Bu tekniğin amacı, erken postnatal ve erişkin farelerin pulmoner arter ağlarının akciğer şişmesi yoluyla ex vivo görselleştirilmesi ve pulmoner arter yoluyla radyoopak polimer bazlı bileşiğin enjeksiyonudur. Döküm dokular için potansiyel uygulamalar da tartışılmıştır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Mikro-BT Görüntüleme için Erişkin ve Erken Postnatal Fare Akciğerlerinin Vasküler Döküm
Bu makalede
Özet
Özet
Kan damarları 3 boyutlu uzayda karmaşık ağlar oluştururlar. Sonuç olarak, vasküler ağların bir dokunun yüzeyini gözlemleyerek nasıl etkileştiğini ve nasıl etkileştiğini görsel olarak anlamak zordur. Bu yöntem akciğerin karmaşık 3 boyutlu vasküler mimarisini görselleştirmek için bir araç sağlar.
Bunu başarmak için pulmoner artere bir kateter yerleştirilir ve vaskülatür aynı anda kandan atılır ve direnci sınırlamak için kimyasal olarak genişlenir. Akciğerler daha sonra standart bir basınçta trakea ile şişirilir ve polimer bileşik standart bir akış hızında vasküler yatağa aşılanır. Tüm arteriyel ağ doldurulduktan ve tedavisine izin verildikten sonra, akciğer vaskülatürü doğrudan görüntülenebilir veya mikro-CT (μCT) tarayıcıda görüntülenebilir.
Başarılı bir şekilde yapıldığında, erken doğum sonrası yaşlardan erişkinlere kadar farelerde pulmoner arteriyel ağ takdir edebilirsiniz. Ayrıca pulmoner arter yatağında gösterildiği gibi, bu yöntem optimize edilmiş kateter yerleşimi ve uç noktaları ile herhangi bir vasküler yatak uygulanabilir.
Giriş
Bu tekniğin odak noktası farelerde polimer bazlı bir bileşik kullanılarak pulmoner arter mimarisinin görselleştirilmesidir. Beyin, kalp ve böbrek1,2,,3,4,5gibi sistemik vasküler yataklarda kapsamlı çalışmalar yapılırken, pulmoner arter ağının hazırlanması ve doldurulması ile ilgili daha az bilgi mevcuttur. Bu çalışmanın amacı, bu nedenle, önceki çalışma6üzerine genişletmek için,7,8 ve araştırmacılar kolayca pulmone....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Burada açıklanan tüm yöntemler Ulusal Kalp Akciğer ve Kan Enstitüsü Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (ACUC) tarafından onaylanmıştır.
1. Hazırlık
- Fareyi intraperitoneally heparin (1 birim/g fare vücut ağırlığı) ile enjekte edin ve 2 dakika boyunca ambulamasını bekleyin.
- Co2 odasında hayvan ötenazi.
- Bir cerrahi tahta üzerinde bir supine pozisyonda fare düzenleyin ve bant ile tahtaya dört uzuvları güvenli. İnce diseksiyon için büyütme kullanın.
2. Akciğerlerve trakea açığa
- Saç parazitini en aza indirmek için farenin ventral tarafını %70 etanol ile p....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Başarılı bir döküm tüm pulmoner arter ağının düzgün dolgu sergileyecek. Bunu yaşolarak değişen C57Bl/6J farelerde gösteriyoruz: Doğum sonrası gün P90 (Şekil 4A), P30 (Şekil 4B), P7 (Şekil 4C), P1(Şekil 4D). Akış hızının kontrol edilerek ve dolgunun gerçek zamanlı olarak görsel olarak izlenmesi yle, en distal vaskülatürün güvenilir uç noktaları elde edilmiştir
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Düzgün bir şekilde yürütülen bu yöntem, pulmoner arterağlarının çarpıcı görüntülerini vererek kemirgen modellerinde karşılaştırma ve deney emaresi sağlar. Yol boyunca birkaç kritik adım başarıyı sağlar. İlk olarak, müfettişler akciğer vaskülatür ve kalp odalarında oluşan kan pıhtıları önlemek için hazırlık aşamasında hayvan heparinize gerekir. Bu polimer bileşiğin tam arteriyel transit sağlar. İkinci olarak, diyafram delinme ve göğüs kafesi çıkarmadan, yanlışlıkla hasar, kesik ler veya yaralanmalara karşı akciğerleri kor.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.
Teşekkürler
Bu araştırma kısmen NHLBI İntramural Araştırma Programı (DIR HL-006247) tarafından desteklenmiştir. Görüntü edinimi ve analizinde rehberlik için NIH Mouse Görüntüleme Tesisi'ne teşekkür ederiz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 1cc şırınga | Becton Dickinson | 309659 | |
| 20ml Cam Sintilasyon Şişeleri | Fisher | 03-340-25P | |
| 30G İğne | Becton Dickinson | 305106 | |
| 50mL konik tüpler | Depolama ve tarama için | Cornin | 352098 |
| 60cc şırınga | Becton Dickinson | 309653 | |
| 7-0 ipek sütür | Teleflex | 103-S | |
| Analiz 12.0 Yazılım | AnalyzeDirect Inc. | N/A | Birincil Yazılım |
| Amira 6.7 Yazılım | Thermo Scientific | N/A | Alternatif Yazılım |
| CeramaCut Makas 9cm | Güzel Bilim araçları | 14958-09 | |
| Seramik Kaplı Kavisli Forseps | Güzel Bilim araçları | 11272-50 | |
| CO2 Tankı | Robert's Oxygen Co. | n/a | |
| Çift şırınga pompası | Cole Parmer | EW-74900-10 | |
| Dumont Mini-Forseps | Güzel Bilim araçları | 11200-14 | |
| Etanol | Pharmco | 111000200 | |
| Formalin | Sigma - Yaşam Bilimleri | HT501128 | |
| Gazlı Bez | Covidien | 441215 | |
| Hemostat | Güzel Bilim araçları | 13013-14 | |
| Heparin (1000USP Birim / ml) | Hospira | NDC 0409-2720-01 | |
| Horos Yazılımı | Horos Projesi | N/A | Alternatif Yazılım |
| İndüksiyon Odası | n/a | n/a | |
| Kimwipe | Fisher | 06-666 | fiber optik temizleme mendili |
| Etiketleme Bandı | Fisher | 15966 | |
| Manyetik Taban | Kanetec | N/A | |
| Mikro-CT sistemi | PerkinElmer | Quantum GX | |
| Microfil (Polimer Bileşik) | Flowech Inc. | Kit B - MV-122 | 8 oz. MV bileşiği; 8 oz. seyreltici; MV-Kürleme Ajanı |
| Mikromanipülatör | Çalma | 56131 | |
| Monoject 1/2 ml İnsülin Şırınga | Covidien | 1188528012 | |
| Sekizgen Forseps Düz Dişler | Güzel Bilim araçları | 11042-08 | |
| Parafilm | Bemis şirketi, Inc. | ||
| PE-10 boru | Instech | BTPE-10 | |
| Fosfat tamponlu Salin | BioRad | # 161-0780 | |
| Halka Standı | Fisher | S13747 | Yükseklik 24 inç. |
| Sodyum Nitroprussid | sigma | 71778-25G | |
| Çelik Levha | N/A | N/A | 16 x 16 inç alan, 1/16 inç kalınlığında |
| Düz Yaylı Makas | Güzel Bilim araçları | 15000-08 | |
| SURFLO 24G Teflon IV Kateter | Santa Cruz Biyoteknoloji | 360103 | |
| Cerrahi Tahta | Fisher | 12-587-20 | Bu dönüştürülmüş bir slayt tutucudur |
| Üniversal 3 uçlu kelepçe | Fisher | S24280 | |
| Kanatlı Inf. Set 25X3 / 4, 12 "Boru | Nipro | PR25G19 | |
| Zeiss Stemi-508 Diseksiyon Kapsamı | Zeiss | n/a |
Kaynaklar
- Vasquez, S. X., et al. Optimization of microCT imaging and blood vessel diameter quantitation of preclinical specimen vasculature with radiopaque polymer injection medium. PLoS One. 6 (4), 19099(2011).
- Hong, S. H., et al.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
