Depresyonun Hayvan Modelleri - Kronik Umutsuzluk Modeli (CDM)

Majör depresif bozukluk gibi duygulanım bozuklukları en sık görülen ve zorlayıcı ruhsal hastalıklar arasındadır ve yüksek bireysel ^acı1, intihar riskinin ^artması2 ile ilişkilidir ve toplum için önemli bir sosyoekonomik ^yüke3 neden olur. Etkisine rağmen, tedavi seçenekleri sınırlıdır ve özellikle son yıllarda psikofarmakolojideki yenilik krizi nedeniyle, yeni antidepresif müdahalelerin geliştirilmesine acil bir ihtiyaç vardır. Depresyonun patofizyolojisini anlamak ve potansiyel yeni ajanları test etmek için rasyonel ve geçerli hayvan modellerine acilen ihtiyaç ^vardır4. Neredeyse yarım yüzyıl boyunca, orijinal olarak Porsolt5 tarafından tanımlanan klasik zorla yüzme testi (FST), potansiyel yeni antidepresanların taranması için indüksiyon ve okuma olarak kullanıldı. 1. günde 5-15 dakika boyunca zorla yüzme süresi, ardından bir kerelik ilaç uygulaması ve ertesi gün başka bir yüzme döneminde farelerin suda hareketsiz geçirdiği kısmın değerlendirilmesinden oluşur. Hareketsizlik zamanının eksik bir doğal kaçış davranışını temsil ettiği düşünülüyordu ve farelerde depresyon benzeri bir durumun derecesiyle ilişkili olduğu ^{düşünülüyordu5}.

Klasik FST, sadece bilimsel toplulukta ^değil6,7,8 aynı zamanda kamu medyasında da ağır bir şekilde eleştirilmiştir8. FST ile ilgili tartışmaların çoğu, klasik paradigmada sadece 1 günlük kısa indüksiyon ve tedavi sürelerinden kaynaklanmaktadır. FST'nin insan depresyonuyla karşılaştırılabilir bir durumdan ziyade akut bir travma modelini temsil ettiği iddia edildi. Dahası, Porsolt testi potansiyel antidepresif ajanlar için bir tarama aracı olarak uygun olabilir, ancak birçok antidepresanın etkisinin gecikmeli başlangıcını görmezden gelir.

Orijinal FST'den türetilen kronik umutsuzluk modeli (CDM)9,10,11,12,13,14,15^, depresyon için daha uygun bir hayvan modelini temsil eder. CDM'de, art arda 5 gün boyunca tekrarlanan yüzme stresi akut travmatik etkileri önler. Tekrarlanan ve devam eden stresli bir durumdan kaçmayı başaramayarak, farelerin çaresizlik, teslim olma ve nihayetinde umutsuzluk durumu geliştirdiği düşünülmektedir. Bu paradigma, insanlarda depresyonun gelişimi için mevcut psikolojik teorilerle, travma sonrası stres bozukluğunun başlangıcında yaygın olarak yaşanan tek bir akut travmadan daha karşılaştırılabilir. CDM'de ortaya çıkan depresyon benzeri durum 4 haftaya kadar ^stabildir9 ve bu nedenle antidepresanların fayda göstermesi için genellikle 2-4 haftaya ihtiyaç duyduğu klinik koşullarla daha iyi karşılaştırılabilir daha uzun tedavi süreleri olasılığını ortaya ^çıkarır16.

Depresif benzeri durumun değerlendirilmesi o zaman çok boyutlu olmalıdır. Klasik FST'de olduğu gibi hareketsizlik süresinin ölçülmesi yararlıdır, ancak tek sonuç parametresi olarak kullanılmamalıdır. Aşağıda açıklanan çeşitli yöntemler, genellikle depresif insanlarda bulunan semptomlar doğrultusunda depresif bir durumun farklı boyutlarını haritalayabilmelidir. Uygun okuma değerlendirmeleri arasında kaçış davranışı (hareketsizlik süresi9,10,17), kuyruk süspansiyon testi (TST)^9, anhedoni (klasik sakkaroz tercih testi (SPT)18), motivasyon odaklı davranış (burun dürtme sakkaroz tercih testi (NPSPT)¹⁰), beklenti/keşif-davranış (belirsiz sinyale ^yanıt19; Y-labirent ^testi9), elektrofizyoloji (uzun süreli plastisite ölçümleri (uzun süreli potansiyel, LTP; uzun süreli depresyon, LTD)²⁰), moleküler değerlendirmeler (acil erken genlerin aktivasyon paternleri (IEG'ler); daha fazla stres ^paternleri21).

Teorik olarak, tekrarlanan bir yüzme testi, hareketsizlik süresinin herhangi bir değerlendirmesi olmadan depresif bir durumu indüklemek için kullanılabilir. Bununla birlikte, hareketsizlik sürelerine sahip en azından bir kavram kanıtı deney serisi sağlanması şiddetle tavsiye edilir. Ek olarak, CDM, indüksiyon aşamasında hareketsizlik süresini ölçerek depresif benzeri bir durumun gelişimini değerlendirmek için uygun bir modeli temsil eder. Yüzmeden önce tedavi edilen belirli fare suşları veya fareler, strese karşı esneklik veya kırılganlık ve davranışsal umutsuzluğun indüksiyonu açısından değerlendirilebilir.

Tüm deneyler, Avrupa kılavuzları (AB 2010/63) ile uyumlu olarak ve Alman hayvan koruma yasası (TierSchG), FELASA (www.felasa.eu/guidelines.php), laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımı için ulusal hayvan refahı kuruluşu GV-SOLAS (www.gv-solas.de/index.html) kılavuzu uyarınca gerçekleştirilmiş ve Freiburg Üniversitesi hayvan refahı komitesi ve Comite d'Ethique en Matiere d'Experimentation Animale de Strasbourg (CREMEAS, CEEA35) ve yerel makamlar. 10-14 haftalık (70-98 doğum sonrası gün, PND) C57Bl6N vahşi tip farelerin her iki cinsiyeti de vahşi tip (WT) belirtilen deneyler için kullanıldı. Strese dirençli bir çizgi olarak, ön beyin nöronal CaMKII promotörü altında adenozin _A1 reseptörlerinin ekspresyonunun arttığı transgenik fare hattı ^{kullanıldı9,15}. Deneylerden sonra, fareler servikal çıkık tarafından kurban edildi.

1. Hazırlık

1. Kapsamlı deneysel planlama da dahil olmak üzere bir hayvan araştırma lisansı alın.
2. Varış: Varışta, CDM'yi gerçekleştirmek için hayvanları hayvan tesisinde büyütün. Hayvanlar harici bir tedarikçiden satın alınırsa, yeni ortama uyum sağlamaları için en az 2 hafta bekleyin.
3. Barınma: Hayvanları barındırmak için, ek stresi önlemek için kafeslerin maksimum sayıda hayvanla meşgul olmadığından emin olun. Barınma koşullarının uluslararası fare muhafazası tavsiyelerine uygun olduğunu garanti edin (daha fazla bilgi için ^bkz.22) ve bunları her zaman sürekli olarak koruyun.
   NOT: En önemli standart muhafaza koşulları, saatte 25-120 hava değişimine sahip ayrı ayrı havalandırılan kafesleri, 12 saat açık-karanlık döngüsünü, mümkün olduğunca sabit sıcaklığı (en azından 20-24 °C arasında sabit), mümkün olduğunca kararlı nemi (en az% 45 -% 65 arasında), kemiren malzeme ve barınak mevcut, bireysel muhafaza yok.
4. Zaman noktası: Tüm denemeleri günün aynı saatinde gerçekleştirin.
   NOT: Gündüz vaktinin CDM üzerindeki etkisini doğrulamak için doğrudan bir değerlendirme yapılmamıştır, ancak depresif benzeri durumları değerlendiren davranış testlerinin çoğu, günün saatine bağlı olarak farklılıklar göstermektedir23,24,25 ve gündüz vaktinin de CDM'yi etkilemesi muhtemeldir.
5. İç içe geçme malzemesi: İç içe geçme malzemesini minimuma indirin. Kafeste çalışan tekerlekler vb. bulunmadığından emin olun.
   NOT: Zenginleştirilmiş ortam, depresif bir durumun indüklenmesini önler.
6. Grup kompozisyonu: Hayvanların tüm deney boyunca aynı grupta kalmasına izin verin. Dişi fareleri farklı litrelerden bile bir araya getirin; erkek fareleri çöp arkadaşı erkek hayvanlarla birlikte gruplandırın. Yaklaşan saldırganlık nedeniyle, özellikle erkeklerde, ısırma ve berberlik bir sorun haline gelebilir, bu nedenle grup kompozisyonuna özel önem verin. Tek konuttan kaçının, çünkü yoksunluk önemli bir ek stres kaynağıdır.
7. Hayvanlar: Belirli farklılıklar gözlenmesine rağmen farklı fare suşları ^{kullanın9,10}. Sık kullanılan bir fare suşu C57Bl6N. Eşleştirilmiş istatistiksel analiz yapmak için fareleri etiketleyin (bkz. adım 3.2.4).
8. Hayvan cinsiyeti: Hem erkek hem de dişi fareleri eşit olarak kullanın.
9. Hayvan yaşı: Hayvanların en az 10 haftalık (70 PND) yaşında olduğundan emin olun. Yüzmenin neden olduğu yorgunluk nedeniyle genç hayvanları kullanmayın.
10. Ekipman: En az 2 L kapasiteli, 24-26 cm çapında ve minimum 30 cm yüksekliğinde şeffaf bir cam silindir / beher kullanın. Diğer gereksinimler arasında su sıcaklığını kontrol etmek için bir termometre, kağıt havlular, kırmızı ışık ısıtma lambası / ısıtma paspası veya karşılaştırılabilir ısıtma kaynağı, zamanlayıcı, kronometre, sessiz ortam bulunmaktadır. Çevrimdışı analiz ve dokümantasyon için yüzme oturumlarını videoya kaydedin. Tarih ve saatin, tek tek hayvan için bir kimlik kodu numarasıyla birlikte bantta/dosyada sürekli olarak görünür olduğundan emin olun. Dosyaları daha sonra analiz etmek ve daha fazla başvuru yapmak üzere saklayın. Analizi kolaylaştırmak için yukarıdan değil, cam silindirin yanından film.

2. İndüksiyon fazı

1. Başlamadan önce
   1. Hayvanları ısırma veya berberlik belirtileri de dahil olmak üzere anormallikler için görsel olarak gözlemleyin. Bir hayvan herhangi bir minimal yaralanma gösteriyorsa, tüm kafesi deney serisinden hariç tutun. Deney sırasında yaralanmalar kötüleşeceğinden ve fareler stresin etkisi altında daha agresif hale geldikçe devam etmesini önleyeceğinden bir veterinerin herhangi bir zamanda hazır olduğundan emin olun.
   2. Deneye başlamadan önce her hayvanın vücut ağırlığını elde edin. Sık sık gözlenen kilo kaybının ilk vücut ağırlığının% 20'sini geçmediğinden emin olun. % 20'nin üzerinde kilo kaybı olan hayvanları hariç tutun ve varsayılan yüksek acı nedeniyle derhal ötenazi yapın.
   3. Bir beheri veya silindiri oda sıcaklığında (22-23 ° C) alttan en az 20 cm yüksekliğe kadar suyla doldurun ve su yüzeyi ile kabın üst sınırı arasında en az 10 cm bırakın.
2. Performans
   1. Hayvanları yavaşça suya aktarın. Yüzme aşamasında, boğulmayı önlemek için hayvanı sürekli gözlem altında tutun. Hayvanın deneyciyi göremediği bir konumdan gözlemleyin (örneğin, yandaki bir odadan video gözlemi).
   2. Deneyin başında bir kronometre ayarlayın. Hayvanları 10 dakika sonra kuyruklarını tutarak sudan çıkarın. Onları bir kağıt havluyla nazikçe kurutun ve bir ısıtma ışığının altına veya bir ısıtma paspasının üzerine koyun.
   3. Bir seferde sadece bir hayvanı değerlendirin. Hayvanların birbirlerini görememelerini sağlayın (örneğin, barınak kafesini deney düzeneğinden bir oda bölücü ile ayırın).
   4. Zorunlu yüzme seansını art arda 5 gün boyunca her gün 10 dakika boyunca gerçekleştirin.
3. Bitirme
   1. Beş yüzme seansından sonra hayvanları ev kafeslerine geri aktarın ve en az 2 gün dinlenmelerine izin verin. Daha sonra spesifik tedavi müdahalelerine başlayın.

3. Anti-depresif tedavinin değerlendirilmesi

1. Zaman kursu
   1. CDM ile akut ve subkronik tedavileri değerlendirin. Bilimsel soruya bağlı olarak, indüksiyon aşaması ile okuma arasındaki dinlenme süresini uyarlayın.
   2. Ketaminin akut ve hızlı etkili potansiyelini değerlendirmek için, CDM'nin indüksiyon aşamasından sonra kısa bir dinlenme süresi (birkaç gün) seçin. Tedaviyi uygulayın (yani, intraperitoneal enjeksiyon) ve kısa bir süre sonra değerlendirmeyi (ek yüzme seansı veya farklı değerlendirme yöntemi) gerçekleştirin.
   3. Subkronik bir tedavinin etkilerini değerlendirmek için, tedavi süresini 4 haftaya kadar artırın (daha uzun tedavi süreleri için veri yoktur). Örneğin, indüksiyon aşamasından sonraki 4 hafta boyunca hayvanlara imipramin ile oral tedaviyi verin ve daha sonra değerlendirin.
   4. Depresif durumu, tedavi süresinin bitiminden hemen sonra, örneğin ertesi gün değerlendirmeye başlayın. Kontrol ve deneysel koşullar için her zaman aynı zaman dilimini seçin.
2. Hareketsizlik süresi
   1. Kavram kanıtı
      1. Hareketsizlik süresini bir okuma yöntemi olarak kullanmak için, indüksiyon aşamasının her gününü ve bir kavram kanıtı sağlamak için test gününü değerlendirin (bkz. Şekil 1). Daha ileri deneysel seriler için, değerlendirmeleri 1. güne, 5. güne ve test gününe düşürün (bkz. Şekil 1C).
      2. Her deneyi videoya çekin. Deneysel koşullara kör olan iki eğitimli gözlemcinin analizi bağımsız olarak gerçekleştirmesine izin verin. Video analizi, deneycinin davranışı farklı bir odadan gözlemlemesini sağlar, böylece teste müdahaleyi en aza indirir (örneğin, ek materyaldeki video dosyasına bakın).
   2. Koşullar: Yüzme testi sırasında üç farklı davranış koşulunu gözlemleyin ve tanımlayın: mücadele, yüzme ve hareketsizlik. Çoğu araştırmacı hareketsizliğe odaklanır; mücadele ve yüzme arasında daha fazla ayrım nadiren yararlıdır ve analizin karmaşıklığını ve süresini önemli ölçüde arttırır.
      1. Mücadele: Hayvan aktif olarak tehdit edici durumdan kaçmaya çalışır. Bu, silindirin yan tarafını, kafası duvara ve tüm uzuvların hareketlerine doğru yönlendirilmiş olarak döşemeyi içerir. Su yüzeyi tipik olarak biraz çalkantılıdır.
      2. Yüzme: Hayvan en azından her iki arka pençesini de hareket ettirir ve su boyunca bir mesafe kat eder. Aktif olarak bir çıkış yolu arar, ancak geminin cam duvarının üstesinden gelmeye çalışmaz. Yüzme, pençeleri su yüzeyinin üzerine kaldırmayı içermez ve vücut genellikle silindirin duvarlarına paralel olarak yönlendirilir. Bu durumda, hayvanlar sıklıkla döner veya daireler halinde hareket eder.
      3. Hareketsizlik: Hayvan, donma benzeri bir konumda hareketsiz kalır ve hiç hareket etmez veya sadece kuyruğunu veya ön pençelerini başını su yüzeyinin üzerinde tutmak için hareket ettirir. Pasif yüzer dışında aktif olarak hiçbir mesafe kat edilmez ve ön pençelerin yönlendirilmiş hareketi gözlenmez.
   3. Izleme
      1. Çevrimdışı video kayıtlarını kullanarak değerlendirmeyi gerçekleştirin. İki bağımsız ve deneyimli sınav görevlisinin kör derecelendirmelerini kullanın ve iki derecelendirme arasındaki ortalamaları hesaplayın.
      2. İki değerlendiricinin sonuçları önceden belirlenmiş bir aralığın üzerinde farklılık gösteriyorsa derecelendirmeleri tekrarlayın. Farklı koşullar mücadele, yüzme ve hareketsizlik arasında sıklıkla değiştiği için fareleri sürekli olarak gözlemleyin.
      3. Odaklanmış bir aşamada (genellikle hareketsizlik) farenin suda kaldığı 10 dakika boyunca harcanan toplam süreyi ölçmek için bir kronometre kullanın. Devam eden zaman ölçümünü değiştirmeden önce yaklaşık bir saniyelik kısa bir gecikme süresi düşünün (örneğin; bir hayvan hareketsizlikte 20 saniye kalırsa ve yalnızca bir saniyeden az bir süre için bir kez hareket ederse ve başka bir 10 saniye boyunca hareketsizliğe geri dönerse, toplam hareketsizlik süresi 30 sn'dir).
   4. İstatistikler: Nispeten yüksek bireyler arası standart sapma nedeniyle (muhtemelen hiyerarşiye bağlı davranışın kafesten yüzme testine aktarılmasından kaynaklanır), daha sonra eşleştirilmiş (eşleştirilmemiş yerine) parametrik testler yapmak için hayvanları işaretleyin veya etiketleyin. Normallik dağılımını değerlendirin ve spesifik soruya bağlı olarak, farklı grupları karşılaştırmak için post-hoc t-testleri veya eşleştirilmiş t-testleri ile varyans analizi (ANOVA) yapın. Hareketsizlik sürelerinin mutlak değerlerini veya normalleştirilmiş değerler olarak analizi gerçekleştirin.
      1. Mutlak değerler: 1. günden 5. güne kadar hareketsizlik süresinin ve test günü için SEM'± ortalama değerlerini verin (bkz. Şekil 1A). 1. gün ve 5. gün için ortalama değerleri karşılaştırın, tercihen depresif bir durumun indüksiyonunu doğrulamak için eşleştirilmiş bir t-testi kullanın. 1. ve 5. günler arasında anlamlı bir fark varsa, 5. günün ortalama değerlerini test gününün ortalama sonuçlarıyla karşılaştırın. Bir deneydeki tipik bir grup büyüklüğünün 6 ila 10 hayvan arasında olduğundan emin olun ve vahşi tip hayvanlarda başlangıç çizgisi ve indüksiyon sonrası hareketsizlik süreleri arasında önemli farklılıklar bekleyin. Farklı grupları eşlenmemiş bir t-testi ile karşılaştırmak, temel farklılıklar nedeniyle mutlak değerler kullanılıyorsa zordur; bu nedenle, normalleştirilmiş değerler kullanın.
      2. Göreceli/Normalleştirilmiş değerler: Normalleştirme yoluyla farklı tedavi etkilerini 5. gündeki bireysel sonuçla karşılaştırın ve ardından değerleri 5. günün yüzdesi olarak ifade edin (bkz. Şekil 1B).
   5. Kontrol deneyleri
      NOT: Yüzme performansı hareket ile ilişkili olabilir. Hiper-lokomotife neden olan maddeler yanlış pozitif sonuçlara neden olabilir (yani, hareketsizlik süresinin azalması); ayrıca yatıştırıcı ajanlar hareketsizlik süresini yapay olarak artırabilir.
      1. Yüzme analizini yapmadan önce bilinmeyen maddeler için hareketteki değişiklikleri değerlendirin. Açık Alan Testi'ni (OFT) ayrı bir hayvan grubunda en az 10 dakika boyunca kullanın.
      2. Test edilen bileşiğin, yüksek geçerliliğe sahip hareketsizlik süresi ölçümü yoluyla CDM okumasını etkileyebilecek spesifik olmayan hiper-lokomotif etkilerini tespit etmek için OFT'de CDM'de olduğu gibi aynı gözlem süresini (10 dakika) seçin.
      3. Önemli hiper-lokomotif etkiler durumunda, anti-depresif gücü değerlendirmek için yüzme seansını değerlendirmeyin, ancak farklı okuma yöntemleri kullanın (örneğin, sakkaroz tercihi, kuyruk süspansiyon testi, vb.).

4. Depresif benzeri bir durumun gelişiminin değerlendirilmesi

1. Depresif bir bozukluğun gelişimini değerlendirmek için, hareketsizlik zamanını ölçmek için indüksiyon aşamasının her gününü değerlendirin.
   NOT: Bu durumda, her gün arasındaki hareketsizlik süresinin küçük bir artışı esnekliği tanımlarken, tedavi edilmemiş veya vahşi tip hayvanlara kıyasla daha güçlü ve daha erken bir artış, strese bağlı umutsuzluğa karşı gelişmiş bir savunmasızlığı temsil eder. Yüzme olayından önce fareleri tedavi ederek, önleyici müdahale veya transgenik fare çizgileri davranışsal umutsuzluğun gelişimi ile ilgili olarak değerlendirilebilir.

CDM'nin indüksiyon aşamasının ilk yüzme seansında, fareler genellikle her ek yüzme seansında sürekli olarak yükselen 190 s ile 230 s arasında ortalama bir hareketsizlik süresi gösterir (Şekil 1A). Bu artış ilk 3 günde daha belirgindir ve son 2-3 gün içinde plato benzeri bir faza ulaşır. 5. günde ölçülen hareketsizlik süresi, 4 haftaya kadar sabit kalır ve bu da istikrarlı davranışsal umutsuzluğu gösterir. Bir müdahalenin antidepresan gücü, indüksiyon aşamasının son günü ile test günü arasında hayvanı tedavi ederek değerlendirilebilir. Yüzme seansları sırasında mutlak puanlama süresinin oldukça öznel olduğunu ve deneyciye, yaşa, cinsiyete ve kullanılan fare çizgisine bağlı olduğunu unutmayın. Bununla birlikte, oturumlar arasındaki göreceli fark, sadece küçük interrater farklılıkları ile oldukça kararlıdır.

Şekil 1'de çeşitli temsili tedaviler gösterilmiştir. Imipramin, uyku yoksunluğu ve ketamin, hareketsizlik süresini önemli ölçüde azaltırken, iyileşme uykusu ile birlikte uyku yoksunluğu, depresif benzeri fenotipte önemli bir değişiklik göstermedi. Bu sonuçlar, uygulanan tedavilerin anti-depresif gücü ile uyumludur ve insan hastalarda gözlenen etkilere benzer. Tedavi, içme suyu yoluyla 3 hafta boyunca 20 mg / kg / gün imipramin, testten 24 saat önce tek bir intraperitoneal enjeksiyonla 3 mg / kg ketamin alımını ve testten önce 6 saat boyunca uyku yoksunluğunu içeriyordu.

Araştırma sorusuna bağlı olarak, çeşitli temsiller görüntülenebilir. Mutlak değerlerin bir temsili gerçek bir veri genel bakışı sağlayabilir ve indüksiyon fazının ve tek bir tedavinin iyi bir şekilde değerlendirilmesini sağlar (Şekil 1A, D). Bununla birlikte, çeşitli tedavilerin farklılıkları doğrudan karşılaştırılamaz; bu nedenle her tedavi grubunun 5. günde hareketsizlik süresi ortalama değerleri farklıdır. Bu nedenle, bu durumda normalleştirilmiş ortalama değerlerin gösteriminin kullanılması önerilir (Şekil 1B). Alan sınırlamaları nedeniyle azaltılmış bir temsil seçilebilir (Şekil 1C). En azından 1. gün, 5. gün ve sınav gününün sonuçlarının gösterilmesinin zorunlu olduğunu unutmayın.

Şekil 1: Mutlak ve normalleştirilmiş değerlerle başarılı sonuçlar. (A) 30 farede depresif benzeri bir durumun başarılı bir şekilde indüklenmesi gözlemlenebilir. Her nokta, belirli bir günde tek bir hayvanın hareketsizlik süresini temsil eder ve çubuklar, test edilen hayvanların ortalama değerlerini temsil eder. Hareketsizlik süresi, indüksiyon fazının her günü (1. günden 5. güne kadar) ve test günü (noktalı çizgiden sonra) için tedavi olsun veya olmasın temsil edilir. Bu örnekte, 1. gün ile 2. gün arasında önemli bir artış gözlenebileceğini unutmayın. Bazı durumlarda, anlamlılık düzeyleri ilk olarak 1. gün ile 3. gün arasında elde edilir. Deneyin devamı için, 1. gün ile 5. gün arasında istatistiksel olarak anlamlı bir artış zorunludur. Tipik tavan etkisine dikkat edin (4. ve 5. günler arasındaki farka kıyasla 1, 2 ve 3. günler arasındaki artış). 5. gün ile test günleri arasında, hayvanlar 4 hafta boyunca ev kafeslerinde, daha fazla tedavi (CDM) veya imipramin (Imip.) ile muamele edilmeden barındırıldı; uyku yoksunluğu (SD); uyku yoksunluğu ve iyileşme uykusu (RS) ve ketamin (Ket). (B) Her gün için bireysel hayvanların performansının örnek zaman seyri verilir. (C) Şekil 1A'da daha önce gösterilen aynı sonuçların normalleştirilmiş gösterimi. Her hayvanın ve günün hareketsizlik süresi, 5. günde karşılık gelen hareketsizlik süresine normalleştirildi ve yüzde olarak ifade edildi. Farklı grupların tedavi sonrası değerleri bu yaklaşım kullanılarak daha iyi görüntülenebilir ve karşılaştırılabilir. (D) 1. gün, 5. gün ve sınav günü (CDM) için normalleştirilmiş değerlerin gösterimi. Başarılı bir kavram kanıtı çalışmasından sonra, değerlendirme zaman noktaları birinci güne, beşinci güne ve test gününe düşürülebilir. Bu zaman noktalarına ihtiyaç vardır, çünkü başarılı bir indüksiyonu göstermek için 1. gün ile 5. gün arasında önemli bir artış gereklidir ve tedavi etkinliği hakkında bir açıklama yapmak için 5. günün test günüyle karşılaştırılması gerekir. (E) Üç farklı fare çizgisinin hareketsizlik süresinin karşılaştırılması: Wildtype (WT) başarılı bir indüksiyon gösterir; örnek bir esnek çizgi (RL), ilk üç günde ve test gününde depresyon benzeri davranışların önemli ölçüde azaldığını gösterir. Bonferroni post hoc testi ile tek yönlü ANOVA: ∗/#p < 0,05, ∗∗/##p < 0,01, ∗∗∗/###p < 0,001, ∗∗∗∗/####p < 0,0001. (#show difference to day 1, ∗ Şekil 1A,C'deki 5. günün ortalama değerlerine ve Şekil 1E'deki WT fare çizgisine olan farkı gösterir). Veriler SEM ± ifade edilmektedir. Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Tüm 5 gün boyunca hareketsizlik süresinin değişmemesi durumunda (Şekil 2), uygulanan stres davranışı uygun şekilde değiştirememiştir ve hiçbir tedavi etkisi değerlendirilememiştir; hayvanların kurban edilmesi ve daha fazla kullanılmaması gerekir.

Şekil 2: Başarısız sonuçlar. Etkisiz bir indüksiyonun temsili şekilde gösterilmiştir. 1. gün ile 5. gün arasındaki hareketsizlik süresinde önemli bir artış olmadığını unutmayın. Bu nedenle, deneyin devamı için kriterlere ulaşılamamıştır ve daha fazla uzatma rasyonel değildir (bu durumda, sadece erkek fareler test edilmiştir ve geriye dönük incelemeden sonra, çöp arkadaşı olmadıkları bulunmuştur). Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Hayvanların davranışsal umutsuzluğunun daha geniş bir görünümünü tanımlamak için daha fazla okuma yöntemi kullanılmalıdır. Çeşitli davranış testleri, elektrofizyolojik ölçümler ve strese bağlı değişikliklerin moleküler değerlendirmeleri mevcuttur. CDM, imipramin ve ketamin tedavisi, Burun-poke-Sakkaroz Tercih Testi (NPSPT) ve yama-kelepçe tekniği kullanılarak uzun süreli potansiyelin değerlendirilmesi ile Kuyruk Süspansiyon Testi (TST) için örnek sonuçlar Şekil 3'te verilmiştir. Bu sonuçlar, CDM indüksiyon fazının davranışsal umutsuzluğun indüksiyonu için genel bir araç olarak kullanılmasını teşvik eder. Kullanılan teknikler hakkında daha fazla bilgi için (TST, NPSPT, LTP-değerlendirmesi) bakınız9,10,17,20.

Şekil 3: CDM fareleri ile ek sonuçlar. (A) Kuyruk Süspansiyon Testinde CDM'nin etkilerinin örnek bir temsili. Fareler kuyrukları tarafından askıya alındı ve hareketsiz geçirilen zaman kaydedildi (metodolojik ayrıntılar için bkz. 9). Her nokta, tek bir hayvanın hareketsizlik süresini temsil eder ve çubuklar, test edilen hayvanların ortalama değerlerini temsil eder. Bonferroni post hoc testi ile tek yönlü ANOVA: ∗∗∗p < 0.001. Veriler, SEM'± araçları olarak ifade edilmektedir. (B) CDM farelerde yakın zamanda kurulan burun pokes sakkaroz tercih testinin temsili sonuçları. Bu görevde, sakkaroz tercihi, sakkaroz şişesine ulaşmak için kademeli olarak artan çabayla ölçülmüştür (burun iğnesi sayısı) (metodolojik ayrıntılar için bkz. 10). CDM'de sakkaroz tercihinin azaldığını ve CDM ile kontrol fareleri arasındaki farkın, farelerin tatlı çözeltiyi içmek için başvurmaları gereken çabayla (Nspk1-7 olarak belirtilen her gün burun pokeslerinin ortalama değerleri) kademeli olarak arttığını unutmayın. Bonferroni post hoc testi ile iki yönlü ANOVA: ∗∗p 0.01 <, ∗∗∗p < 0.001. Uzun süreli sinaptik plastisitedeki CDM'±ye bağımlı değişiklikler, WT farelerinin hipokampal beyin dilimlerinde ilişkisel bir LTP indüksiyon protokolünün uygulanmasından sonra EPSP'lerin ortalama değerlerinin değişmesi olarak sunulmaktadır. Veriler CA3-CA1 sinapsının uyarılması ile elde edildi (ayrıntılar için bakınız17,20). Eşlenmemiş t-testi, ∗∗p < 0.01, veriler SEM ± araç olarak ifade edilmektedir.

Ek Materyal. Bu Dosyayı indirmek için lütfen tıklayınız.

Tüm yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan eder.