Bu protokol, FVB farelerde arka bacak kangrenini indüklemek için femoral arter ve ven elektrokoagülasyonunu nitrik oksit sentaz inhibitörü uygulamasıyla birleştiren benzersiz, klinik olarak ilgili bir periferik arter hastalığı modelini tanımlamaktadır. İntrakardiyak DiI perfüzyonu daha sonra ayak yastığı vaskülatürünün yüksek çözünürlüklü, üç boyutlu görüntülenmesi için kullanılır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Murin Arka Ekstremite Kangren Modelinde Footpad Vaskülatürünün Yüksek Çözünürlüklü Üç Boyutlu Görüntülenmesi
Bu makalede
Özet
Özet
Periferik arter hastalığı (PAH), aterosklerotik risk faktörlerine kronik maruziyet sonucu ortaya çıkan önemli bir morbidite nedenidir. En şiddetli formu olan kronik uzuvları tehdit eden iskemiden (CLTI) muzdarip hastalar, kronik ağrı, ağrısız sınırlı yürüme mesafesi ve iyileşmeyen yaralar dahil olmak üzere günlük yaşamda önemli bozukluklarla karşı karşıyadır. PAD'i incelemek için çeşitli hayvanlarda preklinik modeller geliştirilmiştir, ancak fare arka bacak iskemisi en yaygın kullanılanı olmaya devam etmektedir. Bu modellerde iskemik hakarete cevaben, kullanılan fare suşuna ve arteriyel bozulmanın yerine, sayısına ve araçlarına bağlı olarak önemli farklılıklar olabilir. Bu protokol, CLTI'nin doku kaybına benzeyen Friend Virus B (FVB) farelerinde ayak tabanı kangrenini güvenilir bir şekilde indüklemek için femoral arter ve ven elektrokoagülasyonunu nitrik oksit sentaz (NOS) inhibitörü uygulamasıyla birleştiren benzersiz bir yöntemi açıklamaktadır. Lazer Doppler perfüzyon görüntüleme (LDPI) gibi geleneksel reperfüzyon değerlendirme yöntemleri hala önerilmekle birlikte, vaskülatürü etiketlemek için lipofilik boya 1,1'-dioktadesil-3,3,3',3'-tetrametilindokarbosiyanin perkloratın (DiI) intrakardiyak perfüzyonu kullanılmaktadır. Daha sonraki tam montajlı konfokal lazer tarama mikroskopisi, arka bacak iskemi modellerinde reperfüzyonu değerlendirmenin geleneksel yollarını tamamlayan ayak yastığı vasküler ağlarının yüksek çözünürlüklü, üç boyutlu (3D) rekonstrüksiyonuna izin verir.
Giriş
Ateroskleroz nedeniyle ekstremitelere kan akışının azalması ile karakterize periferik arter hastalığı (PAD), Amerika Birleşik Devletleri'nde 6,5 milyon kişiyi ve dünya çapında 200 milyon insanı etkilemektedir1. PAD'li hastalar uzuv fonksiyonlarında ve yaşam kalitesinde azalma yaşarken, PAD'in en şiddetli formu olan CLTI'lı hastalar, 5 yıllık mortalite oranı %50'ye yaklaşarak amputasyon ve ölüm riski altındadır2. Klinik pratikte, ayak bileği-brakiyal indeksleri (ABI) <0.9 olan hastalarda PAD, ABI <0.4 olanlarda ise dinlenme ağrısı veya doku kaybı ile ilişkili CLTI3 olarak kabul edilir. Semptomlar b....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Protokolde açıklanan tüm hayvan deneyleri, Miami Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır. Çalışma için 8-12 haftalık hem erkek hem de dişi FVB fareleri kullanıldı.
1. L-NAME çözeltisinin hazırlanması
- Laminer bir davlumbazda steril koşullar altında, 50 mg/mL'lik bir çözelti oluşturmak için 1 g L-NAME tozunu ( Malzeme Tablosuna bakınız) 20 mL steril suyla çözerek bir L-NAME stok çözeltisi hazırlayın. Stok çözeltisini -20 °C'de 300-500 μL alikotlarda 3 aya kadar saklayın.
- Çalışan bir L-NAME çözeltisi yapmak için, L-NAME stok çözeltisinin bi....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bu protokol, duyarlı FVB farelerde bir nitrik oksit sentaz inhibitörü olan L-NAME uygulaması ile femoral arter ve ven pıhtılaşmasının bir kombinasyonunu kullanarak murin ayak pedinde iskemi ve doku kaybını indüklemek için güvenilir bir aracı detaylandırır. Şekil 1, murin arka ekstremite vaskülatürünün anatomisini detaylandırır ve lateral circumflex femoral artere (LCFA) sadece proksimal ve safenopopliteal bileşkeye proksimal olan femoral arter ve ven pıhtılaşmasının (sarı X) yerlerini göster.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Fare arka bacak iskemisi, PAD ve CLTI'da neovaskülarizasyonu incelemek için en yaygın kullanılan preklinik model olsa da, kullanılan spesifik fare suşuna ve arteriyel bozulmanın yerine, sayısına ve yöntemine bağlı olarak iskemi şiddeti ve iyileşmesinde önemli farklılıklar vardır. Femoral arter ligasyonu ve L-NAME'in IP uygulamasının kombinasyonu, FVB farelerde arka bacak kangrenini güvenilir bir şekilde indükleyebilir11. Aynı tedavi, C57BL / 6 farelerde doku kaybı olmadan arka bacak iskemisi ile s.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacağı bir çıkar çatışması yoktur.
Teşekkürler
Bu çalışma, Ulusal Sağlık Enstitüleri'nden [R01HL149452 ve VITA (NHLBl-CSB-HV-2017-01-JS)] Z-J L ve OC V'ye verilen hibelerle desteklenmiştir. Ayrıca, Miami Üniversitesi Tıp Fakültesi'ndeki Felç Tedavisi için Miami Projesi'nin Mikroskopi ve Görüntüleme Tesisi'ne, görüntü analiz ve işleme yazılımlarına erişim sağladığı için teşekkür ederiz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Bağlayıcı klipsler (küçük) | Ofis malzemeleri mağazası | ||
| Buprenorfin (sürekli salımlı) | |||
| Kelebek iğne (Luer-Lok ile 25 G) | VWR | 10148-584 | |
| Konfokal lazer tarama mikroskobu | Leica | TCS SP5 | |
| DiI (1,1'-Dioktadesil-3,3,3',3'-tetrametilindokarbosiyanin perklorat) | Invitrogen | D282 | |
| Elektrokoter cihazı | İkizler Koter Sistemi | 5917 | |
| Etanol (%100) | VWR | 89370-084 | |
| Fiji (ImageJ) yazılımı | NIH | Kullanılan sürüm 2.1.0. Ücretsiz indirin, lisans gerekmez. | |
| Köpük biyopsi pedleri | Fisher Scientific | 22-038-221 | |
| Formalin (nötr tamponlu,% 10) | VWR | 89370-094 | |
| FVB fareleri | Jackson Laboratuvarı | 001800 | |
| Glikoz | Sigma-Aldrich | G7528 | |
| HCl (1 M) | Sigma-Aldrich | 13-1700 | |
| Imaris yazılımı | Oxford Instruments | 9.6.0 sürümü kullanıldı. | |
| İzofluran | Pivetal | NDC 46066-755-04 | |
| KCl | Sigma-Aldrich | P9333 | |
| Ketamin | |||
| L-NAME (Nω-Nitro-L-arginin metil ester hidroklorür) | Sigma-Aldrich | N5751 | |
| Lazer Doppler perfüzyon görüntüleyici | MoorLDI | moorLDI2-HIR | Kullanılan moorLDI V5 yazılımı. |
| Mikroskop slaytları (25 x 75 x 1 mm) | VWR | 48311-703 | |
| Na2HPO4 | Sigma-Aldrich | S7907 | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | S7653 | |
| NaH2PO4 | Sigma-Aldrich | S8282 | |
| NaOH | Sigma-Aldrich | S8263 | |
| İğneler (27 G) | BD | 305109 | |
| Povidon-iyot çubukla sopa (%10) | Medline | MDS093901ZZ | |
| Cerrahi aletler | Roboz Cerrahi | İnce forseps, iğne ucu, yaylı makas ve kanama durdurucu önerilir. | |
| Sütür (5-0 emilebilir) | DemeTECH | G275017B0P | |
| Şırıngalar (10 mL) | BD | 305482 | |
| Üç musluklar | Cole-Parmer | 19406-49 | |
| Vasküler Analiz Eklentisi | Ücretsiz indirin, lisans gerekmez. Referansa bakın: Elfarnawany (2015). | ||
| Ksilazin |
Kaynaklar
- Virani, S. S., et al. Heart disease and stroke statistics-2020 update: A report from the American Heart Association. Circulation. 141 (9), 139(2020).
- Duff, S., Mafilios, M. S., Bhounsule, P., Hasegawa, J. T. The burden of ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
