Bu protokolde, doxorubicin yüklü AS1411-g-PEI-g-PEG modifiye altın nanopartiküller üç aşamalı reaksiyonlar yoluyla sentezlenir. Daha sonra doksofobikin yüklenir ve kanser tedavisi için hedef kanser hücrelerine teslim edilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Hedeflenen İlaç Teslimatı için Doxorubicin Yüklü Aptamer-PEI-g-PEG Modifiye Altın Nanopartiküllerinin Sentezi
Bu makalede
Özet
Özet
Sağlıklı hücrelerde ilaç direnci ve toksisite nedeniyle klinik kanser tedavisinde doksofobisin (DOX) kullanımı sınırlanmıştır. Bu protokol, polietilen glikol (PEI-g-PEG) koaloksimer fonksiyonelleştirilmiş altın nanopartiküller (AuNP'ler) ile aşılanmış poli (etileninimin) yüklü aptamer (AS1411) ve DOX ile amid reaksiyonları yoluyla tasarlanmasını açıklar. AS1411 özellikle kanser hücrelerindeki hedefli nükleolin reseptörleri ile bağlanır, böylece DOX sağlıklı hücreler yerine kanser hücrelerini hedefler. İlk olarak, PEG karboksilatlanır, daha sonra 1H NMR analizi ile onaylanan bir PEI-g-PEG koalizör elde etmek için dallı PEI'ye aşılanır. Daha sonra, PEI-g-PEG koalizör kaplı altın nanopartiküller (PEI-g-PEG@AuNPs) sentezlenir ve DOX ve AS1411, reaksiyonlar arasında yavaş yavaş AuNP'lere bağlanır. Hazırlanan AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs çapı ~39,9 nm dir ve nanopartiküllerin su ve hücre ortamında stabil olduğunu gösteren -29,3 mV zeta potansiyeline sahiptir. Hücre sitotoksikliği tahlilleri, yeni tasarlanan DOX yüklü AuNP'lerin kanser hücrelerini (A549) öldürebildiğini göstermektedir. Bu sentez, PEI-g-PEG koalizörlerinin, aptamerlerinin ve DOX'un, sıralı amid reaksiyonları ile elde edilen AuNP'ler üzerindeki hassas düzenini göstermektedir. Bu tür aptamer-PEI-g-PEG fonksiyonelleştirilmiş AuNP'ler kanser tedavisinde hedefe yönelik ilaç teslimatı için umut verici bir platform sağlar.
Giriş
Dünya çapında en büyük halk sağlığı sorunu olan kanser, düşük kür oranı, yüksek nüks oranı ve yüksek ölüm oranı1,2. Mevcut konvansiyonel kanser karşıtı yöntemler cerrahi, kemoterapi ve radyoterapi3, kemoterapinin klinikteki kanser hastaları için birincil tedavi olduğu4. Klinik olarak kullanılan antikanser ilaçlar esas olarak paclitaxel (PTX)5 ve doxorubicin (DOX)6,7içerir. Bir antineoplastik ilaç olan DOX, kanser sitotoksisitesi ve kanser hücre çoğalmasının inhibisyonu avantajları ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
DİkKAT: Tüm kimyasalları kullanmadan önce ilgili tüm malzeme güvenliği veri sayfalarına (MSDS) başvurduğunuzdan emin olun. Koalyolimer ve nanopartiküllerin hazırlanmasında kullanılan kimyasalların birçoğu akut olarak toksiktir. Nanopartiküllerin de potansiyel tehlikeleri vardır. Eldivenler, laboratuvar önlüğü, davlumbazlar, tam boy pantolonlar ve yakın kullanımlı ayakkabılar da dahil olmak üzere tüm uygun güvenlik uygulamalarını ve kişisel koruyucu ekipmanları kullandığınızdan emin olun.
1. Çift karboksil polietilen glikol sentezi (CT-PEG)33
- 100 mL yuvarlak alt şişeye 1,46 g (14,6 mmol) süksinik anhidrit (S....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
1 CT-PEG polimer ve PEI-g-PEG koalolimerlerinin başarılı sentezini doğrulamak için H NMR spektroskopisi kullanılmıştır (Şekil 2). Şekil 2a, δ 'daki metilen proton sinyalinin = 3.61 ppm'de ve δ ' de karboksil proton sinyalinin = 2.57 ppm'de CT-PEG polimerlerinin başarılı sentezini doğruladığını göstermektedir. Şekil 2b, PEG'in δ =2.6 ppm'deki metilen proton sinyalinin ve δ 'daki PEI prot.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
1H NMR spektrumu (Şekil 2) CT-PEG koalolimer ve PEI-g-PEG koalolimerinin başarılı sentezini doğrular. PEG ve PEI'nin moleküler ağırlıkları sırasıyla 1.000 ve 1.200'dir. Ek olarak, EDC/NHS katalitik sistemi, PEI-g-PEG koalolymer'ı amid reaksiyonları yoluyla sentezlemek için kullanılmıştır. PEI-g-PEG koalizatör sentezlemek için PEG ve PEI'nin moleküler ağırlıkları değiştiyse, reaksiyon süresinin ve katalitik sistemin yeniden değerlendirilmesi gerektiği belirtilmelidir. Ayrıca, AuNP'.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.
Teşekkürler
Bu araştırma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (31700840) tarafından finanse edildi; Henan Eyaleti'nin Temel Bilimsel Araştırma Projesi (18B430013, 18A150049). Bu araştırma, XYNU'nun Genç Bilginleri için Nanhu Bursiyerleri Programı tarafından desteklendi. Yazarlar, XYNU'daki Yaşam Bilimleri Koleji'nden lisans öğrencisi Zebo Qu'ya yardımcı çalışmaları için teşekkür ediyor. Yazarlar, ekipmanlarının kullanımı için XYNU Analiz ve Test Merkezi'ni kabul etmek isterler.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 4-Dimetilaminopiridin | Macklin | D807273 | |
| A549 hücresi | ATCC CCL-185TM | ||
| AS1411 | BBI Yaşam Bilimleri Şirketi | 5'-d (TTTGGTGGTGGTGGTTGTGTGGTGGGG) FL-AS1411 (florofor etiketli AS1411) | |
| Susuz Tetrahidrofuran (THF) | SinoPharm Chemical Reagent Co., Ltd | ||
| Hücre sayma kiti-8 ( CCK-8) | Sigma Aldrich | 96992-500TESTLER-F | |
| Diklorometan | Geleneksel Çin tıbbı | 80047318 | |
| Dietil eter (Et2O) | SinoPharm Chemical Reagent Co., Ltd | ||
| Dimetil sülfoksit | Macklin | D806645 | |
| Dulbecco'nun modifiye edilmiş Eagle's medium (DMEM) | Sigma Aldrich | ||
| Doksorubisin hidroklorür | Rhawn R017518 | ||
| Eter mutlak | Geleneksel Çin tıbbı | 80059618 | |
| Alanı Emisyon İletim Elektron Mikroskobu | FEI Şirketi | Tecnai G2 F 20 | |
| Altın (III) klorür trihidrat | Rhawn | R016035 | |
| Lazer Parçacık Boyutlu Enstrüman | Malvern Instruments Ltd | ZetasizerNanoZS / Masterszer3000E | |
| Mikroplaka Okuyucu | Moleküler Cihazlar | SpectraMax 190 | |
| N- (3-Dimetilaminopropil) -N'-etilkarbodiimid hidroklorür | Macklin | N808856 | |
| N-Hidroksisüksinimid | Macklin | H6231 | |
| NMR yazılımı | Delta 5.2.1 | ||
| Nükleer Manyetik Rezonans Spektrometresi | JEOL | JNM-ECZ600R/S3 | |
| Menşei 8.5 | OriginLab | ||
| Penisilin | Sigma Aldrich | V900929-100ML | |
| Fosfat tamponlu salin | Sigma Aldrich | P4417-100TAB | |
| Poli (etilen glikol) | Sigma Aldrich | 81188 | BioUltra, ortalama Mn ~ 1000 |
| Poli (etilenim) çözeltisi | Sigma Aldrich | 482595 | ortalama Mn ~ 1200, ağırlıkça %50 H2O |
| Sodyum borhidrür, toz | Acros | C18930 | |
| Streptomisin | Sigma Aldrich | 85886-10ML | |
| Süksinik anhidrit | Geleneksel Çin tıbbı | 30171826 | |
| Tetrahidrofuran | Geleneksel Çin tıbbı | 40058161 | |
| Trietilamin | Geleneksel Çin tıbbı | 80134318 | |
| UV/VIS/NIR Spektrometresi | Lambda950 | Lambda950 | |
| X-ışını Fotoelektron Spektrometresi | Termo Balıkçı Bilimsel | K-ALPHA 0.5EV |
Kaynaklar
- Abad, J. M., Bravo, I., Pariente, F., Lorenzo, E. Multi-tasking base ligand: a new concept of AuNPs synthesis. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 408 (9), 2329-2338 (2016).
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics, 2019. CA-A Cancer Journal for Clinicia....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
