Laringotracheal stenoz, trakeal hava yolunu kritik derecede daraltan ve etkili tıbbi tedavilerden yoksun patolojik skar birikiminden kaynaklanır. PlLA-PCL (%70 poli-L-laktit ve %30 polikaprolakon) stent kullanılarak lokal ilaç dağıtım sistemi olarak, trakeada skar proliferünü azaltmaya yönelik potansiyel tedaviler incelenebilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Laringotracheal Stenozlu Farelerde Biyouyumlu İlaç Eluting Trakeal Stent Tasarımı
Bu makalede
Özet
Özet
Laringotracheal darlığı (LTS), subglottis ve trakeanın patolojik olarak daraltması sonucu ekstratorasik obstrüksiyon ve önemli nefes darlığı. LTS trakea yabancı bir cisimden mukozal yaralanma sonuçları, doku hasarı ve ters gider lokal inflamatuar yanıta yol açan, patolojik skar dokusunun birikimine yol açan. LTS tedavisi etkili tıbbi tedavilerin eksikliği nedeniyle cerrahidir. Bu yöntemin amacı LTS ile fareler içine yerleştirmek için minyatür olabilir bir biyouyumlu stent inşa etmektir. Biz bir PLLA-PCL (%70 poli-L-laktit ve% 30 polikaprolakton) yapı optimal biyomekanik mukavemeti olduğunu gösterdi, biyouyumlu, in vivo yerleştirme stent için uygulanabilir, ve ilaç eluting yeteneğine sahip. Bu yöntem lokal inflamasyonu inhibe etmek ve hava yolu fibrozisini azaltmak için çeşitli immünomodülatör ajanları test etmek için bir ilaç dağıtım sistemi sağlar. Stentlerin imalatı 28−30 h sürer ve kolayca çoğaltılarak büyük kohortlarla deneyler yapılmasına olanak sağlar. Burada fibrozis ve kollajen birikimini azaltmada etkinliğini test etmek için stent içinde ilaç rapamisin dahil. Sonuçlar PLLA-PCL çadırgüvenilir rapamisin salınımı gösterdi, fizyolojik koşullarda mekanik olarak stabil olduğunu ve biyouyumlu olduğunu ortaya koymuştur, trakea küçük inflamatuar yanıt indükleyen. Ayrıca, rapamisin eluting PLLA-PCL stentler in vivo trakea skar oluşumunu azalttı.
Giriş
Laringorrakheal darlık (LTS), en sık iyatrojenik post-entübasyon yaralanmasına bağlı olarak trakeanın patolojik olarak daraltılmasıdır. Bakteriyel kolonizasyon kombinasyonu, trakeostomi veya endotrakeal tüpyabancı cisim yanıtı, ve hastaya özgü faktörler anormal inflamatuar yanıtyol açar. Bu maladaptif immün yanıt trakea kollajen birikimine yol açar, trakea ve sonraki darlık luminal daralma ile sonuçlanan1,2. Bu hastalığın mevcut tedavisi öncelikle cerrahi olduğundan, aşırı kollajen birikimine yol açan anormal inflamatuar ve profibrotik yolları hedefleyen tıbbi temelli alternatif bir tedavi paradigması geliştir....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
NOT: Burada açıklanan tüm yöntemler Johns Hopkins Üniversitesi Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (MO12M354) tarafından onaylanmıştır.
1. PLLA-PCL rapamisin hazırlanması
- 70:30 PLLA-PCL polimer çözeltileri (içsel viskozite 1.3−1.8 DL/G) iki cam şişe (kapaklı) hazırlayın; Malzeme Tablosu) % 1.0 rapamisin içeren bir şişe ve rapamisin olmadan diğer ile çözümler.
- Bir cam şişe de 70:30 PLLA-PCL 600 mg rapamycin 6 mg ekleyerek polimer çözeltisi içeren% 1.0 rapamisin olun.
- Rapamisin olmadan polimer çözeltisi için (kontrol), sadece cam şişe için 70:30 PLLA-PCL 600 mg ekleyin.
- Bir du....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bu çalışmada kullanılan rapamisin yüklü biyobozunur PLLA-PCL stent yapısı fizyolojik koşullarda tutarlı ve öngörülebilir bir şekilde rapamisin eluting yeteneğine sahip oldu(Şekil 1). Şekil 2, LTS'nin bir murine modelinde kullanılmak üzere 22 G anjiyaterin etrafına serpişne plla-PCL stentini göstermektedir. Trakeada rapamisin elusiyon etkilerinin fibrozisin zayıflatılmasında etkili olup olmadığını belirlemek için, fibrozis ile ilgili gen ekspresyonundaki ölçülen .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Başarılı bir şekilde inşa etmek ve vivo bir ilaç eluting stent kullanmak için en kritik adımlar 1) arzu edilen ilaç elüsülasyon oranı için optimal PLLA-PCL oranını belirleme, 2) eluted için ilaç uygun konsantrasyonu belirlenmesi, 3) stent kalıplama in vivo kullanım için anjiyokateter etrafında, ve 4) transoral ölümcül hava yolu tıkanıklığı neden olmadan LTS indüksiyon sonrası fareler içine stent teslim.
Hava yolu hastalığının hayvan modellerinde stent kullanarak ilaç teslimi için çeşitli yönte.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.
Teşekkürler
Ulusal Sağlık Enstitüleri Sağırlık ve Diğer İletişim Bozuklukları Enstitüsü ödül numaraları 1K23DC014082 ve 1R21DC017225 (Alexander Hillel) altında. Bu çalışma aynı zamanda Trioloji Derneği ve American College of Surgeons (Alexander Hillel), American Medical Association Foundation, Chicago, IL (Madhavi Duvvuri) ve T32 NIDCD eğitim bursu (Kevin Motz) tarafından da desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 1. Stent | |||
| 22 gauge anjiyokateter | Jelco | 4050 | |
| Diklorometan | Sigma Aldrich | 270997-100ML | |
| Gliserol | Fisher Scientific | 56-81-5 | Diğer satıcılardan da temin edilebilir. |
| PDLGA | Sigma Aldrich | 739955-5G | |
| PLLA-PCL (70: 30) | Evonik Industries AG | 65053 | |
| Rapamisin | LC Laboratuvarları | R-5000 | |
| 2. Hayvan cerrahisi< / güçlü > | |||
| Tel fırça | Mill-Rose Company | 320101 | |
| 3. İmmünohistokimya boyama | |||
| Antijen retrival tamponu | Abcam | ab93678 | Diğer satıcılardan da temin edilebilir; asidik pH gerekli |
| DAPI | Hücre Sinyalizasyonu | 8961S | |
| DMEM | ThermoFisher Scientific | 11965-092 | Diğer satıcılardan da temin edilebilir. |
| FBS (Fetal Sığır Serumu) | MilliporeSigma | F4135-500ML | |
| Keçi anti-tavşan-488 antikoru | Lif teknolojisi | a11008 | |
| Keçi anti-sıçan-633 antikoru | Lif teknolojisi | a21094 | |
| Hidrofilik artı slayt | BSB7028 | ||
| PBS | ThermoFisher Scientific | 100-10023 | Diğer satıcılardan da temin edilebilir. |
| Tavşan anti-CD3 antikoru | Abcam | ab5690 | |
| Sıçan antiF4/80 antikoru | Biolengend | 123101 | |
| Zeiss LSM 510 Meta Konfokal Mikroskop | Zeiss | ||
| 4. Kantitatif PCR | |||
| 0,5 mm cam boncuklar | OMNI International | 19-645 | |
| Boncuk Değirmeni Homojenizatör | OMNI International | ||
| Gen'e Özgü İleri/Geri Primerler | Genomik Kaynaklar Çekirdek Tesis | ||
| Nanodrop 2000 spektrofotometre | Termo Bilimsel | ||
| Güç SYBR Yeşil Mastermix | Yaşam Teknolojileri | 4367659 | |
| RNeasy mini kiti | Qiagen | 80404 | |
| StepOnePlus Gerçek Zamanlı PCR sistemi | Yaşam Teknolojileri |
Kaynaklar
- Minnigerode, B., Richter, H. G. Pathophysiology of subglottic tracheal stenosis in childhood. Progress in Pediatric Surgery. 21, 1-7 (1987).
- Wynn, T. A. Fibrotic disease and the T(H)1/T(H)2 paradigm. Nature Reviews Immunology. 4 (8), 583-594 ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
