Fibrin hemostaz ve tromboz sırasında pıhtı oluşumundan sorumludur. Bulanıklık tahlilleri ve tromboelastograhy (TEG) bir pıhtı tamamlayıcı değerlendirme sağlayan sinerjik araçlar olarak kullanılabilir. Bu iki teknik birlikte pıhtılaşma koşulları fibrin pıhtı oluşumunu nasıl etkilediği hakkında daha fazla fikir verebilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Tamamlayıcı Pıhtı Karakterizasyonu için Bulanıklık ve Tromboelastografiden Yararlanma
Bu makalede
Özet
Özet
Tromboz dünya çapında önde gelen ölüm nedenidir. Fibrin(ojen) öncelikle pıhtı oluşumu veya tromboz sorumlu proteindir. Bu nedenle fibrin pıhtı oluşumunu karakterize etmek tromboz çalışmasında faydalıdır. Bulanıklık ve tromboelastografi (TEG) pıhtı oluşumunu izlemek için in vitro tahlillerde yaygın olarak kullanılmaktadır. Bulanıklık, ışık iletimini bir spektrometre ile fibrin pıhtı yapısı üzerinden dinamik olarak ölçer ve genellikle araştırma laboratuvarlarında kullanılır. TEG, kan pıhtısı mukavemetini doğrudan ölçen ve öncelikle hastaların hemostazlarını değerlendirmek için klinik ortamlarda kullanılan özel bir viskoelastik tekniktir. Bu iki alet yardımıyla, bu çalışmada basitleştirilmiş fibrinojen/trombin pıhtısı modeli kullanılarak in vitro fibrin pıhtısını karakterize etmek için bir yöntem açıklanmaktadır. Her iki teknik genelinde veri eğilimleri çeşitli pıhtılaşma koşulları altında karşılaştırıldı. Bu çalışmada, büyükbaş hayvan pıhtılaşma faktörleri genellikle klinik ve araştırma ortamlarında insan pıhtılaşma faktörlerinin yerine kullanıldığından, insan ve büyükbaş fibrin pıhtıları yan yana oluşmuştur. Sonuçlar, TEG ve bulanıklığın pıhtı oluşumunu iki farklı yöntemle izlediğini ve birlikte kullanıldıklarında farklı pıhtılaşma koşullarında tamamlayıcı pıhtı mukavemeti ve fiber yapısal bilgi sağladığını göstermektedir.
Giriş
Tromboz, vücutta kan dolaşımını engelleyen ve dünya çapında yüksek morbidite ve mortaliteye yol açan bir kan pıhtısının patolojik oluşumudur. Her yıl 1000 kişi başına 1-2 venöz tromboemboli olgusu ve 2-3 tromboza bağlı vasküler hastalıklar olgusu vardır1,2. Burada çeşitli pıhtılaşma koşullarında pıhtı oluşumunu izlemek için tromboelastografi (TEG) ve bulanıklığı kullanma yöntemi sunulmuştur. Fibrin(ojen) vücutta pıhtı oluşumundan sorumlu birincil proteindir. Pıhtılaşma kaskad son adımlarında, fibrinopeptidler pıhtı geliştikçe çözünmez fibrin monomerlerin polimerizasyon unu başlatan trombin tarafından fibrinoje....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. Fosfat tamponsal salin (PBS) hazırlanması
NOT: PBS bu çalışma boyunca kalsiyum ilavesi gerektirmediği için tanımlanmış tahliller kullanılmıştır. Sitrik kan ürünlerini yeniden kalsifiye etmek için kullanılan kalsiyum eklerken, kalsiyumun fosfat tamponlarında çökeltisi bilindiği için PBS'den kaçınılması gerektiği unutulmamalıdır.
- 137 mM sodyum klorür, 1,8 mM potasyum fosfat monobasic, 10 mM sodyum fosfat dibazik ve 2,7 mM POTASYUM klorür DI suda karıştırılarak 0,01 M, pH 7,4 PBS tampon yapın.
- Bir pH probu kullanarak tampon pH'ı doğrulayın ve gerektiğinde sodyum hidroksit veya hidroklorik asit kullanarak pH'ı ayarlayın.<....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Şekil 1'de gösterilen deneyler, farklı fibrinojen düzeylerinde insan ve büyükbaş fibrin pıhtılarının temsili bulanıklık izleme eğrileridir. Farklı fibrinojen düzeylerinde fibrin pıhtı oluşumu için temsilci TEG izleme eğrileri Şekil 2'degösterilmiştir . Her iki izleme eğrisi pıhtı inisiyasyonu ndan sonraki bir gecikme döneminden sonra pıhtı bulanıklığının veya pıhtı genliğinin zamanla arttığını ve pıhtı oluşumunun sonunda ki seviyelerinin arttığını göstermektedir.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu protokol, basitleştirilmiş bir fibrinojen/trombin pıhtı modelini ticari olarak kullanılabilen bileşenler kullanılarak test eden iki farklı pıhtı karakterizasyon aracının kullanımını göstermektedir. Hem TEG hem de bulanıklık tahlillerinin yapılması kolaydır. Max pıhtı oluşumu (TurbMax ve TEGMax)ve pıhtı oluşum süreleri (TurbTime ve TEGTime)gibi uç nokta pıhtı muayenelerini sağlamakla kalmıyor, aynı zamanda dinamik pıhtı şekillendirme sürecini de değerlendiriyorlar. Bu da TEG .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 96 Kuyulu Şeffaf Düz Tabanlı UV Şeffaf Mikroplaka | Corning | 3635 | İşlem görmemiş akrilik kopolimer, |
| insan serumu | Millipore Sigma | A1653 | ; % 96, liyofilize toz |
| Arium Mini Plus Ultra saf Su Sistemi | Sartorius | NA | DI su kaynağı |
| Sığır serum albümini | Millipore Sigma | A2153 | ≥ % 96, liyofilize toz |
| TEG 5000 için Tek Kullanımlık Bardaklar ve Pimler (Şeffaf) | Hematetik | REF 6211 | |
| Fibrinojen, Sığır Plazma | Millipore Sigma | 341573 | %95'ten fazla pıhtılaşabilir protein içerir |
| Fibrinojen, Pzminojen tükenmiş, İnsan Plazma | Milipor Sigma | 341578 | %95 pıhtılaşabilir protein içerir&ge. |
| Fosfat tamponlu tuzlu su | Millipore Sigma | P3813 | Toz, pH 7.4, 1 L çözelti hazırlamak için |
| Potasyum klorür | Millipore Sigma | 60130 | ≥ % 99,5 saflıkta |
| Potasyum fosfat monobazik | Millipore Sigma | P9791 | & ge; %98 saflık |
| SevenEasy pH Metre | Mettler Toledo | S20 | |
| Sodyum klorür | Millipore Sigma | 71378 | ≥ % 99,5 saflıkta |
| Sodyum fosfat dibazik | Millipore Sigma | 71636 | & ge; % 99,5 saflıkta |
| SpectraMax M5 çok algılamalı mikroplaka okuyucu sistemi | Moleküler Cihazlar | M5 | |
| TEG 5000 Trombostograf Hemostaz analizör sistemi | Hematetik | 07-022 | |
| Trombin, Sığır | Millipor Sigma | 605157 | |
| Trombin, İnsan Plazması, Yüksek Aktiviteli | Millipor Sigma | 605195 |
Kaynaklar
- Beckman, M. G., Hooper, W. C., Critchley, S. E., Ortel, T. L. Venous Thromboembolism. A Public Health Concern. American Journal of Preventive Medicine. 38, 4 Suppl 495-501 (2010).
- Goldhaber, S. Z., Bounameaux, H. Pulmonary embolism and deep vein thrombosis. The Lancet. 379
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
