Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Plevral Yayılım Fare Modelleri için Yakın Kızılötesi Fotoimmünoterapi

2.9K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/61593

⸱

9 Şubat 2021

 ,  ,  ,  ,  , 
1Respiratory Medicine, Nagoya University Graduate School of Medicine, 2Nagoya University Institute for Advanced Research, 3B3-Unit, Advanced Analytical and Diagnostic Imaging Center (AADIC)/Medical Engineering Unit (MEU), Nagoya University Institute for Advanced Research

Bu makalede

Özet

Yakın kızılötesi fotoimmünoterapi (NIR-PIT), kanser hücrelerini yok etmek için antikor-fotoabsorber (IR700Dye) konjuge ve NIR ışığı kullanan gelişmekte olan bir kanser terapötik stratejisidir. Burada, nir-PIT'in antitümör etkisini biyolüminesans görüntüleme kullanarak plevral yaygın akciğer kanseri ve malign plevral mezotelioma fare modelinde değerlendirmek için bir yöntem sunuyoruz.

Özet

Fotoimmünoterapinin etkinliği ortotopik fare modeli ile deri altı modeline göre daha doğru değerlendirilebilir. Akciğer kanseri veya malign plevral mezotelioma gibi intratorasik hastalıklar için tedavi yöntemlerinin değerlendirilmesi için plevral yayılım modeli kullanılabilir.

Yakın kızılötesi fotoimmünoterapi (NIR-PIT), nir ışığına maruz kaldıktan sonra tümör hedefleyen antikorların özgüllüğünü bir fotoabsorberin (IR700Dye) neden olduğu toksisite ile birleştiren yakın zamanda geliştirilmiş bir kanser tedavi stratejisidir. NIR-PIT'in etkinliği çeşitli antikorlar kullanılarak bildirilmiştir; ancak, sadece birkaç rapor bu stratejinin terapötik etkisini ortotopik bir modelde göstermiştir. Bu çalışmada NIR-PIT kullanılarak tedavi edilen plevral yayılımlı akciğer kanseri modelinin etkinlik değerlendirmesinin bir örneğini ortaya koyuyoruz.

Giriş

Kanser, onlarca yıllık araştırmalara rağmen ölüm oranının önde gelen nedenlerinden biri olmaya devam ediyor. Bunun bir nedeni, radyasyon tedavisi ve kemoterapinin terapötik faydalarını sınırlandırabilecek son derece invaziv teknikler olmasıdır. Daha az invaziv teknikler olan hücresel veya moleküler hedefli tedaviler daha fazla ilgi görüyor. Fotoimmünoterapi, immünoterapi ve fototerapiyi birleştirerek sinerjik olarak terapötik etkiyi artıran bir tedavi yöntemidir. İmmünoterapi, tümör mikroçevresinin immünojenikliğini artırarak ve immünregülatör baskılamayı azaltarak tümör bağışıklığını arttırır ve vücuttaki tümörlerin yok olmasına neden olur. Fototerapi, primer tümörleri ışığa duyarlılık ve ışık ışınlarının bir kombinasyonu ile yok eder ve tümör hücrelerinden salınan tümöre özgü antijenler tümör bağışıklığını arttırır. Tümörler hedef hücrelere özgü ve seçici oldukları için ışığa duyarlılıklayıcılar kullanılarak seçici olarak tedavi edilebilirler. Fototerapinin modalitesi fotodinamik tedavi (PDT), fototermal tedavi (PTT) ve fotokimya temelli tedavileri içerir1.

Yakın kızılötesi fotoimmünoterapi (NIR-PIT), fotokimyasal bazlı tedavi ve immünoterapiyi birleştiren yakın zamanda geliştirilen bir antitümör fototerapi yöntemidir1,2. NIR-PIT, kızılötesine yakın silikon fitalasiyanin boyası IRdye 700DX'in (IR700) monoklonal antikora (mAb) konjugasyonu yoluyla belirli hücre yüzey moleküllerini hedefleyen moleküler olarak hedeflenmiş bir tedavidir. Hedef hücrenin hücre zarı NIR ışığı (690 nm)3ile ışınlama üzerine yok edilir.

Geleneksel ışığa duyarlılıklayıcılar ve antikorlar veya hedeflenen PDT birleştirerek hedefli ışık tedavisi kullanma kavramı otuz yıldan daha eskidir4,5. Önceki çalışmalar konvansiyonel PDT ajanlarını antikorlara eşlenerek hedeflemeye çalışmıştır. Bununla birlikte, bu konjugeler ışığa duyarlılıklarının hidrofobikliği nedeniyle karaciğerde sıkışıp kaldıkları için sınırlı bir başarı vardı6,7. Ayrıca, NIR-PIT mekanizması geleneksel PDT'den tamamen farklıdır. Geleneksel ışığa duyarlılıklayıcılar, ışık enerjisini emen, heyecanlı bir duruma yer alan, zemin durumuna geçiş yapan ve apoptoza neden olan bir enerji dönüşümünden kaynaklanan oksidatif stres üretir. Bununla birlikte, NIR-PIT, bir fotokimyasal reaksiyon yoluyla membranda fotosensilatizerleri toplayarak hücre zarını doğrudan yok ederek hızlı nekroza neden olur8. NIR-PIT birçok yönden geleneksel hedefli PDT'den daha üstündür. Geleneksel ışığa duyarlılıklar, çok sayıda ışığa duyarlılıklaştırıcının tek bir antikor molekülüne bağlanmasını gerektiren ve potansiyel olarak bağlayıcı yakınlığı azaltan düşük yok olma katsayılarına sahiptir. Geleneksel ışığa duyarlılıkların çoğu hidrofobiktir, bu da fotoizatörlerin immünoreaktivitelerinden veya in vivo hedef birikimlerinden ödün vermeden antikorlara bağlanmasını zorlaştırır. Geleneksel ışığa duyarlılıklar tipik olarak görünür aralıktaki ışığı emerek doku penetrasyonunu azaltır.

Akciğer kanseri ve malign plevral mezotelioma (MPM) hücreleri gibi intratorasik tümörleri hedefleyen NIR-PIT üzerinde yapılan çeşitli çalışmalar9, 10,11,12,13,14,15,16,17bildirilmiştir. Bununla birlikte, sadece birkaç rapor NIR-PIT'in plevral yaygın MPM veya akciğer kanseri modellerinde etkinliğini tanımlamıştır9,10,11,12. Deri altı tümör ksinograft modellerinin standart tümör modelleri olduğu düşünülmektedir ve şu anda yeni tedavilerin antitümör etkilerini değerlendirmek için yaygın olarak kullanılmaktadır18. Bununla birlikte, deri altı tümör mikroçevrİmİ, uygun bir doku yapısının veya gerçek bir malign fenotip 19 , 20 ,21,22'yidüzgün bir şekilde rekapte eden bir durumun geliştirilmesi için izindeğildir. İdeal olarak, antitümör etkilerin daha hassas bir şekilde değerlendirilmesi için ortotopik hastalık modelleri oluşturulmalıdır.

Burada, NIR-PIT kullanılarak tedavi edilen plevral yaygın akciğer kanserinin fare modelinde bir etkinlik değerlendirme yöntemi gösteriyoruz. Plevral yayılım fare modeli, tümör hücrelerinin torasik boşluğa enjekte ederek üretilir ve luciferaz lüminesansı kullanılarak doğrulanır. Fare, IR700 ve NIR ışınlama ile konjuge edilen intravenöz bir mAb enjeksiyonu ile tedavi edildi. Terapötik etki luciferaz lüminesans kullanılarak değerlendirildi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm in vivo deneyler, Nagoya Üniversitesi Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi Laboratuvar Hayvan kaynaklarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'na uygun olarak gerçek gerçekleştirildi (onay #2017-29438, #2018-30096, #2019-31234, #2020-20104). Nagoya Üniversitesi Hayvan Merkezi'nde altı haftalık homozigot athymic çıplak fareler satın alındı ve bakımı yapıldı. Farelerde prosedürü gerçekleştirirken, izofluran ile uyuşturuldular (giriş: % 4-5, bakım% 2-3); pati, anestezinin derinliğini doğrulamak için cımbızla bastırıldı.

1. iab ile IR700 konjugasyonu

  1. 1 h için 15-25 °C'de 0.1 mol/L Na 2 HPO 4 (pH 8.6) ile IR700 NHS ester (DMSO'da 66.8 mg,34.2nmol, 5 mmol/L) ile 1 mg, 6.8 nmol) kuluçkaya yatırın.
  2. Karışımı bir sütun kullanarak arındırın (örneğin, Sephadex). Sütunu PBS ile hazırlayın ve yıkayın. Daha sonra karışımı sütuna uygulayın ve saflaştırılmış IR700 konjuge antikoru içeren damlayı toplayın. Bu IR700 konjuge antikor antikor ışığa duyarlılık konjuge (APC) olarak adlandırılır.
  3. APC'deki protein ve IR700 konsantrasyonu ölçün.
    1. Spektrofotometre kullanarak protein ve IR700 için kalibrasyon eğrileri hazırlayın.
    2. Standart albümin konsantrasyonlarını kit protokolünü takiben bir protein test kiti ile karıştırın (bkz. Malzeme Tablosu, Coomassie Parlak Mavi (CBB) protein boyama). Albümin absorbansını 595 nm dalga boyunda ölçün ve aşağıdaki denklemi kullanarak protein için kalibrasyon eğrisini (doğrusal bir yaklaşım formülü) çizin: y = ax + b (x: konsantrasyon, y: absorbans).
    3. Aynı prosedürü kullanarak 690 nm'de emilim ile IR700 için kalibrasyon eğrileri elde edin. Standart IR700 konsantrasyonu 0,1-5 μM'de (0,1954-9,77 μg/mL) önerilir.
    4. APC'deki protein konsantrasyonunu ve IR700 konsantrasyonunu kalibrasyon eğrisi [x = (y-b)/a (x: konsantrasyon, y: absorbans)] kullanarak ölçün.
    5. Molar konsantrasyonunun sonuçlarıyla mAb başına bağlı IR700 boya sayısını belirleyin.
      NOT: mAb molekülü başına en uygun IR700 moleküllerinin konjugasyon sayısını belirlemek önemlidir. Genel olarak, tek bir mAb molekülüne bağlı yaklaşık üç IR700 molekülü hem in vitro hem de in vivoetkili olacaktır. Antikor başına bağlı birçok IR700 (örneğin, altı), in vivo deneyler sırasında karaciğerde sıkışmayı kolaylaştırır. IR700'e bağlı antikor oranı 1:2-1:4 aralığındaydı. Gerekirse IR700 oranı azaltıldı.
  4. APC oluşumu için bir onay olarak sodyum dodecyl sülfat-poliakrilamid jel elektroforez (SDS-PAGE) gerçekleştirin. Jeli floresan görüntüleyici kullanarak 700 nm'de görüntüleyin ve jeldeki proteini kit protokolünü takip eden bir protein boyama kiti kullanarak lekelenin (bkz. Malzeme Tablosu, CBB protein boyama).

2. Plevral yaygınlaştırma modelinin üretimi

  1. Luciferaz eksprese edici hedef hücreleri hazırlayın ve 100 μL fosfat tamponlu salinde (PBS) 1.0 × 106 hedef hücreyi askıya alın
    NOT: Akciğer kanseri ve MPM gibi intratorasik kanser hücreleri hedef hücre olarak uygundur. Luciferaz ekspresyonu hücreleri luciferaz gen transfeksiyon yoluyla hazırlandı ve 10 hücre geçişi > sonra luciferazın yüksek ekspresyonu doğrulandı. Hücreler % 10 fetal sığır serumu ve penisilin (100 IU/mL) ve streptomisinin (100 mg/mL) ile desteklenmiş bir ortamda kültürlendi. Hücre sayısı tümör büyüme hızına ve tedavi süresine göre ayarlandı (1.0. × 105 -6.0× 106 hücre/vücut ağırlığı).
  2. Tercih edilen vücut ağırlığı 19-21 g olan 8-12 haftalık dişi homozigot athymic çıplak fareler hazırlayın.
  3. İşlem sırasında fareleri izofluran ile uyuşturun (giriş: % 4-5, bakım% 2-3); reaksiyon olmadığını onaylamak için kuyruğa cımbızla bastırın.
  4. Polistiren köpüklü bir durdurucu yapın ve akciğer yaralanmasını önlemek için ucun 5 mm'de kalması için durdurucuyu 30 G iğneye takın. Pnömotorakstan kaçınmak için iğne ucunu temiz ön ayaklarla veya %70 EtOH ile temizlenmiş sert bir nesneye bastırarak bükün (Şekil 1).
    DİkKAT: Kendini delmemeye dikkat edin. İğneyi bükmek için tokmak kullanın. İğneye tağrken durdurucuyu tutmayın. Hücreleri şırındağa doldurmadan önce durdurucuyu yapıştırmak daha güvenlidir.
  5. Bir şırıngayı (1 mL) hedef hücrelerle doldurun ve bir durdurucu ile 30G iğne takın.
  6. İşlemden önce hayvanın göğsünü% 70 EtOH ile dezenfekte edin.
  7. Farenin göğsüne bir iğneyi interkostal boşluktan delin. O sırada kaburgalara vururken direnç nedeniyle iğne ucu yukarı ve aşağı hareket etti. Interkostal alandan geçtikten sonra şırınna fareye bastırın ve 100 μL hedef hücre enjekte edin (Şekil 2).
    NOT: İğne göğüs boşluğuna düzgün bir şekilde girdiğinde fare derin nefes eder. İğne ucunun bükülmesi ile pnömotoraks ve akciğere uygun olmayan hücre enjeksiyonu önlenebilir.
    NOT: Kalp duvarı delinme riskini önlemek için sağ göğüs duvarı delinmesi önerilir.
  8. Hücreleri torasik boşluğa yaymak için fareyi 2-3 kez yuvarlayın.
  9. Fareyi temiz ve sıcak bir kafese geri döndürün ve ambülatöre kadar izleyin. İşlemden sonra, fare anesteziden uyanacak ve normal davranacaktır.

3. Biyolüminesans ölçümü

NOT: Veri toplama için kullanılan yazılım Malzeme Tablosundalistelenmiştir.

  1. Plevral yayılım modelinin neslini doğrulamak için, hücreleri torasik boşluğa enjekte ettikten sonra her gün biyolüminesans görüntülerini değerlendirin.
  2. Fareleri uyuşturun (adım 2.3) ve D-luciferin (15 mg / mL, 200 μL) ile intraperitoneally enjekte edin.
  3. Farenin görüntülemeden önce ve sonra normal nefes almasını sağlayın. Anestezi sırasında hipotermiyi önlemek için gerekirse bir ısıtıcı kullanın.
  4. Enjeksiyondan on dakika sonra, fareyi biyolüminesans görüntüleme (BLI) ölçüm ekipmanına ayarlayın. Görüntü alımı için yazılımın Edinme Denetim Masası'nı açın. Parlaklık, Fotoğrafve Kaplama (Şekil 3) 'yiseçin.
  5. Pozlama süresini Otomatik olarak ayarlayın. Binning'i küçük olarak ayarla.
  6. F/stop'ı parlaklık için 1 ve fotoğraf için 8 olarak ayarlayın; f/stop, şarjlı bağlı cihaz dedektörü tarafından alınan ışık miktarını kontrol ediyor.
  7. Görünüm Alanını Colarak ayarlayın.
  8. Fare örneği görüntülemeye hazır olduğunda, görüntüleme alımı için Al'ı tıklatın. Daha fazla çalışma için yeterli luciferaz aktivitesi olan fareler seçildi.
    NOT: Uygun bir plevral yayma modeli, ventral taraftan bakıldığında göğüsteki dağınık bölgede güçlü lüminesans gösterir. BLI görüntüleri toraksta ve sadece enjeksiyon bölgesinde dağıtılmazsa, tümör deri altından nakledilebilir.
  9. Görüntüyü görüntüledikten sonra, görüntü biçimini Radiance olarak ayarlayın. Araç Paleti panelini açın (Şekil 4A).
  10. Yatırım Getirisi Araçları 'nıseçin. Görüntülerdeki biyolüminesan alanı aralığı için Circle'ı kullanmanızı öneririz.
  11. Yüzey biyolüminesansı yoğunluğunu ölçmek için RoI'leri ölç'ü tıklatın (Şekil 4B).
  12. Gereken değerleri/bilgileri seçmek için yatırım getirisi ölçüm panelinin sol köşesindeki Ölçümü Yapılandır'ı kullanın. Bu veri tablosunu .csv dosyası olarak verin (Şekil 4C).
  13. .csv dosyasında biyolüminesan yoğunluk nicelemesi olarak Toplam Akı (p/s) değerlerini kullanın.

4. Dağınık lüminesans görüntüleme tomografisi (DLIT)

NOT: Veri toplama için kullanılan yazılım Malzeme Tablosundalistelenmiştir.

  1. X-ray Armed düğmesini açın.
  2. Fareleri uyuşturun (adım 2.3) ve ardından D-luciferin (15 mg / mL, 200 μL) intraperitoneally farelere enjekte edin. DLIT'i sürekli olarak 3,2'den 3,7'ye çekmek için bu adımı atlayın.
  3. Enjeksiyondan on dakika sonra fareyi BLI ekipmanına ayarlayın.
  4. Yazılımın Edinme Denetim Masası'nı açın. Parlak , Fotoğraf, CT, Standart-Bir Fareve Kaplama 'yıseçin. Diğer ayarlar 3.4-3.6(Şekil 5A)ile aynıydı.
  5. Edinme Denetim Masası'nda Görüntüleme Sihirbazı'nı seçin.
  6. Biyolüminesans'ı ve ardından DLIT 'i (Şekil 5B) seçin.
  7. Ölçülecek dalga boyu olarak Firefly'ı seçin (Şekil 5C).
  8. Görüntüleme Konusunu Fare, Pozlama parametrelerini Otomatik Ayarlar, Görüş Alanını C-13,4 cmve Konu Yüksekliğini 1,5 cm ( Şekil5D) olarak ayarlayın.
  9. Itme X ışınları enerjilendiğinde üretilecektir. öğesini 0,.
  10. CT sıralı görüntü verilerini açın.
  11. Araç Paletinde Yüzey Topografyası'nı açın. Göster 'i seçin (Şekil 6A).
  12. Mor ekran yalnızca gövde yüzeyini gösterecek şekilde eşiği ayarlayın (Şekil 6B). Ardından, Konu Çıplak Fare'yi seçin ve Yüzey Oluştur 'utıklatın. Farenin anahattının doğru çizildiğinden emin olun (Şekil 6C).
  13. Araç Paleti, DLIT 3D Rekonstrüksiyon Özellikleri sekmesini açın. Fare Dokusu olarak Doku Özelliklerini ve Ateş Böceği Olarak Kaynak Spektrumu 'nı seçin(Şekil 6D). Ardından, Çözümle sekmesini açın ve seçilen her dalga boyu verisi için verileri onaylayın. Son olarak, Yeniden Yapılandır düğmesini (Şekil 6E) tıklatın.
  14. Yapılandırılmış DLIT görüntüsünde göğüs boşluğunda BLI varlığını onaylayın.

5. In vivo plevral yayma modeli için NIR-PIT

  1. Bir güç ölçer ile 690 nm dalga boyu (NIR) lazer ışık dozunu ölçün ve çıkışı 100 mW / cm2'yeayarlayın.
    NOT: Lazer ışığı hassas bir bobin boyutu ile tutarlıdır; böylece, ışık enerjisi 50 cm içindeki mesafeden bağımsız olarak neredeyse hiç değişmez. Yanıklar gibi birçok olumsuz olay varsa, 40 mW / cm2aralığında çıkışı azaltın.
  2. Kuyruğu% 70 EtOH ile temizleyin ve NIR ışınlamadan 24 saat önce kuyruk damarı aracılığıyla APC (100 μg) enjekte edin. Kanamayı kontrol etmek için enjeksiyon bölgesine basınç uygulayın.
    NOT: Enjeksiyon için APC hacmini 50-200 μL'ye ayarlayın.
  3. Fareleri uyuşturun (adım 2.3) ve sırt üstü yatırın. Hedef olmayan bölgeye NIR ışınını önlemek için, diğer bölgeleri alüminyum folyo ile siper edin (Şekil 7A). 100 J/cm2lazer ile NIR ışık ile ışınlanın; tümör göbeğe geri yayılırsa, NIR-ışık ışınlama dozu birden fazla yöne bölünebilir (Şekil 7B).
    NOT: İn vitro sonuçlara ve yanık gibi olumsuz olaylara bağlı olarak dozu30-150 J/cm 2 olarak ayarlayın.
  4. NIR ışınlama tamamlandığında ve fare uyanık olduğunda, kafese geri döndürün.
  5. BLI'ye uyun ve yatırım getirisini zaman içinde (her gün) ölçün (Bkz. 3.2-3.12).
  6. Ex vivo görüntüleme için, NIR ışınlamadan hemen önce, APC enjeksiyonundan 24 saat sonra karbondioksitli fareleri ötenazi edin.
    1. Farenin göğsünün içini gözlemlemek için toraksı çıkarın ve kaburgaları ve sternumu kesin. APC yönetimi olmadan kontrolün yanında floresan görüntüsünü (700 nm) yakalayın. Daha sonra, maruz kalan toraksın üzerine D-luciferin (150 μg/mL) uygulayın ve BLI alındı (bkz. 3.2-3.7).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Anti-podoplanin antikoru NZ-1, NZ-1-IR700 üretmek için IR700 ile eşleştirilmişti. NZ-1 ve IR700'ün bir SDS-PAGE(Şekil8)üzerinde bağlanmasını doğruladık. Luciferaz ekspresyatif H2373 (H2373-luc), malign mezotelioma hücrelerinin (H2373) luciferaz geni10ile transfecting ile hazırlanmıştır.

8-12 haftalık dişi homozigot athymic çıplak fareleri uyuşturduk ve torasik boşluğa 1 ×10 5 H2373-luc hücresi enjekte ettik. Tümör hücrelerinin fa...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu çalışmada NIR-PIT'in MPM'nin plevral yayılım modeli üzerindeki terapötik etkisini ölçmek için bir yöntem ortaya koyduk. NIR-PIT ile son derece seçici hücre öldürme yapıldı; böylece, normal doku neredeyse hiç zarar görmedi23,24,25. Bu tür seçici hücre öldürme ile NIR-PIT'in yaygın modeller9,26'dagüvenli olduğu gösterilmiştir. Ancak, baz...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar rakip finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
0.25w/h% Tripsin-1mmol/l EDTA 4Na Fenol KırmızıWakoÇözelti Hücre kültürü için209-016941
1 mL şırıngaFare deneyi içinTERUMOSS-01T
Fareler deneyi için30G iğneNipro1907613
BALB/cSlc-nu/nuJaponya SLC
Collidal Mavi Boyama KitiInvitrogenLC6025kullanımı jel protein boyama için
Coomassie (bradford) Plus protein tahliliThermo Fisher Scientific Inc (Waltham, MA, ABD)APC konsantrasyonunu ölçmek içinPI-23200
Dimetil sülfoksit (DMSO)Wako043-07216tuzu) konjugasyonu için kullanın
Cayman Chemical14681biyolüminesans görüntüleme ve DLIT
GraphPad Prism7içinİstatistiksel analiz için
700 nm floresan görüntüyü analiz etmek içinImage StudioLi-Cor Biosciences
IRDye 700DX Ester Kızılötesi BoyaLI-COR Bioscience (Lincoln, NE, ABD)929-70011
fareler için izofluranWako095-06573anestezi
IVIS Spectrum CTPerkinElmer biyolüminesan görüntü ve DLIT
Living ImagePerkinElmerbiyolüminesan görüntü ve DLIT
Na2HPO4SIGMA-ALDRICH (St. Louis, MO, ABD)IR700konjugasyonu için IR700
NIR ışınlaması için
Novex WedgeWell% 4 ila 20, Tris-Glisin, 1.0 mm, Mini Protein Jel, 12 kuyuSDS-PAGE NuPAGE
LDS Numune Tamponu içinSDS-PAGEInvitrogenNP0007
Thorlabs (Newton, NJ, ABD)NIR lazerin çıkışını ölçmek içinPM100
PBS(-)Wako166-23555
Pearl Trilogy görüntüleme sistemiLi-Cor Biosciences, 700 nm fluorecent görüntüyü yakalamak için
Penicilin-Streptomisin Çözeltisi (x100)Hücre kültürü içinWako168-23191
Lusiferaz transfeksiyonu içinPuromycin DihidroklorürThermoFisherA1113803
RediFect Red-Fluc-Puromycin Lentiviral PrticlesPerkinElmerCLS960002lusiferaz transfeksiyonu için
RPMI-1640, L-glutamin ve Fenol KırmızısıWako189-02025hücre kültürü için
Sephadex G25 sütunu (PD-10) GE Healthcare (Piscataway, NJ, ABD)17-0851-01konsantrasyonunu ölçmek için IR700
UV-1900iShimadzu
ile IR700 D-Luciferin (potasyum GraphPad yazılımı için, NIR Lazer Changchun Yeni Endüstriler Optoelektronik Teknolojisi MRL-III-690R kullanım Invitrogen XP04202BOX kullanımı (x4)Optik güç ölçer için kullanımı  ile APC konjugasyonu için kullanım

Kaynaklar

  1. Xu, X., Lu, H., Lee, R. Near Infrared Light Triggered Photo/Immuno-Therapy Toward Cancers. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 8, (2020).
  2. Mitsunaga, M., et al. Cancer cell-selective in vivo near infrared photoimmunotherapy targeting specific membrane molecules. Nature Medicine. 17, 1685-1691 (2011).
  3. Kobayashi, H., Choyke, P. L. Near-Infrared Photoimmunotherapy of Cancer. Accounts of Chemical Research. 52, 2332-2339 (2019).
  4. Oseroff, A. R., Ohuoha, D., Hasan, T., Bommer, J. C., Yarmush, M. L. Antibody-targeted photolysis: Selective photodestruction of human T-cell leukemia cells using monoclonal antibody-chlorin e6 conjugates. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 83, 8744-8748 (1986).
  5. Mew, D., Wat, C. K., Towers, G. H., Levy, J. G. Photoimmunotherapy: treatment of animal tumors with tumor-specific monoclonal antibody-hematoporphyrin conjugates. Journal of Immunology. 130, 1473-1477 (1983).
  6. Vrouenraets, M. B., et al. Development of meta-tetrahydroxyphenylchlorin-monoclonal antibody conjugates for photoimmunotherapy. Cancer Research. 59, 1505-1513 (1999).
  7. Goff, B. A., et al. Photoimmunotherapy and biodistribution with an OC125-chlorin immunoconjugate in an in vivo murine ovarian cancer model. British Journal of Cancer. 70, 474-480 (1994).
  8. Sato, K., et al. Photoinduced Ligand Release from a Silicon Phthalocyanine Dye Conjugated with Monoclonal Antibodies: A Mechanism of Cancer Cell Cytotoxicity after Near-Infrared Photoimmunotherapy. ACS Central Science. 4, 1559-1569 (2018).
  9. Sato, K., Nagaya, T., Choyke, P. L., Kobayashi, H. Near infrared photoimmunotherapy in the treatment of pleural disseminated NSCLC: Preclinical experience. Theranostics. 5, 698-709 (2015).
  10. Nishinaga, Y., et al. Targeted Phototherapy for Malignant Pleural Mesothelioma: Near-Infrared Photoimmunotherapy Targeting Podoplanin. Cells. 9, 1019(2020).
  11. Sato, K., et al. Near infrared photoimmunotherapy prevents lung cancer metastases in a murine model. Oncotarget. 6, 19747-19758 (2015).
  12. Sato, K., Nagaya, T., Mitsunaga, M., Choyke, P. L., Kobayashi, H. Near infrared photoimmunotherapy for lung metastases. Cancer Letters. 365, 112-121 (2015).
  13. Isobe, Y., et al. Near infrared photoimmunotherapy targeting DLL3 for small cell lung cancer. EBioMedicine. 52, 102632(2020).
  14. Nakamura, Y., et al. Near infrared photoimmunotherapy in a transgenic mouse model of spontaneous epidermal growth factor receptor (EGFR)-expressing lung cancer. Molecular Cancer Therapeutics. 16, 408-414 (2017).
  15. Nagaya, T., et al. Near infrared photoimmunotherapy with avelumab, an anti-programmed death-ligand 1 (PD-L1) antibody. Oncotarget. 8, 8807-8817 (2017).
  16. Sato, K., et al. Spatially selective depletion of tumor-associated regulatory T cells with near-infrared photoimmunotherapy. Science Translational Medicine. 8, (2016).
  17. Sato, K., et al. Comparative effectiveness of light emitting diodes (LEDs) and lasers in near infrared photoimmunotherapy. Oncotarget. 7, 14324-14335 (2016).
  18. Sato, K., Choyke, P. L., Kobayashi, H. Photoimmunotherapy of Gastric Cancer Peritoneal Carcinomatosis in a Mouse Model. PLoS One. 9, 113276(2014).
  19. McLemore, T. L., et al. Comparison of intrapulmonary, percutaneous intrathoracic, and subcutaneous models for the propagation of human pulmonary and nonpulmonary cancer cell lines in athymic nude mice. Cancer Research. 48, 2880-2886 (1988).
  20. Manzotti, C., Audisio, R. A., Pratesi, G. Importance of orthotopic implantation for human tumors as model systems: relevance to metastasis and invasion. Clinical & Experimental Metastasis. 11, 5-14 (1993).
  21. Lwin, T. M., Hoffman, R. M., Bouvet, M. Advantages of patient-derived orthotopic mouse models and genetic reporters for developing fluorescence-guided surgery. Journal of Surgical Oncology. 118, 253-264 (2018).
  22. Sordat, B. C. M. From Ectopic to Orthotopic Tumor Grafting Sites: Evidence for a Critical Role of the Host Tissue Microenvironment for the Actual Expression of the Malignant Phenotype. , Humana Press. Cham. 43-53 (2017).
  23. Sato, K., et al. Photoimmunotherapy: comparative effectiveness of two monoclonal antibodies targeting the epidermal growth factor receptor. Molecular Oncology. 8, 620-632 (2014).
  24. Nakajima, T., et al. The effects of conjugate and light dose on photo-immunotherapy induced cytotoxicity. BMC Cancer. 14, 389(2014).
  25. Nagaya, T., et al. Near infrared photoimmunotherapy of B-cell lymphoma. Molecular Oncology. 10, 1404-1414 (2016).
  26. Sato, K., et al. Near infrared photoimmunotherapy in the treatment of disseminated peritoneal ovarian cancer. Molecular Cancer Therapeutics. 14, 141-150 (2015).
  27. Colin, D. J., Bejuy, O., Germain, S., Triponez, F., Serre-Beinier, V. Implantation and monitoring by pet/ct of an orthotopic model of human pleural mesothelioma in athymic mice. Journal of Visualized Experiments. 2019, (2019).
  28. Opitz, I., et al. Local recurrence model of malignant pleural mesothelioma for investigation of intrapleural treatment. European Journal of Cardio-Thoracic Surgery. 31, 772-778 (2007).
  29. Bunn, P. A., Kelly, K. New chemotherapeutic agents prolong survival and improve quality of life in non-small cell lung cancer: a review of the literature and future directions. Clinical Cancer Research. 4, 1087-1100 (1998).
  30. Astoul, P., Wang, X., Hoffman, R. Patient-like nude-mouse and scid-mouse models of human lung and pleural cancer (review). International Journal of Oncology. 3, 713-718 (1993).
  31. Yamaguchi, H., Pantarat, N., Suzuki, T., Evdokiou, A. Near-infrared photoimmunotherapy using a small protein mimetic for HER2-overexpressing breast cancer. International Journal of Molecular Sciences. 20, (2019).
  32. Jing, H., et al. Imaging and selective elimination of glioblastoma stem cells with theranostic Near-Infrared-Labeled CD133-Specific antibodies. Theranostics. 6, 862-874 (2016).
  33. Burley, T. A., et al. Near-infrared photoimmunotherapy targeting EGFR-Shedding new light on glioblastoma treatment. International Journal of Cancer. 142, 2363-2374 (2018).
  34. Nagaya, T., et al. Near infrared photoimmunotherapy using a fiber optic diffuser for treating peritoneal gastric cancer dissemination. Gastric Cancer. 22, 463-472 (2019).
  35. Nagaya, T., et al. Endoscopic near infrared photoimmunotherapy using a fiber optic diffuser for peritoneal dissemination of gastric cancer. Cancer Science. 109, 1902-1908 (2018).
  36. Harada, T., et al. Near-infrared photoimmunotherapy with galactosyl serum albumin in a model of diffuse peritoneal disseminated ovarian cancer. Oncotarget. 7, 79408-79416 (2016).
  37. Journals, O. JNCI Journal of the National Cancer Institute Way to Better DNA. Annals of Internal Medicine. 37, 1-9 (2008).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Plevral Yayılım ModeliBiyolüminesans GörüntülemeNIR Işık IşınlamasıAntikor Fotosensitizör KonjugatıTümör Hücresi EnjeksiyonuToraks Boşluğu TedavisiOrtotopik Fare ModeliIR700 Boya LazeriLüsiferaz Aktivite Ölçümü
Plevral Yayılım Fare Modelleri için Yakın Kızılötesi Fotoimmünoterapi
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.