Hücre dışı matriks (dECM) tasarlanmış bir yapıda hedef dokuların doğal işlevlerini yeniden özetlemek için uygun mikroçevresel ipuçları sağlayabilir. Bu makalede pankreas dokusunun desellülsizasyonu için protokoller açıklanmıştır, pankreas dokusu kaynaklı dECM bioink decm dECM değerlendirilmesi, ve 3D pankreas dokusu üretimi bir biyobaskı tekniği kullanılarak inşa eder.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
3D Hücre Yüklü Pankreas Dokusu Yapıları Baskı için Pankreas Doku Türetilmiş Ekstrasellüler Matrix Bioink
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Pankreas adacıklarının nakli hipoglisemi ve sekonder komplikasyonlar eşliğinde tip 1 diyabet muzdarip hastalar için umut verici bir tedaviyöntemidir. Ancak, adacık nakli nin kötü adacık engraftment ve düşmanca ortamlar nedeniyle nakledilen adacıkların düşük canlılığı gibi çeşitli sınırlamalar hala vardır. Buna ek olarak, insan pluripotent kök hücrelerinden farklı insülin üreten hücreler kan şekeri seviyesini düzenleyen yeterli hormonsssalgılamak için sınırlı yeteneği var; bu nedenle, uygun mikroçevresel ipuçları ile hücreleri kültürleme tarafından olgunlaşma iyileştirilmesi kuvvetle gereklidir. Bu makalede, pankreas adacıklarının glikoz duyarlılığını artırabilecek yararlı bir mikroortam sağlamak için pankreas dokusu ndan elde edilen hücre dışı matriks (pdECM) biyoink hazırlanması için protokolleri açıklar, ardından 3D pankreas dokusu oluşturma süreçleri mikroekstrüzyon tabanlı biyobaskı tekniği kullanılarak oluşturur.
Giriş
Son zamanlarda, pankreas adacık nakli tip 1 diyabetli hastalar için umut verici bir tedavi olarak kabul edilmiştir. Göreceli güvenlik ve prosedürün minimal invazivlik bu tedavinin büyük avantajları vardır1. Ancak, izole adacıkların düşük başarı oranı ve immünsupresif ilaçların yan etkileri gibi çeşitli sınırlamalar vardır. Ayrıca, engrafted adacık ların sayısı sürekli olarak ekim sonrası düşmancaçevre2 nedeniyle azalır. Bu zorlukların üstesinden gelmek için pankreas adacık transplantasyonuna aljinat, kollajen, poli (laktik-koglikolik asit) (PLGA) veya polietilen glikol (PEG) gibi çeşitli biyouyumlu malzemeler uygulanmışt....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Domuz eti pankreas dokuları yerel bir mezbaha dan toplandı. Hayvan deneyleri Asan Tıp Merkezi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylandı, Seul, Kore.
1. Doku decellularization
- Hücre dışılaştırma için çözümler hazırlayın.
NOT: Tüm çözelti preparatlarında kullanılan 1x fosfat tamponlu salin (PBS) 10x PBS'ye distile su eklenerek seyreltilir.- %1 Triton-X 100 çözümü için, 100 mL 100 mL 100 mL 1x PBS 1x 1x 150 rpm'de karıştırma çubuğu kullanarak 100 mL 100 mL çözündür. PBS kullanımdan hemen önce hazırlanır.
NOT: %10 Triton-X 100 çözeltisi ihtiyaç duyulana kadar oda sıcaklığında saklanabilir.
- %1 Triton-X 100 çözümü için, 100 mL 100 mL 100 mL 1x PBS 1x 1x 150 rpm'de karıştırma çubuğu kullanarak 100 mL 100 mL çözündür. PBS kullanımdan hemen önce hazırlanır.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Pankreas dokularının hücredışılaştırılması
3Boyutlu biyobaskılı doku yapısında adacıkların işlevselliğini artırmak için pankreas dokusuna özgü mikroortamlar sağlamak için pdECM bioink hazırlama sürecini geliştirdik(Şekil 2A).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu protokol, pdECM bioinks gelişimi ve 3D hücre baskı teknikleri kullanılarak 3D pankreas dokusu yapıları imalatı açıklanmıştır. 3D mühendislik doku yapısında hedef dokunun mikro ortamını özetlemek için bioink seçimi çok önemlidir. Bir önceki çalışmada, dokuya özgü dECM bioinks kök hücre farklılaşması ve çoğalması teşvik etmek için yararlı olduğunu doğruladı10. Sentetik polimerler ile karşılaştırıldığında, dECM dokuya özgü kompozisyon ve mimarisi nedeniyle hücre açısından elverişli bir ortam olara.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Teşekkürler
Bu araştırma, Kore hükümeti (MSIT) (2017M3A9C6032067) ve "BİT Eşzamanlılık Yaratıcı Programı" (IITP-2019-1-00783) tarafından finanse edilen Ulusal Araştırma Vakfı'nın (NRF) Biyo ve Tıbbi Teknoloji Geliştirme programı tarafından desteklenmiştir. IITP (Institute for Information & Communications Technology Planning & Evaluation) tarafından denetlenir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Biyolojik Güvenlik Kabinleri | CRYSTE | PURICUBE 1200 | |
| Derin Dondurucu | Thermo Scientific Forma | 957 | |
| Dijital orbital çalkalayıcı | DAIHAN Scientific | DH. | |
| Kuru fırın | DAIHAN Scientific | WON-155 | |
| Dondurarak kurutucu | LABCONCO | 7670540 | |
| Buzdolabı | SANSUNG | CRFD-1141 | |
| Rende | ABM | 1415605793 | |
| Ters Mikroskoplar | Leica | DMi1 | |
| Mikrosantrifüj | CRYSTE | PURISPIN 17R | |
| Mikroplaka okuyucu | Thermo Fisher Scientific | Multiskan GO | |
| Mini santrifüj | DAIHAN Scientific | CF-5 | |
| Çoklu Ocak Gözü Karıştırıcılar | DAIHAN Scientific | SMHS-6 | |
| Nanodrop | Thermo Fisher Scientific | ND-LITE-PR | |
| pH tezgah üstü ölçüm cihazı | Thermo Fisher Scientific | STARA2110 | |
| Reometre | TA Enstrüman | Keşfi HR-2 | |
| Vorteks Karıştırıcı | DAIHAN Scientific | VM-10 | |
| Siurjik Aletler | |||
| İşletme Makası | Hirose | HC.13-122 | |
| Forcep | Kore Ace Scientific | HC.203-30< | |
| güçlü>Malzemeler | |||
| 1.7 mL mikrosantrifüj tüpü | Axygen | MCT-175-C | |
| 10 ml cam şişe | Scilab | SL. VI1243 | |
| 40 ve mikro; m hücreli süzgeç | Falcon | 352340 | |
| 5 L beher | Dong Sung Science | SDS 2400 | |
| 50 mL kornik tüp | Falcon | 352070 | |
| 500 mL beher | Kore Ace Scientific | KA.23-08 | |
| 500 mL şişe üstü vakum filtresi | Corning | 431118 | |
| 500 mL plastik kap | KİLİT& KİLİT | INL301 | |
| 96kuyu plakası | Falcon | 353072 | |
| Alüminyum folyo | DAEKYO | ||
| Kimwipe | Kimtech | ||
| Manyetik çubuk | Kore Ace Scientific | BA.37110-0003 | |
| Harç ve havaneli | DAIHAN Scientific | SC. MG100 | |
| Çok kanallı pipetleyici | Eppendorf | 4982000314 | |
| Petri Kabı | SPL | 10100 | |
| pH indikatör şeritleri | Sigma-Aldrich | 1095350001 | |
| Elek filtre ağı | DAIHAN Scientific | ||
| Decellularization | |||
| 10x pbs | Hyclone | SH30258.01 | |
| %4.7 Perasetik asit | Omegafarm | ||
| %70 etanol | SAMCHUN KİMYASALLARI | E0220 SAM | |
| Damıtılmış su | |||
| IPA | SAMCHUN KİMYASALLARI | samchun I0348 | |
| Triton-X 100 | Biosesang | T1020 | |
| Biyokimyasal tahlil | |||
| 1,9-Dimetil-Metilen Mavisi çinko klorür çift tuz | Sigma-Aldrich | 341088 | |
| 10 N NaOH | Biosesang | S2018 | |
| Kloramin T | Sigma-Aldrich | 857319 | |
| Kondroitin sülfat A | Sigma-Aldrich | C4384 | |
| Sitrik asit | Supelco | 46933 | |
| Sistein-HCl | Sigma-Aldrich | C1276 | |
| Buzlu asetik asit | Merok | 100063 | |
| Glisin | Sigma-Aldrich | 410225 | |
| HCl | Sigma-Aldrich | H1758 | |
| Na2-EDTA | Sigma-Aldrich | E5134 | |
| NaCl | SAMCHUN KİMYASALLARI | S2097 | |
| Papain | Sigma-Aldrich | p4762 | |
| P-DAB | Sigma-Aldrich | D2004 | |
| Perklorik asit | Sigma-Aldrich | 311421 | |
| Sodyum asetat | Sigma-Aldrich | S5636 | |
| Sodyum hidroksit | Supelco | SX0607N | |
| Sodyum fosfat (monobazik) | Sigma-Aldrich | RDD007 | |
| Toluen | Sigma-Aldrich | 244511 | |
| biyomürekkep< / güçlü> | |||
| Chariterized FBS | Hyclone | SH30084.03 | |
| Penisilin-Streptomisin | Thermo Fisher Bilimsel | 15140122 | |
| Pepsin | Sigma-Aldrich | P7215 | |
| Gül bengal | Sigma-Aldrich | 198250 | |
| RPMI-1640 orta Thermo | Fisher Scientific | 11875093 | |
| Tripan Mavisi çözeltisi | Sigma-Aldrich | T8154 |
Kaynaklar
- Shapiro, A. J., Pokrywczynska, M., Ricordi, C. Clinical pancreatic islet transplantation. Nature Reviews Endocrinology. 13 (5), 268(2017).
- Venturini, M., et al. Technique, complications, and therapeu....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
