Burada, gül bengal kullanarak retinal ven tıkanıklığı için optimize edilmiş bir protokol ve genetiği değiştirilmiş suşlarda tekrarlanabilirliğini en üst düzeye çıkarmak için önerilerle lazer rehberliğinde retinal görüntüleme mikroskop sistemi açıklanmaktadır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Değişkenliği Sınırlamak için Retinal Ven Tıkanıklığı Fare Modelinin Optimizasyonu
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Retinal ven tıkanıklığının (RVO) fare modelleri, oftalmolojide nöral retinadaki hipoksik-iskemik hasarı incelemek için sıklıkla kullanılır. Bu raporda, kritik adımlara işaret eden ayrıntılı bir yöntem, genetiği değiştirilmiş farklı fare suşlarında tutarlı bir şekilde başarılı oklüzyon oranları elde etmek için optimizasyon önerileri ile birlikte sunulmuştur. RVO fare modeli, öncelikle bir fotosensitizör boyanın intravenöz olarak uygulanmasından ve ardından oftalmik kılavuzlu lazere bağlı retinal görüntüleme mikroskobu kullanılarak lazer fotokoagülasyonundan oluşur. Oklüzyon tutarlılığının belirleyicileri olarak üç değişken tanımlanmıştır. Gül bengal uygulamasından sonraki bekleme süresini ayarlayarak ve taban çizgisini ve deneysel lazer çıktısını dengeleyerek, deneyler arasındaki değişkenlik sınırlandırılabilir ve tıkanmaların daha yüksek bir başarı oranı elde edilebilir. Bu yöntem, retina ödemi ve hipoksik-iskemik yaralanma ile karakterize retina hastalıklarını incelemek için kullanılabilir. Ek olarak, bu model vasküler hasarı indüklediğinden, nörovaskülatür, nöronal ölüm ve inflamasyonu incelemek için de uygulanabilir.
Giriş
Retinal ven tıkanıklığı (RVO), 2015 yılında dünya çapında yaklaşık 28 milyon insanı etkileyen yaygın bir retinal vasküler hastalıktır1. RVO, çalışan yaşlı yetişkinlerde ve yaşlılarda görme azalmasına ve kaybına yol açarak, yakın on yılda artacağı tahmin edilen, görmeyi tehdit eden devam eden bir hastalığı temsil eder. RVO'nun belirgin patolojilerinden bazıları hipoksik-iskemik hasar, retina ödemi, inflamasyon ve nöronalkayıptır 2. Şu anda, bu bozukluğun ilk tedavi hattı vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF) inhibitörlerinin uygulanmasıdır. Anti-VEGF tedavisi retina ödemini iyileştirmeye yardımcı olurken, birçok hasta....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Bu protokol, Görme ve Oftalmoloji Araştırmaları Derneği'nin (ARVO) oftalmik ve görme araştırmalarında hayvanların kullanımı için yaptığı açıklamayı takip eder. Kemirgen deneyleri, Columbia Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmış ve izlenmiştir.
NOT: Tüm deneylerde yaklaşık 20 g ağırlığında iki aylık erkek fareler kullanılmıştır.
1. Floks genlerinin indüklenebilir genetik ablasyonu için tamoksifenin hazırlanması ve uygulanması
NOT: Retinal damar çapı, hayvanın ağırlığından etkilenebilir. Bir deney için kullanılan tüm hayvanların benzer ağırl....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
RVO fare modeli, retina damarlarında hipoksik-iskemik hasara, kan retina bariyerinin bozulmasına, nöronal ölüme ve retinal ödem8'e yol açan tıkanıklıkları başarılı bir şekilde elde etmeyi amaçlamaktadır. Şekil 1 , tekrarlanabilirliği sağlamak için adımların zaman çizelgesini, deneysel tasarımın bir şemasını gösterir ve deneysel sorulara bağlı olarak daha da optimize edilebilecek adımları özetler. Değiştirilebilecek üç ana adım, gül bengal uygulamasından sonraki beklem.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Fare RVO modeli, RVO patolojisini daha iyi anlamak ve potansiyel terapötikleri test etmek için bir yol sağlar. Fare RVO modeli sahada yaygın olarak kullanılsa da, değişkenliğini ele alan ve modelin optimizasyonunu açıklayan modelin mevcut ayrıntılı bir protokolüne ihtiyaç vardır. Burada, bir deney hayvanları kohortunda en tutarlı sonuçları elde etmek ve güvenilir veriler sağlamak için nelerin değiştirilebileceğine dair deneyimlerden örnekler içeren bir kılavuz sunuyoruz.
RVO fare modelinin en .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar, rekabet eden finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.
Teşekkürler
Bu çalışma, Ulusal Bilim Vakfı Lisansüstü Araştırma Burs Programı (NSF-GRFP) DGE - 1644869 (CCO'ya), Ulusal Göz Enstitüsü (NEI) 5T32EY013933 (AMP'ye) ve Ulusal Yaşlanma Enstitüsü (NIA) R21AG063012 (CMT'ye) tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Carprofen | Rimadyl | NADA # 141-199 | 4 & °C'de tutun; C |
| Mısır Yağı | Sigma-Aldrich | C8267 | |
| Fiber Bağlantı Kablosu | Thor Labs | M14L02 | |
| GenTeal | Alcon | 00658 06401 | |
| Ketamin Hidroklorür | Henry Schein | NDC: 11695-0702-1 | |
| Lasercheck | Tutarlı | 1098293 | |
| Fenilefrin | Akorn | NDCL174478-201-15 | |
| Meridyen ile Phoneix Micron IV, StreamPix ve OCT modülleri | Phoenix Technology Group | ||
| Proparacaine Hydrochloride | Akorn | NDC: 17478-263-12 | 4 & derece'de tutun; C |
| Yenileme | Alergan | 94170 | |
| Gül Bengal | Sigma-Aldrich | 330000-5G | |
| Tamoksifen | Sigma-Aldrich | T5648-5G | ışığa duyarlı |
| Tropicamide | Akorn | NDC: 174478-102-12 | |
| Ksilazin | Akorn | NDCL 59399-110-20 |
Kaynaklar
- Song, P., Xu, Y., Zha, M., Zhang, Y., Rudan, I. Global epidemiology of retinal vein occlusion: a systematic review and meta-analysis of prevalence, incidence, and risk factors. Journal of Global Health. 9 (1), 010427(2019).
- Ehlers, J. P., Fekrat, S.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
