Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Tümör Hücrelerinin Lateral Kuyruk-Damar Enjeksiyonu Sonrasında Akciğer Metastazının Patolojik Analizi

9.3K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/61270

⸱

20 Mayıs 2020

 ,  ,  , 
1Department of Radiation Oncology, Arthur G. James Comprehensive Cancer Center and Richard L. Solove Research Institute, The Ohio State University Medical Center, 2Department of Veterinary Biosciences, Comparative Pathology and Digital Imaging Shared Resource, The Ohio State University

Bu makalede

Düzeltme bildirimi

Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice

Özet

Kanser hücrelerinin intravenöz enjeksiyonu genellikle metastaz araştırmalarında kullanılır, ancak metastatik tümör yükünü analiz etmek zor olabilir. Burada, metastazın kuyruk damarı enjeksiyon modelini gösteriyoruz ve ortaya çıkan metastatik akciğer tümörü yükünü analiz etmek için yeni bir yaklaşım içeriyoruz.

Özet

Çoğu kanser hastası için morbidite ve mortalitenin birincil nedeni olan metastazın farelerde preklinik olarak model alınması zor olabilir. Birkaç spontan metastaz modeli mevcuttur. Bu nedenle, uygun hücre hatlarının kuyruk damarı enjeksiyonu içeren deneysel metastaz modeli metastaz araştırmalarının bir dayanağıdır. Kanser hücreleri lateral kuyruk damarına enjekte edildiğinde akciğer tercih ettikleri kolonizasyon bölgesidir. Bu tekniğin potansiyel bir sınırlaması metastatik akciğer tümörü yükünün doğru ölçülmesidir. Bazı araştırmacılar önceden tanımlanmış boyuttaki makrometazları sayarken ve/veya dokunun kesitini takiben mikrometazlar içerirken, diğerleri normal doku alanına göre metastatik lezyonların alanını belirler. Metastatik yük yüksek olduğunda bu niceleme yöntemlerinin her ikisi de son derece zor olabilir. Burada, akciğer metastazının intravenöz enjeksiyon modelini ve ardından görüntü analiz yazılımı kullanarak metastatik tümör yükünü ölçmek için gelişmiş bir yöntem gösteriyoruz. Bu işlem, kapsamlı bir analiz sağlamak için ortalama metastaz boyutu, toplam metastaz sayısı ve toplam metastaz alanı dahil olmak üzere birden fazla uç nokta parametresinin araştırılmasına olanak tanır. Ayrıca, bu yöntem doğruluğu sağlamak için Amerikan Veteriner Patologlar Koleji (SEK) tarafından onaylanmış bir veteriner patolog kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

Giriş

Son derece karmaşık ve verimsiz bir süreç olmasına rağmen1, metastaz kanser hastalarının morbidite ve mortalitesine önemli bir katkıda bulunur2. Aslında, kansere bağlı ölümlerin çoğu hastalığın metastatik yayılmasına atfedilir3,4. Tümör hücrelerinin başarılı bir şekilde metastaz yapabilmesi için birincil bölgeden kopmaları, bitişik stroma yoluyla istila etmeleri, kan dolaşımına veya lenfatiklere intravazyona girmeleri, ikincil bir bölgenin kılcal yatağına gitmeleri, ikincil dokuya yayılmaları ve çoğalmaları veya metastatik lezyonlar oluşturmak için büyümeleri gerekir5. Fare modellerinin kullanımı, metastatik tohumlama ve büyümeden sorumlu moleküler mekanizmaların anlaşılmasını ilerletmek için kritik öneme sahiptir6,7. Burada, hem genetiği değiştirilmiş fare modellerinin hem de transplantasyon yöntemlerinin sıklıkla kullanıldığı meme kanseri metastazına odaklanıyoruz - her biri kendi avantajları ve sınırlamaları var.

Genetik olarak tasarlanmış meme tümörü modelleri, meme epitelinde transjenlerin ekspresyonini sağlamak için MMTV-LTR (fare meme tümörü virüsü uzun terminal tekrarı) ve WAP (Peynir Altı Suyu Asidik Protein) dahil olmak üzere meme bezine özgü promotörlerden yararlanır8. Polioma orta T antijeni (PyMT), ErbB2/Neu, c-Myc, Wnt-1 ve simian virüs 40 (SV40) dahil olmak üzere onkogenler bu şekilde ifade edilmiştir9,10,11,12,13 ve bu genetik modeller primer tümör başlangıç ve ilerlemesini incelemek için yararlı olmakla birlikte, çok azı uzak organlara kolayca metastaz yapmaktadır. Ayrıca, bu genetik fare modelleri genellikle spontan veya deneysel metastaz modellerine göre daha fazla zaman ve maliyet yasaklayıcıdır. Genetik olarak tasarlanmış meme tümörü modellerinin çoğunun metastaz çalışması için sınırlandırılması göz önüne alındığında, transplantasyon teknikleri bu karmaşık süreci incelemek için cazip yöntemler haline gelmiştir. Buna ortotopik, kuyruk damarı, intrakardiyak ve uygun hücre hatlarının intrakraniyal enjeksiyonu dahildir.

Meme yağı pedine ortotopik enjeksiyondan sonra birkaç meme kanseri hücre hattı kolayca metastaz yapsa da14,15, metastatik tümör yükünün tutarlılığı ve tekrarlanabilirliği zor olabilir ve bu tür çalışmaların süresi birkaç ay sırasına göre olabilir. Akciğer metastazını değerlendirmek için, özellikle kuyruk damarına intravenöz enjeksiyon genellikle birkaç hafta içinde meydana gelen metastatik yayılma ile daha tekrarlanabilir ve zaman etkili bir yöntemdir. Ancak intravenöz enjeksiyon modeli metastatik kaskadın ilk adımlarını atlatığından, bu çalışmaların sonuçlarının yorumlanmasının dikkatli olunmalıdır. Bu gösteride, meme tümörü hücrelerinin kuyruk damarı enjeksiyonunun yanı sıra doğru ve kapsamlı bir analiz yöntemi gösteriyoruz.

Araştırma topluluğu meme kanseri metastazının karmaşık sürecini anlamada önemli ilerleme kaydetmiş olsa da, şu anda 150.000'den fazla kadının metastatik meme kanserine sahip olduğu tahmin edilmektedir16. Evre IV meme kanseri olanların % > 36'sı akciğer metastazı17; bununla birlikte, metastazların bölgeye özgü deseni ve insidansı moleküler alt tipe göre değişebilir18,19,20,21. Meme kanseri ile ilişkili akciğer metastazları olan hastalar, bu hastalık için etkili tedaviler ve yeni biyobelirteçler belirleme ihtiyacını vurgulayan sadece 21 aylık ortanca bir sağkalıma sahiptir17. Tümör hücrelerinin intravenöz enjeksiyonu da dahil olmak üzere deneysel metastaz modellerinin kullanımı, bu önemli klinik zorluk hakkındaki bilgimizi ilerletmeye devam edecektir. Bu protokolde açıklanan dijital görüntüleme patolojisi ve metastatik akciğer tümörü yük analizi yöntemi ile birleştirildiğinde kuyruk damar enjeksiyonları meme kanseri metastaz araştırmaları için değerli bir araçtır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Hayvan kullanımı, OSU Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) onaylı protokol 2007A0120-R4 (PI: Dr. Gina Sizemore) kapsamında Üniversite Laboratuvar Hayvan Kaynakları (ULAR) yönetmeliklerini takip etti.

1. Meme kanseri hücrelerinin kuyruk damarı enjeksiyonu

  1. Enjeksiyon için hücrelerin ve şırıncının hazırlanması
    1. Kullanılacak fare sayısına ve hücre konsantrasyonuna göre uygun sayıda hücreyi plakalar.
      NOT: Enjekte edilen hücre sayısı ve metastazların geliştirilmesi için zaman, kullanılan hücre hattına bağlı olacaktır ve optimize edilmesi gerekecektir. Bu gösteride NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) farelerine intravenöz olarak 1 x 106 MDA-MB-231 hücresi enjekte edilir ve en geç 24 gün sonra makroskopik akciğer lezyonları gözlenir. MVT1 murine meme tümörü hücre hattı17 için, 3 x 106 hücre, 14 gün boyunca gözlenen çok sayıda akciğer metastazı ile bağışıklık yetkin FVB / N farelerine enjekte edilir22,23.
    2. Medyayı epire edin ve hücre plakalarını 1x PBS ile durulayın. Hücreleri minimum hacimde deneyin, uygun ortam hacmini ekleyin ve hematostatometre veya tercih edilen başka bir yöntem kullanarak hücreleri sayın. Uygun hücre sayılarını belirlemek için trypan mavisi (%0.4) veya diğer canlı/ölü hücre boyaları kullanılabilir.
    3. 5 dakika boyunca 180 x g'da dönerek pelet hücreleri.
    4. Fare başına 100 μL'lik bir hacim enjekte olacak şekilde steril 1x PBS'de uygun sayıda hücreyi yeniden kullanın. Canlılığı korumak için hücre süspansiyonlarını buzda tutun.
    5. Enjeksiyondan önce, topaklanmaması için hücreleri 200 μL veya 1 mL pipetle iyice yeniden biriktirin. 28 G insülin şırındında 100 μL çizin (bkz. Malzeme Tablosu).
    6. Şırıngayı dikey tutarak, şırıngaya dokunarak ve pistonu yavaşça ayarlayarak hava kabarcıklarını ortadan kaldırın. Hava kabarcıklarının damara enjekte edilmesi ölümcül olabilecek bir hava/gaz embolisi neden olabilir.
  2. Yanal kuyruk damarı enjeksiyonu
    NOT: Deneysel meme kanseri metastaz tahlilleri için 6 haftalık dişi farelere enjeksiyonlar >.
    1. Fareyi kuyruğundan dolayı idare edin ve hayvanı uygun boyutta oluklu bir tüp / kısıtlama cihazına kaydırın (kullanılan kısıtlama cihazı için Malzeme Tablosuna bakın).
    2. Kısıtlama cihazının fiş kısmını takın ve fareyi yan tarafına yanal kuyruk damarının görüntülenmesi kolay olacak şekilde yerleştirin. Farenin cinsel organa uygun bir ventral arteri, bir dorsal damarı ve iki lateral kaudal damarı vardır.
    3. Farenin kuyruğunun yüzeyini aseptik bir mendille temizleyin. İşaret parmağı ve başparmak arasındaki kuyruğu baskın olmayan elle kavrayın ve hafif gerginlik uygulayın.
    4. Kuyruğun distal kısmından başlayarak, iğneyi göbek ucu ile damara paralel yerleştirin.
    5. İzin verilirse, iğneyi dikkatlice yeniden yakalayın ve 20-30 ° açıya bükün. Tek elle yaklaşım veya iğne recapping cihazı şiddetle tavsiye edilir.
      NOT: Damarın çökmesine neden olabileceğinden aspirasyon yapmak gerekli değildir. Bununla birlikte, ilk yerleştirildiğinde küçük bir kan parlaması görülebilir. İğne, uygun yerleşimle damara sorunsuz bir şekilde ilerleyecektir.
    6. Tüm hacmi yavaşça damara dağıtın. Piston itildiğinde direnç olmamalıdır.
    7. Herhangi bir direnç hissederse, şırınga iğnesini derhal çıkarın. Gerekirse, kuyruğun proksimal ucuna doğru hareket eden veya karşıt yan damar olan iğneyi (ideal olarak en fazla 3 deneme) yeniden yerleştirin.
    8. Enjeksiyondan sonra küçük bir kan hacmi muhtemelen yerinden çıkacaktır. Steril gazlı bezle hafif basınç uygulayın ve aseptik mendille silin.
    9. Şırınnayı derhal uygun keskinlik kabına atın.
    10. Fareyi temiz, havalandırılmış bir kafese geri döndürün ve sıkıntı belirtileri alıp almadığını izleyin.
    11. Metastaz oluşumu (zahmetli solunum, kambur duruş, kilo kaybı) ve genel sıkıntı belirtileri için fareleri 2-3x / haftalık izleyin. Metastaz geliştirme süresi hücre çizgisine ve fare zorlanmasına bağlı olacaktır.
    12. Bir in vivo canlı hayvan görüntüleme cihazı kullanıyorsanız, hücrelerin başarılı enjeksiyonu onaylamak ve zaman "sıfır" veri elde etmek için kuyruk damarı enjeksiyonundan hemen sonra görüntü fareleri (in vivo biyolüminesans görüntüleme ile ilgili belirli ayrıntılar burada yer almaz, ancak Yang ve ark.24 tarafından açıklanmaktadır).

2. Akciğer dokusu fiksasyonu ve metastatik akciğer tümörü yükünün analizi

  1. Histopatoloji için akciğerlerin yapısal formatını korumak için akciğer dokusu enflasyonu
    1. Onaylanan ötanazi prosedürleri (örneğin oda hacminin / dk'nın% 30 - 70'inde karbondioksit) takip edildikten sonra, fare karkasını pimli bir diseksiyon tahtasına sabitleyin. Diseksiyon sırasında farenin kürklerini yoldan uzak tutmak için sprey veya% 70 etanol uygulayın.
      NOT: Karbondioksit boğulması, özellikle daha yavaş akış hızlarında beklenen bir arka plan lezyonu olarak pulmoner kanamaya neden olabilir.
    2. Toraksı orta çizgi kesiği ile açın, kesiği periton boyunca kranially/kaudally uzatın ve ksifoid işlemini kavrayarak diyaframı kesin.
    3. Bıçakları köreltmemek için ayrı bir makas seti kullanarak, göğüs kafesinin her iki tarafındaki kaburgaları kesin ve akciğerlerin genişlemesi için yer bırakarak göğüs kafesini dikkatlice çıkarın.
    4. Submandibuler tükürük bezlerini ve infrahidoid kasları çıkararak trakeayı izole edin. Pimlerin nefes borusunun her iki tarafına yerleştirilmesi, iğne takılması sırasında istenmeyen hareketleri önleyebilir.
    5. 26 G şırındı % 10 nötr tamponlu formalin 2-3 mL ile doldurun ve nefes borusuna yerleştirin.
    6. Yavaşça formalin enjekte edin ve akciğerlerin genişlemesini izleyin (genellikle ~1,5 mL formalin gerektirir).
    7. Formalin akciğerlerden sızmaya başladığında (aşırı enflasyondan kaçının), trakeayı bir çift ön ayakla kıstırın, şırınga iğnesini çıkarın ve tüm solunum cihazını çıkarın. Doku ek kırpması sabitleme sonrası yapılabileceğinden akciğerleri, kalbi vb. doğrudan formalin içine yerleştirin.
    8. Standart yöntemler kullanılarak tam işleme, gömme, doku kesiti ve hematoksilin ve eozin (H&E) boyama.
  2. Metastatik akciğer tümörü yükünün analizi
    1. H&E lekeli akciğer bölümlerini 40x büyütmede yüksek çözünürlüklü, slayt tarayıcıda tarayın (Şekil 3).
    2. Akciğer metastazlarının ölçülmesi için görüntüleri görüntü analiz yazılımına (örneğin Visiopharm Görüntü Analizi) içe aktarın.
      NOT: Yeni kullanıcıların görüntü analizi yazılımını kullanmak için yerinde veya çevrimiçi eğitim almalarını öneririz. Ticari web sayfası üzerinden çok sayıda web semineri de mevcuttur.
    3. Yazılımın uygulama kitaplığından Visiopharm 10118 H&E Lung Metastaz Uygulamasını seçin.
      NOT: Bu uygulamanın amacı, H&E lekeli slaytlarda akciğer metastazını etiketlemek ve ölçmektir. 10118 H&E Akciğer Metastazı Uygulamasının bir parçası olarak, ilk görüntü işleme adımı Doku Algılama Uygulaması ile akciğer dokusunu segmentlere ayırır. İkinci görüntü işleme adımı, akciğer dokusu içindeki metastazları tanımlayan Metastaz Algılama Uygulamasını kullanır. Metastazlar, metastaz olarak tanımlanamayacak kadar yanlış şekillendirilmiş, çok kırmızı veya çok seyrek olan bölgelerle birlikte şekil yoluyla tanımlanır.
    4. Şekil ve seyrekliği tanımlayan parametreleri temsili görüntülere en uygun şekilde ayarlayın. Tümör metastazlarının ve normal akciğer dokusunun parçalı bölgeleri her doku tipi için farklı renk etiketleri kullanılarak görüntülenebilir.
      NOT: Uygulamanın metastazları normal akciğer dokusundan doğru bir şekilde ayıramaması durumunda, Visiopharm Karar Ormanı programını kullanan özel bir uygulamanın deneyler için yapıldığı gibi yazılması gerekebilir (bkz. Şekil 2 ve Şekil 3). Özel bir algoritma yazmak için ayrıntılar aşağıdadır. Aksi takdirde, 2.2.9 adımına geçin.
    5. İstenilen bir görüntüde birden fazla Sınıf [yani akciğer dokusu (neoplastik olmayan), metastazlar, kırmızı kan hücreleri, epitel ve/veya beyaz alan] eğitilerek çalışan Karar Ormanı programını açın. Şekil 2'de tümör metastazları mavi, normal doku yeşil ve bronşiyoler epitel sarıdır. Ayrıca, kırmızı kan hücreleri kırmızı ve hava boşlukları pembedir.
    6. Her Sınıfı bir görüntü için uygun şekilde eğitmek için sorulan evet veya hayır soruları serisini izleyin. Algoritmanın doğruluğu evet/hayır sorularının sayısını belirleyecektir. Analiz için, özel algoritma / uygulama 50 'ye (aralık 0-100) ayarlanmış doğrulukla yazılmıştır.
    7. Algoritmanın/Uygulamanın doğruluğunu artırmak için keskinleştirmek, bulanıklaştırmak, şekle göre sıralamak vb. Özellikler, belirli renkleri veya yoğunlukları ortaya çıkarmak için Sınıfın görüntüyü görme şeklini değiştirir.
      NOT: Özel algoritma için 8500 μm2 ve üzeri ölçülerindeki metastazlar metastaz olarak etiketlenir ve ölçülür. Bu, boyut farkı ve algılamak için çok küçük metastazları hesaplar. Normal doku nicelemesinde küçük yanlış şekilli alanlar ve 8500 μm2'nin altındaki küçük metastatik alanlar yer aldı.
    8. Değiştirilen ayarları uygulamadan veya özel algoritmadan kaydedin ve ardından algoritmayı/uygulamayı H&E lekeli dokuların tamamına veya serisine uygulayın.
    9. Son olarak, Tablo 1'de listelenenleri içeren tüm çıktı değişkenlerini dışa aktar. Mikronlardaki alan kare (μm2) her doku tipi için ölçülebilir ve yüzdeler numune toplam net doku alanından (yani toplam doku eksi hava alanından) elde edilir.
    10. Özel bir algoritma oluştururken, doğru ölçümler sağlamak ve doku tipleri arasında ayrım yapmak için Amerikan Veteriner Patologlar Koleji tarafından onaylanmış bir veteriner patolog kuruluna danışarak doku işaretlemelerini gözden geçirin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Kuyruk damarı enjeksiyonu için etiketsiz hücreler kullanıyorsanız, makrometazlar gözlemlenebiliyorsa (1) nekropsi zamanına kadar veya (2) mikroskobik metastazlar varsa histolojik analizi takiben akciğer kolonizasyonunu doğrulamak zor olabilir. Geniş metastatik akciğer tümörü yükü ile fareler nefes almaya çalışacaktır. Herhangi bir tümör çalışmasında olduğu gibi, fareler çalışma süresi boyunca dikkatle izlenmelidir. Etiketli hücrelerin kullanımı, başarılı kuyruk damarı enjeksiyonu onaylamanın kolay bir yoludur; bu nedenle...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Araştırmacılar metastaz için deneysel bir model olarak tümör hücrelerinin intravenöz enjeksiyonlarını kullanmaya devam ettikçe, ortaya çıkan metastatik tümör yükünü analiz etmek için standart uygulamalar eksiktir. Bazı durumlarda, belirli hücre hatlarının manipülasyonu ve/veya kimyasal bileşiklerin kullanımı üzerine metastatik tümör yükünde önemli farklılıklar makroskopik olarak gözlenebilir. Bununla birlikte, diğer durumlarda, metastatik tohumlama ve büyümedeki ince farklılıklar, kapsamlı patolojik analizler yapılmadan ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Teşekkürler

Temsili veriler Ulusal Kanser Enstitüsü (K22CA218549 ila S.T.S) aracılığıyla finanse edildi. Burada bildirilen kapsamlı analiz yönteminin geliştirilmesindeki yardımlarına ek olarak, histoloji ve immünofizyotimya hizmetleri için Ohio Eyalet Üniversitesi Kapsamlı Kanser Merkezi Karşılaştırmalı Patoloji ve Fare Fenotipleme Paylaşılan Kaynağına (Direktör – Krista La Perle, DVM, PhD) ve algoritma geliştirme ve analiz için Patoloji Görüntüleme Çekirdeğine teşekkür ederiz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
alkol hazırlama pedleriFisher Scientific22-363-750enjeksiyondan önce kuyruğu temizlemek için
diseksiyon makasıFisher Scientific08-951-5fare diseksiyonu ve akciğer dokusu şişirmesi için
L-Glutamin, 4.5g/L Glikoz ve Sodyum Pirüvat ile DMEMFisher ScientificMT10013CVMDA-MB-231 ve MVT1 hücre hatları için hücre kültürü ortam tabanı
Dulbecco'nun Fosfat Tamponlu Tuz Çözeltisi 1xFisher ScientificMT21030CVenjeksiyon etanol için tümör hücrelerini yeniden süspanse etmek için kullanılır
(% 70 çözelti)Diseksiyon sırasında farenin kürkünü en aza indirmek için kullanılan
Evan'ın mavi boyasıMillipore SigmaE2129kuyruk-ven enjeksiyon yöntemi ile uygulama için steril PBS'de% 1'de kullanılır; Dikkatli kullanın - tehlikeli reaktif
Fetal Sığır SerumuMillipore SigmaF4135hücre kültürü ortamı katkı maddesi; DMEM forsepslerinde %10 oranında kullanılır
Diseksiyon ve akciğer dokusu şişirme içinFisher Scientific10-270
FVB/NJ fareleriJackson Laboratuvarı001800MVT1 hücreleri için sinjeneik fare suşu
hematitometre (Bright-Line)Millipore SigmaZ359629sayımı elde etmek için hücre kültüründe kullanım için
insülin şırıngası (28 G)Fisher Scientific14-829-1Bkuyruk-damar enjeksiyonları için (BD 329424)
MDA-MB-231 hücreleriATCCinsan meme kanseri hücre hattı
MVT1 hücrelerifare meme tümör hücreleri
iğneler (26 G)Fisher Scientific14-826-15farenin şişirmek için kullanılır akciğerler
nötr tamponlu formalin (% 10)Fisher Scientific245685doku fiksatifi olarak ve akciğer dokusunu şişirmek için kullanılır; Dikkatli kullanın - tehlikeli reaktif
NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) fareleriJackson Laboratuvarı005557OSUCCC Hedef Doğrulama tarafından sürdürülmektedir Paylaşılan Kaynak
Penisilin Streptomisin 100xThermoFisher15140163hücre kültürü ortamı katkı maddesi
steril gazlı bezolursa farenin kuyruğuna basınç uygulamak içinFisher ScientificNC9379092
şırınga (5 mL)Fisher Scientific14-955-458fare akciğer dokusu
kuyruk-damar tutucuyuBraintree Scientific, Inc.Kuyruk damarı enjeksiyonları için fareyi dizginlemek için kullanılanTV-150 STD
Tripan mavisi (% 0.4)ThermoFisher15250061canlılığı değerlendirmek için hücre kültüründe kullanılır
Tripsin-EDTA %0.25ThermoFisher25200-114tümör hücrelerini plakadan ayırmak için hücre kültüründe kullanılır
OSU; Dikkatli kullanın - yanıcı hücre , , , , , , Kanama şişirmek için kullanılır ,

Kaynaklar

  1. Chambers, A. F., Groom, A. C., MacDonald, I. C. Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites. Nature Reviews: Cancer. 2 (8), 563-572 (2002).
  2. Steeg, P. S. Targeting metastasis. Nature Reviews: Cancer. 16 (4), 201-218 (2016).
  3. Gupta, G. P., Massague, J. Cancer metastasis: building a framework. Cell. 127 (4), 679-695 (2006).
  4. Steeg, P. S. Tumor metastasis: mechanistic insights and clinical challenges. Nature Medicine. 12 (8), 895-904 (2006).
  5. Chaffer, C. L., Weinberg, R. A. A perspective on cancer cell metastasis. Science. 331 (6024), 1559-1564 (2011).
  6. Eckhardt, B. L., Francis, P. A., Parker, B. S., Anderson, R. L. Strategies for the discovery and development of therapies for metastatic breast cancer. Nature Reviews Drug Discovery. 11 (6), 479-497 (2012).
  7. Gomez-Cuadrado, L., Tracey, N., Ma, R., Qian, B., Brunton, V. G. Mouse models of metastasis: progress and prospects. Disease Models & Mechanisms. 10 (9), 1061-1074 (2017).
  8. Fantozzi, A., Christofori, G. Mouse models of breast cancer metastasis. Breast Cancer Research. 8 (4), 212(2006).
  9. Schoenenberger, C. A., et al. Targeted c-myc gene expression in mammary glands of transgenic mice induces mammary tumours with constitutive milk protein gene transcription. EMBO Journal. 7 (1), 169-175 (1988).
  10. Nusse, R., Varmus, H. E. Many tumors induced by the mouse mammary tumor virus contain a provirus integrated in the same region of the host genome. Cell. 31 (1), 99-109 (1982).
  11. Muller, W. J., Sinn, E., Pattengale, P. K., Wallace, R., Leder, P. Single-step induction of mammary adenocarcinoma in transgenic mice bearing the activated c-neu oncogene. Cell. 54 (1), 105-115 (1988).
  12. Lin, E. Y., et al. Progression to malignancy in the polyoma middle T oncoprotein mouse breast cancer model provides a reliable model for human diseases. American Journal of Pathology. 163 (5), 2113-2126 (2003).
  13. Green, J. E., et al. The C3(1)/SV40 T-antigen transgenic mouse model of mammary cancer: ductal epithelial cell targeting with multistage progression to carcinoma. Oncogene. 19 (1), 1020-1027 (2000).
  14. Iorns, E., et al. A new mouse model for the study of human breast cancer metastasis. PloS One. 7 (10), 47995(2012).
  15. Kim, I. S., Baek, S. H. Mouse models for breast cancer metastasis. Biochemical and Biophysical Research Communications. 394 (3), 443-447 (2010).
  16. Mariotto, A. B., Etzioni, R., Hurlbert, M., Penberthy, L., Mayer, M. Estimation of the Number of Women Living with Metastatic Breast Cancer in the United States. Cancer Epidemiology, Biomarkers and Prevention. 26 (6), 809-815 (2017).
  17. Xiao, W., et al. Risk factors and survival outcomes in patients with breast cancer and lung metastasis: a population-based study. Cancer Medicine. 7 (3), 922-930 (2018).
  18. Smid, M., et al. Subtypes of breast cancer show preferential site of relapse. Cancer Research. 68 (9), 3108-3114 (2008).
  19. Kennecke, H., et al. Metastatic behavior of breast cancer subtypes. Journal of Clinical Oncology. 28 (20), 3271-3277 (2010).
  20. Soni, A., et al. Breast cancer subtypes predispose the site of distant metastases. American Journal of Clinical Pathology. 143 (4), 471-478 (2015).
  21. Leone, B. A., et al. Prognostic impact of metastatic pattern in stage IV breast cancer at initial diagnosis. Breast Cancer Research and Treatment. 161 (3), 537-548 (2017).
  22. Pei, X. F., et al. Explant-cell culture of primary mammary tumors from MMTV-c-Myc transgenic mice. In Vitro Cellular and Developmental Biology: Animal. 40 (1-2), 14-21 (2004).
  23. Mathsyaraja, H., et al. CSF1-ETS2-induced microRNA in myeloid cells promote metastatic tumor growth. Oncogene. 34 (28), 3651-3661 (2015).
  24. Yang, S., Zhang, J. J., Huang, X. Y. Mouse models for tumor metastasis. Methods in Molecular Biology. 928, 221-228 (2012).
  25. La Perle, K. M. D. Comparative Pathologists: Ultimate Control Freaks Seeking Validation. Veterinary Pathology. 56 (1), 19-23 (2019).
  26. Blomberg, O. S., Spagnuolo, L., de Visser, K. E. Immune regulation of metastasis: mechanistic insights and therapeutic opportunities. Disease Models & Mechanisms. 11 (10), (2018).
  27. Gonzalez, H., Hagerling, C., Werb, Z. Roles of the immune system in cancer: from tumor initiation to metastatic progression. Genes and Development. 32 (19-20), 1267-1284 (2018).
  28. Borowsky, A. D., et al. Syngeneic mouse mammary carcinoma cell lines: two closely related cell lines with divergent metastatic behavior. Clinical and Experimental Metastasis. 22 (1), 47-59 (2005).
  29. Yang, Y., et al. Immunocompetent mouse allograft models for development of therapies to target breast cancer metastasis. Oncotarget. 8 (19), 30621-30643 (2017).
  30. Resch, M., Neels, T., Tichy, A., Palme, R., Rulicke, T. Impact assessment of tail-vein injection in mice using a modified anaesthesia induction chamber versus a common restrainer without anaesthesia. Laboratory Animals. 53 (2), 190-201 (2019).
  31. Rashid, O. M., et al. Is tail vein injection a relevant breast cancer lung metastasis model. Journal of Thoracic Disease. 5 (4), 385-392 (2013).
  32. Goodale, D., Phay, C., Postenka, C. O., Keeney, M., Allan, A. L. Characterization of tumor cell dissemination patterns in preclinical models of cancer metastasis using flow cytometry and laser scanning cytometry. Cytometry Part A. 75 (4), 344-355 (2009).
  33. Goddard, E. T., Fischer, J., Schedin, P. A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer. Journal of Visualized Experiments. (118), (2016).
  34. Wright, L. E., et al. Murine models of breast cancer bone metastasis. BoneKEy Reports. 5, 804(2016).
  35. Simmons, J. K., et al. Animal Models of Bone Metastasis. Veterinary Pathology. 52 (5), 827-841 (2015).
  36. Liu, Z., et al. Improving orthotopic mouse models of patient-derived breast cancer brain metastases by a modified intracarotid injection method. Scientific Reports. 9 (1), 622(2019).
  37. Kodack, D. P., Askoxylakis, V., Ferraro, G. B., Fukumura, D., Jain, R. K. Emerging strategies for treating brain metastases from breast cancer. Cancer Cell. 27 (2), 163-175 (2015).
  38. Brown, D. L. Practical Stereology Applications for the Pathologist. Veterinary Pathology. 54 (3), 358-368 (2017).
  39. Aeffner, F., et al. Digital Microscopy, Image Analysis, and Virtual Slide Repository. Institute for Laboratory Animal Research Journal. 59 (1), 66-79 (2018).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Düzeltme


Formal Correction: Erratum: Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells
Posted by JoVE Editors on 12/02/2020. Citeable Link.

An erratum was issued for: Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells. The author list was updated.

The author list was updated from:

Katie A. Thies1, Sue E. Knoblaugh2, and Steven T. Sizemore1
1Department of Radiation Oncology, Arthur G. James Comprehensive Cancer Center and Richard L. Solove Research Institute, The Ohio State University Medical Center
2Department of Veterinary Biosciences, Comparative Pathology and Digital Imaging Shared Resource, The Ohio State University

to:

Katie A. Thies1, Sarah Steck1, Sue E. Knoblaugh2, and Steven T. Sizemore1
1Department of Radiation Oncology, Arthur G. James Comprehensive Cancer Center and Richard L. Solove Research Institute, The Ohio State University Medical Center
2Department of Veterinary Biosciences, Comparative Pathology and Digital Imaging Shared Resource, The Ohio State University

Etiketler

G r nt Analiz Yaz l mMetastatik T m r Y kH E Boyal DokuDijital G r nt AnaliziAkci er Dokusu SegmentasyonuMetastaz KantifikasyonuBiyol minesans G r nt lemeVeteriner Patolojisi
Tümör Hücrelerinin Lateral Kuyruk-Damar Enjeksiyonu Sonrasında Akciğer Metastazının Patolojik Analizi
Bize ulaşın
Kütüphaneye tavsiye et

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Telif hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.