Yöntem makalesi

Doğal Polifenol Curcumin Kullanarak Beyin Dokusunda Amiloid Plakların Etiketlenmesi ve Görüntülenmesi

DOI:

10.3791/60377

⸱

1 Kasım 2019

 ,  ,  ,  , 
1Field Neurosciences Institute, Ascension St. Mary's Hospital, 2Field Neurosciences Institute Laboratory for Restorative Neurology, Central Michigan University, 3Program in Neuroscience, Central Michigan University, 4Department of Psychology, Central Michigan University, 5Department of Health Sciences, Saginaw Valley State University

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kurkumin, amiloid beta proteinine tercihli bağlanması ve diğer geleneksel amiloid bağlayıcı boyalarla yapısal benzerlikleri nedeniyle beyin dokusundaki amiloid beta protein plaklarının etiketlenmesi ve görüntülenmesi için ideal bir florofordur. Amiloid beta protein plaklarını geleneksel yöntemlere göre daha verimli ve ucuz bir şekilde etiketlemek ve hayal etmek için kullanılabilir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Amiloid beta proteininin (Aβ) ekstra ve hücre içi alanlarda birikintisi Alzheimer hastalığının (AD) ayırt edici patolojilerinden biridir. Bu nedenle, AD beyin dokusunda Aβ varlığının tespiti AD ilerlemesini önlemek için yeni tedaviler geliştirmek için değerli bir araçtır. Ad beyin dokusunda Aβ histokimyasal olarak saptanmak için çeşitli klasik amiloid bağlayıcı boyalar, florokrom, görüntüleme probları ve Aβ'ya özgü antikorlar kullanılmıştır. Aβ tespiti için bu bileşiklerin kullanımı maliyetli ve zaman alıcıdır. Ancak, yoğun floresan aktivitesi, yüksek afinite ve Aβ özgüllüğü ve geleneksel amiloid bağlayıcı boyalar ile yapısal benzerlikler nedeniyle, curcumin (Cur) postmortem aβ plakların etiketlenmesi ve görüntülenmesi için umut verici bir adaydır beyin dokusu. Bu bitki Curcuma longadoğal bir polifenol olduğunu. Bu çalışmada Cur, 5x ailesel Alzheimer hastalığının genetik fare modeli (5xFAD) ve insan AD dokusundan bir dakika içinde aβ plaklarını histokimyasal olarak etiketlemek için kullanılmıştır. Cur'un etiketleme yeteneği, tioflavin-S (Thio-S), Kongo kırmızısı (CR) ve Floro-yeşim C (FJC) gibi geleneksel amiloid bağlayıcı boyalarla ve Aβ'ya özgü antikorlarla (6E10 ve A11) karşılaştırıldı. Cur'un bu geleneksel boyalarla karşılaştırıldığında Aβ plaklarını etiketlemenin ve imajanın en ucuz ve en hızlı yolu olduğunu ve Aβ'ya özgü antikorlarla karşılaştırılabilir olduğunu gözlemledik. Buna ek olarak, Cur oligomerler ve fibriller gibi çoğu Aβ türü ile bağlanır. Bu nedenle Cur, Aβ plakları için en uygun maliyetli, basit ve hızlı florokrom algılama ajanı olarak kullanılabilir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Alzheimer hastalığı (AD) en yaygın biridir, yaşa bağlı, ilerleyici nörolojik bozukluklar ve ölüm önde gelen nedenlerinden biri dünya çapında1,2. Öğrenme, hafıza ve biliş bozukluğu, nöropsikiyatrik bozukluklar ile birlikte, yaygın belirtiler AD3tezahür vardır. AD'nin etiyolojisi tam olarak açıklanmamakla birlikte, mevcut genetik, biyokimyasal ve deneysel kanıtlar Aβ'nın kademeli birikiminin AD4için kesin bir biyobelirteç olduğunu göstermektedir. Bu yanlış katlanmış protein hücre içi ve hücre dışı alanlarda birikir ve sinaptik kaybı dahil olduğu düşünülmektedir, artan nöroinflamasyon, ve beyinde kortikal ve hipokampal bölgelerde nörodejenerasyon AD etkilenen5. Bu nedenle, AD dokusunda Aβ histochemical tespiti AD ilerlemesini önlemek için toksik olmayan, anti-amiloid ilaçların geliştirilmesinde önemli bir ilk adımdır.

Son birkaç on yıl içinde, birçok araştırma laboratuarı tarafından beyin dokusundaki Aβ plaklarını etiketlemek ve görüntülemek için çeşitli boyalar ve antikorlar kullanılmıştır, ancak bu yöntemlerden bazıları zaman alıcıdır ve kullanılan boyalar veya antikorlar pahalıdır ve birkaç aksesuar gerektirir. Kimyasal. Bu nedenle, AD beyninde Aβ plakların tespit ucuz bir araç geliştirilmesi hoş bir yeni araç olacaktır. Birçok laboratuvar cur kullanmaya başladı, umut verici bir anti-amiloid doğal polifenol, etiketleme ve görüntüleme Aβ için, yanı sıra AD için bir terapötik ajan6,7,8,9. Hidrofobikliği ve lipofilik yapısı, klasik amiloid bağlayıcı boyalarla yapısal benzerlikleri, güçlü floresan aktivitesi ve Aβ ile bağdaştırılan güçlü yakınlığı, Aβ dokudaki Aβ plaklarının etiketlenmesi ve görüntülenmesi için ideal bir florofon yapar10 . Aβ-plaklar ve oligomerler ile cur bağlanır ve varlığı da hücre içi alanlarda tespit edilir7,11,12,13. Buna ek olarak, bu minimal miktarda (1−10 nM) Cur 5x ailesel Alzheimer hastalığı (5xFAD) beyin dokusu nda Aβ plaklar etiket olabilir gösterilmiştir7. 1 nM konsantrasyonu Aβ plakların sayımı için optimum floresan yoğunluğunu sağlamasa da, 10 nM veya daha yüksek cur konsantrasyonu yapar. Ran ve meslektaşları14 gibi düşük dozlarda 0.2 nM difluoroboron-türevleştirilmiş Cur olarak yaklaşık bir kızılötesi prob in vivo Aβ mevduat tespit edebilirsiniz bildirdi. Bu dozun dokudaki Aβ plaklarını etiketlemek için yeterli olup olmadığı henüz belli değildir. Daha önceki çalışmaların çoğunda Cur kullanarak Aβ plaklarını boyamak için 20−30 dk kullanılmıştır, ancak optimal boyama çok daha az zaman gerektirebilir.

Bu çalışma, Cur'un AD beyin dokusundaki Aβ plaklarını etiketlemek için gerekli olduğu minimum süreyi test etmek ve Cur ile diğer konvansiyonel ile boyandıktan sonra 5xFAD farelerinden beyin dokusundaki Aβ plaklarının etiketlenmesi ve görüntülenmesi hassasiyetini karşılaştırmak için tasarlanmıştır. Thioflavin-S (Thio-S), Kongo kırmızısı (CR) ve Floro-yeşim C (FJC) gibi aβ bağlayıcı boyalar. Bu klasik amiloid bağlayıcı boyaların Aβ etiketleme yeteneği, 5xFAD farelerinden parafin gömülü ve kriyostat koronal beyin kesitlerinde ve yaşlı uyumlu insan AD ve kontrol beyin dokusundan Cur boyama ile karşılaştırıldı. Bulgular, Cur'un Aβ plaklarını Aβ spesifik antikorlara (6E10) benzer ve Thio-S, CR veya FJC'den orta derecede daha iyi bir şekilde etiketlediğini göstermektedir. Buna ek olarak, 5xFAD fareler için Cur intraperitoneal enjeksiyonları 2−5 gün boyunca uygulandığında, kan-beyin bariyerini geçti ve Aβ plaklar ile bağlı7. İlginçtir, Cur nanomolar konsantrasyonları etiketleme kupuran ve görüntü Aβ plaklar 5xFAD beyin dokusu7,14. Ayrıca, çekirdek, neuritik, diffüz ve yanmış plaklar gibi morfolojik olarak farklı Aβ plaklar Cur tarafından diğer konvansiyonel amiloid bağlayıcı boyalardan daha verimli olarak etiketlenebilir7. Genel olarak Cur, Ad hayvan modellerinden ve/veya insan AD dokusundan postmortem beyin dokusundaki Aβ plaklarını, Aβ'ya özgü antikorlara güvenilir bir alternatif olarak kolay ve ucuz bir şekilde etiket ve görüntü ye uygulanabilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada açıklanan tüm yöntemler Saginaw Valley State University Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (ACUC) tarafından onaylanmıştır. İnsan dokusu Arizona Banner Sun Sağlık Enstitüsü'nde kurulmuş bir beyin bankası elde edildi15,16.

1. Hayvanların perfüzyonu

  1. Fiksatif ve perfüzyon tamponlarını hazırlayın.
    1. 80 g sodyum klorür (NaCl), 2 g potasyum klorür (KCl), 21,7 g disodyum hidrojen fosfat (Na2HPO4·7H2O), 2,59 g potasyum dihidrojen fosfat (KH2PO 4) ekleyerek 0,1 M sodyum fosfat tamponu hazırlayın ), ve çift distile su toplam 1 L yapmak.
    2. Hazırlamak 4% paraformaldehit (PFA).
      1. PBS 1 L (0.1 M, pH 7.4) paraformaldehit 40 g ekleyin.
      2. PFA çözeltisini 60−65 °C'ye ısıtın ve manyetik karıştırıcı kullanarak karıştırın.
        NOT: Sıcaklık 65 °C'yi geçmemelidir.
      3. PfA'yı tamamen eritmek için damlalıkla birkaç damla NaOH (1 N) ekleyin.
      4. PFA çözeltisini orta ve ince filtre kağıdıyla filtreleyin ve 4 °C'de saklayın.
        NOT: Çözüm bir ay için iyidir.
  2. Hayvan anestezisi ve perfüzyon uyguluyor.
    NOT: On iki aylık B6SJL-Tg APP SwFlLon, PSEN1*M146L*L286V, 1136799Vas/J (5×FAD) yaşuyumlu kontrol fareleri (grup başına n = 6) satıcılardan satın alınmış ve Saginaw Valley State Üniversitesi hayvan evinde yetiştirilmiştir. Genotipleme polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) tarafından daha önce açıklandığı gibi doğrulandı7. İnsan AD beyin dokusu postmortem AD beyin dokusu ve yaş uyumlu kontrol dokusu içerir.
    1. Sodyum pentobarbital (390 mg/kg vücut ağırlığı) veya ketamin/ksilazin karışımı (80 mg/kg vücut ağırlığı ketamin ivedi ve 10 mg/kg vücut ağırlığı xylazine) gibi uygun bir anestezik ajanla hayvanı intraperitoneal enjeksiyon (27 G iğne ve 1) ile anestezik mL şırınga). Bir parmak çimdikleme anestezi düzeyini kontrol edin. Hayvan tepkisiz ise, o zaman perfüzyon cerrahisi için hazırdır.
    2. Perfüzyon ameliyat tepsisi üzerinde supine pozisyonda anestezi hayvan yerleştirin ve küçük iris makas kullanarak sol ventrikül arka ucuna bir kesi yapmak.
    3. Sol ventriküle 22 G perfüzyon iğnesi yerleştirin ve perfüzyon sıvısını vücuttan çıkarmak için sağ auricle'da küçük bir kesi yapın. Buz gibi perfüzyon sıvısının (0,1 M PBS, pH 7,4) 5−6 dk (akış hızı 20−25 ml/dk) akmasını sağlamak için yer çekimiyle beslenen perfüzyon sistemini kullanın.
      NOT: Berrak bir karaciğer optimum perfüzyonun göstergesidir.
    4. Tampon valfi sabitleme için buz gibi %4 paraformaldehit çözeltisine geçirin ve 8−10 dk boyunca akmasını bekleyin.
      NOT: Sertleşmiş veya sertleşmiş uzuvların takip ettiği titreme iyi bir fiksasyon göstergesidir.
    5. Makas kullanarak kafatasından beyni çıkarın. Bir spatula kullanarak, beyni toplayın ve %4'lük pfa (beyin hacminin en az 10 katı) bir şişeye yerleştirin ve daha fazla kullanıma kadar 4 °C'de saklayın.

2. Doku işleme

  1. Cryostat bölümlerini kesin.
    1. Beyni dereceli sakkaroz çözeltilerine aktarın (%10, %20 ve %30) ve kullanım anına kadar her biri 24 saat boyunca 4 °C'de saklayın.
    2. -22 °C'de kriyostat kullanarak 40 μm kalınlığında kesin. PBS ve sodyum azid (%0.02) ile dolu 6 kuyuluk tabakasında kuyu başına 10−20 kesit toplayın.
  2. Parafin fare ve insan beyin dokusu için bölümleri gömmek.
    1. Parafin kesitleri için perfüzyonve 24 saat post-sabit beyin dokusunu dereceli alkollerle susuz düşürün (%50, %70, %90) 2 saat için, 1 saat için% 100 alkol 2x takip), ve sonra xylene 2x ile 1 saat her) oda sıcaklığında.
    2. Alüminyum folyo ile kaplı cam konik bir şişe de 56 °C'de 1 saat için ksilen-parafin (1:1) 2x ile doku nüfuz.
    3. 4−6 saat boyunca eritilmiş parafin (56 °C) doku batırın.
    4. Oda sıcaklığında döner bir mikrotom kullanarak 5 μm kalınlığında keserek 45 °C'de bir doku suyu banyosuna yerleştirin.
  3. Histokimyasal Cur ile kriyostat bölümlerde Aβ plaklar etiket.
    1. Her biri 5 dk için PBS (pH 7.4) 3x ile 2.1.2 adımdan bölümleri durulayın.
    2. Oda sıcaklığında 2 dakika boyunca% 70 etanol içinde bölümleri batırın.
    3. 10 μM'lik son çalışma konsantrasyonunu elde etmek için stok Cur'u (1 mM) metanolve seyrelti% 70 etanol ile çözün.
    4. 150 rpm'de bir çalkalayıcıüzerinde oda sıcaklığında 1−5 dk çalışan Cur çözeltisi ile bölümleri batırın.
    5. Cur çözeltisini atın ve her biri 2 dakika boyunca %70 etanol 3x ile yıkayın.
    6. Bölümleri poli-L-l-lizin kaplı cam kaydıraklarüzerine koyun ve distiren plastikleştirici ksilen (DPX) gibi organik montaj ortamı nı kullanarak bir kapaklı monte edin.
    7. 480/550 nm uyarma/emisyon filtrelerini kullanarak floresan mikroskop altında görüntüle.
  4. Histokimyasal cur ile parafin gömülü fare ve insan beyin bölümlerinde Aβ plaklar etiket.
    1. Oda sıcaklığında her biri 5 dk için ksilen 2x ile adım 2.2.4 doku bölümlerini deparaffinize.
    2. Dereceli alkol solüsyonları ile rehydrate (100%, 80%, 70%, 50% 1 dakika her biri için) ve distile su ile 2x oda sıcaklığında 5 dakika.
    3. 150 rpm sallayarak, karanlıkta oda sıcaklığında 10 dakika cur (10 μM) ile leke bölümleri. Her biri 2 dakika için %70, %90 ve %100 alkol ile yıkayın.
    4. Her biri 5 dk için ksilen 2x ile temizleyin ve DPX ile kapak fişi.
    5. Adım 2.3.7'de belirtildiği gibi floresan mikroskobu altında görselleştirin.
  5. Cur'u Aβ plakları ve oligomerlerde Aβ antikorile birleştirir.
    1. 12 kuyu plakalı PBS 3x ile adım 2.1.2'den cryostat bölümleri yıkayın.
    2. PBS'de %10 normal keçi serumu (NGS) çözünmüş ve %0,5 Triton-X-100 ile oda sıcaklığında 1 saat boyunca çözünmüş olan bölümleri bloke edin.
    3. Engelleme çözümlerini atın. Aβ-spesifik antikorlar (6E10 veya A11, seyreltilmiş 1:200) ile bölümleri kuluçkaya yatırın ve %10 NGS ve %0,5 Triton-X100 içeren taze bloklama çözeltisinde bir gecede 4 °C'de 150 rpm'de bir çalkalayıcıda çözünün.
    4. Antikor çözeltisini atın ve bölümleri Her biri 10 dakika PBS 3x ile yıkayın.
    5. Karanlıkta oda sıcaklığında 1 saat boyunca kırmızı florofor (örneğin Alexa 594) ile ikincil antikor etiketi ile kuluçka.
    6. Her biri 10 dakika boyunca PBS 3x ile yıkayın.
    7. % 70 alkol 1x ile yıkayın.
    8. Oda sıcaklığında 5 dakika boyunca Cur (10 μM) ile bölümleri kuluçkaya yatırın.
    9. Her biri 1 dk için %70 alkol 3x ile yıkayın.
    10. Her biri 1 dk için %90 ve %100 alkol le susuz kalın, her biri 5 dk için ksilen 2x ile temizleyin ve DPX kullanarak slaytlara monte edin.
    11. Kırmızı ve yeşil sinyaller için uygun uyarma/emisyon filtreleriyle floresan mikroskobu kullanarak görselleştirin.
    12. Hücre içi Aβ kolokalizasyonu için, Aβ-antikor (6E10), 150 rpm'de sallayarak karanlıkta oda sıcaklığında Cur ile restain ve 10 dakika oda sıcaklığında 10 dakika boyunca Hoechst-33342 (1 mg/ml) ve/veya DAPI (1ug/ml) ile karşı lekesi 150 rpm sallayarak ile karanlık. PBS 3x ile yıkayın.
    13. 100x hedefi (toplam büyütme 1.000x) ile kırmızı, yeşil ve mavi filtreler ile görüntü alın.
  6. Thio-S, CR ve FJC ile Etiket Aβ plaklar.
    NOT: Thio-S ve CR etiketleme için ayrıntılı protokoller daha öncebildirilmiştir 7.
    1. FJC boyama için, adım 2.1.2'den elde edilen serbest yüzen bölümleri PBS 3x ile 5 dakika boyunca yıkayın.
    2. Bölümleri 12 kuyu plakası ve FJC ile lekeye yerleştirin (%0.001) oda sıcaklığında karanlıkta 10 dakika.
    3. FJC çözeltisi atın ve her biri 5 dakika PBS 3x ile yıkayın.
    4. Amonyum klorür ile inkübül (NH4Cl, 50 mM PBS çözünmüş) oda sıcaklığında 10 dakika.
    5. NH4Cl çözeltisini atın ve her biri 5 dakika PBS 3x ile yıkayın.
    6. Bölüm 2.4'teki adımları takiben, 450/520 nm uyarma/emisyon filtrelerini kullanarak floresan mikroskop altında dereceli alkol solüsyonu, açık, montaj lı ve görünümiçeren dehidrat.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Curcumin bir dakika içinde Aβ plakları etiketler. Cur ile 5xFAD dokusunu boyadığımızda, Cur etiketia Aβ plaklarının 1 dk içinde olduğunu bulduk. Cur ile artan kuluçka süresi Aβ plaklarının floresan yoğunluğunu biraz artırsa da, gözlenen Aβ plaklarının sayısı 1 dk ile 5 dk boyama süresi arasında anlamlı olarak farklı değildi(Şekil 1).

Cur, aβ plaklarını kriyostat-hazır, parafin gömülü fare ve fare AD...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hipotezimiz, Cur'un diğer klasik amiloid bağlayıcı boyalarla karşılaştırıldığında postmortem AD beyin dokusundaki Aβ plaklarını etiketlemenin ve iletmenin en hızlı, en kolay ve en ucuz yolu olarak kullanılabileceğini ve aβ'ya özgü antikorlar olabileceğini ileri sürüyordu. Bu çalışmanın amacı, Postmortem AD beyin dokusunda Cur tarafından Aβ plaklarının etiketlenip görüntülemesi için gereken minimum süreyi belirlemek ve Cur'un Aβ plaklarını etiketlemek için Aβ antikora alternatif olarak kullanılıp kullanılamayacağını belir...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma için destek St Mary's Yükselişi Alan Nörobilimler Enstitüsü geldi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
4 & prime;, 6-diamidino-2-fenilindol (DAPI)IHC dünyası, Woodstock, MD
Alzheimer hastalığının bir hayvan modeli Jackson'ınlaboratuvarı, Bar Harbor, ME
Mutlak alkolVWR, Radnor, PA
Alexa 594Santacruz Biotech, Dallas, TX
Antikor 6E10Biolegend, San Diego, CA
Antikor A11Millipore, Burlington, MA
Bileşik ışık mikroskobuOlympus, Shinjuku, JaponyaOlympus BX51
Kongo kırmızıSigma, St. Louis, MO
KriyostatGMI, Ramsey, MNLeicaCM1800
KurkuminSigma, St. Louis, MO
Disodyum hidrojen fosfatSigma, St. Louis, MO
Distiren plastikleştirici ksilenBDH, Dawsonville, GA
Filtre kağıtlarıFisher scientific, Pittsburgh, PA
Hoechst-33342Sigma, St. Louis, MO
Ters floresan mikroskopLeica, Buffalo Grove, ILLeica DMI 6000B
Ters floresan mikroskopOlympus, Shinjuku, JaponyaOlympus 1x70
Normal keçi serumuSigma, St. Louis, MO
ParafinSigma, St. Louis, MO
ParaformaldehitSigma, St. Louis, MO
Ploy-lizin kaplı şarjlı cam slaytGlobe Scientific Inc, Mahwah, NJ
Potasyum klorürSigma, St. Louis, MO
Potasyum dihidrojen fosfatSigma, St. Louis, MO
Sodyum azidSigma, St. Louis, MO
Sodyum klorürSigma, St. Louis, MO
Sodyum hidroksitEMD Millipore, Burlington, MA
Sodyum pentobarbitalVortex İlaç sınırlı, Dearborn, MI
Thioflavin-SSigma, St. Louis, MO
Triton-X-100Sigma, St. Louis, MO
KsilenVWR, Radnor, PA

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Cummings, J. L. Alzheimer's disease. New England Journal of Medicine. 351 (1), 56-67 (2004).
  2. Jack, C. R., Holtzman, D. M. Biomarker modeling of Alzheimer's disease. Neuron. 80 (6), 1347-1358 (2013).
  3. Tarawneh, R., Holtzman, D. M. The clinical problem of symptomatic Alzheimer disease and mild cognitive impairment. Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 2 (5), (2012).
  4. Selkoe, D. J. Cell biology of protein misfolding: the examples of Alzheimer's and Parkinson's diseases. Nature Cell Biology. 6 (11), 1054-1061 (2004).
  5. Hardy, J., Allsop, D. Amyloid deposition as the central event in the aetiology of Alzheimer's disease. Trends in Pharmacological Sciences. 12 (10), 383-388 (1991).
  6. Chen, M., et al. Use of curcumin in diagnosis, prevention, and treatment of Alzheimer's disease. Neural Regeneration Research. 13 (4), 742-752 (2018).
  7. Maiti, P., et al. A comparative study of dietary curcumin, nanocurcumin, and other classical amyloid-binding dyes for labeling and imaging of amyloid plaques in brain tissue of 5x-familial Alzheimer's disease mice. Histochemistry and Cell Biology. 146 (5), 609-625 (2016).
  8. Maiti, P., Dunbar, G. L. Use of Curcumin, a Natural Polyphenol for Targeting Molecular Pathways in Treating Age-Related Neurodegenerative Diseases. International Journal of Molecular Sciences. 19 (6), (2017).
  9. Maiti, P., Dunbar, G. L. Comparative Neuroprotective Effects of Dietary Curcumin and Solid Lipid Curcumin Particles in Cultured Mouse Neuroblastoma Cells after Exposure to Abeta42. International Journal of Alzheimer's Disease. , (2017).
  10. den Haan, J., Morrema, T. H. J., Rozemuller, A. J., Bouwman, F. H., Hoozemans, J. J. M. Different curcumin forms selectively bind fibrillar amyloid beta in post mortem Alzheimer's disease brains: Implications for in-vivo diagnostics. Acta Neuropathologica Communications. 6 (1), 75(2018).
  11. Koronyo, Y., et al. Retinal amyloid pathology and proof-of-concept imaging trial in Alzheimer's disease. JCI Insight. 2 (16), (2017).
  12. Koronyo, Y., Salumbides, B. C., Black, K. L., Koronyo-Hamaoui, M. Alzheimer's disease in the retina: imaging retinal abeta plaques for early diagnosis and therapy assessment. Neurodegenerative Diseases. 10 (1-4), 285-293 (2012).
  13. Koronyo-Hamaoui, M., et al. Identification of amyloid plaques in retinas from Alzheimer's patients and noninvasive in vivo optical imaging of retinal plaques in a mouse model. NeuroImage. 54 (Suppl 1), S204-S217 (2011).
  14. Ran, C., et al. Design, synthesis, and testing of difluoroboron-derivatized curcumins as near-infrared probes for in vivo detection of amyloid-beta deposits. Journal of the American Chemical Society. 131 (42), 15257-15261 (2009).
  15. Beach, T. G. The Sun Health Research Institute Brain Donation Program: Description and Experience, 1987-2007. Cell Tissue Bank. 9 (3), 229-245 (2008).
  16. Green, S. J., Killiany, R. J. Subregions of the inferior parietal lobule are affected in the progression to AD. Neurobiology of Aging. 31 (8), 1304-1311 (2010).
  17. Ono, K., Hasegawa, K., Naiki, H., Yamada, M. Curcumin has potent anti-amyloidogenic effects for Alzheimer's beta-amyloid fibrils in vitro. Journal of Neuroscience Research. 75 (6), 742-750 (2004).
  18. Garcia-Alloza, M., Borrelli, L. A., Rozkalne, A., Hyman, B. T., Bacskai, B. J. Curcumin labels amyloid pathology in vivo, disrupts existing plaques, and partially restores distorted neurites in an Alzheimer mouse model. Journal of Neurochemistry. 102 (4), 1095-1104 (2007).
  19. Mutsuga, M., et al. Binding of curcumin to senile plaques and cerebral amyloid angiopathy in the aged brain of various animals and to neurofibrillary tangles in Alzheimer's brain. Journal of Veterinary Medical Science. 74 (1), 51-57 (2012).
  20. Tei, M., Uchida, K., Mutsuga, M., Chambers, J. K., Nakayama, H. The binding of curcumin to various types of canine amyloid proteins. Journal of Veterinary Medical Science. 74 (4), 481-483 (2012).
  21. Liu, L., Komatsu, H., Murray, I. V., Axelsen, P. H. Promotion of amyloid beta protein misfolding and fibrillogenesis by a lipid oxidation product. Journal of Molecular Biology. 377 (4), 1236-1250 (2008).
  22. Wu, C., Scott, J., Shea, J. E. Binding of Congo red to amyloid protofibrils of the Alzheimer Abeta(9-40) peptide probed by molecular dynamics simulations. Biophysical Journal. 103 (3), 550-557 (2012).
  23. Wu, C., Wang, Z., Lei, H., Zhang, W., Duan, Y. Dual binding modes of Congo red to amyloid protofibril surface observed in molecular dynamics simulations. Journal of the American Chemical Society. 129 (5), 1225-1232 (2007).
  24. Gutierrez, I. L., et al. Alternative Method to Detect Neuronal Degeneration and Amyloid beta Accumulation in Free-Floating Brain Sections With Fluoro-Jade. ASN Neuro Methods. 10, 1-7 (2018).
  25. Yang, F., et al. Curcumin inhibits formation of amyloid beta oligomers and fibrils, binds plaques, and reduces amyloid in vivo. Journal of Biological Chemistry. 280 (7), 5892-5901 (2005).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Kurkumin EtiketlemeFloresan MikroskobuHistokimyasal EtiketlemePerf zyon ProtokolKriyostat Kesit AlmaParafin Kesit AlmaKurkumin KonsantrasyonuAlzheimer Hastal

İlgili makaleler