Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Farelerde Modelleme İnme: Dış Karotid Arter yoluyla Geçici Orta Serebral Arter Tıkanıklığı

7.9K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/62573

⸱

24 Mayıs 2021

 ,  , 
1Institute for Stroke and Dementia Research, LMU Munich, 2Munich Cluster for Systems Neurology (SyNergy)

Bu makalede

Özet

Deneysel inme araştırmalarında orta serebral arter tıkanma (MCAo) farklı modelleri kullanılmaktadır. Burada, serebrovasküler trombüsin spontan pıhtı lizisi veya tedavisi nedeniyle çıkarıldığı insan inmesini taklit etmeyi amaçlayan dış karotis arter (ECA) yoluyla geçici MCAo'nun deneysel bir inme modeli tanımlanmıştır.

Özet

İnme, gelişmiş ülkelerde üçüncü en sık mortalite nedeni ve edinilmiş erişkin sakatlığının önde gelen nedenidir. Bugüne kadar terapötik seçenekler inmeden sonraki ilk saatlerde inme hastalarının küçük bir oranı ile sınırlıdır. Özellikle terapötik zaman penceresini uzatmak için yeni terapötik stratejiler kapsamlı bir şekilde araştırılmaktadır. Bu güncel araştırmalar, inme sonrası inme sonrası inflamasyon, anjiogenez, nöronal plastisite ve rejenerasyon gibi önemli patofizyolojik yolların incelenmesini içerir. Son on yılda, bağımsız araştırma grupları arasında deneysel sonuçların ve bilimsel bulguların zayıf tekrarlanabilirliği konusunda artan bir endişe vardır. "Çoğaltma krizi" olarak adlandırılan krizin üstesinden gelmek için, tüm prosedürler için ayrıntılı standartlaştırılmış modellere acilen ihtiyaç vardır. "ImmunoStroke" araştırma konsorsiyumu (https://immunostroke.de/) içinde bir çaba olarak, geçici orta serebral arter tıkanıklığının (MCAo) standartlaştırılmış bir fare modeli önerildi. Bu model, filamentin çıkarılmasından sonra kan akışının tamamen restorasyonuna izin verir, insan felçlerinin büyük bir kısmında meydana gelen terapötik veya spontan pıhtı lizizini simüle eder. Bu "filament" inme modelinin cerrahi prosedürü ve fonksiyonel analizi için araçlar eşlik eden videoda gösterilmiştir.

Giriş

İnme, dünya çapında en sık görülen ölüm ve sakatlık nedenlerinden biridir. Esas olarak iskemik ve hemorajik olmak üzere iki farklı inme şekli olmasına rağmen, tüm inme vakalarının% 80-85'i iskemik1' dir. Şu anda, iskemik inme hastaları için sadece iki tedavi mevcuttur: rekombinant doku plazminojen aktivatörü (rtPA) veya mekanik trombektomi ile farmakolojik tedavi. Ancak terapötik zaman penceresinin dar ve çoklu dışlama kriterleri nedeniyle bu özel tedavi seçeneklerinden sadece belirli sayıda hasta yararlanabiliyor. Son yirmi yılda preklinik ve çevirisel inme araştırmaları nöroprotektif yaklaşımların incelenmesine odaklanmıştır. Bununla birlikte, klinik çalışmalara ulaşan tüm bileşikler şimdiye kadar hasta için hiçbir iyileşme göstermedi2.

İn vitro modeller inmenin tüm beyin etkileşimlerini ve patofizyolojik mekanizmalarını doğru bir şekilde üretemediğinden, hayvan modelleri preklinik inme araştırmaları için çok önemlidir. Bununla birlikte, tek bir hayvan modelinde insan iskemik inmenin tüm yönlerini taklit etmek mümkün değildir, çünkü iskemik inme son derece karmaşık ve heterojen bir hastalıktır. Bu nedenle farklı türlerde zamanla farklı iskemik inme modelleri geliştirilmiştir. Serebral arterioles fototombozu veya orta serebral arterin (MCA) kalıcı distal tıkanıklığı, neokortekste küçük ve lokal olarak tanımlanmış lezyonlara neden olan yaygın olarak kullanılan modellerdir3,4. Bunların yanı sıra, en sık kullanılan inme modeli muhtemelen MCA'nın geçici bir tıkanıklığının elde edildiği "filament modeli" olarak adlandırılır. Bu model, MCA'nın kökenine geçici bir dikiş filamentinin girişinden oluşur, bu da serebral kan akışının aniden azalmasına ve ardından subkortikal ve kortikal beyin bölgelerinin büyük enfarktürüne yol5. Çoğu kontur modeli MCA oklüzyonlarını taklit etse de 6, "filament modeli" iskemik zamanın hassas bir şekilde sınırlandırılmasına izin verir. Filament giderme ile reperfüzyon, spontan veya terapötik (rtPA veya mekanik trombektomi) pıhtı lizizi sonrası beyin kan akışı restorasyonunun insan klinik senaryosunu taklit eder. Bugüne kadar, bu "filament modelinin" farklı modifikasyonları tanımlanmıştır. En yaygın yaklaşımda, ilk olarak Longa ve ark. 19895yılında, MCA7'ninkökenine ortak karotis arter (CCA) aracılığıyla silikon kaplı bir filament tanıtılır. Yaygın olarak kullanılan bir yaklaşım olmasına rağmen, bu model reperfüzyon sırasında kan akışının tamamen geri yüklenmesine izin vermez, çünkü CCA filamentin çıkarılmasından sonra kalıcı olarak bağlanır.

Son on yılda, giderek artan sayıda araştırma grubu, bu "filament modelini" kullanarak farelerde inme modellemeye ilgi duyuyor. Bununla birlikte, bu modelin önemli değişkenliği ve prosedürlerin standardizasyonunun olmaması, şimdiye kadar bildirilen deneysel sonuçların ve bilimsel bulguların yüksek değişkenliğinin ve zayıf tekrarlanabilirliğinin nedenlerinden bazılarıdır2,8. Araştırma laboratuvarları arasındaki düşük tekrarlanabilirlik oranına atıfta bulunan mevcut "çoğaltma krizinin" potansiyel bir nedeni, aynı deneysel metodolojiyi kullanan araştırma grupları arasındaki karşılaştırılamaz inme enfarktüs hacimleridir9. Aslında, ilk preklinik randomize kontrollü çok merkezli deneme çalışmasını yaptıktan sonra10, bu deneysel inme modelinin yeterli standardizasyonunun olmamasının ve sonraki sonuç parametrelerinin bağımsız laboratuvarlar arasındaki preklinik çalışmalarda tekrarlanabilirliğin başarısızlığının ana nedenleri olduğunu doğrulayabildik11 . Ortaya çıkan enfarktüs boyutlarındaki bu şiddetli farklılıklar, aynı inme modelini kullanmasına rağmen, sadece doğrulayıcı araştırmalar için değil, aynı zamanda sağlam ve tekrarlanabilir modellerin eksikliği nedeniyle bilimsel işbirlikleri için de haklı bir tehdit oluşturmaktadır.

Bu zorluklar ışığında, "ImmunoStroke" araştırma konsorsiyumu (https://immunostroke.de/) içindeki işbirlikçi araştırma çalışmalarında kullanılan standartlaştırılmış geçici BIR MCAo modeli prosedürünü ayrıntılı olarak geliştirmeyi ve tanımlamayı amaçladık. Bu konsorsiyum, inme iyileşmesinin mekanistik ilkelerinin altında kalan beyin-bağışıklık etkileşimlerini anlamayı amaçlamaktadır. Ayrıca inme sonuç analizi için histolojik ve ilgili fonksiyonel yöntemler sunulmaktadır. Tüm yöntemler, ImmunoStroke konsorsiyumunun tüm araştırma laboratuvarlarında kullanılan yerleşik standart işletim prosedürlerine dayanmaktadır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Bu videoda bildirilen deneyler, deney hayvanlarının kullanımına ilişkin ulusal yönergeleri izleyerek yapıldı ve protokoller Alman hükümet komiteleri (Regierung von Oberbayern, Münih, Almanya) tarafından onaylandı. On haftalık erkek C57Bl/6J fareler kullanıldı ve kontrollü sıcaklık (22 ± 2 °C) altında, 12 saat açık-karanlık döngü süresi ve peletlenmiş yiyecek ve su reklam libitum erişimi ile yerleştirildi.

1. Malzeme ve aletlerin hazırlanması

  1. 37 °C'de anestezi sırasında çalışma bölgesinin sıcaklığını ve fare gövdesi sıcaklığını korumak için ısı battaniyesini bağlayın.
  2. Otoklav makası ve forseps, % 70 etanol çözeltisi hazırlayın ve mevcut dekpanthenol göz merhemini, birkaç parça pamuğu ve 5-0 kaplamalı örgülü polyester dikişi kullanıma hazır tutun. Hayvanın kesi bölgesini nemli tutmak için% 0,9 tuzlu su çözeltisi (iğnesiz) ile 1 mL şırınga hazırlayın. Anestezi gazını hazırlayın (%100 O2 + izofluran).
  3. 10 μL pipet ucunun (3-5 mm uzunluk) ucunu keserek lazer Doppler probu için bir tutucu hazırlayın.
    NOT: Tüm aletler sıcak boncuk sterilizatörü kullanılarak sterilize edilir. Yüzeyler de mikrobiyal dezenfektan spreyi ile ameliyat öncesi ve sonrası dezenfekte edilir. Ameliyattan önce, farelerin başını ve göğsünü çevreleyen alanlar yara dezenfeksiyon spreyi ile dezenfekte edilir.

2. Lazer Doppler hazırlanması

  1. Ameliyattan 30 dakika önce fareye analjezi enjekte edin (intraperitoneal olarak 4 mg/kg Carprofen ve 0,1 mg/kg Buprenorfin).
  2. Fareyi, spontan vücut hareketi ve vibrissae'nin kesilmesine kadar% 4'lük bir izofluran akış hızı ile indüksiyon odasına yerleştirerek uyuşturun.
  3. Fareyi anestezi maskesinde burnu ile operasyon bölgesinde eğilimli bir konuma getirin. bir dakika daha izofluran konsantrasyonu% 4'te tutun, sonra azaltın ve% 2'de tutun.
  4. Fare gövdesi sıcaklığını 37 °C'de tutmak için ilgili geri bildirim kontrollü ısıtma yastığını ayarlayın ve cerrahi prosedürler boyunca sıcaklığı izlemek için rektal probu hafifçe takın.
  5. Her iki göze dekpanthenol göz merhem uygulayın.
  6. Sol gözü ve kulağı çevreleyen cilt ve saçları %70 etanol ile dezenfekte edin.
  7. Kafatası kemiğini ortaya çıkarmak için kafa derisini sol kulak ile göz (1 cm uzunluğunda) arasında kesin.
  8. Kafatasının altındaki MCA'yı görselleştirmek için zamansal kası kesin ve emekli edin.
  9. Lazer Doppler probunu/lifini sol MCA'nın üstünde tutkalla sabitle. Daha sonra, ucu tutucunun etrafındaki yarayı kapatmak için cildi yapıştırın. İşlemi hızlandırmak için 2-3 damla sertleştirici tutkal uygulayın. Lazer Doppler lifinin yapıştırılmadığını ve uç tutucudan herhangi bir zamanda kolayca çıkarılabildiğinden emin olun.

3. Geçici MCAo modeli (tıkanma)

  1. Fareyi sırtüstü konumuna getirin. Somurtma anestezi konisine koyun ve pençeleri bantla sabitleyin.
  2. Göğsü çevreleyen deriyi ve saçları dezenfekte edin ve boyunda 2 cm uzunluğunda bir orta çizgi kesisi yapın.
  3. Deriyi ve altdbüler bezleri ayırmak için tokalar kullanın. Sternomastoid kası tutmak, cerrahi alanı ortaya çıkarmak ve sol ortak karotis arteri (CCA) bulmak için retraktörler kullanın. CCA'yı bağ dokusundan ve çevresindeki sinirlerden (vagal sinire zarar vermeden) arındırın ve çatallanmadan önce geçici bir ligasyon gerçekleştirin.
  4. Dış şahdamarını (ECA) parçalara ayırın ve en distal görünür kısımda kalıcı bir düğüm bağlayın. ECA'nın altına çatallamaya yakın bir dikiş daha yerleştirin ve daha sonra kullanılmak üzere gevşek bir düğüm hazırlayın.
  5. İç şahdamarını (ICA) parçalara ayırın ve üzerine çatallanmanın 5 mm üzerine bir mikrovasküler klips yerleştirin. Vagal sinirine zarar vermediklerden emin olun.
  6. Sıkı ve gevşek ligasyonlar arasında ECA'ya küçük bir delik açın; tüm ECA'yı kesmemeye dikkat edin.
  7. Filamenti tanıtın ve CCA'ya doğru ilerletin. Filamenti bu pozisyonda kısa bir süre sabitlemek ve mikrovasküler klipsi çıkarırken kanamayı önlemek için ECA'daki gevşek ligasyonu lümen etrafında sıkın.
  8. Mikrovasküler klipsi çıkarın ve lazer Doppler tarafından ölçülen beyin kan akışında keskin bir azalma (%>80) tespit ederek MCA'nın kökenine ulaşılana kadar filamenti ICA'dan geçirin. ECA etrafındaki düğümü daha da sıkılaştırarak filamenti bu konumda sabitlayın.
    NOT: Filament uygun yöne doğru gittiğinde, sorunsuz bir şekilde ilerler ve direnç gözlenmemelidir.
  9. Filament eklemeden önce ve sonra lazer Doppler değerlerini kaydedin.
  10. Yarayı dikmeden önce retraktörü çıkarın ve sternomastoid kası ve submandibular bezleri yeniden konumlandırın. Lazer Doppler probını çıkarın ve hayvanı 1 saat boyunca (filament çıkarılana kadar) 37 °C'de bir kurtarma odasına yerleştirin.

4. Geçici MCAo modeli (Reperfüzyon)

  1. Fareyi, spontan vücut hareketi ve vibrissae'nin kesilmesine kadar% 4'lük bir izofluran akış hızı ile indüksiyon odasına yerleştirerek uyuşturun.
  2. Her iki göze dekpanthenol göz merhem uygulayın.
  3. Fareyi anestezi maskesinde snout ile operasyon bölgesinde eğilimli bir konuma getirin. bir dakika daha izofluran konsantrasyonu% 4'te tutun, sonra azaltın ve% 2'de tutun. Hayvanın pençelerini bantla sabitleyin.
  4. Lazer Doppler probını prob tutucusuna yerleştirin.
  5. Yara dikişini çıkarın, cildi ve altdbüler bezleri ayırmak için tokalar kullanın. Sternomastoid kası hafifçe çekmek ve cerrahi alanı açığa çıkarmak için retraktörler kullanın.
  6. Filamenti sıkılaştıran ECA dikişini gevşetin ve filamenti hafifçe çekin. Çıkarma sırasında filamentin silikon kauçuk kaplamasına zarar vermekten kaçının.
  7. ECA dikişini sıkıca bağlayın.
  8. Lazer Doppler cihazındaki serebral kan akışındaki artışı onaylayın (>en önceki başlangıç değerinin% 80'i).
  9. Filament kaldırmadan önce ve sonra lazer Doppler değerlerini kaydedin.
  10. CCA'dan çatallanmadan önce geçici ligasyonu açın.
  11. Retraktörü çıkarın ve yarayı dikmeden önce sternomastoid kası ve submandibular bezleri yeniden konumlandırın. Hayvanı anesteziden kurtulmak için 1 saat boyunca 37 °C'de bir iyileşme odasına yerleştirin.
  12. İyileştikten sonra, fareleri sıcaklık kontrollü bir odada kafeslerine geri koyun.
  13. Ameliyattan sonraki 3 güne kadar kafes zemininde küçük Petri kaplarına ıslak yiyecek peletleri ve hidrojel ekleyerek hayvanlara iyi bakın.
  14. Ameliyattan sonra 3 d için her 12 saatte bir analjezi enjekte edin (4 mg/kg Carprofen ve 0.1 mg/kg Buprenorfin).

5. Sham operasyonu

  1. Arterlerin ligasyonu ve filamentin tanıtımı da dahil olmak üzere yukarıda açıklandığı gibi tüm prosedürleri gerçekleştirin (adım 1-3.7).
  2. Filamenti yerleştirildikten hemen sonra çıkarın. Daha sonra, hayvanı 1 saat boyunca kurtarma odasına yerleştirin.
  3. Hayvanı tekrar operasyon bölgesine yerleştirin ve tam beyin kanı akışı restorasyonu sağlamak için CCA'nın geçici ligasyonunu çıkarın.
  4. Yarayı dikin ve hayvanı anesteziden kurtulmak için 1 saat boyunca 37 ° C'de bir iyileşme odasına yerleştirin. İyileştikten sonra, fareleri sıcaklık kontrollü bir odada kafeslerine geri koyun.
  5. Ameliyattan sonraki 3 güne kadar kafes zemindeki küçük Petri kaplarına ıslak yiyecek topakları ve hidrojel ekleyerek hayvanlara iyi bakın.
  6. Ameliyattan sonra 3 d için her 12 saatte bir analjezi enjekte edin (4 mg/kg Carprofen ve 0.1 mg/kg Buprenorfin).

6. Nöroscore

  1. Neuroscore'u her zaman günün aynı saatinde gerçekleştirin ve bireysel cerrahlar arasında "nötr bir koku" sağlamak için cerrahi kıyafetler kullanın.
  2. Fareleri testden önce "açık" bir kafesle odada 30 dakika dinlendirin.
  3. Tablo 1 ve Tablo 2'deki her öğeyi 30 s için gözlemleyin.

7. İntra kardiyak perfüzyon

  1. Fosfat tamponlu salin (PBS)-heparin (2 U/mL) içeren 20 mL'lik bir şırınna hazırlayın ve yerçekimi tahrikli perfüzyonu kolaylaştırmak için tezgahın 1 m üstüne yerleştirin. (İsteğE BAĞLI: PBS, pH 7.4'te %4 PFA içeren 20 mL şırıng kullanarak %4 paraformaldehit (PFA) ile intra kardiyak perfüzyon gerçekleştirin).
  2. İntrperitoneally enjekte 100 μL ketamin ve ksilazin (sırasıyla 120 ve 16 mg/kg vücut ağırlığı). 5 dakika bekleyin ve spontan vücut hareketinin ve vibrissae'nin durmasını onaylayın.
  3. Hayvanı sırtüstü bir pozisyonda sabitlayın ve karın vücut yüzeyini% 70 etanol ile dezenfekte edin.
  4. Karın içine 3 cm uzunluğunda bir kesi yapın; kalbi tamamen görselleştirmek için diyaframı, kaburgaları ve sternumu kesin.
  5. Sağ kulakçıkta küçük bir kesi yapın ve perfüzyon kanüllerini sol ventrikül içine yerleştirin.
  6. 20 mL PBS-heparin ile perfuse.
  7. Perfüzyondan sonra hayvanın kafasını koparın ve beyni çıkarın.
  8. Beyni toz kuru buz üzerinde dondurun ve daha fazla kullanıma kadar -80 °C'de saklayın.

8. Enfarktüs hacmi

  1. Kriyoeksiyon için, beyinleri her 400 μm'de bir 20-μm kalınlığında bölümlere kesmek için bir kriyostat kullanın. Bölümleri slaytlara yerleştirin ve kullanıma kadar slaytları −80 °C'de saklayın.
  2. Cresyl mor (CV) boyama
    1. Kristaller çözülene kadar 500 mL H2O'da (60 °C) 0,5 g CV asetat karıştırıp ısıtarak boyama solüsyonunun hazırlanmasını sağlar. Çözelti soğuduktan sonra koyu bir şişede saklayın. Her kullanımdan önce 60 °C'ye ısıtın ve filtreleyin.
    2. Slaytları oda sıcaklığında 30 dakika kurutun. Onları 15 dakika boyunca% 95 etanol, 1 dakika boyunca% 70 etanol ve ardından 1 dakika boyunca% 50 etanol içine daldır.
    3. Slaytları damıtılmış suya 2 dakika daldırın; damıtılmış suyu yenileyin ve slaytları 1 dakika boyunca suya yerleştirin. Daha sonra, slaytları önceden ısıtılmış boyama çözeltisine 60 °C'de 10 dakika daldırın. Slaytları damıtılmış suda iki kez 1 dakika yıkayın.
    4. Slaytları 2 dakika boyunca% 95 etanol içine daldırın. Onları 5 dakika boyunca% 100 etanol içine yerleştirin; % 100 etanol tazeleyin ve slaytları tekrar etanol içine 2 dakika yerleştirin. Daha sonra, slaytları bir montaj ortamı ile örtün.
    5. Analiz (Şekil 4C)
      1. Slaytları tarayın ve aşağıdaki denklemi kullanarak ödemi düzeltmek için Swanson yöntemi12 ile dolaylı enfarktüs hacmini analiz edin:
        (İskemik alan) = (iskemik bölge)-((ipsilateral yarımküre)-(kontrallateral yarımküre))

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Burada açıklanan model, MCA'nın kökenini geçici olarak engellemek için ECA aracılığıyla silikon kaplı bir filamentin tanıtılmasından oluşan yaygın olarak kullanılan "filament" inme modelinin bir modifikasyonudur (Şekil 1). Filament çıkarıldıktan sonra, sadece ECA'daki kan akışı kalıcı olarak durdurulur ve CCA ve ICA'nın tamamen yeniden dengelenmesine izin verir. Bu, insan hastalarında başarılı farmakolojik tromboliz veya mekanik trombektomi sonrası gözlenen duruma benzer şekilde beynin yeter...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Mevcut protokol, standartlaştırılmış geçici bir MCAo modeli oluşturmak için bir Alman çok merkezli araştırma konsorsiyumunun ("ImmunoStroke") konsensüs anlaşmasına dayanan deneysel bir inme modelini tanımlamaktadır. MCA'nın kökenine ECA üzerinden silikon kaplı bir filament getirilerek kurulan geçici MCAo modeli, sınırlandırılmış bir tıkanıklık döneminden sonra arteriyel reperfüzyon elde etmek için en yaygın kullanılan inme modellerinden biridir. Bu nedenle, bu yordam çeviriyle ilgili bir kontur modeli olarak kabul edileb...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak rakip çıkarları yoktur.

Teşekkürler

ImmunoStroke Konsorsiyumu'nun (FOR 2879, For immune cells to stroke recovery) tüm işbirliği ortaklarımıza öneriler ve tartışmalar için teşekkür ederiz. Bu çalışma Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG, Alman Araştırma Vakfı), Münih Sistem Nörolojisi Kümesi (EXC 2145 SyNergy - ID 390857198) çerçevesinde ve LI-2534/6-1, LI-2534/7-1 ve LL-112/1-1 hibeleri kapsamında Almanya'nın Mükemmellik Stratejisi kapsamındadır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
45 derece rampaH & S Kunststofftechnikyüksekliği: 18 cm
5/0 tehditPearsalls10C103000
5 mL ŞırıngaBraun
Asetik AsitSigma Life Science695092
İzofluran için anestezi sistemiDräger
Bepanthen pomatBayer
C57Bl/6J farelerCharles Nehir000664
KelepçesiFST12500-12
KlipsFST18055-04
Klips tutucuFST18057-14
KotonlarNOBA Verbondmitel Danz974116
Kresil menekşeSigma Yaşam BilimleriC5042-10G
KriyostatTermo Bilimsel CryoStarNX70
Etanol %70CLN Chemikalien Laborbedorf521005
Etanol %96CLN Chemikalien Laborbedorf522078
Etanol %99CLN Chemikalien LaborbedorfETO-5000-99-1
FilamentlerDoccol602112PK5Re
İnce 45 açılı forsepsFST11251-35
İnce forsepsFST11252-23
İnce MakasFST14094-11
TutkalOrechselnBSI-112
Sertleştirici TutkalDrechseln & MehrBSI-151
Isıtma battaniyesiFHC DC Sıcaklık Kontrol Cihazı
IsofluranAbbotB506
IsopentanFluka59070
KetaminInresa Arzneimittel GmbH
Lazer DopplerPerimedPF 5010 LDPM, Periflux Sistemi 5000
Lazer Doppler probuPerimed91-00123
Fosfat Tamponlu Tuzlu Su pH: 7.4Apotheke Innestadt Uni MunchenP32799
Kurtarma odasıMediheat
Roti-Histokit montaj ortamıRoth6638.1
Tuzlu su çözeltisiBraun131321
NeşterTüyü02.001.30.011
Silikon kaplı filamentlerDoccol602112PK5Re
StereomikroskopLeicaM80
Superfrost Plus SlaytlarThermo ScientificJ1800AMNZ
Vannas Yaylı MakasFST15000-00
XylacineAlbrecht

Kaynaklar

  1. Donnan, G. A., Fisher, M., Macleod, M., Davis, S. M. Stroke. Lancet. 371 (9624), 1612-1623 (2008).
  2. O'Collins, V. E., et al. 1,026 experimental treatments in acute stroke. Annals of Neurology. 59 (3), 467-477 (2006).
  3. Tureyen, K., Vemuganti, R., Sailor, K. A., Dempsey, R. J. Infarct volume quantification in mouse focal cerebral ischemia: a comparison of triphenyltetrazolium chloride and cresyl violet staining techniques. Journal of Neuroscience Methods. 139 (2), 203-207 (2004).
  4. Zhang, Z., et al. A new rat model of thrombotic focal cerebral ischemia. Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 17 (2), 123-135 (1997).
  5. Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).
  6. Carmichael, S. T. Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose. NeuroRx. 2 (3), 396-409 (2005).
  7. Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. Modeling stroke in mice - middle cerebral artery occlusion with the filament model. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (47), e2423(2011).
  8. Dirnagl, U., et al. A concerted appeal for international cooperation in preclinical stroke research. Stroke. 44 (6), 1754-1760 (2013).
  9. McNutt, M. Journals unite for reproducibility. Science. 346 (6210), 679(2014).
  10. Llovera, G., et al. Results of a preclinical randomized controlled multicenter trial (pRCT): Anti-CD49d treatment for acute brain ischemia. Science Translational Medicine. 7 (299), (2015).
  11. Llovera, G., Liesz, A. The next step in translational research: lessons learned from the first preclinical randomized controlled trial. Journal of Neurochemistry. 139, Suppl 2 271-279 (2016).
  12. Swanson, G. M., Satariano, E. R., Satariano, W. A., Threatt, B. A. Racial differences in the early detection of breast cancer in metropolitan Detroit, 1978 to 1987. Cancer. 66 (6), 1297-1301 (1990).
  13. Lourbopoulos, A., et al. Inadequate food and water intake determine mortality following stroke in mice. Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 37 (6), 2084-2097 (2017).
  14. Clark, W. M., Lessov, N. S., Dixon, M. P., Eckenstein, F. Monofilament intraluminal middle cerebral artery occlusion in the mouse. Neurological Research. 19 (6), 641-648 (1997).
  15. Jackman, K., Kunz, A., Iadecola, C. Modeling focal cerebral ischemia in vivo. Methods in Molecular Biology. 793, 195-209 (2011).
  16. Kitano, H., Kirsch, J. R., Hurn, P. D., Murphy, S. J. Inhalational anesthetics as neuroprotectants or chemical preconditioning agents in ischemic brain. Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 27 (6), 1108-1128 (2007).
  17. Rousselet, E., Kriz, J., Seidah, N. G. Mouse model of intraluminal MCAO: cerebral infarct evaluation by cresyl violet staining. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (69), e4038(2012).
  18. Rha, J. H., Saver, J. L. The impact of recanalization on ischemic stroke outcome: a meta-analysis. Stroke. 38 (3), 967-973 (2007).
  19. Liu, J., et al. Transient filament occlusion of the middle cerebral artery in rats: does the reperfusion method matter 24 hours after perfusion. BMC Neuroscience. 13, 154(2012).
  20. Sommer, C. J. Ischemic stroke: experimental models and reality. Acta Neuropathologica. 133 (2), 245-261 (2017).
  21. Jones, B. J., Roberts, D. J. A rotarod suitable for quantitative measurements of motor incoordination in naive mice. Naunyn-Schmiedebergs Archiv für Experimentelle Pathologie und Pharmakologie. 259 (2), 211(1968).
  22. Bouet, V., et al. The adhesive removal test: a sensitive method to assess sensorimotor deficits in mice. Nature Protocols. 4 (10), 1560-1564 (2009).
  23. Zhang, L., et al. A test for detecting long-term sensorimotor dysfunction in the mouse after focal cerebral ischemia. Journal of Neuroscience Methods. 117 (2), 207-214 (2002).
  24. Schallert, T., Fleming, S. M., Leasure, J. L., Tillerson, J. L., Bland, S. T. CNS plasticity and assessment of forelimb sensorimotor outcome in unilateral rat models of stroke, cortical ablation, parkinsonism and spinal cord injury. Neuropharmacology. 39 (5), 777-787 (2000).
  25. Roth, S., Yang, J., Cramer, J., Malik, R., Liesz, A. Detection of cytokine-induced sickness behavior after ischemic stroke by an optimized behavioral assessment battery. Brain, Behavior, and Immunity. 91, 668-672 (2021).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

nme Fare ModeliGe ici MCA Okl zyonuLazer Doppler Ak metrisiSerebral Kan Ak mFilament Yerle tirmeEnfarkt HacmiN rodavran sal De erlendirmeBeyin Reperf zyonu
Farelerde Modelleme İnme: Dış Karotid Arter yoluyla Geçici Orta Serebral Arter Tıkanıklığı
Bize ulaşın
Kütüphaneye tavsiye et

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Telif hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.