Bu el yazması farelerde aktif deneysel deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE) indüklemek için bir protokol sunar. Merkezi sinir sisteminde (CNS) infiltrasyon lenfositlerin izolasyon ve karakterizasyonu için bir yöntem de lenfositler CNS otoimmün hastalığın gelişiminde nasıl rol olduğunu göstermek için sunulmaktadır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit Sırasında Merkezi Sinir Sisteminde Lenfosit Infiltrasyonunun Akış Sitometrik Analizi
Bu makalede
Özet
Özet
Multipl skleroz (MS), çevresel faktörler ve duyarlı genetik arka planın birleşimi ile oluşan merkezi sinir sisteminin (CNS) otoimmün bir hastalığıdır. Deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE), Miyelin antijenlerine özgü T lenfositlerinin CNS'de inflamatuar reaksiyon başlattığı patogenezi araştırmak için yaygın olarak kullanılan tipik bir MS hastalığı modelidir. CNS lenfositler hastalığın gelişimini nasıl düzenleyen değerlendirmek için çok önemlidir. Ancak, CNS'de infiltrasyonlu lenfositlerin miktarını ve kalitesini ölçme yaklaşımı, beyinden sızmış lenfositlerin izole edilmesi ve saptanmasındaki güçlükler nedeniyle çok sınırlıdır. Bu el yazması, CNS'den infiltrasyona geçen lenfositlerin izolasyonu, tanımlanması ve karakterizasyonu için yararlı olan bir protokol sunar ve lenfositlerin CNS otoimmün hastalığının gelişiminde nasıl rol aldığını anlamamıza yardımcı olacaktır.
Giriş
CNS kronik bir demiyelinating hastalık olarak, MS dünya çapında yaklaşık 2,5 milyon kişi etkiler ve küratif tedavileryoksun 1. Ayrıca bir otoimmün hastalık olarak kabul edilir, hangi miyelin antijen spesifik T lenfositler inflamatuar bir reaksiyon başlatmak ve CNS demiyelinasyon ve aksonal yaralanmaya yol2. Deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE) yaygın CNS bir klasik otoimmün demiyelinasyon hastalığı modeli olarak MS patojenik mekanizmaları araştırmak için kullanılmıştır3. EAE ikna etmek için iki yolu vardır: bir miyelin bileşenleri ile hayvanlar aşılayarak aktif EAE ikna etmektir, başka reseptör....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Burada açıklanan tüm yöntemler Temel Tıp Bilimleri Okulu, Şangay Jiao Tong Üniversitesi hayvan komitesi tarafından onaylanmıştır.
1. Malzemelerin hazırlanması
- Ticari kaynaklardan liyofilize peptid elde etmek için MOG35-55'in MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK dizisini kullanın. Peptitin saflığının %gt;%95 olduğundan emin olun. Fosfat tamponlu salin (PBS) içinde 10 mg/mL MOG stok çözeltisi hazırlayın ve -20 °C'de saklayın.
- M. tüberküloz H37 Ra'nın 4 mg/mL stok çözeltisini, Tam Freund'un Adjuvan (CFA) 25 mL'ine 100 mg m. tüberküloz H37 Ra tüpü koyarak hazırlayın ve karıştırın. Stok çözeltisini -20 °C'de saklayın. ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
C57BL/6 farelerinin bağışıklaştırılmasından sonra tüm fareler nörolojik bulgular için tartıldı, incelendi ve günlük olarak derecelendi. EAE'nin temsili klinik seyri Şekil 2A'da sunulduğu gibi bir hastalık eğrisi ve Şekil 2B'desunulduğu gibi farede vücut ağırlığının değişmesiile sonuçlanmalıdır. MOG35-55 ile aşılanmış C57BL/6 fareler genellikle 10-12.Figure 2A Ağırlık değişimi EAE modelinde değerli bir göstergeydi. Hastalığın başlang.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu çalışma, MS. EAE'nin tipik bir nöroimmünolojik deneysel hayvan modeli olarak kabul edilen C57BL/6 farelerinde MOG35-55 kullanarak EAE'yi indüklemek ve izlemek için bir protokol sunmaktadır. Örneğin, SJL farelerde PLP139-151 peptid kullanarak özelliklerelaps15terapötik etkileri değerlendirmek için uygun bir nüks-remitting EAE hastalığı ders neden olabilir. Burada özetlenen deneysel prosedür diğer EAE protokollerine de uygulanabilir7. Bu modelde C57BL/6 fareler MOG35-55 pe.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların beyan etmek için çıkar çatışması yok.
Teşekkürler
Bu araştırma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı hibe (31570921 ZJ, 81571533 LS), Şangay Belediye Sağlık Komisyonu ve Aile Planlaması (201540206 ZJ), Ruijin Hastanesi Kuzey araştırma hibe (2017ZX01 ZJ) tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Alexa Fluor700 anti-fare CD45.2 | eBioscience | 56-0454-82 | |
| Anti-Fare CD16 / CD32 Fc blok | BioLegend | 101302 | |
| APC anti-fare IFN-g | eBioscience | 17-7311-82 | |
| BD LSRFortessa X-20 | BD | ||
| Dounce homojenizatör | Wheaton | 353107542 | |
| eBioscience Hücre Stimülasyon Kokteyli (artı protein taşıma inhibitörleri) (500X) | eBioscience | 00-4975-03 | |
| eBioscience Hücre İçi Fiksasyon & Geçirgenlik Tampon Seti | eBioscience | 88-8824-00 | |
| FITC anti-fare CD3 | BioLegend | 100203 | |
| FITC Sıçan IgG2b, & kappa; İzotip Ctrl Antikor | BioLegend | 400605 | |
| Freund'un Adjuvanı Komple (CFA) | Sigma-Aldrich | F5881 | |
| Fare IgG2a kappa İzotip Kontrolü (eBM2a), Alexa Fluor 700, eBioscience | eBioscience | 56-4724-80 | |
| Mycobacterium tuberculosis H37 Ra | Difco Laboratuvarları | 231141 | |
| PE anti-fare IL-17A | eBioscience | 12-7177-81 | |
| PE/Cy7 anti-fare CD4 | BioLegend | 100422 | |
| PE/Cy7 Sıçan IgG2b, & kappa; İzotip Ctrl Antikoru | BioLegend | 400617 | |
| Percoll | GE | 17-0891-01 | |
| PerCP/Cy5.5 anti-fare CD11b | BioLegend | 101228 | |
| PerCP/Cy5.5 Sıçan IgG2b, & kappa; Boğmaca | 400631 | BioLegend | |
| (PTX) | Sigma-Aldrich | P-2980 | |
| Sıçan IgG1 kappa İzotip Kontrolü (eBRG1), APC, eBioscience | eBioscience | 17-4301-82 | |
| Sıçan IgG2a kappa İzotip Kontrolü (eBR2a), PE, eBioscience | eBioscience | 12-4321-80 | |
| Sıçan MOG35 & ndash; 55 peptit | Biosynth Uluslararası | MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK |
Kaynaklar
- Milo, R., Kahana, E. Multiple sclerosis: geoepidemiology, genetics and the environment. Autoimmunity Reviews. 9, 387-394 (2010).
- Gold, R., Linington, C., Lassmann, H.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
