Kronik pankreatit (CP), genellikle inatçı karın ağrısı ile ilişkili olan pankreasın iltihabı ve fibrozisi ile karakterize bir hastalıktır. Bu makalede, 2,4,6 -trinitrobenzen sülfiyonik asit (TNBS) ile safra kanalı infüzyonu yoluyla CP'nin fare modelini oluşturma tekniğinin iyileştirilmesine odaklanmaktadır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Safra Kanalı TNBS infüzyonu ile Kronik Pankreatit için Bir Fare Modeli
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Kronik pankreatit (CP), pankreas iltihabı ve fibrozis, glandüler atrofi, karın ağrısı ve diğer semptomları içeren karmaşık bir hastalıktır. Safra kanalı 2,4,6 -trinitrobenzen sülfikonik asit (TNBS) infüzyon modelinin CP'de görülen nöropatik ağrının özelliklerini çoğalttığı CP'yi incelemek için çeşitli kemirgen modelleri geliştirilmiştir. Bununla birlikte, farelerde safra yolu ilaç infüzyonu teknik olarak zordur. Bu protokol, cp fare modeli üretimi için safra kanalı TNBS infüzyon prosedürünü gösterir. TNBS, duodenumdaki Vater ampullası aracılığıyla pankreasa aşılandı. Bu protokol, işlem sırasında ilaç hacmini, cerrahi teknikleri ve ilaç kullanımını optimize etti. TNBS ile tedavi edilen fareler, vücut ağırlığı ve pankreas kilo azalmaları, ağrıya bağlı davranışlardaki değişiklikler ve anormal pankreas morfolojisi ile yansıtıldığı gibi CP özellikleri gösterdi. Bu gelişmelerle TNBS enjeksiyonu ile ilişkili mortalite en az düzeydeydi. Bu prosedür sadece pankreas hastalığı modellerinin oluşturulmasında kritik değildir, aynı zamanda lokal pankreas ilacı dağıtımında da yararlıdır.
Giriş
Kronik pankreatit (CP), pankreas atrofisi, fibrozis, karın ağrısı ve hem ekzokrin hem de endokrin fonksiyonların nihai kaybı ile karakterize kronik bir enflamatuar hastalıktır1. Mevcut tıbbi ve cerrahi tedaviler iyileştirici değildir, ancak hastalığın sonucu olan semptomları hafifletmek için üstlenilir: refrakter karın ağrısı, endokrin ve ekzokrin disfonksiyon. Bu nedenle, acilen daha etkili tedavilere ihtiyaç vardır2. Hayvan modelleri, hastalığın daha iyi anlaşılması ve potansiyel terapötiklerin araştırılması için gerekli bir araç sağlar3. CP için cerulein ve/veya alkol modellerinin yaygın olarak....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm prosedürler, Güney Carolina Tıp Üniversitesi ve Ralph H. Johnson Tıp Merkezi'ndeki Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitelerinin onayıyla gerçekleştirildi. Bu çalışmada 8-10 haftalık C57BL/6J erkek fareler kullanılmıştır. Fareler, yiyecek ve suya reklam libitumaccess ile standart bir 12 ışık / 12 karanlık döngü altında barındırıldı.
1. Enjeksiyon için TNBS çözeltisinin hazırlanması
- % 0.9 salin içinde% 10 etanol hazırlayın. %10 etanol 1 mL'ye 7,5 μL TNBS ekleyerek stok TNBS'yi (bkz. Malzeme Tablosu)%10 etanol içinde 7,5 mM'lik nihai konsantrasyonda çözün.
DİkKAT: TNBS kimyasal bir tehlike oluşturur. Çözelt....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Safra kanalı infüzyon prosedürleri, bu prosedürle ilişkili fare mortalitesini azaltmak için optimize edilmiştir10. TNBS ilk olarak toplam 35 μL veya 50 μL hacimde verildi. TNBS'nin 50 μL'lik bir hacimde enjeksiyonu tüm pankreasa ulaşabilir ve daha homojen bir hastalık fenotipine neden olabilir (Şekil 1B). Ek olarak, 31G iğne ile insülin şırıngası kullanılarak TNBS enjeksiyonu, düzenli şırıngalara ve iğne boyutlarına göre infüzyon hızını daha iyi kontrol edebilir. Buz .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Kronik pankreatit indükle etmek için TNBS'nin safra kanalı infüzyonu, farelerde teknik olarak zordur, çünkü farelerin% 22,5'i ilaç infüzyonunun 3-4 gün içinde ölebilir10. Burada, bu rapor önceki çalışmalara dayanarak prosedürü iyileştirdi ve erken fare ölüm oranını% <10'a düşürdü. Örneğin, artan ilaç hacmi (35 μL'den 50μL'ye kadar) ilaçların tüm pankreasa ulaşmasını sağlayabilir. Bir insülin şırıngası ve daha küçük bir iğne boyutu (31G) kullanmak, pankreas kanalına potansiyel hasarı ve safra keses.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Tüm yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.
Teşekkürler
Bu çalışma Gazi İşleri Bakanlığı (VA-ORD BLR&D Merit I01BX004536) ve Ulusal Sağlık Enstitüsü tarafından desteklenmiştir # 1R01DK105183, DK120394 ve DK118529'dan HW'ye. Dr. Hongju Wu'ya teknik deneyimlerini paylaştığı için teşekkür ederiz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| % 10 Nötr tamponlu formalin v / v | Fisher Scientific | 23426796 | |
| Alkol hazırlama pedleri, steril | Fisher Scientific | 22-363-750 | |
| Hayvan Anestezi sistemi | VetEquip, Inc. | ||
| Buprenorfin hidroklorür, enjeksiyon | Par Steril Ürünler, LLC | NDC 42023-179-05 | |
| Santrifüj tüpleri, 15 mL | Fisher Scientific | 0553859A | |
| Etanol, mutlak (200 kanıt), moleküler biyoloji sınıfı | Fisher Scientific | BP2818500 | |
| Ekstra ince Mikro Diseksiyon makası 4" düz keskin | Roboz Cerrahi Enstrüman A.Ş. | RS-5882 | |
| Graefe forseps 4" ekstra hassas uç | Roboz Cerrahi Alet A.Ş. | RS-5136 | |
| Isıtmalı ped | Amazon | B07HMKMBKM | |
| Hegar-Baumgartner İğne Tutucu 5.25" | Roboz Cerrahi Alet A.Ş. | RS-7850 | |
| 31 gauge iğneli insülin şırıngası | BD | 324909 | |
| İyot hazırlama pedleri | Fisher Scientific | 19-027048 | |
| İzofluran | Piramal Yoğun Bakım | NDC 66794-017-25 | |
| Forseps uygulayan mikro klips 5.5" | Roboz Cerrahi Alet A.Ş. | RS-5410 | |
| Mikro klip, düz güçlü kavisli 1x6mm | Roboz Cerrahi Alet A.Ş. | RS-5433 | |
| Mikro klips, düz, 0.75mm klips genişliği | Roboz Cerrahi Alet A.Ş. | RS-5420 | |
| Pikrilsülfonik asit çözeltisi, TNBS, H2O | Millipore Sigma | 92822-1ML | |
| Polipropilen Sütür 4-0 | Med-Vet International | MV-8683 | |
| Polipropilen Sütür 5-0 | Med-Vet International | MV-8661 | |
| Sodyum klorür, %0.9 intravenöz solüsyon | VWR | 2B1322Q | |
| Cerrahi örtü, steril | Med-Vet International | DR1826 | |
| Doku Kaseti | Fisher Scientific | 22-272416 | |
| Von Frey filamentleri | Bioseb | EB2-VFF |
Kaynaklar
- Klauss, S., et al. Genetically induced vs. classical animal models of chronic pancreatitis: a critical comparison. The Federation of American Societies for Experimental Biology Journal. 32, 5778-5792 (2018).
- Liao, Y. H., et al.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
