Soluma için kuru toz formülasyonları solunum yolu hastalıklarının tedavisinde büyük potansiyele sahiptir. İnsan çalışmalarına girmeden önce, preklinik çalışmalarda kuru toz formülasyonunun etkinliğini değerlendirmek gerekir. Farelerde intratrakiel yoldan kuru tozun yönetiminin basit ve invaziv bir yöntemi sunulmuştur.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Farelerde Kuru Toz Formülasyonunun Intratrakial Yönetimi
Bu makalede
Özet
Özet
Solunabilir kuru toz formülasyonlarının geliştirilmesinde, biyolojik faaliyetlerini preklinik hayvan modellerinde değerlendirmek esastır. Bu makale, farelerde kuru toz formülasyonunun intratraskial teslimatının noninvaziv bir yöntemini tanıtmaktadır. Üç yönlü bir stopcock aracılığıyla 1 mL şırındıya bağlı 200 μL jel yükleme pipet ucundan oluşan kuru toz yükleme cihazı sunulur. Pipet ucuna az miktarda kuru toz (1-2 mg) yüklenir ve şırınnada 0,6 mL hava ile dağılır. Pipet uçları tek kullanımlık ve ucuz olduğundan, farklı kuru toz formülasyonları önceden farklı uçlara yüklenebilir. Çeşitli formülasyonlar, cihaz temizliği ve doz doldurma olmadan aynı hayvan deneyinde değerlendirilebilir, böylece zamandan tasarruf edilir ve artık tozdan çapraz bulaşma riski ortadan kalkar. Toz dağılımının kapsamı pipet ucunda kalan toz miktarına göre incelenebilir. Farede özel yapım ışık kaynağı ve yol gösterici bir canül içeren bir entübasyon protokolü dahildir. Uygun entübasyon, kuru toz formülasyonunun farenin derin akciğer bölgesine intratrakial olarak teslimini etkileyen önemli faktörlerden biridir.
Giriş
Pulmoner uygulama yolu, hem lokal hem de sistemik eylemler için terapötiklerin sağlanmasında çeşitli faydalar sunmaktadır. Akciğer hastalıklarının tedavisi için, pulmoner doğumla yüksek lokal ilaç konsantrasyonu elde edilebilir, böylece gerekli doz azaltılabilir ve sistemik yan etkilerin insidansı düşürülebilir. Ayrıca, akciğerdeki nispeten düşük enzimamatik aktiviteler erken ilaç metabolizmasını azaltabilir. Akciğerler ayrıca büyük ve iyi perfüzyonlu yüzey alanı, son derece ince epitel hücre tabakası ve pulmoner kılcal damarlardaki yüksek kan hacmi nedeniyle sistemik etki için ilaç emilimi için de etkilidir1.
Soluna....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Bu çalışmada yapılan deneyler, Hong Kong Üniversitesi Öğretim ve Araştırma için Canlı Hayvanların Kullanımı Komitesi (CULATR) tarafından onaylanmıştır. Luciferaz messenger RNA'nın (mRNA), %5 sentetik peptit PEG12KL4'ünü ve mannitolün %94,5'ini (w/w) içeren sprey dondurma kurutma (SFD) ile hazırlanan kuru toz formülasyonları akciğerde mRNA ekspresyonunun16. SFD tozunun kütle ortanca aerodinamik çapı (MMAD) 2,4 μm'dir. Sprey kurutulmuş (SD) mannitol tozu, toz dağılımında kullanılan hava hacminin etkisini araştırmak için kullanılır16. SD tozunun MMAD'si 1,5 μm'dir.
1. Kuru toz insufflato....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bir hayvanın akciğerine toz aerosol sağlamak için kuru bir toz oyucu kullanıldığında, kullanılan hava hacmi, toz dağılımı verimliliğinin yanı sıra güvenliği de etkilediği için kritik öneme sahiptir. Yöntemi optimize etmek için, kuru tozu dağıtmak için farklı hava hacimleri (0,3 mL, 0,6 mL ve 1,0 mL) kullanıldı (1 mg sprey kurutulmuş mannitol) ve farelerin ağırlığı uygulamadan sonra 48 saat boyunca izlendi(Şekil 6). 0.3 mL ve 0.6 mL hava kullanımı, farelerin uygulama sonrası 48 saate kadar ki.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu yazıda kuru toz insufflation ve intratrakial entübasyon için özel yapım cihazlar sunulmuştur. Toz yükleme adımında, kuru toz 200 μL jel yükleme pipet ucuna yüklenir. Ucun dar ucunda gevşek toz paketlemeye izin vermek için uca hafifçe dokunmak önemlidir. Bununla birlikte, toz çok sıkı paketlenirse, ucuna sıkışırlar ve düzgün bir şekilde dağılamazlar. Özellikle düşük yoğunluklu ve düşük bağıl nemde toz yüklemesini kolaylaştırmak için tozun ve pipet ucunun statik yüklerinin nötralize etmesi önerilir. Kılavuzlu canül, cih.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak çıkar çatışmaları yoktur.
Teşekkürler
Yazarlar, bay Ray Lee, Bay HC Leung ve Bay Wallace So'ya ışık kaynağı ve toz oytucusu yapma konusundaki nazik yardımları için teşekkür etmek istiyor; ve hayvan görüntüleme yardımı için Fakülte Çekirdek Tesisi. Çalışma, Hong Kong Araştırma Hibe Konseyi (17300319) tarafından desteklendi.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| BALB/c fare | Dişi; 7-9 haftalık; Vücut ağırlığı 20-25 g | ||
| CleanCap Firefly Luciferase mRNA | TriLink Biyoteknoloji | L-7602 | |
| Kuru Toz İnsüflatör | PennCentury | Model DP-4M | |
| Ketamin %10 | Alfasan International B.V. | NA | |
| Işık yayan diyot (LED) meşale | Unilite Internation | PS-K1 | |
| Mannitol (Pearlitol 160C) | Roquette | 450001 | |
| ; L) | Labcon | 1034-800-000 | |
| Naylon diş ipi | Reach | 30017050 | |
| İğnesiz bir mililitre şırınga | Terumo | SS-01T | |
| Fiber Optik | |||
| PEG12KL4 peptid | EZ Biolab | (PEG12)-KLLLLKLLLLKLLKLLKLLK-NH2 | |
| Plastik Pasteur ince uçlu pipet | Alpha Laboratuvar | lambaları LW4061 | |
| Üç musluk | Braun | D201 | |
| Ksilazin %2 Alfasan | International B.V. | NA | |
| Zerostat 3 anti-statik tabanca | MILTY | 5036694022153 |
Kaynaklar
- Newman, S. P. Drug delivery to the lungs: challenges and opportunities. Therapeutic Delivery. 8 (8), 647-661 (2017).
- Setter, S. M., et al. Inhaled dry powder insulin for the treatment of diabetes mellitus. Clinical Therapeutics. 29 (5), 7....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
