Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Kornea Yara İyileşmesini İncelemek İçin Epitelyal Aşınma Modeli

3.5K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/63112

⸱

29 Aralık 2021

 ,  ,  ,  , 
1College of Optometry, University of Houston, 2Children’s Nutrition Research Center, Baylor College of Medicine, 3Center for Translational Research on Inflammatory Diseases (CTRID), Michael E. DeBakey Veterans Affairs Medical Center

Bu makalede

Özet

Burada, bir trefin ve künt bir golf kulübü spud kullanarak farede merkezi bir kornea epitelyal aşınma yarası oluşturmak için bir protokol açıklanmaktadır. Bu kornea yara iyileşmesi modeli yüksek oranda tekrarlanabilir ve şimdi hastalıklar bağlamında tehlikeye atılmış kornea yara iyileşmesini değerlendirmek için kullanılmaktadır.

Özet

Kornea görme için kritik öneme sahiptir ve gözün kırılma gücünün yaklaşık üçte ikisini oluşturur. Korneanın vizyondaki rolü için çok önemli olan şey şeffaflığıdır. Bununla birlikte, dış pozisyonu nedeniyle, kornea, kornea şeffaflığının kaybına ve nihai körlüğe yol açabilecek çok çeşitli yaralanmalara karşı oldukça hassastır. Bu yaralanmalara yanıt olarak etkili kornea yarasının iyileşmesi, kornea homeostazının korunmasında ve kornea saydamlığının ve kırma yeteneklerinin korunmasında çok önemlidir. Tehlikeye giren kornea yarası iyileşmesi durumunda, kornea enfeksiyonlara, ülserasyonlara ve yara izlerine karşı savunmasız hale gelir. Kornea yaralanması iyileşmesinin kornea şeffaflığının ve görmenin korunmasındaki temel önemi göz önüne alındığında, normal kornea yarası iyileşme sürecinin daha iyi anlaşılması, enfeksiyon ve hastalıkla ilişkili bozulmuş kornea yarasının iyileşmesini anlamak için bir ön koşuldur. Bu amaç doğrultusunda, kornea yaralanmasının murin modellerinin, normal fizyolojik koşullar altında çalışan kornea yarası iyileşme mekanizmalarını daha iyi anlamamızda yararlı olduğu kanıtlanmıştır. Burada, bir trefin ve künt bir golf kulübü spud kullanarak farede merkezi bir kornea epitel aşınması oluşturmak için bir protokol açıklanmaktadır. Bu modelde, yara bölgesini ayırmak için kornea üzerinde ortalanmış 2 mm çapında dairesel bir trefin kullanılır. Golf sıçrayışı, epiteli debride etmek ve kornea epitel bazal membranına zarar vermeden dairesel bir yara oluşturmak için özenle kullanılır. Ortaya çıkan enflamatuar yanıt, etkili yara iyileşmesi için kritik olan iyi karakterize edilmiş hücresel ve moleküler olayların bir kaskadı olarak ilerler. Bu basit kornea yara iyileşmesi modeli oldukça tekrarlanabilir ve iyi yayınlanmıştır ve şimdi hastalık bağlamında tehlikeye atılmış kornea yara iyileşmesini değerlendirmek için kullanılmaktadır.

Giriş

Kornea gözün üçte birinin saydam ön kısmıdır. Kornea gözün iç yapılarını korumak ve gözü enfeksiyonlara karşı koruyan yapısal bir bariyer oluşturmak da dahil olmak üzere çeşitli işlevlere hizmet eder1. Daha da önemlisi, kornea görme için kritik öneme sahiptir ve gözün kırılma gücünün yaklaşık üçte ikisini sağlar 2,3. Korneanın vizyondaki rolü için çok önemli olan şey şeffaflığıdır. Bununla birlikte, dışa doğru pozisyonu nedeniyle, kornea günlük olarak bariyer fonksiyonunun bozulmasına, şeffaflık kaybına ve nihai körlüğe yol açabilecek çok çeşitli yaralanmalara maruz kalmaktadır. Kornea saydamlık kaybı tüm dünyada görme bozukluğunun önde gelen nedenlerinden biridir 4,5. Kornea sıyrıkları, acil servise (ER) yapılan ziyaretlerin yaygın bir nedenidir ve ER6'da sunulan gözle ilgili vakaların yarısını oluşturur. Amerika Birleşik Devletleri'nde yılda 1 milyondan fazla kişinin gözle ilgili yaralanmalardan muzdarip olduğu tahmin edilmektedir7. Bu yaralanmalara yanıt olarak etkili kornea yarasının iyileşmesi, kornea homeostazının korunması, şeffaflığının ve kırma yeteneklerinin korunması için çok önemlidir. Tehlikeye giren kornea yarasının iyileşmesi durumunda, kornea enfeksiyonlara, ülserasyonlara ve yara izlerine karşı savunmasız hale gelir 8,9. Ayrıca, refraktif ameliyatların artan popülaritesi, kornea10'a benzersiz bir travmatik zorluk getirmektedir. Kornea yaralanması iyileşmesinin kornea şeffaflığının ve görmenin korunmasındaki temel önemi göz önüne alındığında, normal kornea yarası iyileşme sürecinin daha iyi anlaşılması, enfeksiyon ve hastalıkla ilişkili bozulmuş kornea yarasının iyileşmesini anlamak için bir ön koşuldur.

Bu amaçla, kornea yara iyileşmesinin çeşitli hayvan modelleri geliştirilmiştir11,12,13,14,15. Kornea yarasının iyileşmesinin murin modellerinin, normal fizyolojik koşullar altında çalışan kornea yarası iyileşme mekanizmalarını anlamamızı sağlamada yararlı olduğu kanıtlanmıştır. Kornea yarasının iyileşmesini incelemek için her biri yara iyileşme sürecinin farklı yönlerini araştırmak için uygun olan farklı kornea yaraları türleri kullanılmıştır. Kornea yara iyileşmesi çalışmalarında kullanılan en yaygın yara modeli tipleri mekanik ve kimyasal yara modelleridir. Çoğunlukla korneada alkali yanıkların oluşumunu içeren kimyasal kornea yaraları, kornea ülserlerini, opaklaşmayı ve neovaskülarizasyonu incelemek için yararlıdır13. Mekanik kornea yaraları debridman (aşınma) yaralarını ve keratektomi yaralarını içerir14,15,16. Sağlam veya kırılmış kornea epitel bazal membranı sırasıyla debridman ve keratektomi yaralarını tanımlar. Debridman yaralarında epitel bazal membranı sağlam kalırken, keratektomi yaralarında çoğunlukla anterior stromaya penetrasyon ile bazal membran kırılır. Debridman yaraları, kornea yaralanmasını takiben yeniden epitelizasyon, epitel hücre proliferasyonu, immün yanıt ve sinir rejenerasyonunu incelemek için en yararlı olanlardır. Keratektomi yaraları ise kornea skarlaşmasının incelenmesinde en yararlı olanıdır14,15.

Burada, bir trefin ve künt bir golf kulübü spud kullanarak farede merkezi bir kornea epitelyal aşınma yarası oluşturmak için bir protokol açıklanmaktadır. Bu basit kornea yara iyileşmesi modeli oldukça tekrarlanabilir ve iyi yayınlanmıştır ve şimdi hastalık bağlamında tehlikeye atılmış kornea yara iyileşmesini değerlendirmek için kullanılmaktadır17.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm hayvan protokolleri, Houston Üniversitesi ve Baylor Tıp Fakültesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komiteleri tarafından onaylanmıştır. Görme ve Oftalmoloji Araştırmaları Derneği (ARVO) bildirisinde özetlenen ve hayvanların görme ve oftalmik araştırmalarda kullanımına ilişkin kılavuzlar, farelerin ele alınmasında ve kullanılmasında takip edilmiştir.

1. Hazırlık

  1. Floresein çözeltisinin hazırlanması
    1. 10 mg sodyum floresein tuzunu 1 mL steril salin veya steril 1x fosfat tamponlu salin (PBS) içinde çözerek% 1 floresein çözeltisi hazırlayın.
      NOT: Mikrobiyal kontaminasyonu önlemek için sodyum floresein çözeltisini kullanım gününde veya bir gün önce hazırlayın. Kullanımdan bir gün önce hazırlandığında, floresein çözeltisini ışıktan 4 ° C'de saklayın. Fotobeyazlatmayı önlemek için tüpleri alüminyum folyo ile sarın.
    2. Çözeltiyi tek bir deneyde kullanıma uygun alikotlara bölün. Zaman noktası başına fare başına 1-1,5 μL floresein çözeltisi kullanılır. Tek bir denemeye uygun aliquot hacmini hesaplamak için aşağıdaki formülü kullanın:
      figure-protocol-1
      NOT: Örneğin, beş zaman noktasında izlenen yara büyüklüğüne sahip tek bir deneyde altı fare incelenirse, bu tek deney için uygun olan aliquot hacmi şöyle olacaktır:
      figure-protocol-2
  2. Farelerin anestezisi için ketamin / ksilazin kokteylinin hazırlanması.
    1. 10 mL kokteyl hazırlamak için, 2.0 mL ketamin (100 mg / mL) ile 1.0 mL ksilazin (20 mg / mL) karıştırın ve 7.0 mL steril PBS ekleyin. Ketamin / ksilazin kokteylini ameliyattan bir gün önce veya ameliyat günü hazırlayın.
      NOT: Aksi belirtilmedikçe tüm çözeltiler oda sıcaklığında kullanılmalıdır.

2. Anestezi

  1. Uygulanacak uygun anestezik miktarını belirlemek için fareyi (8-12 haftalık C57BL/6 vahşi tip fareler) tartın. Anestezik18'in enjeksiyonu için fareleri kısıtlamak ve işlemek için iki elli fare kısıtlama tekniğini kullanın. Ketamin / ksilazin kokteylini intraperitoneal olarak (i.p.) 80 mg / kg ketamin ve 8 mg / kg ksilazin nihai konsantrasyonunda uygulayın.
  2. Fareye kornea yaralaması yapmadan önce tam anestezi elde edilene kadar bekleyin. Ayak parmağını sıkıştırdıktan sonra pedal refleksini değerlendirerek anestezi derinliğini değerlendirin. Yeterli anestezi sağlandığında, fare ayak parmağını sıkıştırmak için hareket etmemelidir.
    NOT: Fareler anestezi sırasında vücut ısısını hızla kaybettiğinden, hipotermiyi önlemek için farelere bir sıcaklık kaynağı sağlamak önemlidir. Anestezi ve iyileşme aşamalarında fareleri bir ısı kaynağına (ısıtma yastığı) yerleştirin.

3. Kornea yarası oluşumu

  1. Sadece sağ veya sol gözü yaralayın. Fareden fareye geçerken yaralanan gözle (yani sol veya sağ) tutarlılığı koruyun.
    NOT: Aşınmalar kornea sinirlerine zarar verdiğinden ve keskinliği azalttığından, her iki gözün yaralanması önemli rahatsızlıklara ve bozulmalara neden olabilir. Analjezikler enflamatuar yanıtları baskılama potansiyeline sahip olduklarından, kullanımları kornea iltihabını anlamayı amaçlayan bazı deneylerde kafa karıştırıcı olabilir. Kornea yarası deneylerinde analjeziklerden kaçınmak, Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitemiz (IACUC) tarafından onaylanmıştır.
  2. Epitel kornea yarası oluşturmak için
    1. Diseksiyon mikroskobu altında, korneanın merkezini ayırmak için 2 mm çapında trefin kullanın (bkz. Şekil 1), göz kapaklarını tutmak için baş parmak ve işaret parmağını kullanarak gözü geniş tutun. Kornea epiteli üzerinde bir izlenim bırakmak için trefin'i yavaşça döndürün.
      NOT: Trefin kullanırken aşırı basınç uygulanmamasına dikkat edilmelidir, çünkü bu kornea perforasyonuna neden olabilir. Ayrıca, trefinin merkezi olarak konumlandırılmasına özen gösterilmelidir. Öğrenciler korneanın merkezini bulmak için bir dönüm noktası olarak kullanılabilir.
    2. Diseksiyon yapan bir mikroskop altında, künt golf spodu (bkz. Şekil 1), trefin ile sınırlandırılmış alan içinde kornea yüzeyinden yaklaşık 45 ° 'de tutun. Epiteli debride debride etmek için sınırlanmış bölgedeki epiteli dikkatlice ve sürekli olarak pud ile kazıyın.
      NOT: Debridmanda aşırı kuvvet uygulamayın, çünkü bu da kornea perforasyonuna neden olabilir. Farelerin gözleri yaralama işlemi sırasında kuruyabilir ve bu da debridmanı zorlaştırır. Böyle bir durumda, optimum hidrasyonu sağlamak için oküler yüzeye steril PBS uygulayın.

figure-protocol-3
Resim 1: 2 mm trefin ve künt golf sopası spud. Trefin, kornea merkezinde dairesel bir bölgeyi sınırlamak için kullanılır ve golf kulübü spud'u, sınırlandırılmış bölgedeki epiteli çıkarmak için kullanılır. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

4. Yara kapanmasının izlenmesi ve yeniden epitelizasyonun izlenmesi

  1. Pipet 1-1.5 μL% 1 floresein çözeltisi mavi ışık kaynaklı dijital bir mikroskop kullanarak yaralı yüzey ve görüntü korneası üzerine.
  2. Yara boyutunun abartılmasına yol açan çevredeki epitellere yayılmasını önlemek için floresan çözeltisinin ilk dakikasında görüntüler elde edin. Yaralı kornealar, yaralanmadan sonra belirli zamanlarda (yani, 0 saat, 12 saat, 18 saat, 24 saat ve 30 saat) görüntülenir.
    NOT: Tüm zaman noktalarında, görüntüleme anestezi altında yapılır; ketamin / ksilazin yaralama sırasında kullanılırken, izofluran sonraki zaman noktalarında kullanılır. Fareler, yara kapanma izleme süresi boyunca ayrı kafeslerde ayrı ayrı tutulur. Birlikte barındırıldığında, fareler çöp arkadaşının gözlerini yalama eğilimindedir, bu da farklı dokularda yara iyileşmesini etkilediği gösterilen bir davranış19,20.
  3. Bir görüntü analiz yazılımı kullanarak yara alanını izleyerek yakalanan görüntüleri analiz edin. Her zaman noktası için yara alanı, 0 saatte orijinal yara alanının yüzdesi olarak ifade edilir.

5. İmmünofloresan görüntüleme ve analizi

  1. IACUC onaylı bir yöntemle (bu durumda, karbondioksit doz aşımı ve ardından servikal çıkık) fareleri, yaralamadan sonra istenen zaman noktalarında ötenazileştirin.
  2. İris kavisli makas kullanarak göz küresini yerinden etmek için yanal canthus'a hafifçe bastırarak göz kürelerini toplayın. Optik siniri sıkıca kavramak için makası göz küresinin arkasına yönlendirin ve ardından göz küresinin çıkarılmasını sağlayan siniri kesin.
  3. Her bir göz küresini, oda sıcaklığında 1 saat boyunca% 2 paraformaldehit içeren 1 mL'lik 1x PBS'ye sabitleyin ve ardından her biri 5 dakika boyunca 1 mL'lik 1x PBS'de üç kez yıkayın.
  4. Diseksiyon mikroskobu altında, sklerada bir kesi yapmak için bir cerrahi bıçak kullanın, limbusa yaklaşık 500 μm distal ve daha sonra dünyayı kesin. Forseps kullanarak, iris maddesini korneadan nazikçe çıkarın ve daha sonra limbus'u sağlam bıraktığınızdan emin olarak skleral dokuyu dikkatlice kesin.
  5. Her biri yaklaşık 1 mm uzunluğunda, periferik korneadan uzanan ve korneanın düzleşmesine izin vermek için merkezden kısa duran dört kısmi radyal kesim yapın.
  6. Korneaları 15 dakika boyunca 1 mL% 2 sığır serum albümini (BSA) ve% 0.01 TritonX -100'de 1x PBS'de% 0.01 TritonX -100'de geçirgenleştirin ve bloke edin, ardından oda sıcaklığında 45 dakika daha 1x PBS'de% 2 BSA'da bloke edin.
  7. Korneaları% 2 BSA içeren 1x PBS'de hazırlanan doğrudan etiketlenmiş benzersiz florokrom konjuge antikorlardan oluşan bir kokteylde 4 ° C'de gece boyunca inkübe edin.
    NOT: Antikorlar, ilgilenilen belirli hücreleri ve dokuları etiketlemek için hedeflenir. Örneğin, endotel, nötrofiller ve trombositler sırasıyla anti-CD31 21,22, anti-Ly-6G 23,24 ve anti-CD41 25,26 antikorları ile etiketlenmiştir. Çekirdekleri görselleştirmek için antikor kokteyline 4',6-diamidino-2-fenilindol (DAPI) eklenir.
  8. Kuluçkadan sonra, korneaları her biri 15 dakika boyunca 1x PBS'de üç kez yıkayın.
  9. Korneaları mikroskop üzerine bir damla solma önleyici floresan montaj ortamına monte edin, bir kapak kayması ile örtün ve bir floresan ışık mikroskobu kullanarak istenen büyütme (4x ila 100x objektif) ile görüntü. Şekil 2A'da gösterildiği gibi korneanın farklı bölgelerdeki tam kalınlıkta görüntülerini alın.
    NOT: Şekil 2A'da gösterilen mikroskobik analiz paterni, inflamasyon ve hücre bölünmesindeki spesifik bölgesel değişiklikleri analiz etmek için kullanılır. Hem DAPI hem de Ly-6G boyama, ekstravasküler nötrofilleri tanımlamak için kullanılır. DAPI boyama ile, küresel nötrofiller farklı bir at nalı veya çörek şeklinde çekirdeğe sahiptir (Şekil 2B).

figure-protocol-4
Şekil 2: Kornea görüntüleme stratejisi ve merkezi aşınma sonrası nötrofil infiltrasyonu . (A) Kornea çapı boyunca dokuz mikroskobik alan gösteren bir kornea bütününün şematik gösterimi. Gri alan orijinal yara alanını temsil eder. Her bölgenin genişliği 500 μm'dir. (B) DAPI boyaması ile nötrofil çekirdeklerinin farklı at nalı veya çörek şeklini not edin. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Şekil 3 , künt golf sopası spud'u ile oluşturulan bir kornea yarasının iletim elektron mikrografını göstererek, epitel bazal membranının yaralanmadan sonra gerçekten sağlam olduğunu göstermektedir.

figure-results-1
Şekil 3: Epitelyal bazal membran kornea aşınmasından sonra bozulmadan kalır. Künt golf sopası spud'u ile...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu yöntem makalesinin amacı, bir trefin ve künt bir golf sopası tükürüğü kullanarak farede merkezi bir kornea epitelyal aşınma yarası oluşturmak için bir protokolü tanımlamaktı. Bu murin modeli, kornea iltihabını ve yara iyileşmesine katkısını incelemek için kullanılmıştır. Bu tip bir model, normal fizyolojik koşullar altında vepatolojilerde kornea yarası iyileşme mekanizmalarını incelemek için kullanılabilir 17,28,29,41,42.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyleri yoktur.

Teşekkürler

Finansman: Destekleyen: NIH EY018239 (A.R.B., C.W.S. ve R.E.R.), P30EY007551 (A.R.B.) ve Sigma Xi Grant in Aid of Research (P.K.A.). İçerik yalnızca yazarların sorumluluğundadır ve Ulusal Sağlık Enstitüleri veya Sigma Xi'nin resmi görüşlerini temsil etmemektedir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Anti-CD31 antikoruBD Bioscience, Pharmingen550274
Anti-CD41 antikoruBD Bioscience, Pharmingen553847
Anti-Ly6G antikoruBD Bioscience, Pharmingen551459
Sığır serum albümini (BSA)ThermoFisher scientificB14
C57BL/6 farelerJackson Laboratuvarları664
DAPISigma AldrichD8417
DeltaVision geniş alan evrişim floresan mikroskobuGE Yaşam Bilimleri
Diseksiyon mikroskobuLeica microsystems
Elektronik Üstten Yüklemeli Teraziler (Tartı)Fisher Scientific
EthanolThermoFisher scientificT038181000CS
Golf sopası spud,Stephens aletleriS2-1135
İris eğrisi makasıFisher Scientific31212
İzofluran,Patterson veteriner07-893-1389
KetaminPatterson, veteriner07-890-8598
Fosfat tamponlu salin (PBS),ThermoFisher, bilimselAM9624
Sodyum floresein tuzuSigma Aldrich46970
Cerrahi bıçak (scapel bıçağı)Güzel Bilim araçları10022-00
TrephineIntegra Miltex33-31
TritonX -100Fisher Scientific50-295-34
ForcepGüzel Bilim araçları11923-13
XylazinePatterson veteriner07-808-1947
, , , , , , , ,

Kaynaklar

  1. DelMonte, D. W., Kim, T. Anatomy and physiology of the cornea. Journal of Cataract and Refractive Surgery. 37 (3), 588-598 (2011).
  2. Meek, K. M., Knupp, C. Corneal structure and transparency. Progress in Retinal and Eye Research. 49, 1-16 (2015).
  3. Sridhar, M. S. Anatomy of cornea and ocular surface. Indian Journal of Ophthalmology. 66 (2), 190-194 (2018).
  4. Flaxman, S. R., et al. Global causes of blindness and distance vision impairment 1990-2020: a systematic review and meta-analysis. The Lancet Global Health. 5 (12), 1221-1234 (2017).
  5. Robaei, D., Watson, S. Corneal blindness: A global problem. Clinical & Experimental Ophthalmology. 42 (3), 213-214 (2014).
  6. McGwin, G., Owsley, C. Incidence of emergency department-treated eye injury in the United States. Archives of Ophthalmology. 123 (5), 662-666 (2005).
  7. Ljubimov, A. V., Saghizadeh, M. Progress in corneal wound healing. Progress in Retinal and Eye Research. 49, 17-45 (2015).
  8. Wilson, S. L., Haj, A. J. E., Yang, Y. Control of scar tissue formation in the cornea: Strategies in clinical and corneal tissue engineering. Journal of Functional Biomaterials. 3 (3), 642(2012).
  9. Vaidyanathan, U., et al. Persistent corneal epithelial defects: A review article. Medical Hypothesis, Discovery and Innovation in Ophthalmology. 8 (3), 163-176 (2019).
  10. Netto, M., et al. Wound healing in the cornea: a review of refractive surgery complications and new prospects for therapy. Cornea. 24 (5), 509-522 (2005).
  11. Friedenwald, J. S., Buschke, W. Some factors concerned in the mitotic and wound-healing activities of the corneal epithelium. Transactions of the American Ophthalmological Society. 42, 371-383 (1944).
  12. Xu, K., Yu, F. -S. X. Impaired epithelial wound healing and EGFR signaling pathways in the corneas of diabetic rats. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 52 (6), 3301-3308 (2011).
  13. Bai, J. Q., Qin, H. F., Zhao, S. H. Research on mouse model of grade II corneal alkali burn. International Journal of Ophthalmology. 9 (4), 487-490 (2016).
  14. Blanco-Mezquita, J. T., Hutcheon, A. E. K., Stepp, M. A., Zieske, J. D. αVβ6 integrin promotes corneal wound healing. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 52 (11), 8505-8513 (2011).
  15. Blanco-Mezquita, J. T., Hutcheon, A. E. K., Zieske, J. D. Role of thrombospondin-1 in repair of penetrating corneal wounds. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 54 (9), 6262-6268 (2013).
  16. Stepp, M. A., et al. Wounding the cornea to learn how it heals. Experimental Eye Research. 121, 178-193 (2014).
  17. Hargrave, A., et al. Corneal dysfunction precedes the onset of hyperglycemia in a mouse model of diet-induced obesity. PLoS ONE. 15, 0238750(2020).
  18. Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. Manual restraint and common compound administration routes in mice and rats. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (67), e2771(2012).
  19. Bodner, L., Dayan, D. Effect of parotid submandibular and sublingual saliva on wound healing in rats. Comparative Biochemistry and Physiology. Part A, Physiology. 100 (4), 887-890 (1991).
  20. Abbasian, B., Azizi, S., Esmaeili, A. Effects of rat's licking behavior on cutaneous wound healing. Iranian Journal of Basic Medical Sciences. 13 (1), 242-247 (2010).
  21. DeLisser, H. M., et al. Involvement of endothelial PECAM-1/CD31 in angiogenesis. The American Journal of Pathology. 151 (3), 671-677 (1997).
  22. Piali, L., et al. CD31/PECAM-1 is a ligand for alpha v beta 3 integrin involved in adhesion of leukocytes to endothelium. The Journal of Cell Biology. 130 (2), 451-460 (1995).
  23. Fleming, T. J., Fleming, M. L., Malek, T. R. Selective expression of Ly-6G on myeloid lineage cells in mouse bone marrow. RB6-8C5 mAb to granulocyte-differentiation antigen (Gr-1) detects members of the Ly-6 family. The Journal of Immunology. 151 (5), 2399-2408 (1993).
  24. Fleming, T. J., Malek, T. R. Multiple glycosylphosphatidylinositol-anchored Ly-6 molecules and transmembrane Ly-6E mediate inhibition of IL-2 production. The Journal of Immunology. 153 (5), 1955-1962 (1994).
  25. Phillips, D. R., Charo, I. F., Scarborough, R. M. GPIIb-IIIa: the responsive integrin. Cell. 65 (3), 359-362 (1991).
  26. Nieswandt, B., et al. Acute systemic reaction and lung alterations induced by an antiplatelet integrin gpIIb/IIIa antibody in mice. Blood. 94 (2), 684-693 (1999).
  27. Li, Z., Burns, A. R., Rumbaut, R. E., Smith, C. W. γδ T cells are necessary for platelet and neutrophil accumulation in limbal vessels and efficient epithelial repair after corneal abrasion. American Journal of Pathology. 171 (3), 838-845 (2007).
  28. Liu, Q., Smith, C. W., Zhang, W., Burns, A. R., Li, Z. NK cells modulate the inflammatory response to corneal epithelial abrasion and thereby support wound healing. American Journal of Pathology. 181 (2), 452-462 (2012).
  29. Gao, Y., et al. NK cells are necessary for recovery of corneal CD11c+ dendritic cells after epithelial abrasion injury. Journal of Leukocyte Biology. 94 (2), 343-351 (2013).
  30. Xiao, C., et al. Acute tobacco smoke exposure exacerbates the inflammatory response to corneal wounds in mice via the sympathetic nervous system. Communications Biology. 2, 33(2019).
  31. Wang, H., et al. Epothilone B speeds corneal nerve regrowth and functional recovery through microtubule stabilization and increased nerve beading. Scientific Reports. 8 (1), 2647(2018).
  32. Li, Z., Burns, A. R., Smith, C. W. Lymphocyte function-associated Antigen-1-dependent inhibition of corneal wound healing. Cell Injury. 169, 1590-1600 (2006).
  33. Wu, M., et al. The neuroregenerative effects of topical decorin on the injured mouse cornea. Journal of Neuroinflammation. 17 (1), 1-14 (2020).
  34. Rodrigues, M., Kosaric, N., Bonham, C. A., Gurtner, G. C. Wound healing: A cellular perspective. Physiological Reviews. 99 (1), 665-706 (2019).
  35. Rennard, S. I. Inflammation and repair processes in chronic obstructive pulmonary disease. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 160 (5), Pt 2 12-16 (1999).
  36. Landén, N. X., Li, D., Ståhle, M. Transition from inflammation to proliferation: a critical step during wound healing. Cellular and Molecular Life Sciences. 73 (20), 3861-3885 (2016).
  37. Li, Z., Rumbaut, R. E., Burns, A. R., Smith, C. W. Platelet response to corneal abrasion is necessary for acute inflammation and efficient re-epithelialteation. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 47, 4794-4802 (2006).
  38. Lam, F. W., Burns, A. R., Smith, C. W., Rumbaut, R. E. Platelets enhance neutrophil transendothelial migration via P-selectin glycoprotein ligand-1. American Journal of Physiology - Heart and Circulatory Physiology. 300 (2), 468-475 (2011).
  39. La Cruz, A. D., et al. Platelet and erythrocyte extravasation across inflamed corneal venules depend on CD18, neutrophils, and mast cell degranulation. International Journal of Molecular Sciences. 22 (14), 7360(2021).
  40. Li, Z., Burns, A. R., Smith, C. W. Two waves of neutrophil emigration in response to corneal epithelial abrasion: Distinct adhesion molecule requirements. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 47 (5), 1947-1955 (2006).
  41. Li, Z., Burns, A. R., Han, L., Rumbaut, R. E., Smith, C. W. IL-17 and VEGF Are Necessary for Efficient Corneal Nerve Regeneration. The American Journal of Pathology. 178 (3), 1106-1116 (2011).
  42. Xue, Y., et al. Modulation of circadian rhythms affects corneal epithelium renewal and repair in mice. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 58 (3), 1865-1874 (2017).
  43. Zhang, W., Magadi, S., Li, Z., Smith, C. W., Burns, A. R. IL-20 promotes epithelial healing of the injured mouse cornea. Experimental Eye Research. 154, 22-29 (2017).
  44. Li, Z., Burns, A. R., Miller, S. B., Smith, C. W. CCL20, γδ T cells, and IL-22 in corneal epithelial healing. FASEB Journal. 25 (8), 2659-2668 (2011).
  45. Li, Z., Burns, A. R., Han, L., Rumbaut, R. E., Smith, C. W. IL-17 and VEGF are necessary for efficient corneal nerve regeneration. American Journal of Pathology. 178 (3), 1106-1116 (2011).
  46. Reins, R. Y., Hanlon, S. D., Magadi, S., McDermott, A. M. Effects of topically applied Vitamin D during corneal wound healing. PLoS ONE. 11 (4), 0152889(2016).
  47. Gagen, D., et al. ICAM-1 mediates surface contact between neutrophils and keratocytes following corneal epithelial abrasion in the mouse. Experimental Eye Research. 91 (5), 676-684 (2010).
  48. Li, Z., Rivera, C. A., Burns, A. R., Smith, C. W. Hindlimb unloading depresses corneal epithelial wound healing in mice. Journal of Applied Physiology. 97 (2), 641-647 (2004).
  49. Byeseda, S. E., et al. ICAM-1 is necessary for epithelial recruitment of γδ T cells and efficient corneal wound healing. American Journal of Pathology. 175 (2), 571-579 (2009).
  50. Li, Z., Burns, A. R., Rumbaut, R. E., Smith, C. W. γδ T cells are necessary for platelet and neutrophil accumulation in limbal vessels and efficient epithelial repair after corneal abrasion. American Journal of Pathology. 171 (3), 838-845 (2007).
  51. Petrescu, M. S., et al. Neutrophil interactions with keratocytes during corneal epithelial wound healing: A role for CD18 integrins. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 48 (11), 5023-5029 (2007).
  52. Pal-Ghosh, S., Pajoohesh-Ganji, A., Tadvalkar, G., Stepp, M. A. Removal of the basement membrane enhances corneal wound healing. Experimental Eye Research. 93 (6), 927-936 (2011).
  53. Pal-Ghosh, S., et al. Cytokine deposition alters leukocyte morphology and initial recruitment of monocytes and γδT cells after corneal injury. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 55 (4), 2757-2765 (2014).
  54. Pal-Ghosh, S., Tadvalkar, G., Jurjus, R. A., Zieske, J. D., Stepp, M. A. BALB/c and C57BL6 mouse strains vary in their ability to heal corneal epithelial debridement wounds. Experimental Eye Research. 87 (5), 478-486 (2008).
  55. Kato, T., Chang, J. H., Azar, D. T. Expression of type XVIII collagen during healing of corneal incisions and keratectomy wounds. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 44 (1), 78-85 (2003).
  56. Kure, T., et al. Corneal neovascularization after excimer keratectomy wounds in matrilysin-deficient mice. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 44 (1), 137-144 (2003).
  57. Lin, A., et al. Bacterial keratitis preferred practice pattern. Ophthalmology. 126 (1), 1-55 (2019).
  58. Cable, E. J., Onishi, K. G., Prendergast, B. J. Circadian rhythms accelerate wound healing in female Siberian hamsters. Physiology and Behavior. 171, 165-174 (2017).
  59. Lyons, A. B., Moy, L., Moy, R., Tung, R. Circadian rhythm and the skin: A review of the literature. Journal of Clinical and Aesthetic Dermatology. 12 (9), 42-45 (2019).
  60. Westman, J., Grinstein, S., Marques, P. E. Phagocytosis of Necrotic Debris at Sites of Injury and Inflammation. Frontiers in Immunology. 10, 3030(2020).
  61. Gaudry, M., et al. Intracellular pool of vascular endothelial growth factor in human neutrophils. Blood. 90 (10), 4153-4161 (1997).
  62. Pan, Z., et al. Vascular endothelial growth factor promotes anatomical and functional recovery of injured peripheral nerves in the avascular cornea. FASEB Journal. 7, 2756-2767 (2013).
  63. Di, G., et al. VEGF-B promotes recovery of corneal innervations and trophic functions in diabetic mice. Scientific Reports. 7 (1), 1-13 (2017).
  64. Thomas, M. R., Storey, R. F. The role of platelets in inflammation. Thrombosis and Haemostasis. 114 (3), 449-458 (2015).
  65. Margraf, A., Zarbock, A. Platelets in inflammation and resolution. The Journal of Immunology. 203 (9), 2357-2367 (2019).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Kornea ŞeffaflığıMurin Kornea ModeliBazal MembranYara Kapanmasıİnflamatuar YanıtFlüoresein BoyamaDijital MikroskopiGörüntü Analizi
Kornea Yara İyileşmesini İncelemek İçin Epitelyal Aşınma Modeli
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.