull fareler ve genetik olarak benzer suşları HIV enfeksiyonu eğitimi için üç farklı modelde istihdam edilecek insanlaşma için genel bir protokol sağlanan. İlk deneysel yaklaşımda, ışınlanmış yenidoğan fareler insan CD34ile enjekte edilir + HSCs, hangi kordon kanı elde edilebilir, fetal karaciğer,.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.
Teşekkürler
Bu çalışma JCZ Için IHV klinik bölümü iç fonlar tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 0. 5 ml Mikrosantrifüj tüpleri | Neptün | 3735.S.X | |
| 1. 5 ml Mikrosantrifüj tüpleri | Neptün | 3745.S.X | |
| 10 ml Serolojik pipetler | yıldız iskeleti | VL-4090-0010 | |
| 15 ml konik tüpler | Yıldız bilimsel | T15-600 | |
| 25 ml Serolojik pipetler | yıldız sceintific | VL-4090-0025 | |
| 5 ml Serolojik pipetler | stellar sceintific | VL-4090-0005 | |
| 50 ml konik tüpler | Stellar scientific | T50-600 | |
| ACK lizis tamponu | Kaliteli biyolojik | 118-156-101 | |
| Alkol hazırlama pedleri | Fisher scientific | 06-669-62 | Steril |
| Anti-İnsan CD3 klonu UCHT1 | Biolegend | 300439 | APC konjuge |
| Anti-İnsan CD4 klonu OKT4 | Biolegend | 317420 | AF488 konjuge |
| Anti-İnsan CD45 klonu 2D1 | Biolegend | 368522 | BV421 konjuge |
| Anti-İnsan CD8 klonu SK1 | Biolegend | 344710 | PerCP-Cy5.5 konjuge |
| Biosafaty kabini seviye 2 | Mümkünse, İzofluran ile işlem yapılırken bir exauste chimeny'ye bağlanır | ||
| Bonnet | Fisher scientific | 17-100-900 | Temel koruma için tek kullanımlık kapak |
| Cavicide | Metrex | 13-1000 | Yüzey dezenfektan |
| CD34+ hücreleri | Lonza | 2C-101 | Tek bir donörden çok sayıda flakon mevcut |
| Santrifüj | Beckman | 65-6KR | |
| Şeffaf kavanoz | Amazon | 77977 | |
| Pamuklu gazlı bez ped | Fisher scientific | 22-415-468 | Steril |
| Tek kullanımlık laboratuvar önlükleri | Fisher scientific | 19-472-422 | |
| EDTA mikro tüpler | Greiner bio-one | 450480 | |
| Yüz Maskesi | Fisher scientific | 17-100-897 | |
| FACS lizasyon solüsyonu | BD | 340202 | |
| FBS premium HI | Atlanta biyolojik | S1115OH | |
| Ficoll | GE health one | 17-1440-02 | |
| Akış sitometresi | FACS Aria II kullandık | ||
| Akış sitometri tüpleri | Falcon | 352054 | 5 ml polistiren ve yuvarlak tabanlı |
| HIV BaL | uQUANT çekirdek tesisimizde hazırlanmıştır | ||
| İnsan PBMC'leri | HIV pozitif ve negatif gönüllüler | ||
| Kızılötesi ısınma pedi | Venet scientific | DCT-25 | Küçük hayvanlar için geçici terapötik ısınma pedi |
| Isentress (Raltegravir) | Merck | NSC 0006-0227061 | İnsan immün yetmezlik virüsünü tedavi etmek için antiretroviral ilaç (HIV)-İntegraz inhibitörü |
| İzofluran | Henry Schein | NDC 11695-6776-2 | |
| Mark I ışınlayıcı | Ekipman Maryland | ||
| Mikro pipetler | |||
| Mikrosantrifüj Eppendorf | |||
| Fare kulak küpeleri | Ulusal Bant & Etiket şirketi | 1005-1L1 | |
| Natelson kan alma tüpleri | Fisher scientific | 02-668-10 | |
| NOG-EXL | Taconic | HSCFTL-13395-F | |
| NSG fareleri | Jackson | 5557 | CD34 aşılaması için zaman hamile kadınlar ve PBMC aşılaması için Juvenils |
| NSG-SGM3 | Jackson | 13062 | |
| Paraformaldehit% 16 | Elektron mikroskobu bilimleri | 15710 | |
| PBS 1X pH 7.4 | Gibco | 100-10-023 | |
| Petri kapları | Fisher scientific | 08-757-28 | |
| Quantistudio qPCR makinesi | Thermo | QS3 | |
| Reaktif rezervuarları | Costar | 4870 | |
| RPMI ortamı 1640 1X | Gibco | 11875-093 | |
| Ayakkabı Fisher | scientific | 17-100-911 | |
| Steril tek kullanımlık Eldivenler | Microflex | SUF-524 | |
| SuperScript II Birinci İplikli Sentez SuperMix | Invitrogen | 10080-400 | cDNA sentezi |
| Şırıngalar 28-G x 1/2 | BD | 329-461 | |
| Şırıngalar 29-G x 1/2 | BD | 324-702 | |
| Truvada (Emtricitabine ve Tenofovir | Gilead | NDC 61958-0701-1 | İnsan immün yetmezlik virüsü (HIV) -Nikleosid analog-transkriptaz inhibitörü tedavi etmek için antiretroviral ilaç |
| Tripan mavisi | Sigma | T8154 | Hücre sayısı ve canlılığı |
| Vick Vaporub | Okul sağlığı | 43214 | Mentol ve okaliptüs bazlı merhem |
| Su moleküler biyoloji sınıfı | Kalite biyolojik | 351-029-131 |
Kaynaklar
- Shultz, L. D., Ishikawa, F., Greiner, D. L. Humanized mice in translational biomedical research. Nature Reviews Immunology. 7, 118-130 (2007).
- Koboziev, I., et al. Use of humanized mice to study the pathogenesis of autoimmune and inflammatory....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
