Küçük Saç Örneklerinde 11 İlaca Dirençli TB İlaçların Ölçülmesi için Doğrulanmış LC-MS/MS Paneli

Andrew Reckers; Anita Wen; David Aguilar; Peter Bacchetti; Monica Gandhi; John Metcalfe; Roy Gerona

doi:10.3791/60861

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Küçük Saç Örneklerinde 11 İlaca Dirençli TB İlaçların Ölçülmesi için Doğrulanmış LC-MS/MS Paneli

7.3K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/60861

⸱

19 Mayıs 2020

Andrew Reckers¹ , Anita Wen¹ , David Aguilar¹ , Peter Bacchetti² , Monica Gandhi³ , John Metcalfe⁴ , Roy Gerona¹

¹Department of Obstetrics, Gynecology and Reproductive Sciences, TB Hair Analysis Laboratory, University of California San Francisco, ²Department of Epidemiology and Biostatistics, University of California San Francisco, ³Department of Medicine, Division of HIV, Infectious Diseases, and Global Medicine, University of California San Francisco, ⁴Department of Medicine, Division of Pulmonary and Critical Care Medicine, University of California San Francisco

Bu makalede

Özet

Hastaların kompleks ilaca dirençli tüberküloz (DR-TB) rejimlerine bağlılığını analiz etme yöntemleri yanlış ve kaynak yoğun olabilir. Yöntemimiz, 11 DR-TB ilaç konsantrasyonları için kolayca toplanan ve depolanan bir matris olan saçı analiz eder. LC-MS/MS kullanarak, uyuşturucuya bağlılığı daha iyi anlamak için kullanılabilen alt nanogram ilaç düzeylerini belirleyebiliriz.

Özet

Ilaca dirençli tüberküloz (DR-TB) giderek büyüyen bir halk sağlığı tehdididir ve terapötik ilaç düzeylerinin değerlendirilmesi önemli klinik yararları olabilir. Plazma ilaç düzeyleri mevcut altın standart değerlendirme, ancak flebotomi ve soğuk zincir gerektirir, ve sadece çok yakın bağlılık yakalamak. Yöntemimiz saç kullanır, kolayca toplanan ve uzun vadeli bağlılık yansıtıcı bir matris, 11 anti-TB ilaçlar için test etmek. Grubumuz tarafından önceki çalışma saç antiretroviral ilaç düzeyleri HIV sonuçları ile ilişkili olduğunu göstermektedir. DR-TB ilaçlar için yöntemimiz 2 mg saç (kök için 3 cm proksimal), hangi pulverize ve metanol ayıklanır kullanır. Numuneler tek bir LC-MS/MS yöntemi ile analiz edilir ve 16 dk'lık bir çalışmada 11 ilaç ölçülür. 11 ilaç için daha düşük nicelik sınırları (LLOQs) 0.01 ng/mg ile 1 ng/mg arasında değişmektedir. İki kütle spektrometresi geçişinin oranları karşılaştırılarak ilaç varlığı doğrulanır. Örnekler, ilacın deuterated, ¹⁵N-veya ¹³C etiketli ilaç isotopolog için alan oranı kullanılarak ölçülür. 0.001-100 ng/mg arasında değişen bir kalibrasyon eğrisi kullandık. Dr-TB hastalarından doğrudan gözlenen tedavi (DOT) üzerine toplanan saç örneklerinden alınan kolaylık örneğine yöntemin uygulanması, on bir ilacın dokuzu (izoniazid, pyrazinamide, ethambutol, linezolid, levofloksasin, moksifloksasin, clofazimin, bedaquiline, pretomanid) lineer dinamik aralığında saçtaki ilaç düzeylerini göstermiştir. Hiçbir hasta protionamide değildi ve etionamid için ölçülen düzeyler LLOQ'ya yakındı (daha fazla çalışma yerine etionamid'in metabolitinin maruziyeti izlemek için uygunluğu nun incelenmesi). Özetle, saçlarda DR-TB ilaçları için çok analit panelinin geliştirilmesini ilaca dirençli tüberküloz tedavisi sırasında terapötik ilaç izleme tekniği olarak tanımlıyoruz.

Giriş

Yirmi birinci yüzyılda, ilaca dirençli Tüberküloz (DR-TB) zaten zayıf ulusal Tüberküloz kontrol programları için gelişen bir felaket, teyit durumlarda sadece son 5 yıl içinde iki katına ile, tüm ölümlerin yaklaşık üçte biri için muhasebe küresel antimikrobiyal direnç ile ilgili¹^,². DR-TB'nin başarılı tedavisi, geleneksel olarak ilaca duyarlı tüberküloz tedavisinden daha uzun ve daha toksik ikinci basamak rejimlere ihtiyaç dalmıştır. Ayrıca, DR-TB olan hastalar genellikle başlangıçta direnç ortaya çıkmasına katkıda bağlılık için önemli önceden varolan zorluklar var³.