Yöntem makalesi

Kolektif Hareket Niteliklerini Analiz Etmek için Birincil Fare Embriyonik Palatal Mezenkim Hücrelerinin İzolasyonu ve Zaman Atlamalı Görüntülenmesi

DOI:

10.3791/62151

⸱

13 Şubat 2021

 ,  ,  , 
1Department of Anatomy and Cell Biology, University of Kansas Medical Center, 2Department of Biological Physics, Eotvos University

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

İki boyutlu (2D) büyüme ve yara onarım testlerinin hızlandırılmış görüntülemesi için primer fare embriyonik palatal mezenkimal hücrelerin izolasyonu ve kültürü için bir protokol sunuyoruz. Ayrıca hücre akışı oluşumunu ve yönlü hareketliliği belirlemek için zaman atlamalı görüntüleme verilerinin analizi için metodoloji sağlıyoruz.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Damak gelişiminin gelişimi, dilin yanındaki bilateral damak raflarının dikey büyümesini ve ardından dilin üzerinde yükselme ve füzyonu içeren dinamik bir süreçtir. Bu süreçteki kusurlar, yaygın bir doğum kusuru olan yarık damağa yol açar. Son çalışmalar, palatal raf yüksekliğinin, rafın yönünü dikeyden yataya dönüştüren bir yeniden şekillendirme işlemi içerdiğini göstermiştir. Bu dinamik tadilatta palatal raf mezenkimal hücrelerin rolü üzerinde çalışmak zor olmuştur. Zaman atlamalı görüntüleme tabanlı nicel analiz son zamanlarda primer fare embriyonik palatal mezenkimal (MEPM) hücrelerinin kendi kendine kolektif bir harekete dönüşebileceğini göstermek için kullanılmaktadır. Nicel analizler, mutant MEPM hücrelerindeki farklılıkları damak yükselme kusurları olan bir fare modelinden belirleyebilir. Bu makalede, MEPM hücrelerini E13.5 embriyolarından izole etme ve kültürleme yöntemleri açıklanmaktadır- özellikle zaman atlamalı görüntüleme için- ve akış oluşumu, şekil hizalaması ve yönün kalıcılığı için önlemler de dahil olmak üzere kolektif hareketin çeşitli hücresel özelliklerini belirlemek. MEPM hücrelerinin dinamik yükselme sürecinde palatal raf mezenkiminin rolünü incelemek için bir proxy modeli olarak hizmet edebileceği öne sunun. Bu nicel yöntemler, kraniofasiyal alandaki araştırmacıların kontrol ve mutant hücrelerdeki kolektif hareket niteliklerini değerlendirmelerine ve karşılaştırmalarına izin verecek ve bu da palatal raf yükselmesi sırasında mezenkimal yeniden şekillendirmenin anlaşılmasını artıracaktır. Ayrıca, MEPM hücreleri genel olarak kolektif hücre hareketinin araştırılması için nadir bir mezenkimal hücre modeli sağlar.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Damak gelişimi, palatogenezdeki kusurlar, izole vakalarda veya yüzlerce sendromun bir parçası olarak ortaya çıkan yarık damak-yaygın bir doğum kusuru olduğu için kapsamlı bir şekilde incelenmiştir1,2. Embriyonik damak gelişimi embriyonik dokunun hareketini ve füzyonunu içeren dinamik bir süreçtir. Bu işlem dört ana adıma ayrılabilir: 1) palatal rafların indüksiyonu, 2) dilin yanındaki palat raflarının dikey büyümesi, 3) dil üzerindeki palat raflarının yükselmesi ve 4) orta çizgideki palatal rafların füzyonu1,3,4. Son birkaç on yılda, yarık damak 5 ,6,7,8. Bu modellerin karakterizasyonu palatal raf indüksiyonu, çoğalma ve füzyon adımlarında kusurlar olduğunu belirtmiştir; ancak, palatal raf yükselmesi kusurları nadirdir. Bu nedenle, damak raf yüksekliğinin dinamiklerini anlamak ilgi çekici bir araştırma alanıdır.

Palatal raf yükselmesi kusurları olan bazı fare mutantlarının dikkatli analizi, mevcut modelin palatal rafın çok ön bölgesinin yukarı doğru çevrildiğini gösterirken, damak1,3,4'ünorta kısmında yatay hareket veya palat raflarının "yeniden şekillendirilme" meydana geldiğinigösterdi. 9,10,11. Palatal rafın medial kenar epitelleri, daha sonra palatal raf mezenkim tarafından sürülen bu tadilat için gerekli sinyalizasyonu başlatır. Son zamanlarda, birçok araştırmacı palatal rafları içeren geçici oral yapışıklıklar gösteren fare modellerinde palatal raf yükselmesi gecikmesi tespit etti12,13. Mezenkimal remodeling, hücrelerin yatay yönde bir şişkinlik oluşturmak için yeniden düzenlenmesini içerirken, aynı zamanda palatal rafı dikey yönde geri çekme9,10,14. Palatal raf yüksekliğini ve altta yatan mezenkimal remodeling'i etkilemek için önerilen çeşitli mekanizmalar arasında hücre çoğalması15,16,17, kemotaktik gradyanlar18ve hücre dışı matris bileşenleri19,20vardır. Önemli bir soru ortaya çıktı: Specc1leksikliği olan farelerde gözlenen palatal raf yükselme gecikmesi de kısmen palatal raf tadilatındaki bir kusurdan kaynaklanıyor mu ve bu tadilat kusuru birincil MEPM hücrelerinin davranışında içsel bir kusurda ortaya çıkabilirmi 21?

Birincil MEPM hücreleri kraniyofasiyal alanda gen ekspresyasyonu22 , 23,24,25,26,27,28,29ve çoğalma 30,31ve göç 25,31 ,32 içeren birçok çalışma için kullanılmıştır. , ancak kolektif hücre davranışı analizi için yok. MEPM hücrelerinin zaman atlamalı görüntülemesi, MEPM hücrelerinin yönlü hareket gösterdiğini ve toplu hareketin yoğunluğa bağlı hücre akışlarını oluşturduğunu göstermek için 2B kültür ve yara onarım tahlillerindegerçekleştirildi 21. Ayrıca, Specc1l mutant hücreleri daha dar hücre akışları oluşturdu ve oldukça değişken hücre göç yörüngeleri gösterdi. Bu koordineli hareketlilik eksikliği Specc1l mutant embriyolarında damak yükselmesi gecikmesine katkıda bulunmak için kabul edilir13,21. Bu nedenle, birincil MEPM hücrelerini kullanan bu nispeten basit tahliller, palatal raf yüksekliği sırasında mezenkimal remodeling'i incelemek için bir proxy görevi görebilebilir. Bu makalede, birincil MEPM hücrelerinin izolasyonu ve kültürünün yanı sıra 2B ve yara onarım tahlilleri için zaman atlamalı görüntüleme ve analiz açıklanmaktadır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hayvanları içeren tüm deneyler, kumc Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanan bir protokol ile, kılavuz ve yönetmeliklerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir (Protokol Numarası: 2018-2447).

1. Hasat E13.5 embriyoları

  1. Hamile dişi fareleri CO2 inhalasyon odası kullanarak veya Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanan bir prosedürle ötenazi yaptırın. Hemen diseksiyona devam edin.
  2. Cildi ve peritonları çıkararak karın boşluğunun alt yarısını açığa çıkarın. E13.5 embriyolarını içeren uterusun her iki boynuzu da dışarı atılır.
  3. Fazla kan, saç veya diğer kalıntıları durulamak için uterusu önceden ısıtılmış 37 °C steril fosfat tamponlu saline (PBS) yerleştirin. Uterusun steril PBS ile dolu steril 10 cm'lik bir kabına yerleştirin.
  4. Küçük makas kullanarak, uterusun uzunluğu boyunca uterus duvarını keserek her embriyoyu hala yumurta sarısı kesesinde açığa çıkar. Embriyoyu çevreleyen yumurta sarısı kesesini çıkarın, ancak gerekirse genotipleme için sakla. Embriyolar çıkarıldıkça, her embriyoyu PBS ile dolu 12 kuyulu bir tabağa yerleştirin.

2. Embriyolardan palatal rafların diseksiyonu (Şekil 1)

NOT: Paslanmaz çelik diseksiyon aletlerini (Malzeme Tablosunabakınız) her embriyoyu işlendikten sonra, aletleri önce 0 etil alkol (EtOH) kabına, ardından 10 sn için 350 °C'de bir alet sterilizatörüne yerleştirip% 100 EtOH'luk ikinci bir beherde soğutarak sterilize edin.

  1. Sterilize edilmiş delikli bir kaşık kullanarak embriyoyu Dulbecco'nun fetal sığır serumu (FBS), L-glutamin (4 mM L-Glu) ve antibiyotik-penisilin ve streptomisin (50 birim/mL) içeren minimum esansiyel ortamından (DMEM) oluşan MEPM kültür ortamı ile dolu 10 cm'lik yeni bir yemeğe yerleştirin.
  2. Steril makas kullanarak embriyonun çene hattının hemen altında kafasını koparın(Şekil 1A, kırmızı noktalı çizgi). Sterilize edilmiş ince #5'in bir noktasını ağza sokarak alt çeneyi çıkarın ve yanağın hemen içinde tutun. Eklenen kümes parmaklarının noktasını kafatasının arkasından çıkana kadar itin.
  3. Şekil 1B'dekisarı çizgi boyunca, kümesleri yönlendirin, böylece kümeslerin diğer tarafı (hala embriyonun dışındadır) kulak kanalının hemen üzerinde gezinir, ardından dokuyu kesmek içinpsleri kıstırın. Gerekirse, kıskaç tarafından tamamen kesilmemiş herhangi bir dokuyu kesmek için şimdi kapalı olan önktüslerin dikişi boyunca başka bir ince toka çalıştırın.
  4. Embriyo kafasının diğer tarafı için önceki adımı tekrarlayın. Kafatasının alt çenesini, dilini ve alt kısmını tamamen çıkarmak ve palatal rafları ortaya çıkarmak için kıstırma işlemine devam edin.
  5. Şekil 1C'de (yeşil çizgi) gösterildiği gibi, gözlerin hemen üstünden keserek kafatasının kafatasını çıkarın. Başı sol veya sağ tarafına yerleştirerek ve küçük paslanmaz çelik makasın noktalarını embriyonun göz seviyesinin hemen üstünde kafatasının önüne ve arkasına yerleştirerek bunu yapın. Kafatasının üst kısmını makasın hızlı bir yudumuyla kesin, daha sonraki adımlarda stabilite için önemli olacak ve yandan bakıldığında Şekil 1D gibi görünmesi gereken düz bir yüzey oluşturun.
  6. Başın kalan kısmını baş aşağı yerleştirin, başın üst yönü (kafatası çıkarılmış) çanağın altına düz bir şekilde yaslanmış, bu da damak rafının çıkarılması için sabit bir yüzey sağlayacaktır. Şimdi açıkta ve yukarı bakan ve başın ön yarısında merkezi bir oluğun her iki tarafında iki yükseltilmiş sırt olarak görünecek olan palatal rafları tanımlamak için bir dakika ayırın (Şekil 1E).
  7. Raflar çıkarılırken hareketsiz hale getirmek için başın kalan kısmını kabın içine sabitlayın. Bunu, başın burun bölgesine yakın dokudan ince bir tokanın bir noktasını, ön kısmını damak raflarına sokarak ve tokaların diğer noktasını kafatasının tabanından, arkasını damak raflarına sokarak yapın. Palatal rafların eksizyonini gerçekleştirirken bunları yerinde tutun.
    1. Başı bir elinizle hareketsiz hale getirin, önce çıkarmak için iki raftan herhangi birini seçin ve ikinci bir çift ince toparlakın her iki noktasını da rafın yan yüzeyinin tabanındaki dokuya yerleştirin ve dokuyu kesmek için kıstırın (Şekil 1F). Bunu rafın medial yüzeyinin tabanı boyunca ve daha sonra kafadan ayırmak için rafın hem ön hem de arka uçlarında tekrarlayın.
  8. Rafı yavaşça kaldırın, gerektiğinde ek tutamlar yaparak rafı çevredeki dokudan tamamen boşaltın.
  9. İkinci damak rafını çıkarmak için önceki iki adımı tekrarlayın.
  10. Palatal raflar artık çevredeki dokudan arındırılmış ve PBS'ye (Şekil G)yerleştirilmişken, pipetteki rafları çekmek için steril bir plastik ampul transfer-pipeti kullanın ve bunları yaklaşık 500 μL PBS ile birlikte 1,5 mL mikrosantrifüj tüpüne aktarın. Çöplerin geri kalanı aynı şekilde işlendiği için palatal raflar içeren tüpleri buz üzerinde tutun.
    NOT: Alternatif olarak, raflar diseksiyondan hemen sonra (buza yerleştirmek yerine) önceden ısıtılan tripsin (%0,25) içeren 1,5 mL mikrosantrifüj tüpüne yerlenebilir. Örnekler daha taze olacaktır, ancak örneklerin topluca tedavi edilmesi yerine her bir numune için tüm işlem adımlarını zamanlamak için dikkatli olunmalıdır.

3. MEPM hücrelerinin kültürü

NOT: Burada açıklanan koşullar altında, damak epitel hücreleri ilk pasajdan sağ çıkamaz ve saf damak mezenkimal hücre kültürü ile sonuçlanır. Bir doku kültürü davlumbazındaki tüm adımları gerçekleştirmek için steril tekniği kullanın.

  1. PBS'yi 1,5 mL'lik tüpten aspire edin ve atın, bu süreçte rafları atmamaya dikkat edin. Hemen palatal raflar içeren her tüpe 200 μL önceden ısıtılmış (37 °C) tripsin (%0,25) ekleyin. Trypsinizasyonu hızlandırmak için 1000 μL pipet ucu kullanarak rafları trypsin'de kısa bir süre yukarı ve aşağı borulayın.
  2. Tüpleri 37 °C'de 5 dakika kuluçkaya yatırın, ardından dokuyu parçalamaya yardımcı olmak için her numuneyi tekrar yukarı ve aşağı borun. Tüpleri 37 °C'de 5 dakika daha kuluçkaya yatırın ve dokunun ayrışmasını tamamlamak için bir kez daha yukarı ve aşağı borulayın.
    NOT: Raflar tamamen veya neredeyse tamamen ayrışmalı ve tripin içinde görünür doku parçaları kalmadan askıya alınmalıdır.
  3. Her 1,5 mL tüpe 800 μL MEPM kültür ortamı (adım 2,1) ekleyin. Hücreleri peletmek için 1,5 mL'lik tüpü 200 × g'da 5 dakika santrifüj edin. Üstnatant çıkarın ve hücre peletini 1 mL MEPM kültür ortamında yeniden diriltin.
  4. MEPM hücrelerini MEPM kültür ortamı içeren 6 kuyu doku kültürü ile işlenmiş bir plakaya dönüştürin. Hücrelerin% 5 CO 2'li bir inkübatörde 37 ° C'de12saat boyunca plastik yüzeye yapışmasına izin verin.















    3. figure-protocol-1





figure-protocol-2




    1. figure-protocol-3

      figure-protocol-4
    2. figure-protocol-5



      3. figure-protocol-6

figure-protocol-7

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Palatal rafların diseksiyonu Şekil 1'degösterilmiştir. Kesi dizisi, dokunun kaymasını en aza indirmek için tasarlanmıştır. Başın çıkarılmasından sonra (Şekil 1A,B), alt çene çıkarılır (Şekil 1B,C). Başın üst kısmının kesisi (Şekil 1C,D) baş aşağı yerleştirildiğinde dokuyu stabilize etmek içinyapılır (Şe...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Palatal raf yüksekliği dikeyden yataya yeniden şekillendirme olayı1, 3,4,9,11oluşturur. Bu tadilat işleminin palatal raf mezenkimal hücrelerin koordineli davranmasını gerektirdiği açıktır. Wildtype MEPM hücreleri ile yapılan analizler, bu hücre davranışının içsel olduğunu ve21. Bu nedenle, bu tahliller, yarık damak yeni ve mevcut fare m...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu proje kısmen Ulusal Sağlık Enstitüleri TARAFıNDAN DE026172 (I.S.) ve GM102801 (A.C.) hibeleri tarafından desteklendi. I.S. ayrıca kısmen Biyomedikal Araştırma Mükemmelliği Merkezi (COBRE) hibesi (Ulusal Genel Tıp Bilimleri Enstitüsü P20 GM104936), Kansas IDeA Biyomedikal Araştırma Mükemmellik Ağı hibesi (Ulusal Genel Tıp Bilimleri Enstitüsü P20 GM103418) ve Kansas Entelektüel ve Gelişimsel Engelliler Araştırma Merkezi (KIDDRC) hibesi (U54 Eunice Kennedy Shriver National Institute of Child Health and Human Development) tarafından desteklendi. HD090216).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Beher, 250 mL (x2)Fisher ScientificFB-100-250
CO2Matheson GasUN1013
Konik tüpler, 15 mL (x1)Midwest ScientificC15B
Debian işletim sistemihızlandırılmış görüntülerin hesaplamalı analizi
Dulbecco'nun Modifiye Eagles 4 mM ile Orta/Yüksek Glikozu L-Glutamin ve Sodyum PiruvatCytiva Yaşam BilimleriSH30243.01
EtOH, %100Decon Laboratories2701
EVOS FL AutoThermoFisher ScientificAMAFD1000
EVOS Sahne Üstü İnkübatörThermoFisher ScientificAMC1000
EVOS Sahne Üstü Gemi Tutucu, Çok Kuyulu PlakalarThermoFisher ScientificAMEPVH028
Fetal Sığır SerumuCorning35-010-CV
İnce nokta # 5 Paslanmaz Çelik Forseps (x2)Güzel Bilim Araçları11295-10Diseksiyon
Aleti sterilizatör boncuk banyosuGüzel Bilim Araçları18000-45
Mikrosetrifüj tüpleri, 1.5 mLAvant2925
Mikro Diseksiyon Paslanmaz Çelik Makas, DüzRobozRS-5910Diseksiyon
NucBlue (Hoechst) Canlı Hazır ProblarThermoFisher ScientificR37605
Penisilin Streptomisin Çözeltisi, 100xCorning30-002-CI
Silikon Uç, 2 kuyuluIbidi80209
Küçük Delikli Paslanmaz Çelik KaşıkGüzel Bilim AraçlarıMC17CDiseksiyon
Yayı Makas, 4 mmİnce Bilim Aletleri15018-10
Steril 10 cm dishe(ler)Corning430293
Steril 12 oyuklu plaka(lar)PR1MA667512
Steril 6 oyuklu plaka(lar)Thermo Fisher Scientific140675
Steril PBSCorning21-031-CV
Steril plastik ampul transfer pipetiThermoFisher Scientific202-1S
Tripsin, %0,25ThermoFisher Scientific25200056

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Bush, J. O., Jiang, R. Palatogenesis: morphogenetic and molecular mechanisms of secondary palate development. Development. 139 (2), 231-243 (2012).
  2. Mossey, P. A., Little, J., Munger, R. G., Dixon, M. J., Shaw, W. C. Cleft lip and palate. Lancet. 374 (9703), 1773-1785 (2009).
  3. Lan, Y., Xu, J., Jiang, R. Cellular and molecular mechanisms of palatogenesis. Current Topics in Developmental Biology. 115, 59-84 (2015).
  4. Li, C., Lan, Y., Jiang, R. Molecular and cellular mechanisms of palate development. Journal of Dental Research. 96 (11), 1184-1191 (2017).
  5. Gritli-Linde, A. The etiopathogenesis of cleft lip and cleft palate: usefulness and caveats of mouse models. Current Topics in Developmental Biology. 84, 37(2008).
  6. Meng, L., Bian, Z., Torensma, R., Vonden Hoff, J. W. Biological mechanisms in palatogenesis and cleft palate. Journal of Dental Research. 88 (1), 22-33 (2009).
  7. Dixon, M. J., Marazita, M. L., Beaty, T. H., Murray, J. C. Cleft lip and palate: understanding genetic and environmental influences. Nature Reviews Genetics. 12 (3), 167-178 (2011).
  8. Kousa, Y. A., Schutte, B. C. Toward an orofacial gene regulatory network. Developmental Dynamics. 245 (3), 220-232 (2016).
  9. Jin, J. Z., et al. Mesenchymal cell remodeling during mouse secondary palate reorientation. Developmental Dynamics. 239 (7), 2110-2117 (2010).
  10. Yu, K., Ornitz, D. M. Histomorphological study of palatal shelf elevation during murine secondary palate formation. Developmental Dynamics. 240 (7), 1737-1744 (2011).
  11. Chiquet, M., Blumer, S., Angelini, M., Mitsiadis, T. A., Katsaros, C. Mesenchymal remodeling during palatal shelf elevation revealed by extracellular matrix and F-actin expression patterns. Frontiers in Physiology. 7, 392(2016).
  12. Paul, B. J., et al. ARHGAP29 mutation is associated with abnormal oral epithelial adhesions. Journal of Dental Research. 96 (11), 1298-1305 (2017).
  13. Hall, E. G., et al. SPECC1L regulates palate development downstream of IRF6. Human Molecular Genetics. 29 (5), 845-858 (2020).
  14. Walker, B. E., Fraser, F. C. Closure of the secondary palate in three strains of mice. Journal of Embryology and Experimental Morphology. 4 (2), 176-189 (1956).
  15. Jin, J. Z., Li, Q., Higashi, Y., Darling, D. S., Ding, J. Analysis of Zfhx1a mutant mice reveals palatal shelf contact-independent medial edge epithelial differentiation during palate fusion. Cell Tissue Research. 333 (1), 29-38 (2008).
  16. Kouskoura, T., et al. The etiology of cleft palate formation in BMP7-deficient mice. PLoS One. 8 (3), 59463(2013).
  17. Lan, Y., Zhang, N., Liu, H., Xu, J., Jiang, R. Golgb1 regulates protein glycosylation and is crucial for mammalian palate development. Development. 143 (13), 2344-2355 (2016).
  18. He, F., et al. Wnt5a regulates directional cell migration and cell proliferation via Ror2-mediated noncanonical pathway in mammalian palate development. Development. 135 (23), 3871-3879 (2008).
  19. Lan, Y., Qin, C., Jiang, R. Requirement of hyaluronan synthase-2 in craniofacial and palate development. Journal of Dental Research. 98 (12), 1367-1375 (2019).
  20. Yonemitsu, M. A., Lin, T. Y., Yu, K. Hyaluronic acid is required for palatal shelf movement and its interaction with the tongue during palatal shelf elevation. Developmental Biology. 457 (1), 57-68 (2020).
  21. Goering, J. P., et al. SPECC1L-deficient palate mesenchyme cells show speed and directionality defect. Scientific Reports. 11 (1), 1452(2021).
  22. Fantauzzo, K. A., Soriano, P. PI3K-mediated PDGFRalpha signaling regulates survival and proliferation in skeletal development through p53-dependent intracellular pathways. Genes and Development. 28 (9), 1005-1017 (2014).
  23. Vasudevan, H. N., Soriano, P. SRF regulates craniofacial development through selective recruitment of MRTF cofactors by PDGF signaling. Developmental Cell. 31 (3), 332-344 (2014).
  24. Vasudevan, H. N., Mazot, P., He, F., Soriano, P. Receptor tyrosine kinases modulate distinct transcriptional programs by differential usage of intracellular pathways. Elife. 4, 07186(2015).
  25. Gao, L., et al. 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin and TGFbeta3-mediated mouse embryonic palatal mesenchymal cells. Dose Response. 17 (1), 1559325818786822(2019).
  26. Iyyanar, P. P. R., Nazarali, A. J. Hoxa2 inhibits bone morphogenetic protein signaling during osteogenic differentiation of the palatal mesenchyme. Frontiers in Physiology. 8, 929(2017).
  27. Jiang, Z., Pan, L., Chen, X., Chen, Z., Xu, D. Wnt6 influences the viability of mouse embryonic palatal mesenchymal cells via the beta-catenin pathway. Experimental and Therapeutic Medicine. 14 (6), 5339-5344 (2017).
  28. Liu, X., et al. Negative interplay of retinoic acid and TGF-beta signaling mediated by TG-interacting factor to modulate mouse embryonic palate mesenchymal-cell proliferation. Birth Defects Research Part B: Developmental and Reproductive Toxicology. 101 (6), 403-409 (2014).
  29. Bush, J. O., Soriano, P. Ephrin-B1 forward signaling regulates craniofacial morphogenesis by controlling cell proliferation across Eph-ephrin boundaries. Genes & Development. 24 (18), 2068-2080 (2010).
  30. Mo, J., Long, R., Fantauzzo, K. A. Pdgfra and Pdgfrb genetically interact in the murine neural crest cell lineage to regulate migration and proliferation. Frontiers in Physiology. 11, 588901(2020).
  31. He, F., Soriano, P. A critical role for PDGFRalpha signaling in medial nasal process development. PLoS Genetics. 9 (9), 1003851(2013).
  32. Fantauzzo, K. A., Soriano, P. Generation of an immortalized mouse embryonic palatal mesenchyme cell line. PLoS One. 12 (6), 0179078(2017).
  33. Wu, K., Gauthier, D., Levine, M. D. Live cell image segmentation. IEEE Transactions on Biomedical Engineering. 42 (1), 1-12 (1995).
  34. Neufeld, Z., et al. The role of Allee effect in modelling post resection recurrence of glioblastoma. PLoS Computational Biology. 13 (11), 1005818(2017).
  35. Zamir, E. A., Czirok, A., Rongish, B. J., Little, C. D. A digital image-based method for computational tissue fate mapping during early avian morphogenesis. Annals of Biomedical Engineering. 33 (6), 854-865 (2005).
  36. Czirok, A., et al. Optical-flow based non-invasive analysis of cardiomyocyte contractility. Scientific Reports. 7 (1), 10404(2017).
  37. Biggs, L. C., et al. Interferon regulatory factor 6 regulates keratinocyte migration. Journal of Cell Science. 127, Pt 13 2840-2848 (2014).
  38. Czirok, A., Varga, K., Mehes, E., Szabo, A. Collective cell streams in epithelial monolayers depend on cell adhesion. New Journal of Physics. 15, 75006(2013).
  39. Szabo, A., et al. Collective cell motion in endothelial monolayers. Physical Biology. 7 (4), 046007(2010).
  40. Gulyas, M., Csiszer, M., Mehes, E., Czirok, A. Software tools for cell culture-related 3D printed structures. PLoS One. 13 (9), 0203203(2018).
  41. Soderholm, J., Heald, R. Scratch n' screen for inhibitors of cell migration. Chemistry & Biology. 12 (3), 263-265 (2005).
  42. Riahi, R., Yang, Y., Zhang, D. D., Wong, P. K. Advances in wound-healing assays for probing collective cell migration. Journal of Laboratory Automation. 17 (1), 59-65 (2012).
  43. Svensson, C. M., Medyukhina, A., Belyaev, I., Al-Zaben, N., Figge, M. T. Untangling cell tracks: Quantifying cell migration by time lapse image data analysis. Cytometry Part A. 93 (3), 357-370 (2018).
  44. Fantauzzo, K. A., Soriano, P. PDGFRbeta regulates craniofacial development through homodimers and functional heterodimers with PDGFRalpha. Genes & Development. 30 (21), 2443-2458 (2016).
  45. Rafi, S. K., et al. Anti-epileptic drug topiramate upregulates TGFβ1 and SOX9 expression in primary embryonic palatal mesenchyme cells: Implications for teratogenicity. PLoS ONE. , In Press (2021).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Collective Cell MovementPalatal Shelf ElevationMouse Embryo DissectionCell Migration AssayWound Repair AssayMesenchymal RemodelingCraniofacial DevelopmentCell Motility Analysis

İlgili makaleler