L-DOPA ile indüklenen diskinezilerin kemirgen modelleri, L-DOPA'nın tekrarlanan uygulaması nedeniyle ortaya çıkan belirtileri hafifletmek veya gelişimi hafifletmek için terapötik müdahaleleri tanımlamak için paha biçilmez araçlardır. Bu protokol, Parkinson hastalığının tek taraflı 6-OHDA lezyonlu sıçan modelinde diskinetik benzeri hareketlerin nasıl indükleneceğini ve analiz edileceğini göstermektedir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Parkinson Hastalığının Tek Taraflı 6-OHDA-Lezyonlu Sıçan Modelinde L-DOPA-İndüklenen Diskinezilerin Değerlendirilmesi
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
L-DOPA ile indüklenen diskineziler (LID'ler), Parkinson hastalığı (PD) olan hastalara uzun süreli L-DOPA uygulamasından kaynaklanan motor komplikasyonları ifade eder. Klinikte en sık gözlenen patern, koreiform, distonik ve balistik hareketlerin klinik belirtilerinden oluşan pik doz diskinezidir. PD'nin 6-hidroksidopamin (6-OHDA) sıçan modeli, LID'lerin çeşitli özelliklerini taklit eder. Tekrarlanan L-DOPA uygulamasından sonra, 6-OHDA lezyonlu sıçanlar diskinetik benzeri hareketler sergiler (örneğin, anormal istemsiz hareketler, AIM'ler). Bu protokol, nigrostriatal yolakta% 90-95 dopaminerjik tükenme ile 6-OHDA lezyonlu sıçanlarda AIM'lerin nasıl indükleneceğini ve analiz edileceğini göstermektedir. Tekrarlanan L-DOPA uygulaması (3 hafta) (5 mg / kg, 12.5 mg / kg benserazid ile birlikte) AIM'lerin gelişimini indükleyebilir. Zaman seyri analizi, AIM'lerde 30-90 dakikada (pik doz diskinezi) önemli bir artış olduğunu ortaya koymaktadır. LID'lerin kemirgen modelleri, etkili antidiskinetik müdahaleleri tanımlamak için önemli bir klinik öncesi araçtır.
Giriş
Dopamin öncüsü L-3,4-dihidroksifenilalanin (L-DOPA), Parkinson hastalığının (PD) motor semptomları için en etkili tedaviyi temsil eder1. L-DOPA tedavisi PD ile ilişkili motor semptomları iyileştirebilir, ancak zamanla etkinliğini kaybeder. "Aşınma dalgalanması" veya "doz sonu bozulması" gibi motor dalgalanmalar, klinik olarak tek L-DOPA dozlarının etkisinin süresinin kısaltılması olarak kendini gösterir2. Diğer durumlarda, klinik bulgular yavaş büküm hareketleri ve anormal duruşlardan (distoni)3 oluşur ve dopamin seviyeleri düşük olduğunda ortaya çıkar (dönem dışı distoni)4....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm deneyler Ribeirão Preto'nun Felsefe, Fen Bilimleri ve Mektupları Fakültesi Etik Kurulu'na (CEUA/FFCLRP 18.5.35.59.5) uygun olarak gerçekleştirilmiştir.
1. 6-OHDA lezyonu
- Deneylerin başında (6 hafta) 200-250 g ağırlığındaki Sprague-Dawley erkek sıçanlarını kullanın. Hayvanları (kafes başına 2-3) standart laboratuvar koşullarında (12:12 saat aydınlık / karanlık döngüsü, saat 06:00'da ışıklar yanar, sıcaklık kontrollü tesisler (22-24 ° C), yiyecek ve su mevcut ad libitum ile barındırın.
NOT: Şiddetli 6-OHDA lezyonlu sıçanların nasıl üretileceğine dair tam bir açıklama başka bir yerde açıklanmıştır
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Sıçanlarda gözlenen AIM kalıpları, insanlarda ve insan olmayan primatlarda gözlemlenenlere kıyasla daha basit ve sınırlı olmasına rağmen, bu model kronik L-DOPA uygulaması tarafından indüklenen hem hiperkinetik hem de distonik benzeri hareketleri yeniden üretir. Burada, 3 hafta boyunca (Pazartesi-Cuma) kronik olarak L-DOPA (12.5 mg / kg benserazid ile birlikte 5 mg / kg) ile tedavi edilen tek taraflı 6-OHDA lezyonlu sıçanlardan oluşan bir gruptan (n = 10) toplanan veriler sunulmaktadır. Şekil 2, Şeki.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu protokol, MFB'de 6-OHDA'nın tek taraflı mikroenjeksiyonu ile indüklenen PD'nin sıçan modelinde AIM'lerin nasıl indükleneceğini ve analiz edileceğini göstermektedir. Düşük dozlarda L-DOPA'nın (5 mg / kg, 12.5 mg / kg benserazid ile birlikte) kronik günlük uygulaması, 3 haftalık tedavi boyunca AIM'lerin gelişimini sağlamıştır. Temporal analiz, AIM'lerde önemli bir artış olduğunu ortaya koydu ve L-DOPA uygulamasından 30 ila 90 dakika sonra pik doz diskinezi gözlendi. AIM'ler eksenel, uzuv ve orolingual kasları etkileyen .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların çıkar çatışması yoktur.
Teşekkürler
Bu çalışma São Paulo Araştırma Vakfı (FAPESP, hibe 2017/00003-0) tarafından desteklenmiştir. Yüksek Öğretim Personelinin İyileştirilmesi için Koordinasyon (CAPES) için minnettarız. Dr. Anthony R. West, Dr. Heinz Steiner ve Dr. Kuei Y. Tseng'e destek ve mentorluk için teşekkür ederiz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 6-hidroksidopamin hidrobromür | Sigma-Aldrich, ABD | H6507 | Katekolaminerjik terminallerin dejenerasyonuna neden olan nörotoksin |
| Benzerazid hidroklorür | Sigma | B7283 | Periferik dopa-dekarboksilaz inhibitörü |
| Kamera Bullet IR Turbo HD (HD-TVI) 2.8mm B | HIKVISION | DS-2CE16C0T-IRP | Tüm davranışları kaydetmek için kullanılan |
| kamera İmidramin hidroklorür | Alfa Aesar | J63723 | Noradrenerjik nöronları 6-OHDA'dan korumak için kullanılan norepinefrin taşıyıcı inhibitör (NET) |
| Ketamin hidroklorür | Ceva Hayvan Sağlığı | Cerrahi müdahale için | |
| anestezi L-3,4-dihidroksifenilalanin (L-DOPA) metil ester (hidroklorür) | Cayman Chemical Company | 16149 | Dopamin öncü |
| Aynaları | Deneyler sırasında hayvanların davranışlarını her yönden gözlemlemek için kullanılır | ||
| İğneler 0,30 x 13 mm | PrecisionGlide | İlaç enjekte etmek için kullanılan iğneler | |
| Sodyum klorür (NaCl) | Samtec | Tuz | |
| Şırıngaları 1 ml Steril | BD Plastipak | İlaç enjekte etmek için kullanılan şırıngalar | |
| Şeffaf silindirler | Deneyler sırasında hayvan davranışlarını kaydetmek için kullanılır | ||
| Ksilazin hidroklorür | Ceva Hayvan Sağlığı | Cerrahi müdahale için yatıştırıcı, analjezik ve kas gevşetici |
Kaynaklar
- Jenner, P. Molecular mechanisms of L-DOPA-induced dyskinesia. Nature Reviews. Neuroscience. 9 (9), 665-677 (2008).
- Nutt, J. G. Levodopa-induced dyskinesia: review, observations, and speculations. Neurology. 40 (2), 340-345 (1990).
- Luquin, M. R....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
