Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

3D Hücre Yüklü Pankreas Dokusu Yapıları Baskı için Pankreas Doku Türetilmiş Ekstrasellüler Matrix Bioink

10.6K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/60434

⸱

13 Aralık 2019

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Mechanical Engineering, Pohang University of Science and Technology, 2School of Interdisciplinary Bioscience and Bioengineering, Pohang University of Science and Technology, 3Asan Institute for Life Science, University of Ulsan College of Medicine and Asan Medical Center, 4Division of Hepato-Biliary and Pancreatic Surgery, Department of Surgery, University of Ulsan College of Medicine and Asan Medical Center, 5Department of Creative IT Engineering, Pohang University of Science and Technology

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Hücre dışı matriks (dECM) tasarlanmış bir yapıda hedef dokuların doğal işlevlerini yeniden özetlemek için uygun mikroçevresel ipuçları sağlayabilir. Bu makalede pankreas dokusunun desellülsizasyonu için protokoller açıklanmıştır, pankreas dokusu kaynaklı dECM bioink decm dECM değerlendirilmesi, ve 3D pankreas dokusu üretimi bir biyobaskı tekniği kullanılarak inşa eder.

Özet

Pankreas adacıklarının nakli hipoglisemi ve sekonder komplikasyonlar eşliğinde tip 1 diyabet muzdarip hastalar için umut verici bir tedaviyöntemidir. Ancak, adacık nakli nin kötü adacık engraftment ve düşmanca ortamlar nedeniyle nakledilen adacıkların düşük canlılığı gibi çeşitli sınırlamalar hala vardır. Buna ek olarak, insan pluripotent kök hücrelerinden farklı insülin üreten hücreler kan şekeri seviyesini düzenleyen yeterli hormonsssalgılamak için sınırlı yeteneği var; bu nedenle, uygun mikroçevresel ipuçları ile hücreleri kültürleme tarafından olgunlaşma iyileştirilmesi kuvvetle gereklidir. Bu makalede, pankreas adacıklarının glikoz duyarlılığını artırabilecek yararlı bir mikroortam sağlamak için pankreas dokusu ndan elde edilen hücre dışı matriks (pdECM) biyoink hazırlanması için protokolleri açıklar, ardından 3D pankreas dokusu oluşturma süreçleri mikroekstrüzyon tabanlı biyobaskı tekniği kullanılarak oluşturur.

Giriş

Son zamanlarda, pankreas adacık nakli tip 1 diyabetli hastalar için umut verici bir tedavi olarak kabul edilmiştir. Göreceli güvenlik ve prosedürün minimal invazivlik bu tedavinin büyük avantajları vardır1. Ancak, izole adacıkların düşük başarı oranı ve immünsupresif ilaçların yan etkileri gibi çeşitli sınırlamalar vardır. Ayrıca, engrafted adacık ların sayısı sürekli olarak ekim sonrası düşmancaçevre2 nedeniyle azalır. Bu zorlukların üstesinden gelmek için pankreas adacık transplantasyonuna aljinat, kollajen, poli (laktik-koglikolik asit) (PLGA) veya polietilen glikol (PEG) gibi çeşitli biyouyumlu malzemeler uygulanmıştır.

3D hücre baskı teknolojisi, büyük potansiyeli ve yüksek performansı nedeniyle doku mühendisliğinde gelişmektedir. Söylemeye gerek yok, bioinks uygun bir mikroortam sağlamak ve basılı doku yapıları hücresel süreçlerin iyileştirilmesi sağlayan önemli bileşenleri olarak bilinir. Fibrin, aljinat ve kollajen gibi makas inceltme hidrojelleri önemli sayıda yaygın bioinks olarak kullanılır. Ancak, bu malzemeler in doğal dokuda ekstrasellüler matris (ECM) ile karşılaştırıldığında yapısal, kimyasal, biyolojik ve mekanik karmaşıklık eksikliği göstermektedir3. Adacıklar ve ECM arasındaki etkileşimler gibi mikroçevresel ipuçları adacıkların işlevini artırmak için önemli sinyallerdir. Hücreli ECM (dECM) kollajen, glikozaminoglikanlar (GAGs) ve glikoproteinler de dahil olmak üzere çeşitli ECM bileşenlerinin dokuya özgü bileşimini yeniden oluşturabilir. Örneğin, periferik AK'larını koruyan birincil adacıklar (örneğin, tip I, III, IV, V ve VI kollajen, laminin ve fibronektin) düşük apoptoz ve daha iyi insülin hassasiyeti sergilerler, böylece dokuya özgü hücre-matriks etkileşimlerinin orijinal doku4'ebenzer şekilde çalışma yeteneklerini artırmak için önemli olduğunu gösterirler.

Bu yazıda, pankreas adacıklarının aktivitesini ve işlevlerini artırmak için yararlı mikroçevresel ipuçları sağlamak için pankreas dokusu kaynaklı hücre dışı matriks (pdECM) bioink hazırlanması için protokolleri açıklamak, bir mikroeksistasyon tabanlı biyobaskı tekniği kullanarak 3D pankreas dokusu yapıları oluşturmak için süreçler takip(Şekil 1).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Domuz eti pankreas dokuları yerel bir mezbaha dan toplandı. Hayvan deneyleri Asan Tıp Merkezi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylandı, Seul, Kore.

1. Doku decellularization

  1. Hücre dışılaştırma için çözümler hazırlayın.
    NOT: Tüm çözelti preparatlarında kullanılan 1x fosfat tamponlu salin (PBS) 10x PBS'ye distile su eklenerek seyreltilir.
    1. %1 Triton-X 100 çözümü için, 100 mL 100 mL 100 mL 1x PBS 1x 1x 150 rpm'de karıştırma çubuğu kullanarak 100 mL 100 mL çözündür. PBS kullanımdan hemen önce hazırlanır.
      NOT: %10 Triton-X 100 çözeltisi ihtiyaç duyulana kadar oda sıcaklığında saklanabilir.
    2. %0,1 perasetik asit çözeltisi için, 8,5 mL perasetik asitten %4,7'lik perasetik asidi 22,8 mL'lik 70 mL etanol ve 368,7 mL distile su kullanmadan hemen önce seyreltin.
  2. Pankreasın periferik dokuları çıkarın ve decellularization önce doku dilim.
    1. Rezeke domuz pankreasını akan musluk suyuyla yıkayın ve sterilize makas kullanarak periferik dokuları çıkarın.
    2. Forseps ile plastik bir torbaya pankreas aktarın ve bir sonraki adım için etkili bir şekilde pankreas kesmeye yardımcı olmak için 1 saat için -80 °C dondurun.
    3. Dondurulmuş pankreası bir rende kullanarak 1 mm kalınlığında parçalar halinde dilimleyin.
    4. Dilimlenmiş dokunun 50 g'ını 500 mL plastik bir kap içine aktarın.
      NOT: Burada, dokuları kontaminasyondan korumak ve çözelti buharlaşmasını önlemek için kapaklı plastik bir kap önerilir.
  3. Reaktiflerle tedavi.
    NOT: Tüm hücre dışılaştırma işlemi 150 rpm'de dijital orbital shaker üzerinde 4 °C'de yapılmalıdır. Tüm decellularization adımlarda, fiziksel müfreze kullanarak forceps birlikte yapışmasını pankreas dilimleri önlemek için gereklidir. Konteynerin distile su ile yıkanması, artık reaktiflerin tamamen kapta çıkarılması için gereklidir.
    1. Herhangi bir reaktif işlemeden önce, bir shaker kullanarak distile su 300 mL ile dilimlenmiş pankreas 50 g yıkayın.
    2. Bulutlu su kaybolana kadar (yaklaşık 12 saat sonra) 150 rpm sürekli doku karıştırın. Damıtılmış suyu her 2 saatte bir değiştirin.
      NOT: Bulutlu suyun daha hızlı temizlenmesi için her saat demıtılmış suyun değiştirilmesi tavsiye edilir.
    3. Suyu atın ve 50 g mendilin 400 mL'si ile 1x PBS çözeltisinde %1 Triton-X 100 ile 84 saat boyunca çözeltiyi yenileyin.
      NOT: Bu noktada, hücresel bileşenler çıkarılmaya başladığından doku miktarı azalır.
    4. Pankreastan kalan yağ kaldırmak için 2 saat için isopropanol 400 mL ile tedavi edin .
      NOT: Bu süreçte yağ ın alınması nedeniyle dokunun sertleşmesi normaldir.
    5. 2 saat sonra IPA'yı çıkarın ve 24 saat boyunca 400 mL 1x PBS ile dokuyı yıkayın.
    6. Hücredışı dokuyu sterilize etmek için önceki çözeltiyi atın ve 400 mL%0.1 perasetik asit ile 2 saat boyunca %4 etanolde tedavi edin.
    7. Artık deterjanı çıkarmak için, 6 saat boyunca 400 mL 1x PBS ile dokuyu yıkayın.
    8. Dejeneratize edilmiş dokuları 50 mL'lik konik bir tüpte forceps ile toplayın.
    9. Numuneyi -80 °C'de 1 saat boyunca dondurun. Konik tüpü kapak yerine tüy bırakmayan bir mendille kapatın ve verimli bir şekilde linofizasyon için bir lastik bantla düzeltin.
    10. -50 °C'de 4 d için hücreli dokuyu lyophilize.
      NOT: 1.3. adım için, hücre dışı olmayan doku1 g de aynı koşullar altında dondurularak kurutulmalıdır.

2. Hücre dışı dokuların değerlendirilmesi

NOT: DsDNA, glikozaminoglikan (GAGs) ve kollajen in decellularized doku doğal doku ile karşılaştırıldığında kalıntı miktarını değerlendirmek için, dejeneratif olmayan doku (yerli doku) ve desellüler doku her biri en az 1 g gereklidir bir değerlendirme toplu. DSDNA, GAGs ve kollajen miktarı dokunun kuru ağırlığına göre hesaplanabilir.

  1. Biyokimyasal tahliller için çözümler hazırlayın.
    1. Örnek sindirim için papain çözeltisi hazırlayın.
      NOT: Yapılacak arabellek miktarı örnek sayısına göre ayarlanabilir.
      1. Çözün 119 mg 0.1 M sodyum fosfat (monobazik), 18.6 mg 0.5 mM Na2-EDTA, ve 8.8 mg 5 mM sistein-HCl 10 mL otoklavlı su.
      2. 10 M NaOH çözeltisi ekleyerek çözeltinin pH'ını 6,5'e ayarlayın.
      3. Yukarıdaki çözeltiye ve girdaba 125 mg/mL papain stok çözeltisi ekleyerek her bir elementin eşit şekilde karışmasını bekleyin.
    2. Dimetil-metilen mavisi (DMMB) teşbibi için çözümler hazırlayın.
      1. DMMB boya yapmak için, 1,9-dimethyl-metilen mavi çinko klorür çift tuz 8 mg çözünür, glisin 1.52 g, ve NaCl 1.185 g 500 otoklavlı su mL. Tezgah üstü pH metre kullanarak pH değişimini ölçerken 0,5 M HCl çözeltisi ekleyerek pH'ı 3'e ayarlayın. Ardından, bunu 500 mL'lik şişe üstü vakum filtresine filtreleyin.
      2. 15 μL 10 mg/mL kondroitin sülfat Standart için bir çözelti yapın.
    3. Hidroksiproline titretisi için çözümler hazırlayın.
      1. Kloramin çalışma çözeltisi için, 2,4 g sodyum asetat, 1 g sitrik asit ve 0,68 g sodyum hidroksiti 24 mL distile suda çözün ve 240 μL buzul asetik asit, 10 μL toluen ve 6 mL IPA ekleyin.
        NOT: Girdap mikseri kullanarak tüm tozları çözelti halinde çözün. Kloramin çalışma çözeltisi 4 °C'de üç aya kadar saklanabilir.
      2. Kloramin T çözeltisi için, 0,35 g kloramin T'yi 20 mL kloramin çalışma çözeltisinde çözünve 2,5 mL IPA ekleyin. Girdap tüm bileşenleri karıştırmak için.
        NOT: Kullanmadan hemen önce hazırlayın.
      3. P-DAB çözeltisi için, 6,5 mL perklorik asit ve 15 mL IPA içine 3,75 g P-DAB koyun; alüminyum folyo sarın.
        NOT: Kullanmadan hemen önce hazırlayın.
  2. 1.5 mL mikrosantrifüj tüp ve daha iyi örnek sindirmek için tüp girdap lyophilized doku 10 mg papain çözeltisi 1 mL ekleyin.
  3. 1,5 mL mikrosentrifüj tüpünü kauçuk bir rafa yerleştirin ve numuneleri 60 °C'de 16 saat boyunca 300 mL su içeren 500 mL'lik bir kabın içine sindirin.
  4. 20 dk için 9.500 x g santrifüj, supernatant toplamak ve yeni bir tüp içine aktarın.
  5. Hücreleşmiş dokudaki artık DNA ve ana proteinleri ölçün.
    1. Sindirilmiş numunenin 1 μL'sini spektrometreye yükleyin ve üreticinin talimatlarına göre dsDNA miktarını ölçün.
      NOT: Deneyci, numuneyi kirletmemek için saçlarını arkaya bağlamalı ve maske takmalıdır.
  6. Hücredışı dokuda kalan GAG miktarını ölçmek için bir DMMB testi gerçekleştirin.
    1. Standartları yapmak için 1 μL kondroitin sülfat A çözeltisi ve 499 μL 1x PBS'yi karıştırın. Kondroitin sülfatı seyreltin 0, 4, 8, 12, 16 ve 20 μg/mL konsantrasyonlarda distile su ile bir çözelti.
    2. Standart ve sindirilmiş numunelerin her konsantrasyonunun 50°L'lik kısmını 96 kuyulu bir tabağa yükleyin.
    3. Çok kanallı pipet kullanarak her kuyuya 200 μL DMMB boya ekleyin.
    4. Hemen bir mikroplaka okuyucu üzerinde 525 nm de emici okuyun.
  7. Kollajen miktarını ölçmek için bir hidroksiproline testi gerçekleştirin.
    1. Hidroksiprolin testini yapmak için, 120 °C'de 16 saat boyunca eşit hcl hacimlerde 250 μL sindirilmiş numuneyi kuluçkaya yatırın.
    2. Numuneleri soğutmak için oda sıcaklığındaki artıkları 3 saat kurulayın ve numuneleri 1 mL 1x PBS'de yeniden çözün.
    3. 4 °C'de 10 dk için 2.400 x g santrifüj.
    4. Standart olarak 100 μg/mL hidroksiprolin çözeltisi hazırlayın.
    5. Standart bir çözelti için 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 15, 20, 30 μg/mL konsantrasyonda distile suile hidroksiprolin çözeltisi.
    6. 50 μL numune ve standart çözeltinin üçe trilycatelerini 96 kuyulu bir tabağa yükleyin.
    7. 50 μL Kloramin T çözeltisi ekleyin ve oda sıcaklığında 20 dakika kuluçkaya yatırın.
    8. 50 μL p-DAB çözeltisi ekleyin ve 60 °C'de 30 dakika kuluçkaya yatırın.
      NOT: Aliquot karanlık bir odada. Eklemeden sonra, alüminyum folyo ile plaka sarın.
    9. 30 dakika oda sıcaklığında kuluçka.
    10. Soğuduktan sonra, bir mikroplaka okuyucu üzerinde 540 nm emici ölçün.

3. Bioink hazırlama

NOT: pdECM tozu -80 °C'de en az bir yıl saklanabilir. pH ayarı yapılmadan önce sindirilmiş pdECM çözeltisi -20 °C'de bir ay saklanabilir. Kullanmadan önce, dondurulmuş pdECM çözeltisi örneğini bir gecede 4 °C'de eritin. PH ayarlı pdECM çözeltisi 4 °C'de bir haftaya kadar saklanabilir. Sindirilmiş pdECM çözeltisi en az birkaç gün 4 °C'de saklanabilir ancak 1 haftayı geçmemelidir.

  1. Pepsin ile dondurulmuş pdECM sindirin.
    1. Bioink etkili sindirim için, bir harç ve havaneli kullanarak sıvı azot ile lyophilized pdECM pulverize.
    2. 50 mL konik tüpte pdECM tozunun 200 mg'ını toplayın ve pepsin'in 20 mg'ını ve 0,5 M asetik asitin 8,4 mL'sini ekleyin (son konsantrasyon 2 w/v%).
    3. Manyetik karıştırma çubuğunu 50 mL konik tüpe yerleştirin ve 300 rpm'de 96 saat karıştırın.
  2. Sindirilmiş pdECM çözeltisinin pH'ını ayarlayın.
    NOT: PH ayarı öncesi jelleşmeyi önlemek için bu işlem buz üzerinde yapılmalıdır.
    1. Parçaların optimum sindirimini elde etmek için buz üzerinde pozitif yer değiştirme pipeti kullanarak 40 μm hücreli süzgeç kullanarak pdECM çözeltisindeki sindirilmemiş parçacıkları filtreleyin.
    2. NaOH kullanmadan önce 10x PBS ve girdap 1 mL ekleyin.
    3. pH gösterge şeritleri ile pH kontrol 10 M NaOH ile 7 pH ayarlayın.
      NOT: Girdap her zaman NaOH eklenir böylece bioink iyice diğer reaktifler ile karıştırılır.

4. Reolojik analiz

  1. Deneysel kurulum
    1. Reolojik özellikleri değerlendirmek için pdECM bioink%1.5 (w/v) hazırlayın.
    2. Bir reometrenin hız kontrollü modunda 20 mm koni plaka geometrisi (2° açı ile 20 mm koni çapı) kurutucu modunu kurun.
    3. PDECM bioink viskozite, jelleşme kinetik ve dinamik modülü ölçmek için yüklü yazılım (TRIOS) deneysel dizileri oluşturun.
      1. Viskozite: pdECM bioink'i plakaya yerleştirin. PDECM bioink'in karmaşık viskozitesini (Pa·s) 1ila 1.000 s-1'e kadar artan bir kesme hızı altında 15 °C sabit sıcaklıkta ölçün.
      2. Jelasyon kinetiği: pdECM bioink'i plakaya yerleştirin. PDECM bioink'in depolama ve kayıp modüllerini 4-37 °C'de 5 °C/dk (zaman süpürme modu) artımlı artış hızıyla ölçerek karmaşık modülü (G*) hesaplayın.
      3. Dinamik modül: PdECM bioink'i ölçümden önce 60 dk boyunca 37 °C'de plakaüzerine yerleştirin. PdECM bioink'in frekansa bağlı depolama modülünü (G') ve kayıp modülünü (G'') 0,1-100 rad/s aralığında %2 gerilme de ölçün.

5. Pankreas dokusunun 3D hücre baskı adacık kullanılarak inşa eder

  1. İzole adacıkların hazırlanması
    1. Bir önceki çalışmada açıklanan protokollere göre birincil adacıkları bir sıçandan yalıtmak5.
    2. Yalıtılmış isletten enkaz ve ölü hücreleri ayırmak için hücre süspansiyonundan 70 μm'lik bir süzgeçten geçirin. Çapı 70 μm'den küçük olan adacıklar ölü veya anormal olarak kabul edilir.
    3. RPMI-1640 orta izole adacıklar askıya ve petri kabına yerleştirin. Biyogüvenlik kabininde mikroskop (4x objektif lens) altında P200 hacimli pipet kullanarak çapı 300 μm'den büyük adacıkları çıkarın.
  2. pdECM bioink içine adacık kapsülleme
    1. pH ayarlı pdECM bioink ve izole adacık hazırlayın.
      NOT: pH ayarı yapılmadan önce jelleşmeyi önlemek için bu işlem buz üzerinde yapılmalıdır.
    2. PdECM bioink'i ve askıya alınan ortamı adacıklarla (oran 3:1) pozitif bir deplasman pipeti kullanarak tek düze karıştırılıncaya kadar hafifçe karıştırın.
      NOT: PDECM bioink son konsantrasyonu 1.5% ve pdECM bioink hücre yoğunluğu 3.000 IEQ / mL olduğunu.
  3. Pankreas dokusu nun 3Boyutlu hücre baskısı yapır
    1. Sterilize şırınga ve 22 G nozul hazırlayın.
      NOT: Bu gösterge, çapı 100-250 m olan adacıkların basımı için seçilmiştir.
    2. Şırıngaya adacık yüklü pdECM bioink yükleyin.
    3. Bioink'i en iyi baskı durumuna göre (besleme hızı: 150 mm/dak; pnömatik basınç: 15 kPa) 18 °C'de kafes şeklinde yazdırın.
    4. Bioink çapraz bağlantı için, 30 dakika için kuvöz baskılı yapı yerleştirin.
    5. RPMI-1640 orta% 10 fetal sığır serumu (FBS), 100 U / mL penisilin ve 100 U/ mL streptomisin ile birlikte olan adacık kültür medya içine basılı yapı batırın.

6. Desenli yapı ile pankreas yapı3D hücre baskı

  1. Bioink iki tip hazırlanması
    1. Birden fazla bioink kullanarak baskı çok yönlülüğünü doğrulamak için, pdECM bioinks iki set hazırlamak ve her pdECM bioink içine% 0.4 Trypan Blue ve Rose Bengal çözeltisi ekleyerek onları leke 1:20, sırasıyla.
      NOT: pH ayarı yapılmadan önce jelleşmeyi önlemek için bu işlem buz üzerinde yapılmalıdır.
    2. PdECM bioink'i ve askıya alınan ortamı adacıklarla (oran 3:1) pozitif bir deplasman pipeti kullanarak tek düze karıştırılıncaya kadar hafifçe karıştırın.
      NOT: PDECM bioink son konsantrasyonu 1.5% ve pdECM bioink hücre yoğunluğu 3.000 IEQ / mL olduğunu.
  2. Çok malzeme tabanlı pankreas dokusu nun 3Boyutlu hücre baskısı yapır
    1. Sterilşine şırıngalar ve 25 G nozul hazırlayın.
    2. Her bioink (mavi ve kırmızı) iki farklı şırınga, sırasıyla yük.
    3. Bioink'i optimize baskı durumuna (besleme hızı: 150 mm/dak; pnömatik basınç: 15 kPa) 18 °C'de mavi ve kırmızı dan oluşan alternatif çizgilere sahip bir kafes şeklinde yazdırın.
    4. Bioink çapraz bağlantı için, 30 dakika için kuvöz baskılı yapı yerleştirin.
    5. RPMI-1640 orta% 10 fetal sığır serumu (FBS), 100 U / mL penisilin ve 100 U/ mL streptomisin ile birlikte olan adacık kültür medya içine basılı yapı batırın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Pankreas dokularının hücredışılaştırılması
3Boyutlu biyobaskılı doku yapısında adacıkların işlevselliğini artırmak için pankreas dokusuna özgü mikroortamlar sağlamak için pdECM bioink hazırlama sürecini geliştirdik(Şekil 2A).


Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu protokol, pdECM bioinks gelişimi ve 3D hücre baskı teknikleri kullanılarak 3D pankreas dokusu yapıları imalatı açıklanmıştır. 3D mühendislik doku yapısında hedef dokunun mikro ortamını özetlemek için bioink seçimi çok önemlidir. Bir önceki çalışmada, dokuya özgü dECM bioinks kök hücre farklılaşması ve çoğalması teşvik etmek için yararlı olduğunu doğruladı10. Sentetik polimerler ile karşılaştırıldığında, dECM dokuya özgü kompozisyon ve mimarisi nedeniyle hücre açısından elverişli bir ortam olara...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Teşekkürler

Bu araştırma, Kore hükümeti (MSIT) (2017M3A9C6032067) ve "BİT Eşzamanlılık Yaratıcı Programı" (IITP-2019-1-00783) tarafından finanse edilen Ulusal Araştırma Vakfı'nın (NRF) Biyo ve Tıbbi Teknoloji Geliştirme programı tarafından desteklenmiştir. IITP (Institute for Information & Communications Technology Planning & Evaluation) tarafından denetlenir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Biyolojik Güvenlik KabinleriCRYSTEPURICUBE 1200
Derin DondurucuThermo Scientific Forma957
Dijital orbital çalkalayıcıDAIHAN ScientificDH.
Kuru fırınDAIHAN ScientificWON-155
Dondurarak kurutucuLABCONCO7670540
BuzdolabıSANSUNGCRFD-1141
RendeABM1415605793
Ters MikroskoplarLeicaDMi1
MikrosantrifüjCRYSTEPURISPIN 17R
Mikroplaka okuyucuThermo Fisher ScientificMultiskan GO
Mini santrifüjDAIHAN ScientificCF-5
Çoklu Ocak Gözü KarıştırıcılarDAIHAN ScientificSMHS-6
NanodropThermo Fisher ScientificND-LITE-PR
pH tezgah üstü ölçüm cihazıThermo Fisher ScientificSTARA2110
ReometreTA EnstrümanKeşfi HR-2
Vorteks KarıştırıcıDAIHAN ScientificVM-10
Siurjik Aletler
İşletme MakasıHiroseHC.13-122
ForcepKore Ace ScientificHC.203-30<
güçlü>Malzemeler
1.7 mL mikrosantrifüj tüpüAxygenMCT-175-C
10 ml cam şişeScilabSL. VI1243
40 ve mikro; m hücreli süzgeçFalcon352340
5 L beherDong Sung ScienceSDS 2400
50 mL kornik tüpFalcon352070
500 mL beherKore Ace ScientificKA.23-08
500 mL şişe üstü vakum filtresiCorning431118
500 mL plastik kapKİLİT& KİLİTINL301
96kuyu plakasıFalcon353072
Alüminyum folyoDAEKYO
KimwipeKimtech
Manyetik çubukKore Ace ScientificBA.37110-0003
Harç ve havaneliDAIHAN ScientificSC. MG100
Çok kanallı pipetleyiciEppendorf4982000314
Petri KabıSPL10100
pH indikatör şeritleriSigma-Aldrich1095350001
Elek filtre ağıDAIHAN Scientific
Decellularization
10x pbsHycloneSH30258.01
%4.7 Perasetik asitOmegafarm
%70 etanolSAMCHUN KİMYASALLARIE0220 SAM
Damıtılmış su
IPASAMCHUN KİMYASALLARIsamchun I0348
Triton-X 100BiosesangT1020
Biyokimyasal tahlil
1,9-Dimetil-Metilen Mavisi çinko klorür çift tuzSigma-Aldrich341088
10 N NaOHBiosesangS2018
Kloramin TSigma-Aldrich857319
Kondroitin sülfat ASigma-AldrichC4384
Sitrik asitSupelco46933
Sistein-HClSigma-AldrichC1276
Buzlu asetik asitMerok100063
GlisinSigma-Aldrich410225
HClSigma-AldrichH1758
Na2-EDTASigma-AldrichE5134
NaClSAMCHUN KİMYASALLARIS2097
PapainSigma-Aldrichp4762
P-DABSigma-AldrichD2004
Perklorik asitSigma-Aldrich311421
Sodyum asetatSigma-AldrichS5636
Sodyum hidroksitSupelcoSX0607N
Sodyum fosfat (monobazik)Sigma-AldrichRDD007
ToluenSigma-Aldrich244511
biyomürekkep< / güçlü>
Chariterized FBSHycloneSH30084.03
Penisilin-StreptomisinThermo Fisher Bilimsel15140122
PepsinSigma-AldrichP7215
Gül bengalSigma-Aldrich198250
RPMI-1640 orta ThermoFisher Scientific11875093
Tripan Mavisi çözeltisiSigma-AldrichT8154
WSO04010

Kaynaklar

  1. Shapiro, A. J., Pokrywczynska, M., Ricordi, C. Clinical pancreatic islet transplantation. Nature Reviews Endocrinology. 13 (5), 268(2017).
  2. Venturini, M., et al. Technique, complications, and therapeutic efficacy of percutaneous transplantation of human pancreatic islet cells in type 1 diabetes: the role of US. Radiology. 234 (2), 617-624 (2005).
  3. Xie, D., et al. Cytoprotection of PEG-modified adult porcine pancreatic islets for improved xenotransplantation. Biomaterials. 26 (4), 403-412 (2005).
  4. Sackett, S. D., et al. Extracellular matrix scaffold and hydrogel derived from decellularized and delipidized human pancreas. Scientific Reports. 8 (1), 10452(2018).
  5. Kim, J., et al. 3D cell printing of islet-laden pancreatic tissue-derived extracellular matrix bioink constructs for enhancing pancreatic functions. Journal of Materials Chemistry B. 7 (10), 1773-1781 (2019).
  6. Yi, H. G., et al. A bioprinted human-glioblastoma-on-a-chip for the identification of patient-specific responses to chemoradiotherapy. Nature Biomedical Engineering. 1, (2019).
  7. Das, S., et al. Decellularized extracellular matrix bioinks and the external stimuli to enhance cardiac tissue development in vitro. Acta Biomaterialia. , (2019).
  8. Kim, H., et al. Shear-induced alignment of collagen fibrils using 3D cell printing for corneal stroma tissue engineering. Biofabrication. 11 (3), 035017(2019).
  9. Huang, H. H., Ramachandran, K., Stehno-Bittel, L. A replacement for islet equivalents with improved reliability and validity. Acta Diabetologica. 50 (5), 687-696 (2013).
  10. Pati, F., et al. Printing three-dimensional tissue analogues with decellularized extracellular matrix bioink. Nature Communications. 5, 3935(2014).
  11. Hussey, G. S., Dziki, J. L., Badylak, S. F. Extracellular matrix-based materials for regenerative medicine. Nature Reviews Materials. 1, (2018).
  12. Kim, B. S., Kim, H., Gao, G., Jang, J., Cho, D. W. Decellularized extracellular matrix: a step towards the next generation source for bioink manufacturing. Biofabrication. 9 (3), 034104(2017).
  13. Gaetani, R., et al. Evaluation of different decellularization protocols on the generation of pancreas-derived hydrogels. Tissue Engineering Part C: Methods. 24 (12), 697-708 (2018).
  14. Gao, G., et al. Tissue engineered bio-blood-vessels constructed using a tissue-specific bioink and 3D coaxial cell printing technique: a novel therapy for ischemic disease. Advanced Functional Materials. 27 (33), 1700798(2017).
  15. La, W. G., et al. Systemically replicated organic and inorganic bony microenvironment for new bone formation generated by a 3D printing technology. RSC Advances. 6 (14), 11546-11553 (2016).
  16. Lee, H., et al. Development of liver decellularized extracellular matrix bioink for three-dimensional cell printing-based liver tissue engineering. Biomacromolecules. 18 (4), 1229-1237 (2017).
  17. Choudhury, D., Tun, H. W., Wang, T., Naing, M. W. Organ-derived decellularized extracellular matrix: a game changer for bioink manufacturing? Trends in Biotechnology. 36 (8), 787-805 (2018).
  18. Kurpios, N. A., et al. The direction of gut looping is established by changes in the extracellular matrix and in cell: cell adhesion. Proceedings of the National Academy of Sciences. 105 (25), 8499-8506 (2008).
  19. Sakai, T., Larsen, M., Yamada, K. M. Fibronectin requirement in branching morphogenesis. Nature. 423 (6942), 876(2003).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Pankreas Dokusu Kaynakl ECMDesel lerize Ekstrasell ler MatriksBioink Haz rlama3B Biyobas m Tekni iAdac k Enkaps lasyonuDokuya zg KompozisyonEkstr zyon Tabanl Bas mReolojik KarakterizasyonSol Jel Ge i iGlukoz Duyarl l De erlendirmesi
3D Hücre Yüklü Pankreas Dokusu Yapıları Baskı için Pankreas Doku Türetilmiş Ekstrasellüler Matrix Bioink
Bize ulaşın
Kütüphaneye tavsiye et

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Telif hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.