Burada, brüt uygunluğu ve lokal hücre dışı matris yapılarını belirlemek için murine pulmoner valfin eksizyon, basınçlandırma, fiksasyon ve görüntüleme için korelatif bir iş akışı açıklıyoruz.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Murine Pulmoner Kapakçığın Korelatif Görüntülemesi için Cerrahi ve Örnek İşleme
Bu makalede
Özet
Özet
Kalp kapakçığı ile ilgili hastalığın (HVD) altında kalan nedenler zor bulunur. Murine hayvan modelleri HVD'yi incelemek için mükemmel bir araç sağlar, ancak yapıyı ve organizasyonu birden fazla uzunluk ölçeğinde doğru bir şekilde ölçmek için gereken cerrahi ve enstrümantal uzmanlık ilerlemesini engellemıştır. Bu çalışma, kalp kapakçığını farklı uzunluk ölçeklerinde tasvir etmek için murine diseksiyonu, en blok boyama, örnek işleme ve korelatif görüntüleme prosedürlerinin ayrıntılı bir açıklamasını sunmaktadır. Hidrostatik transvalvüler basınç, kalp kapak konformasyonunu kimyasal olarak sabitlenerek zamansal heterojenliği kontrol etmek için kullanıldı. Kalp kapakçığının geometrisini doğrulamak ve seri blok yüz taramalı elektron mikroskopisi (SBF-SEM) için gereken aşağı akış numune işleme için referans sağlamak için mikro bilgisayarlı tomografi (μCT) kullanılmıştır. Hücre dışı matrisin (ECM) yüksek çözünürlüklü seri SEM görüntüleri alındı ve kuruluşunun yerel bir 3D gösterimini sağlamak için yeniden inşa edildi. Daha sonra pulmoner kapak boyunca mekansal varyasyonun üstesinden gelmek için μCT ve SBF-SEM görüntüleme yöntemleri korelasyona uğramıştır. Sunulan çalışma sadece pulmoner kapak üzerinde olmasına rağmen, bu metodoloji biyolojik sistemlerdeki hiyerarşik organizasyonu tanımlamak için benimsenebilir ve birden fazla uzunluk ölçeğinde yapısal karakterizasyon için çok önemlidir.
Giriş
Pulmoner kapak (PV), sağ ventrikül ile pulmoner arter arasında tek yönlü kan akışını sağlamaya yarar. Pulmoner kapak malformasyonları doğumsal kalp hastalığının çeşitli formları ile ilişkilidir. Konjenital kalp kapak hastalığının (HVD) mevcut tedavisi, bir hastanın ömrü boyunca birden fazla invaziv ameliyat gerektirebilen valvüler onarım veya kapak değişimidir1. Kalp kapakçığının işlevinin, genellikle yapı-fonksiyon korelasyon olarak adlandırılan yapısından türetildiği yaygın olarak kabul edilmiştir. Daha spesifik olarak, kalbin geometrik ve biyomekanik özellikleri işlevini belirler. Mekanik özellikler, sırayla, ECM'nin bileşimi ve organizasyon....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Bu çalışmada hayvanların kullanımı AR13-00030 protokolü kapsamında Nationwide Çocuk Hastanesi kurumsal hayvan bakım ve kullanım komitesine uygun olarak yapıldı.
1. Pulmoner kapak eksizyonu
- Fare diseksiyonu için gereken gerekli araçları otoklavlav. Buna ince makas, mikro tokalar, mikro vasküler kelepçeler, toka uygulanan kelepçe, mikroneedle tutucular, yay makası ve retraktörler dahildir.
- Operasyondan önce tüm fareleri en az 2 hafta boyunca alıştırın. Yaklaşık 1 yaşında olan C57BL/6 fareleri kafeslerinden çıkarın ve tartın, ardından bir ketamin/ ksilazin kokteyli (3:1 ketamin:ksilazin, g başına 0.01 mL) aşırı doz ile öten....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Pulmoner arterin basınç tüpüne anastomozu Şekil 1A'dagösterilmiştir. Hidrostatik basınç uygulamasını takiben, pulmoner gövde, pulmoner valf broşürlerinin kapalı bir konfigürasyonda olduğunu gösteren radyal olarak(Şekil 1B)dağılır. Pulmoner kapak uyumu μCT ile doğrulandı. Bu durumda, broşürler coapt (kapalı) ve annulus dairesel (Şekil 2A). Şekil 2B,C, fiksasyon ( Şekil 2B ) veya arteriye.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Ventriküllerin çıkarılması iki amaca hizmet eder. Birincisi, ventrikül tarafını atmosferik basınca maruz bırakmak, böylece sadece akciğer kapakçığının arteryal tarafından kapanmak için bir transvalvüler basınç uygulamak gerekir ve ikincisi, pulmoner gövdenin bükülmesini önlemek için kararlı bir taban sağlar. Basınçlandırma sırasında, pulmoner gövde radyal ve alt yönden dağılır, bükülmeye eğilimli hale getirir ve pulmoner gövdenin çökmesine neden olur. Pulmoner vananın tuzlu su çözeltisi ile önceden yüklenmesi, basınçland.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.
Teşekkürler
Bu çalışma kısmen R01HL139796 ve R01HL128847 tarafından CKB ve RO1DE028297 ve DWM için CBET1608058 hibeleri tarafından desteklenmektedir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| %25 glutaraldehit (aq) | EMS | 16210 | Birincil fiksatif bileşen |
| %0.9 sodyum klorür enjeksiyonu | Hospira Inc. | NDC 0409-4888-10 | |
| 1 mL şırınga | BD | 309659 | |
| 10 mL şırınga | BD | 309604 | |
| 200 geçirmez etanol | EMS | 15055 | |
| 22G iğne | BD | 305156 | |
| 3 mL şırınga | BD | 309657 | |
| 3 musluk | Smiths Medical ASD, Inc. | ||
| %4 osmiyum tetroksit | EMS | 19150 | Boyama bileşeni |
| %4 paraformaldehit (aq) | EMS | 157-4-100 | Birincil fiksatif bileşen |
| Emilebilir hemostat | Ethicon | 1961 | |
| Aseton | EMS | 10012 | |
| Siyah poliamid monofilament sütür, 10-0 | AROSurjik aletler Corporation | ||
| Siyah poliamid monofilament sütür, 6-0 | AROSurjik aletler Corporation | SN-1956 | |
| C57BL / 6 fareler | Jackson Laboratories | 664 | Yaklaşık 1 yo |
| Kalsiyum klorür | Sigma-Aldrich | 10043-52-4 | |
| Forsep uygulayan kelepçe | FST | 00072-14 | |
| Pamuk uçlu aplikatörler | Fisher Bilimsel | 23-400-118 | |
| DPBS | Gibco | 14190-144 | |
| Dumont #5 forsep | FST | 11251-20 | |
| Dumont #5/45 forseps | FST | 11251-35 | |
| Dumont #7 ince forsep | FST | 11274-20 | |
| Durcupan ACM reçine | EMS | 14040 | |
| İnce makas | FST | gömmek için14028-10 | |
| Heliscan microCT | Thermo Fisher Scientific | Micro-CT | |
| Ketamin hidroklorür enjeksiyonu | Hospira Inc. | NDC 0409-2053 | |
| L-aspartik asit | Sigma-Aldrich | 56-84-8 | Boyama bileşeni |
| Kurşun nitrat | EMS | 17900 | Boyama bileşeni |
| düşük vakumlu geri saçılma dedektörü | Thermo Fisher Scientific | VSDBS | SEM geri saçılma dedektörü |
| Mikro adson forsep | FST | 11018-12 | |
| Millex-GP filtre, 0.22 um, PES 33mm, steril olmayan | EMD Millipore SLGP033NS | ||
| Dokumasız şarkılar | McKesson Corp. | 94442000 | |
| Potasyum hekzasiyanoferrat(II) trihidrat | Sigma-Aldrich | 14459-95-1 | Boyama bileşeni |
| Potasyum hidroksit | Sigma-Aldrich | 1310-58-3 | |
| Basınç izleme hattı | Smiths Medical ASD, Inc. | MX562 | |
| Tuzlu su çözeltisi (steril% 0.9 sodyum klorür) | Hospira Inc. | NDC 0409-0138-22 | |
| Boyut 3 BEEM kapsül | EMS | 69910-01 | Gömme kabı |
| Sodyum kakodilat trihidrat | Sigma-Aldrich | 6131-99-3 | Tampon |
| Solibri ekartörler | FST | 17000-04 | |
| Püskürtme, karbon ve e-kiriş kaplayıcı | Leica | EM ACE600 | Altın kaplayıcı |
| Cerrahi mikroskop | Leica | M80 | |
| Tiyokarbohidrazid (TCH) | EMS | 21900 | Boyama bileşeni |
| Tish iğne tutucu/forsep | Micrins | MI1540 | |
| Düzeltici | Wahl | 9854-500 | |
| Uranil asetat | EMS | 22400 | Boyama bileşeni |
| Volumescope taramalı elektron mikroskobu | Thermo Fisher Scientific | VOLUMESCOPESEM | Seri Blok Yüz Taramalı Elektron Mikroskobu |
| Ksilazin steril çözeltisi | Akorn Inc. | NADA# 139-236 |
Kaynaklar
- Azari, S., et al. A systematic review of the cost-effectiveness of heart valve replacement with a mechanical versus biological prosthesis in patients with heart valvular disease. Heart Failure Reviews. 25 (3), 495-503 (2020).
- Ng, C. M., et al.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
