Yöntem makalesi

Lenf Nodu Kriyosiyonlarında Tümör Hücre Adezyonunun Ölçülmesi

DOI:

10.3791/60531

⸱

9 Şubat 2020

 ,  ,  , 
1Molecular Oncology Center, Hospital Sírio-Libanês

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada, lenf nodu (LN) kriyokesilere yapışkan tümör hücrelerinin sayısallaştırılmasını sağlayan basit ve ucuz bir yöntemi tanımlıyoruz. LN-yapışık tümör hücreleri ışık mikroskobu ile kolayca tanımlanır ve floresan tabanlı bir yöntemle doğrulanır, tümör hücre bağlayıcılığını LN parenkime bağlayan bir adezyon indeksi verir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tümör drenaj lenf düğümleri (LNs) sadece tümör üretilen atık filtreleri değildir. Farklı kanser türlerine sahip hastalarda disemine tümör hücrelerinin geçici ikamet en yaygın bölgesel sitelerinden biridir. Bu LN-ikamet eden tümör hücrelerinin tespiti kötü prognoz ve adjuvan tedavi kararları ile ilişkili önemli bir biyobelirteçtir. Son fare modelleri LN-ikamet tümör hücrelerinin uzak metastazlar için malign hücrelerin önemli bir kaynak olabileceğini göstermiştir. Tümör hücrelerinin LN parankim'e yapışmasını ölçebilme yeteneği, genlerin tanımlanmasına veya lenfatik/metastatik yayma ile ilgili sinyal yollarına odaklanan deneysel araştırmalarda kritik bir göstergedir. LN'ler, kesit düzlemine bağlı olarak doku kesitlerinde çeşitli görünüm ve kompozisyonlara sahip karmaşık 3B yapılar olduğundan, matrislerinin deneysel olarak in vitro'yu tam kontrollü bir şekilde kopyalaması zordur. Burada, yapışkan tümör hücrelerinin LN kriyokesilerine nicelleştirilmesini sağlayan basit ve ucuz bir yöntemi tanımlıyoruz. Aynı LN'nin seri bölümlerini kullanarak Brodt tarafından geliştirilen klasik yöntemi radyoaktif olmayan etiketler kullanmak ve LN yüzey alanına göre bağlı tümör hücrelerinin sayısını doğrudan saymak için uyarlıyoruz. LN-yapışık tümör hücreleri ışık mikroskobu ile kolayca tanımlanır ve floresan tabanlı bir yöntemle doğrulanır, ln parenkim için hücre bağlayıcı lık ortaya koyan bir adezyon indeksi vererek, integrinlerin bağlaçlarına bağlanmasında moleküler değişikliklerin düşündürücü kanıtıdır.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kanser metastazı tedavi başarısızlığının ana nedeni ve kanserin yaşamı tehdit eden yönüdür. 130 yıl önce öne sürüldüğünde, metastatik yayılma sonuçları, yaygın tümör hücrelerinin elit (DTCs, "tohumlar") onları birincil siteleri kaçınmak ve uzak bölgelerde kötü huylu büyüme kurmak için izin belirli biyolojik yetenekler elde ("toprak")1. Son zamanlarda, premetastatik nişler indüksiyon ("tohum" gelişmek için gerekli bir "verimli toprak" olarak kavramsallaştırılmış), DTCs tarafından birincil tümörlerin kendi kendine tohumlama, ikincil organlarda "tohum" uykuhali ve metastazparalelilerleme modeli 2 gibi "tohum ve toprak" ilişkileri ile ilgili çeşitli yeni kavramlar ortaya çıkmıştır 2 .

Çoğu katı maligniteiçin, DTC'ler klinik metastaz bulgusu olan veya olmayan hastalarda kemik iliği ve lenf düğümleri (LN) gibi birçok mezenkimal organda bulunabilir ve saptanabilir. Tümör drenaj LNs DTCs bölgesel yayılmasının ilk yer olduğundan, LN durumu önemli bir prognostik göstergesidir ve genellikle adjuvan tedavi kararları ile ilişkilidir3. Bazı tümör tipleri için, LN durumu ve kötü sonuçlar arasındaki korelasyon güçlü, baş ve boyun dahil4,5, meme6, prostat7, akciğer8, mide9, kolorektal10,11 ve tiroid kanserleri12.

NNs retiküler hücrelerle kaplı ve lenfatik damarlar ile çevrili lenfatik sistemin küçük oval organlardır. Bu organlar kesinlikle bağışıklık sisteminin işleyişi için gereklidir13. NNs birlikte lenfositler ve antijen sunan hücreleri getirerek, bağışıklık dolaşan hücreler için çekici platformlar olarak hareket14. Ancak, LNs da dolaşan tümör hücrelerini çekmek. On yıllar boyunca, LNs metastatik tümör hücreleri için ulaşım pasif yolları olarak resmedildi. Ancak, son çalışmalar tümör hücrelerinin de kemotaktik (kemokinler) ve / veya haptotaktik (ekstrasellüler matriks elemanları) ipuçları lenfatik endotel15tarafından salgılanan lNs doğru yönlendirilmiş olabileceğini göstermiştir. Örnek olarak, tümör hücrelerinde CCR7 reseptörünün aşırı ekspresyonu tümör drenaj LNs16doğru metastatik melanom hücrelerinin rehberlik kolaylaştırır. Buna ek olarak, ekstrasellüler LN proteinleri işe alma ve dolaşım da dahil olmak üzere bir yapışkan iskele sağlamak17. Aslında, tümör drenaj LNs belirli LN mikroçevresel sinyaller18tarafından proliferatif veya atıl devletlerde muhafaza edilebilir DTCs, tohumlama için verimli toprak sağlamak. Bu LN ikamet Eden DTCs nihai kaderi tartışmalıdır; bazı çalışmalar bu hücrelerin metastatik ilerleme pasif göstergeler olduğunu düşündürmektedir19, diğerleri direnç daha olası kurucuları olduğunu düşündürmektedir (kendi kendine tohumlama birincil siteleri) ve / veya metastaziçin hücresel rezervuarlar olarak hareket (üçüncül kanser büyümesi için "tohum" yayılıyor)20,21. Son zamanlarda, preklinik modeller kullanılarak, bu LN ikamet DTCs aktif kan damarları işgal, kan dolaşımına girdi ve akciğerlerkolonize birkısmını gösterilmiştir 21 .

NNs kanser hücrelerinin varlığı kanser saldırganlık ve invazivite için bir belirteç olduğunu göz önünde bulundurarak, Bu çalışmada, biz kantitatif in IN NNs tümör hücre adezyonu ölçmek için Brodt22 tarafından geliştirilen klasik bir yöntem optimize. Floresan tabanlı bir testin kullanılması, tümör hücreleri ile LN kriyokesitleri arasındaki yapışkan değişikliklerin tespiti için düşük maliyetli, hızlı, hassas ve çevre dostu (radyoaktif olmayan) bir protokol geliştirmemize olanak sağladı. YÖNTEMe örnek vermek için NDRG4 gen ekspresyonu ve sıçan LN dondurulmuş bölümleri farklı düzeylerde ifade MCF-7 meme kanseri hücreleri kullanarak, bu protokol in vitro ve LN metastaz meme kanseri hastalarında gözlenen LN'ler için tümör hücre adezyonu arasında iyi bir korelasyon izin gösterdi24.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ldns servikal çıkış tarafından kurban sağlıklı yetişkin Wistar sıçanların taze leşkurtarıldı. NIH Laboratuvar Hayvanlarında Ağrı ve Sıkıntı Rehberi'ni takip ettik ve tüm prosedürler Sírio-Libanês Hastanesi Araştırma ve Eğitim Enstitüsü Etik Komitesi ve Hayvan Araştırmaları Komitesi tarafından onaylandı (CEUA P 2016-04).

NOT: Tüm taze dondurulmuş dokular biyolojik olarak tehlikeli olarak kabul edilir ve uygun biyogüvenlik önlemleri kullanılarak ele alınmalıdır.

1. Lenfadenektomi ve Kriyoding

  1. Oda sıcaklığında temiz bir diseksiyon panosuna sırt recumbency yatan yetişkin Wistar sıçanların (180-220 g) taze karkas yerleştirin.
    NOT: LN'ler ötanazi sonrası 30 dk'ya kadar toplanmalıdır.
  2. % 70 izopropil alkol ile sıçan karkas sprey ve LN hasat için steril aletler kullanın.
  3. Cımbız yardımıyla karın derisini kaldırın ve altta yatan dokuya zarar vermeden medial kesi ile bir oyuk açın, karın iç sezgisini açığa. Bağırsak dışarı çekin ve torasik ve abdominal LNs görünür hale gelir (Şekil 1).
  4. Dikkatle arkasında yatan üstün mezenterik arter yaralanmasını önlemek için künt ucu makası kullanımı ile her sıçan DANS'ları çıkarmak.
    NOT: Rezeke lenf nodunun bulunduğu yere bağlı olarak, mezenterik doku gibi ona bağlı diğer dokuların temizlenmesi gereklidir.
  5. 5 mL steril fosfat tamponlu salin (PBS) içeren 15 mL konik tüpler halinde hasat LN'leri.
  6. Fare leşlerini düzgün bir şekilde atın.
  7. PBS'den taze NN'leri çıkarın, düğümü kuru filtre kağıdına yuvarlayın ve kurulayın. Küçük bir Petri kabına yerleştirin ve dondurulmuş doku örnekleri (O.C.T.) için 2 dakika gömme çözeltisi ekleyin.
  8. LN'yi bir kriyomold tabanında istenilen pozisyonda, üzerini örtecek kadar O.C.T ile aşağı doğru aktarın ve yönlendirin. Doku yakınında kabarcıklar kaçının. Kesit yüzeyi kriyomold'un alt kısmıdır.
  9. Hemen kuru buz ile bir strafor soğutucu da kriyomold snap-freeze. Hala dondurulmamış O.C.T. (~ 20-35 s) küçük bir parçası olduğunda, alüminyum folyo için örnek aktarın ve kuru buz ile bir soğutucu yerleştirin diğer örnekleri dondurmaya devam ederken. Sonunda, kesit kadar -80 °C'de tüm örnekleri saklayın.
  10. Kesitli LN, kesit kalınlığını 5-8 m.'ye ayarlayan bir kriyostat ile mikroskop slaytlarına aktarın.
    NOT: Kesitlemeden önce, -80 °C'lik dondurucudan dondurulmuş numuneleri çıkarın ve -22 °C'de -22 °C'de sıcaklıkla dengede durun ve ln içeren slaytlar -80 °C'de bir aya kadar saklanabilir.

2. Floresan Boyalar ile Hücresel Etiketleme

NOT: Floresan boyalar hücre biyolojisinde yaygın olarak kullanılmaktadır. Biz uzun zincirli dialkylcarbocyanines etiketleme kullanmayı tercih (DiI(C18),uyarma 549 nm, Emisyon 565 nm) çünkü parlak, istikrarlı ve kültür medya doğrudan eklenebilir, hücre canlılığı veya hücre yapışkan özellikleri etkilemez25,26.

  1. İdeal koşullarda büyüyen hücreleri ayrıştırın (yani tam ortamda) ve serumsuz ortamda 106 hücre/mL yoğunlukta yeniden askıya alın.
  2. A15 mL konik tüpe 1 mL hücre süspansiyonu (106 hücre) ekleyin ve 37 °C'de 10 dakika boyunca Dil(C18)(2 μg/mL) etiketi ekleyin.
    NOT: 5 dakika sonra, hücre çökeltisini ve tortul hücrelerin alt boydananmasını önlemek için tüpleri hafifçe çalkalayın. Daha büyük yoğunluklar, tek tip boyama için daha uzun kuluçka süreleri gerektirir. Hücre boyama için en uygun kuluçka süresi hücre hattına göre değişir. Konvansiyonel FL2 akış sitometri sitometri sitometri sitometrisi algılama kanalı kullanılarak daha iyi ölçülebilir (Şekil 2A).
  3. 4 dk için 300 x g etiketli süspansiyon tüpleri santrifüj.
  4. Supernatant çıkarın ve serum içermeyen orta 10 mL iki kez yıkayın. Hücreleri kırmızı pelet olarak kurtarın. Serumsuz ortamda 106 hücre/mL'deki hücreleri %0.1 büyükbaş hayvan serum albumini (BSA) ile yeniden askıya alın.

3. Poli-L-lizin Solüsyonu veya Tohumlama Kontrolü Olarak BSA ile Precoating Yemekleri (İsteğe Bağlı)

NOT: Farklı tümör hücrelerinin farklı deney gruplarının aynı sayıda tohumlanmış olmasını sağlamak için PLL ile precoated hücre kültürü yemeklerini pozitif yükleme kontrol yüzeyleri olarak, ayrıca bsa kaplı yüzeyleri negatif kontroller olarak kullandık.

  1. Steril koşullarda, PLL veya BSA kaplı kuyuları hazırlamak için 300 μL PLL (H2O'da %0,1 w/v) veya BSA (H2O'da %2,5 w/v ile seyreltilmiş) ekleyin ve gece boyunca 4 °C'de kuluçkaya yatırın.
  2. Aspirasyon ile çözeltiyi çıkarın, steril PBS ile yüzeyi hafifçe durulayın ve hücre tohumlamadan önce doku kültürü kaputunda oda sıcaklığında tabağı havakurulayın.
    NOT: PLL veya BSA'nın son hacimleri farklı kuyu plakalarının alanına göre ayarlanmalıdır.

4. LN Kriyokesiveya PLL/BSA kaplı Kuyularda Floresan etiketli Tümör Hücrelerinin Tohumlanması

NOT: Deneysel kontroller olarak, (1) pll veya BSA ile önceden kaplanmış hücre kültürü yemeklerini ve (2) deney başına aynı LN'nin ardışık bölümlerini (Şekil 2D'deki bu ayrıntıya bakın), her LN bölümünün hücre yapışma hızını belirleyebilen hücre yapışma hızını belirleyebilen hücre dışı matris (ECM) bileşimindeki bölgesel varyasyonları en aza indirecek olan (Şekil 2D'de)kullandık. Aşağıdaki tümör hücre doyuzyun tonu için yüksek kaliteli ve sıralı LN kriyokesiyonları seçin.

  1. Kriyokesitleri PBS ile iki kez hafifçe yıkayın ve oda sıcaklığında 15 dakika boyunca PBS ile rehidrat.
  2. 37 °C'de 30 dk için %2,5 BSA ile kriyokesitlere spesifik olmayan yapışmayı engelleyin. Yıkama ve kuluçka sırasında tüm O.C.T'nin çıkarıldığından emin olmak için immünohistokimya yıkama odaları ve lamina beşiklerini kullanın.
  3. Kuru bir kağıt havlu üzerinde fazla BSA drenaj, bir pamuklu bez ile LN bölümlerin anahat kuru ve pap kalem kullanarak bölümleri çevreleyen.
  4. Tümör hücre adezyonu analizi için, her çevrelenmiş LN bölümüne 100 μL hücre süspansiyonu (adım 2.4)'i ekleyin veya 24 kuyulu PLL kaplı plakalara yerleştirin ve geleneksel hücre kültürü kuluçka makinesinde 37 °C'de 1-2 saat nemlendirilmiş bir hazne rafına yerleştirin.
    NOT: Hücre süspansiyonunun son hacmi, farklı çevrelenmiş LN'lerin alanına göre ayarlanmalıdır.
  5. Yapışmaz hücreleri PBS ile dört kez hafifçe yıkayın. Oda sıcaklığında 15 dakika pbs% 3.7 formaldehit ile kalan yapışık floresan hücreleri düzeltin.

5. Yapıştırıcı Endeksinin Manuel Nicelemesi

NOT: Yapıştırıcı indeksi (yani, tümör hücreleri/LN mm2)10X hedefi kullanılarak elde edildi ve tümör hücrelerinin sayısı manuel olarak sayılarak, ışık mikroskobu ile kolayca tanımlandı ve floresan mikroskop(Şekil 2D)ile doğrulandı , çeşitli bağımsız alanların lenf düğüm alanları başına (National Institute of Health ImageJ/FIJI yazılımı kullanılarak elde edildi).

  1. Parlak ve kırmızı floresan alanlara karşılık gelen iki kanalda ayrı TIFF görüntüleri almak için 10x hedefi olan floresan mikroskop kullanın(Şekil 2D). Bu görüntüleri sistematik olarak adlandırın ve kaydedin.
  2. ImageJ/FIJI'yi başlatın, görüntüleri açın ve ölçeği ayarlayın. Kalibrasyon ölçeği (örneğin, mikrometrik cetvel 1 mm)(Şekil 2C)kullanmak gerekir.
  3. Mikrometrik cetvelin (veya sahne mikrometresinin) fotoğrafını açın, Düz çizgi aracını seçin ve bilinen bir mesafeyi tanımlayan düz bir çizgi çizin.
  4. Analiz menüsünde Ölçek Ayarla'yıseçin. Piksellerde Mesafe, adım 5.3'te çizilen çizginin uzunluğuna (piksel olarak) göre doldurulur. Bilinen mesafe gerçek mesafe (bu durumda, milimetre) ve uzunluk alanı (bu durumda, milimetre cinsinden) birim uzunluk birimi ile doldurulacaktır.
  5. Global'e tıklayın (bu kalibrasyon bu ImageJ/FIJI oturumunda açılan tüm görüntüler için geçerlidir) ve Tamamtuşuna basın.
  6. Lenf düğümü alanı ölçümü: Değnek aracını seçin ve çift tıklayarak, Değnek aracı ayarlarını açın. Modu 8'e ayarlayın. Fotoğrafa tıklayın ve fotoğraftaki tüm lenf düğümlerini seçene kadar toleransı ayarlayın ve Tamamtuşuna basın. Alanı ölçmek için Analyze | Ölçü (CTRL + M). Alan daha önce belirlenen birimlerde ifade edilir.
  7. Tümör hücre niceliği: FIJI yazılımındaki ışık mikroskobu/floresan görüntülerini açın. Eklentileri Seçin | Analiz Et | Hücre Sayacı | Hücre Sayacı. Sayısalhale getirmek için fotoğrafın üzerine tıklayın ve hücre sayacı penceresinde Ki'ye initialize düğmesine basın. Sayaç türünü (1-8) seçin ve fotoğraftaki hücrelere tıklayın. Bir sonraki fotoğrafı açmak için hücre sayacı penceresindeki Sıfırla düğmesine basın, yeni fotoğrafı açın ve tüm adımları yineleyin.
    NOT: LN adezyon indeksi, LN kapalı alana göre yapışık tümör hücrelerinin sayısı olarak ifade edilir (hücre/mm2).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Biz ndrg4 geninin farklı düzeylerde ifade kırmızı floresan MCF-7 meme kanseri hücrelerinin LN yapışkan potansiyelini değerlendirerek test göstermek (NDRG4-pozitif ve NDRG4-negatif hücreler olarak anılacaktır), hücre yüzeyinde beta1-integrin kümeleme negatif bir modülatör24, sıçan LN-adheren tümör hücrelerinin fraksiyonları inceleyerek. Bu protokolün ham görüntüleriörnekleri Şekil 2'degösterilmiştir. Şekil 2

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kanser hücrelerinin lenfatik sistem yayılması karmaşık hücre odaklı olaylar çeşitli gerektirir. Onlar primer tümör hücre ayrılması ve ekstrasellüler matriks remodeling ile başlar (ECM) mimarisi, ve kalıcı kemotaksis ve sentinel NNs yolda afferent lenfatikler aracılığıyla aktif göç tarafından desteklenir. Kanser hücreleri bağlı ve LNs hayatta, kolayca diğer ikincil organlara yayılabilir. Burada tümör hücreleri ve dondurulmuş NN'ler arasındaki özel yapışkan etkileşimlerin hızlı ve düşük maliyetli fonksiyonel analizi için k...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Biz teknik yardım için Dr Rosana De Lima Pagano ve Ana Carolina Pinheiro Campos teşekkür ederiz. Bu çalışma: FAPESP - São Paulo Araştırma Vakfı (2016/07463-4) ve Ludwig Kanser Araştırma Enstitüsü (LICR) tarafından desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

2< / sup>

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
15 mL Konik TüplerCorning352096
2-propanolMerck109634
Tezgah Üstü Laminer Akış
Kutusu
Corning430372
KriyostatLeicaCM1860 UV
Kriyostat-Mıknatıslı FırçaLeica14018340426
DiIC18 Hücre Traker BoyaMoleküler ProblarıV-22885
Fetal Sığır Serumu (FBS)Yaşam Teknolojileri12657-029
Floresan mikroskobuNikon Eclipse 80
Forma Serisi II CO2 inkübatörüThermo Scientific
FormaldehitSigma-Aldrich252549
Yüksek Profilli Tek Kullanımlık Tıraş BıçağıLeica14035838926
Kuluçka Küpü (IHC)KASVIK560030
Ters mikroskopOlympusCKX31
Isofluran 100 mLCristá lia
Sıvı Bloquer Süper Pap KalemAbcam, Yaşam Bilimleri Reaktifleriab2601
Optimum Kesme Sıcaklığı "OCT" bileşiğiSakura4583
Fosfat Tamponlu Tuzlu Su (PBS)Yaşam Teknolojileri70011-044
Poli-L-lizinSigma-AldrichP8920
RPMIGibco31800-022
Serolojik Pipetler 1 mLJet BiofilGSP010001
Serolojik Pipetler 10 mLJet BiofilGSP010010
Serolojik Pipetler 5 mLJet BiofilGSP010005
Serolojik Pipetler 50 mLJet BiofilGSP010050
Serolojik Pipetleyici Easypet 3Eppendorf
Tissue-Tek kriyomoldSakura4557
Tripan Mavisi %0.4CanlandırıcıT10282
TripsinEnstitüsü Adolfo LutzATV
Disk Leica 14020139126 Sığır Serumu Albümin için Esco Hücre Kültürü Sigma-Aldrich A9647-100 Hücre kültürü şişesi T-25 cm Serolojik Pipetler 2 mL Jet Biofil GSP010002

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Paget, S. The distribution of secondary growths in cancer of the breast. Cancer and Metastasis Reviews. 8 (2), 98-101 (1989).
  2. Liu, Q., Zhang, H., Jiang, X., Qian, C., Liu, Z., Zuo, D. Factors involved in cancer metastasis: a better understanding to seed and soil hypothesis. Molecular Cancer. 16 (1), 176(2017).
  3. Padera, T. P., Meijer, E. F., Munn, L. L. The Lymphatic System in Disease Processes and Cancer Progression. Annual Review of Biomedical Engineering. 18, 125-158 (2016).
  4. Leemans, C. R., Tiwari, R., Nauta, J. J., van der Waal, I., Snow, G. B. Regional lymph node involvement and its significance in the development of distant metastases in head and neck carcinoma. Cancer. 71 (2), 452-456 (1993).
  5. Kowalski, L. P., et al. Prognostic significance of the distribution of neck node metastasis from oral carcinoma. Head & Neck. 22 (3), 207-214 (2000).
  6. McGuire, W. L. Prognostic factors for recurrence and survival in human breast cancer. Breast Cancer Research and Treatment. 10 (1), 5-9 (1987).
  7. Gervasi, L. A., et al. Prognostic significance of lymph nodal metastases in prostate cancer. The Journal of Urology. 142 (2 Pt 1), 332-336 (1989).
  8. Naruke, T., Suemasu, K., Ishikawa, S. Lymph node mapping and curability at various levels of metastasis in resected lung cancer. The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 76 (6), 832-839 (1978).
  9. Sasako, M., et al. D2 lymphadenectomy alone or with para-aortic nodal dissection for gastric cancer. The New England Journal of Medicine. 359 (5), 453-462 (2008).
  10. Chang, G. J., Rodriguez-Bigas, M. A., Skibber, J. M., Moyer, V. A. Lymph node evaluation and survival after curative resection of colon cancer: systematic review. Journal of the National Cancer Institute. 99 (6), 433-441 (2007).
  11. Watanabe, T., et al. Extended lymphadenectomy and preoperative radiotherapy for lower rectal cancers. Surgery. 132 (1), 27-33 (2002).
  12. Machens, A., Dralle, H. Correlation between the number of lymph node metastases and lung metastasis in papillary thyroid cancer. The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism. 97 (12), 4375-4382 (2012).
  13. Dijkstra, C. D., Kamperdijk, E. W. A., Veerman, A. J. P. Normal Anatomy, Histology, Immunohistology, and Ultrastructure, Lymph Node, Rat. Hemopoietic System. Jones, T. C., Ward, J. M., Mohr, U., Hunt, R. D. , 129-136 (1990).
  14. Gretz, J. E., Anderson, A. O., Shaw, S. Cords, channels, corridors and conduits: critical architectural elements facilitating cell interactions in the lymph node cortex. Immunological Reviews. 156, 11-24 (1997).
  15. Podgrabinska, S., Skobe, M. Role of lymphatic vasculature in regional and distant metastases. Microvascular Research. 95, 46-52 (2014).
  16. Wiley, H. E., Gonzales, E. B., Maki, W., Wu, M. T., Hwang, S. T. Expression of CC chemokine receptor-7 and regional lymph node metastasis of B16 murine melanoma. Journal of the National Cancer Institute. 93 (21), 1638-1643 (2001).
  17. Chen, J., Alexander, J. S., Orr, A. W. Integrins and their extracellular matrix ligands in lymphangiogenesis and lymph node metastasis. International Journal of Cell Biology. 2012, 853703(2012).
  18. Müller, M., Gounari, F., Prifti, S., Hacker, H. J., Schirrmacher, V., Khazaie, K. EblacZ tumor dormancy in bone marrow and lymph nodes: active control of proliferating tumor cells by CD8+ immune T cells. Cancer Research. 58 (23), 5439-5446 (1998).
  19. Cady, B. Regional lymph node metastases; a singular manifestation of the process of clinical metastases in cancer: contemporary animal research and clinical reports suggest unifying concepts. Annals of Surgical Oncology. 14 (6), 1790-1800 (2007).
  20. Klein, C. A. The systemic progression of human cancer: a focus on the individual disseminated cancer cell-the unit of selection. Advances in Cancer Research. 89, 35-67 (2003).
  21. Pereira, E. R., et al. Lymph node metastases can invade local blood vessels, exit the node, and colonize distant organs in mice. Science. 359 (6382), 1403-1407 (2018).
  22. Brodt, P. Tumor cell adhesion to frozen lymph node sections-an in vitro correlate of lymphatic metastasis. Clinical & Experimental Metastasis. 7 (3), 343-352 (1989).
  23. Badylak, S. F. Xenogeneic extracellular matrix as a scaffold for tissue reconstruction. Transplant Immunology. 12 (3-4), 367-377 (2004).
  24. Jandrey, E. H. F., et al. NDRG4 promoter hypermethylation is a mechanistic biomarker associated with metastatic progression in breast cancer patients. NPJ Breast Cancer. 5, 11(2019).
  25. Honig, M. G., Hume, R. I. Dil and diO: versatile fluorescent dyes for neuronal labelling and pathway tracing. Trends in Neurosciences. 12 (9), 333(1989).
  26. Costa, E. T., et al. Intratumoral heterogeneity of ADAM23 promotes tumor growth and metastasis through LGI4 and nitric oxide signals. Oncogene. 34 (10), 1270-1279 (2015).
  27. Song, J., et al. Extracellular matrix of secondary lymphoid organs impacts on B-cell fate and survival. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (31), E2915-E2924 (2013).
  28. Kramer, R. H., Rosen, S. D., McDonald, K. A. Basement-membrane components associated with the extracellular matrix of the lymph node. Cell and Tissue Research. 252 (2), 367-375 (1988).
  29. Sobocinski, G. P., Toy, K., Bobrowski, W. F., Shaw, S., Anderson, A. O., Kaldjian, E. P. Ultrastructural localization of extracellular matrix proteins of the lymph node cortex: evidence supporting the reticular network as a pathway for lymphocyte migration. BMC Immunology. 11, 42(2010).
  30. Pathak, A. P., Artemov, D., Neeman, M., Bhujwalla, Z. M. Lymph Node Metastasis in Breast Cancer Xenografts Is Associated with Increased Regions of Extravascular Drain, Lymphatic Vessel Area, and Invasive Phenotype. Cancer Research. 66 (10), 5151-5158 (2006).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Adezyon ndeksiFloresan MikroskobuH cre Say cDiI aretlemeKriyostat Kesit AlmaPBS ile Y kamaFormaldehit FiksasyonuMetastatik Yay l m

İlgili makaleler