Yöntem makalesi

Küçük Ölçekli Hücre İşleme için Otomatik Karşı Akım Santrifüj Sistemi

DOI:

10.3791/60423

⸱

12 Aralık 2019

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1The Ritchie Centre, Hudson Institute of Medical Research, 2Department of Obstetrics and Gynaecology, Monash University, 3Scinogy, 4Australian Regenerative Medicine Institute, Monash University

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Otomasyon, hücre üretiminde yükseltme ve maliyet yönetiminin anahtarıdır. Bu el yazması, küçük ölçekli biyoişleme için arabellek değişimi ve hücre konsantrasyonu adımlarını otomatikleştirmek için bir karşı akış santrifüj hücre işleme cihazının kullanımını açıklar.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Gen ve hücre bazlı tedavilerin başarılı bir şekilde ticarileştirilmesi, uygun maliyetli ve ölçeklenebilir üretim süreçleri gerektirir. Tampon değişimi ve ürün konsantrasyonu çoğu üretim süreci için gerekli bileşenlerdir. Ancak, ürün geliştirmenin erken aşamalarında, bu adımlar genellikle el ile gerçekleştirilir. Tampon değişimi için manuel çıkmaz santrifüj emek yoğun, pahalı ve ölçeklenebilir değildir. Kapalı otomatik bir sistem bu zahmetli adımı etkili bir şekilde ortadan kaldırabilir, ancak uygulama zor olabilir. Burada, küçük ve orta ölçekli hücre işleme için uygun olan ve manuel işleme ve büyük ölçekli otomasyon arasındaki boşluğu kapatmayı amaçlayan yeni geliştirilmiş bir hücre işleme cihazını tanımlıyoruz. Bu protokol, akış hızı ve santrifüj hızını değiştirerek çeşitli hücre tiplerine ve süreçlerine kolayca uygulanabilir. Protokolümüz, manuel işlemle karşılaştırıldığında daha kısa işlem süreleriyle yüksek hücre kurtarmasını gösterdi. Otomatik işlemden kurtarılan hücreler de çoğalma oranlarını korudu. Cihaz, arabellek değişimi, hücre formülasyonu ve kriyopreservation gibi adımları karşılamak için kapalı bir üretim sürecinde modüler bir bileşen olarak uygulanabilir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Modern tıbbın manzarası gen ve hücre temelli tedavilerdeki (GCT) son gelişmelerle hızla değişmiştir. Çeviri araştırmalarında en hızlı büyüyen alanlardan biri olan GCT sektörü, benzersiz ve eşi görülmemiş zorluklarla da karşı karşıyadır. Sağlam klinik sonuçlara ek olarak, verimli ve uygun maliyetli üretim süreçleri GCT ticari başarı için gereklidir, özellikle küçük ölçekli üretim elde etmek zordur1. Zaman maliyeti, işçilik, ve kalite güvenceleri hücrelerin her toplu sadece yüz veya binlerce yerine bir hasta için birkaç doz üretir büyütülür. Üretim süreçlerinin antikor ve rekombinant protein üretimine daha çok benzediği allojen hücre tedavilerinden farklı olarak, otolog hücre tedavileri genellikle küçük ölçeklioperasyonlar1 olarak üretilmektedir. Biyofarmasötik üretiminde nispeten yeni bir fenomen olarak2, küçük ölçekli hücre işleme seçenekleri şu anda oldukça sınırlıdır.

Arabellek değişimi hücre üretimi için gereklidir. Hücrelerin kültür medyasından çıkarıldığı ve kriyopreservation veya infüzyonu için yoğunlaştığı alt akım süreçlerinden biridir. Şu anda, küçük ölçekli hücre üretimi genellikle akademik araştırma ortamında benzer süreçler uygular ve sterilite korumak için özel temiz odalar güvenir3. Manuel downstream süreçleri genellikle hacim azaltma ve tampon değişimi için pelet ve yeniden hücreleri askıya benchtop santrifüjler kullanın. Bu açık süreçler pahalı (yani, işçilik ve temiz oda bakımı) ve ticari üretim için ideal olmayan sınırlı üretim kapasitesine sahip2,3.

Otomasyonun uygulanması, üretim verimliliğini artırmak ve ticari ölçekli üretimlere ulaşmak için bir çözüm olarak önerilmiştir2. Gama ışınlaması veya terminal uç filtrasyon gibi biyolojik yöntemlerle hücre bazlı ürünlerde sterilite elde edilemez. Bunun yerine, kontaminasyon risklerini azaltmak için otomatik kapalı bir sistem kurulur ve operatörler sterilite4korumak için temiz odalara güvenerek. Proses otomasyonu, aynı zamanda birden fazla sistem paralel çalışan (ölçeklendirme) ya da sırayla operatörler arasındaki değişkenliği en aza indirir bireysel bir cihazın işleme kapasitesini (ölçeklendirme) artırarak ölçeklenebilirlik sorunu giderir. Ayrıca, otolog tedavilerin maliyet modelleme analizi otomasyon üretim maliyetini azaltabilir düşündürmektedir5,6. Ancak, otomatik bir üretim platformu7kullanılan bir otolog kök hücre klinik çalışmada hiçbir maliyet avantajı bulundu 7 , otomasyon maliyet yararı bireysel üretim sürecine bağlı olabileceğini düşündürmektedir.

Otomasyonun mevcut bir üretim sürecine dahil edilebildiği farklı stratejiler vardır. Bu, tam entegre bir platform veya modüler tabanlı bir işlem zinciri uygulanarak elde edilebilir. CliniMACS Prodigy (Miltenyi Biotec), Cocoon (Oktan Biotech) ve Quantum (Terumo BCT) gibi otolog hücre üretimi için ticari olarak kullanılabilen birkaç tam entegre platform bulunmaktadır. Genellikle "GMP-in-a-box" olarak tanımlanan bu entegre platformlar, altyapı konusunda düşük taleplere sahiptir ve kullanımı kolaydır. Ancak, tam entegre bir kurulumun üretim kapasitesi sisteme bağlı kuluçka makinesi ile sınırlandırılabilir. Örneğin, Prodigy'nin kültür kapasitesi 400 mL haznesi8 ile sınırlıdır ve Quantum kartuşunun 2,1 m2 (120 T175 şişeye eşdeğer)olarakayarlanmış sınırlayıcı bir yüzey alanı vardır 7 , daha yüksek hücre dozları gerektiren hastalar için yeterli olmayabilir9,10. Ayrıca, Prodigy ve Quantum kullanımlarını sınırlayan ortak bir özelliğe sahiptir: operasyonel birim hücre genişletme dönemi boyunca tek bir hücre grubu tarafından işgal edilir, böylece her birim11tarafından imal edilebilen toplu iş sayısını sınırlandırır. Otomasyon için modüler yaklaşım ticari üretim süreci 12 simüle birden fazla modüler birimleri ile bir üretim zinciri oluşturmaktır12,13. Kültür cihazını hücre yıkama cihazından ayıran bu yaklaşım, böylece üretim verimliliğini en üst düzeye çıkarabilir. İdeal bir işleme cihazı uyarlanabilir ve üretim ihtiyacı12ölçeklenebilir biri olacaktır.

1970'li yıllara dayanan karşı akış santrifüj (CFC) teknolojisi, hücre işleme de uzun bir geçmişe sahip14. Santrifüj kuvvetini bir karşı akış kuvvetiyle dengeleyerek hücre konsantrasyonu ve ayrıştırma sağlar. Tipik olarak, bir hücre süspansiyonu bir hücre odasının dar ucundan sabit bir akış hızı altında bir santrifüj kuvvete maruz kalırken girer (Şekil 1A). Sıvının akışı santrifüj kuvvetine ters yönde yapılır. Buna, hücre odası içinde bir degrade oluşturan karşı akış kuvveti denir. Hücre odası koni şeklindeki hücre odasının ucundan genişledikçe karşı akış kuvveti azalır. Daha yüksek yoğunluklu ve daha büyük çapı olan hücreler daha yüksek bir sedimantasyon hızına sahiptir ler ve böylece koni şeklindeki hücre odasının ucuna doğru kuvvet dengesine ulaşırlar. Küçük parçacıklar haznetabanına doğru dengeye ulaşabilir veya haznede tutulamayacak kadar küçük olabilir ve yıkanır. CFC teknolojisi çoğunlukla dendritik hücre tedavileri için monosit izole gibi kan aferez ürünleri işleme uygulaması için bilinir15,16. Tampon değişimi açısından, CFC teknolojisi sadece büyük ölçekli üretim17 uygulanmıştır ve otolog hücre tedavileri küçük ölçekli üretim için henüz kullanılmak üzere.

Küçük ölçekli hücre üretimi için uygun bir cihaz ihtiyacını gidermek için, otomatik bir CFC cihazı (Malzemeler Tablosubakınız), son zamanlardageliştirilmiştir 18. Otomatik hücre işleme cihazı hücre enkaz kaldırmak ve tampon değişimi kolaylaştırmak için karşı akış santrifüj teknolojisini kullanır. Cihaz, hücrelerin steril, kapalı bir sistem içinde işlenmesini sağlayan hücre aktarım torbasına steril bağlanabilen tek kullanımlık bir kit ile tampon değişimi gerçekleştirir. Burada, otomatik protokollerde memeli hücre kültürlerinde tampon değişimi gerçekleştirmek için bir karşı akım santrifüj cihazının kullanımını araştırıyoruz. Bu çalışmada, nonadherent ve yapışık hücre tiplerini modellemek için Jurkat hücreleri ve mezenkimal stromal hücreleri (MSCs) kullanarak tampon değişim protokolünü test ettik. Jurkat hücreleri genellikle akut T hücreli lösemi19,20çalışma için kullanılan T hücreleri ölümsüzleştirilmiş vardır. MSC'ler, çok çeşitli hastalıklar için insan klinik çalışmalarında çalışılan yetişkin kök hücrelerdir9.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Tampon değişimi için reaktiflerin ve hücrelerin hazırlanması

  1. Sınıf 2 laminar akış başlığında arabellekleri hazırlayın (Bkz. Malzeme Tablosu). Şırınga ve iğne tertibatı kullanarak, 500 mL tuzlu torbadan 50 mL tuzlu çözelti çıkarın. Bunu %20 insan serum albumininin (HSA) 50 mL'si ile değiştirin ve %2 hsa'yı tuzlu da yapın ve bu da yıkama tamponu görevi göreceksiniz.
  2. Hücreleri kültür damarlarından çıkarın ve trypan mavisi hariç tutularak başlangıç hücre miktarını ve canlılığını belirlemek için bir hücre sayısı gerçekleştirin. Hücreleri bir aktarım torbasına yükleyin.
    NOT: Bu protokolde Jurkat hücreleri RPMI'de kültürlenmiş ve MsC'ler DMEM:F12'de kültürlendi. Her iki ortam da %10 fetal sığır serumu (FBS) ve %1 Antibiyotik-Antimikotik solüsyon ile desteklendi. Hücreler 37 °C'de %5 CO2ile kültürlendi. MSC'ler veya yapışık hücreler için, hücreleri ayırmak için kültür damarlarına bir sindirim enzimi (örneğin, tripsin) ekleyin ve hücreler ayrıldıktan sonra kültür ortamıyla söndürün. Bu protokolde bir transfer çantası kullanılmıştır çünkü hücreler kültür kaplarında genişletilmişti. Ancak, hücreler bir hücre kültür çantası kültürlü ise, doğrudan steril tüp kaynak yoluyla tek kullanımlık kiti bağlı olabilir. Bu protokolde, her çalışma için 3 x 107 Jurkat hücresi veya 1 x 107 MSC kullanılmıştır ve burada hücreler 40 mL kültür medyasında askıya alınmıştır.
    1. Transfer torbasını tek kullanımlık işleme kitine bağlamak için steril bir tüp kaynakçısı varsa, hücreleri bir şırınga ve iğne terletmesi kullanarak bir transfer çantasına yükleyin (bkz.
    2. Alternatif olarak, transfer çantasına bağlı yaklaşık 10 cm kalan bağlantı tüpünü kesmek ve tüpün ucuna bir dişi Luer konektörü eklemek için bir çift otoklav makas kullanın. Hücreleri ve medyayı aspire etmek için bir şırınga kullanın, ardından şırıngayı Luer konektörüne bağlayın ve hücreleri transfer çantasına yükleyin.
  3. Hücreleri içeren torbayı bağlayın, adım 1.1'de hazırlanan 500 mL yıkama tamponu içeren tampon torbayı yıkayın, atık torbayı ve şırıngayı tek kullanımlık kitte toplayın(Şekil 1B).
    NOT: Her çantanın bağlanma konumu programdaki ayarlara bağlıdır. Bu protokolde, atık torbayı A pozisyonunda, B pozisyonunda ki tamponu yıkayın, Hücre torbasını D ve F pozisyonlarında ve toplama şırıngasını H pozisyonunda(Şekil 1C)bağladık.

2. Otomatik arabellek değişim protokolü için program

  1. Aygıtın Grafik Kullanıcı Arabirimini (GUI) açın ve dizüstü bilgisayar veya tabletteki "START" düğmesine basın. Daha sonra "Open" varolan bir protokol veya yeni bir protokol oluşturmak için "Yeni" tuşuna basın.
  2. Her adımda gezinmek için "İleri" ve "Geri" düğmesini kullanın, açılacak/kapatılan vanaları, santrifüj hızını, pompa hızını, pompa yönünü ve eylem tetikleyicilerini seçin. Her adımın ayarları Tablo 1'deözetlenmiştir. O zaman protokolü kaydet.

3. Makinenin kurulumu

  1. Tek kullanımlık işleme kitini makineye yerleştirin ve bağlı çantaları buna göre asın. Tüm vanaları varsayılan kapalı konuma sıfırlamak için kırmızı "Dur/Sıfırla" düğmesine basın.
    NOT: Kitin doğru yerleştirildiğinden ve tüm vanaların uygun şekilde çalıştığından emin olmak için kapı kapatıldığında makine bir test gerçekleştirecektir.
  2. GUI'yi işleme cihazına bağlayın ve "Bağlan" düğmesine basın. Sonra kaydedilen programı indirin. Yeşil "Oynat" düğmesi yandığında, protokolün başlamaya hazır olduğunu gösterir.
  3. Transfer çantası borusu için manuel kelepçeleri açın.
    NOT: Operatör kelepçeleri açmayı unutursa, cihaz durur ve basınç sensörü uyarısı görünür. Cihazı sıfırlamak ve kelepçeleri açmak için "Durdur" düğmesine basın ve yeniden başlamak için kelepçeleri açın.

4. Otomatik tampon değişimi

  1. Arabellek değişim programını başlatmak için "Başlat" tuşuna basın.
    NOT: Otomatik işlemi el ile değiştirmek için " Tetik " düğmesine ulaşmadanönce bir sonraki adıma geçmek için "Next" düğmesine basın veya işlemi beklemeye almak için "Duraklat" tuşuna basın. Bu sadece J ve K vanaları açık tutarken kit aracılığıyla hücreleri yeniden sirküle edecek(Şekil 1C).
  2. Otomasyon adım 6(Tablo 1)sonunda, şimdi boşaltılan torbadaki hava kabarcık sensörünü tetiklediğinde işlem duraklatılır. Çanta gerçekten boşsa işlemi bir sonraki adıma taşımak için "Next" tuşuna basın veya sensör satırdaki bir kabarcık tarafından tetiklenmişse işleme devam etmek için "Duraklat" tuşuna basın.

5. Hücrelerin toplanması ve örneklemi

  1. Otomatik işlem tamamlandığında, tüm boru kelepçelerini kapatın. Kapıyı açın ve tek kullanımlık kiti cihazdan alın. Sonraki işlemler için hücreleri toplamak için şırınga nın bağlantısını kesin. Hücre sayımı ve canlılık kontrolü için toplanan hücrelerin bir örneğini alın (bkz. adım 6.2).

6. İşlem doğrulaması

  1. El ile arabellek değiştirme protokolünü kullanarak denetim denemeleri gerçekleştirin.
    1. 5 dk. 200 x g santrifüj hücre süspansiyonu supernatant atın ve hücre yıkama tampon 30 mL ile hücreleri yeniden askıya. 5 dk. 200 x g'da tekrar hücre süspansiyonuna santrifüj edin.
  2. Otomatik bir hücre sayacı kullanarak hücre canlılığını değerlendirmek için trypan mavi dışlama tayini ile hücre sayımı gerçekleştirin.
  3. Hücre çoğalmasını 2, 24 ve 48 saat olarak ölçmek için bir MTS testi gerçekleştirin.
    NOT: MTS titreci, üreticinin talimatlarına göre 96 kuyu doku kültür plakası üzerinde gerçekleştirilmiştir. Tampon değişim sürecinden sonra hücre kültürü medyasından (10.000 Jurkat hücresi veya 1.500'ü içeren) 100 μL aliquot'u kaplandı. Her zaman noktasında, her kuyuya 20°L MTS reaktif ilerler ve 37 °C'de 2 saat kuluçkaya yatırıldı. Absorbans bir plaka okuyucu kullanılarak 490 nm olarak değerlendirildi.
  4. Otomatik işlemin manuel işlemle Jurkat hücreleri ve MSC işlevi üzerindeki etkisini karşılaştırmak için işlevsel tahliller yapın.
    1. DMEM:F12 media'da 50 ng/mL phorbol 12-myristate 13-myristate 13-asetat (PMA) ve 1 μg/mL iyomisin (hücre stimülasyon kokteyli) ile uyarılmış 1 x 106 hücre/mL yoğunlukta 96 kuyuluk bir plakada Kültür Jurkat hücreleri 24 saat için %10 fetal sığır serumu (FBS) içeren. Hücreleri %5 CO2ile 37 °C'de kuluçkaya yatırın.
    2. Üreticinin talimatlarına göre boncuk bazlı ELISA testini (Bkz. Malzeme Tablosu)kullanarak kültür supernatant'tan interlökin-2 üretimini ölçün.
    3. DMEM:F12 ortamının 1 mL'de 10.000 hücre/cm 2 yoğunluğunda 12 kuyu plakasında ki Kültür MSC'leri, 48 saat için interferon-γ 50 birim/mL ile desteklenmiş 10 adet fbs içeren ortam. İndoleamin 2,3-dioksijenase (IDO) enzim aktivitesini ölçmek için daha önce21msc'lerin enzim aktivitesini ölçmek için süpernatant toplayın .

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokolde, otomatik arabellek değişim sürecini göstermek için Jurkat hücreleri ve MSC'leri temsili örnekler olarak kullandık. İşlem sırasında Jurkat hücreleri ve MSC'ler aynı işlem adımlarını, akış hızını kontrol eden santrifüj kuvvet ve pompa hızı farklılıkları ile paylaşmış(Tablo 1). Şekil 2, tampon değişim işlemi sırasında akışkan hücre yatağının nasıl görünebileceğine kamera tarafından çekilen temsili görüntüleri gösterir. Tipik olarak, akışkan hücre yatağı

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Açıklanan otomatik arabellek değiştirme protokolü basit ve kullanıcı dostudur. Yine de, bu protokolde kritik ve özellikle dikkat gerektiren birkaç önemli adım vardır. Deneyimlerimize göre, MSC'ler (ortalama çap 10-15 μm) gibi daha büyük hücreleri işlerken her çalışmada en az 1 x 107 hücre içermelidir(Şekil 4B). Jurkat hücreleri (ortalama ~10 μm çap) gibi daha küçük hücrelerin işlenmesi, kararlı bir akışkan hücre yatağı elde etmek için yaklaşık 3 x 107 h...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

SW, IF ve DJ COO, CTO ve CEO'su Scinogy Pty. Ltd vardır. CFC cihazına erişim de Scinogy tarafından sağlanmıştır.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma Viktorya Hükümeti'nin Operasyonel Altyapı Destek Programı ve Ekonomik Kalkınma, İşler, Ulaştırma ve Kaynaklar Bakanlığı tarafından sağlanan Viktorya Hükümeti Teknoloji Fişi tarafından desteklenir. RL Ulusal Sağlık ve Tıbbi Araştırma Konseyi Kariyer Geliştirme Bursu alıcıdır. AL, Avustralya Lisansüstü Ödülü'nü kazanmıştır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
20 ml Luer kilitli şırıngalarBD302830
%20 İnsan serum albümini (HSA)CSL BehringAUST R 46283
4- (Dimetilamino) benzaldehitSigma-Aldrich156477-25g
500ml IV tuzlu su torbasıFresenius KabiK690521
Antibiyotik-AntimikotikThermo Fisher Scientific15240112
Otomatik hücre sayacı (Kontes)Thermo Fisher ScientificN/A
Hücre sayma odası slaytlarıThermo Fisher ScientificC10228
Hücre stimülasyon kokteyli (500x)Thermo Fisher Scientific00-4970-93
Hücre transfer torbalarıTerumoT1BBT060CBB
CellTiter AQueous Tek Çözeltili Hücre Proliferasyon Testi (MTS)PromegaG3582
SantrifüjEppendorf5810R
DMEM: F12 ortamıThermo Fisher Scientific11320082
EnVision plaka OkuyucuPerkin ElmerN/A
Fetal sığır serumu (FBS)Thermo Fisher Scientific10099141
İnsan İnterlökin 2 (IL2) KitiPerkin ElmerAl221C
Luer (dişi) bağlantı parçaları,CPCLF41
PC, dizüstü bilgisayar veya PC, tablet cihazıASUS,N/A
Plaka okuyucu (SpectraMax i3)Moleküler Cihaz, N/A
Rekombinant İnsan IFN-&gama;PeproTech300-02
Rotea ters akışlı santrifüj hücre işleme cihazıScinogyN/A
Rotea tek kullanımlık işleme kitiScinogyN/A
RPMI ortamıThermo Fisher Scientific11875119
Cerrahi makasProSciTech420SS
Trikloroasetik asitSigma-AldrichT6399-250g
Tripan Mavi lekeThermo Fisher ScientificT10282
Tripsin sindirim enzimi (TrypLE Express Enzimi)Thermo Fisher Scientific12604013
, , ,,

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lopes, A. G., Sinclair, A., Frohlich, B. Cost Analysis of Cell Therapy Manufacture: Autologous Cell Therapies, Part 1. BioProcess International. 16 (3), (2018).
  2. Hampson, B., Ceccarelli, J. Factories of the future: Can Patient-Specific Cell Therapies Get There from Here? BioProcess International. 14 (4), (2016).
  3. Preti, R., Daus, A., Hampson, B., Sumen, C. Mapping success for commercial cell therapy manufacturing. BioProcess International. 13 (9), 33-38 (2015).
  4. Heathman, T. R., et al. The translation of cell-based therapies: clinical landscape and manufacturing challenges. Regenerative Medicine. 10 (1), 49-64 (2015).
  5. Lipsitz, Y. Y., et al. A roadmap for cost-of-goods planning to guide economic production of cell therapy products. Cytotherapy. 19 (12), 1383-1391 (2017).
  6. Lopes, A. G., Sinclair, A., Frohlich, B. Cost Analysis of Cell Therapy Manufacture: Autologous Cell Therapies, Part 2. BioProcess International. 16 (4), 12-19 (2018).
  7. Hanley, P. J., et al. Efficient manufacturing of therapeutic mesenchymal stromal cells with the use of the Quantum Cell Expansion System. Cytotherapy. 16 (8), 1048-1058 (2014).
  8. Leong, W., Nakervis, B., Beltzer, J. Automation: what will the cell therapy laboratory of the future look like? Cell Gene Therapy Insights. 4 (9), 679-694 (2018).
  9. Galipeau, J., Sensebe, L. Mesenchymal Stromal Cells: Clinical Challenges and Therapeutic Opportunities. Cell Stem Cell. 22 (6), 824-833 (2018).
  10. Salmikangas, P., Kinsella, N., Chamberlain, P. Chimeric Antigen Receptor T-Cells (CAR T-Cells) for Cancer Immunotherapy - Moving Target for Industry? Pharmaceutical Research. 35 (8), 152(2018).
  11. James, D. How short-term gain can lead to long-term pain. Cell Gene Therapy Insights. 3 (4), 271-284 (2017).
  12. Rafiq, Q. A., Thomas, R. J. The evolving role of automation in process development, manufacture of cell, gene-based therapies. Cell Gene Therapy Insights. 2 (4), 473-479 (2016).
  13. Rafiq, Q. A. Emerging Automated Approaches for Cell and Gene Therapy Manufacture. Cell Gene Therapy Insights. 4 (9), 911-914 (2018).
  14. Contreras, T. J., Jemionek, J. F., French, J. E., Shields, L. J. Human Granulocyte Isolation by Continuous Flow Centrifugation Leukapheresis and Counterflow Centrifugation Elutriation (CFCL/CCE). Transfusion. 19 (6), 695-703 (1979).
  15. Berger, T. G., et al. Efficient elutriation of monocytes within a closed system (Elutra™) for clinical-scale generation of dendritic cells. Journal of Immunological Methods. 298 (1), 61-72 (2005).
  16. Chen, Y., Hoecker, P., Zeng, J., Dettke, M. Combination of Cobe AutoPBSC and Gambro Elutra as a platform for monocyte enrichment in dendritic cell (DC) therapy: Clinical study. Journal of Clinical Apheresis. 23 (5), 157-162 (2008).
  17. Whitford, W. G. Continuous Processing in Pharmaceutical Manufacturing. Subramanian, G. , (2014).
  18. Scinogy. SMALL BATCH CELL SEPARATION, WASH & CONCENTRATION. , https://www.scinogy.com/projects (2019).
  19. Yu, D., et al. Targeting Jurkat T Lymphocyte Leukemia Cells by an Engineered Interferon-Alpha Hybrid Molecule. Cellular Physiology and Biochemistry. 42 (2), 519-529 (2017).
  20. Moharram, S. A., Shah, K., Kazi, J. U. T cell Acute Lymphoblastic Leukemia Cells Display Activation of Different Survival Pathways. Journal of Cancer. 8 (19), 4124(2017).
  21. Ling, W., et al. Mesenchymal stem cells use IDO to regulate immunity in tumor microenvironment. Cancer Research. 74 (5), 1576-1587 (2014).
  22. Tanzeglock, T., Soos, M., Stephanopoulos, G., Morbidelli, M. Induction of mammalian cell death by simple shear and extensional flows. Biotechnology and Bioengineering. 104 (2), 360-370 (2009).
  23. Aguado, B. A., Mulyasasmita, W., Su, J., Lampe, K. J., Heilshorn, S. C. Improving viability of stem cells during syringe needle flow through the design of hydrogel cell carriers. Tissue engineering. Part A. 18 (7-8), 806-815 (2012).
  24. Zhu, F., et al. Hydroxyethyl starch as a substitute for dextran 40 for thawing peripheral blood progenitor cell products. Cytotherapy. 17 (12), 1813-1819 (2015).
  25. Schwandt, S., Korschgen, L., Peters, S., Kogler, G. Cord blood collection and processing with hydroxyethyl starch or non-hydroxyethyl starch. Cytotherapy. 18 (5), 642-652 (2016).
  26. Stroncek, D. F., et al. Counter-flow elutriation of clinical peripheral blood mononuclear cell concentrates for the production of dendritic and T cell therapies. Journal of Translational Medicine. 12, 241(2014).
  27. Mfarrej, B., et al. Pre-clinical assessment of the Lovo device for dimethyl sulfoxide removal and cell concentration in thawed hematopoietic progenitor cell grafts. Cytotherapy. 19 (12), 1501-1508 (2017).
  28. Abonnenc, M., Pesse, B., Tissot, J. D., Barelli, S., Lion, N. Automatic washing of thawed haematopoietic progenitor cell grafts: a preclinical evaluation. Vox Sanguinis. 112 (4), 367-378 (2017).
  29. Panes, J., et al. Expanded allogeneic adipose-derived mesenchymal stem cells (Cx601) for complex perianal fistulas in Crohn's disease: a phase 3 randomised, double-blind controlled trial. Lancet. 388 (10051), 1281-1290 (2016).
  30. Lim, R., et al. First-In-Human Administration of Allogeneic Amnion Cells in Premature Infants With Bronchopulmonary Dysplasia: A Safety Study. Stem Cells Translational Medicine. 7 (9), 628-635 (2018).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Ters Ak l Santrif jlemeOtomatik Tampon De i imiH cre leme CihazTek Kullan ml k leme KitiAk kanize H cre YataY ksek H cre Geri Kazan mKapal retim SistemiTampon De i im ProtokolH cre Canl l k De erlendirmesi

İlgili makaleler