Method Article

Üç Günlük Gelişmekte Olan Civciv Embriyosu Kullanılarak Hook İskemi-Reperfüzyon Modelinin Üretimi

DOI:

10.3791/63288

⸱

February 19th, 2022

 ,  ,  ,  ,  , 
1Laboratory for Stem Cell and Restorative Neurology, Department of Biotechnology, Era’s Lucknow Medical College Hospital, Era University, 2Era University, 3Department of Stem Cell Biology and Regenerative Medicine, Era University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu makalede, I/R gelişimini ve tedavisini daha iyi anlamak için omurilik iğnesi özelleştirilmiş kanca kullanılarak 3 günlük civciv embriyosunda iskemi-reperfüzyon (I/R) modellemesi açıklanmaktadır. Bu model basit, hızlı ve ucuzdur.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Miyokard enfarktüsü, inme ve periferik vasküler hastalık gibi iskemi ve reperfüzyon (I/R) bozuklukları hastalık ve ölümün önde gelen nedenlerinden birkaçıdır. Birçok in vitro ve in vivo model şu anda hastalık veya hasarlı dokularda I/R mekanizmasını incelemek için mevcuttur. Bununla birlikte, bugüne kadar, I/R mekanizmalarının daha iyi anlaşılmasını ve daha hızlı ilaç taramasını sağlayacak ovo I/R modelinde hiçbir şey bildirilmemiştir. Bu makalede, I/R gelişim ve tedavi mekanizmalarını anlamak için 3 günlük civciv embriyosunda omurilik iğnesi özelleştirilmiş kanca kullanılarak yapılan I/R modellemesi açıklanmaktadır. Modelimiz DNA, RNA ve protein seviyelerindeki anomalileri araştırmak için kullanılabilir. Bu yöntem basit, hızlı ve ucuzdur. Mevcut model bağımsız olarak veya mevcut in vitro ve in vivo I/R modelleri ile birlikte kullanılabilir.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

İskemi-reperfüzyon dokusu hasarı kalp krizi, iskemik inme, travma ve periferik vasküler hastalık dahil olmak üzere bir dizi patoloji ile bağlantılıdır1,2,3,4,5. Bunun nedeni öncelikle hastalığın ilerlemesinin kapsamlı bir şekilde anlaşılmaması ve etkili bir araştırma modelinin bulunmamasıdır. İskemik yaralanma, dokunun belirli bir bölgesine kan akışı kesildiğinde meydana gelir. Sonuç olarak, iskemik doku sonunda nekrotize edilir, ancak oran dokuya bağlı olarak değişir. Bu nedenle, kan akışının geri yüklenme....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Era's Lucknow Tıp Koleji ve Hastanesi Kurumsal Hayvan Etik Komitesi, bu deneylerin Hayvanlar Üzerinde Deneylerin Kontrol ve Gözetimi Komitesi (CPCSEA) uyarınca yapılması için resmi bir onay gerek olmadığını belirten yazılı bir feragatname yayınladı. Bununla birlikte, embriyonik sıkıntı potansiyelini en aza indirmek için Standart Çalışma Prosedürleri izlendi.

1. Tampon hazırlama (Tablo 1)

  1. Ringer'ın çözümünü hazırlayın
    1. Ringer'ın çözümünü hazırlamak için, 0,72 g NaCl (123 mM), 0,017 g CaCl2 (1,53 mM), 0,037 g KCl (4,96 mM) 70 mL steril damıtılmış H2O'da son hacim 100 mL çözün. pH'ı 7,4'e....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Modelimizin etkinliğini değerlendirmek için Doppler Kan Akışı Görüntüleme tekniği kullanılmıştır. Kısacası, yarattığımız başarıyı belirlemek için kontrol grubundan gelen verileri RVA grubundan gelen verilerle karşılaştırdık. Şekil 4A , kontrol hayvanıyla ilişkili tipik bir akıyı tasvir ederken, Şekil 4B

.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

İskemi-reperfüzyon araştırmalarının amacı, hücre ölümünü önleyen ve iyileşmeyi teşvik eden terapötik stratejiler oluşturmaktır29,30. I/R araştırmalarındaki mevcut kısıtlamaların üstesinden gelmek için güvenilir ve tekrarlanabilir bir I/R modeli üretmek için hook I/R civciv embriyo modeli tasarladık. Bilgimize göre, bizimki, stres sinyallerini (örneğin, oksidatif ve enflamatuar stres) incelemenin yanı sıra, rutin I /R deneyleri için 3 günlük civciv embriyosunda ol.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar rakip çıkarlar beyan etmemektedir.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Videografi ve düzenleme sırasındaki eleştirel girişleri için Hari Shankar'a, seslendirme için Bay Baqer Hussain'e, video düzenleme için Bay Asghar Rizvi'ye, video çekimleri için Bay Mohammad Haider'e, deneyler sırasında yardım için Bay Mohammad Danish Siddiqui'ye şükranlarımızı sunmak istiyoruz.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
(-80& derece; C) dondurucuHaier,
Santrifüj tüpüTARSONS, Hindistan500010X
100mm Petri kabı (steril)Tarsons, Hindistan460050
18G İğne (18G ve kez; 1.5 (1.25&kez; 38mm)Ramsons, Hindistan13990
1mL ŞırıngaDISPO VAN-26G
İğne (26G ve kez; 1/2 (10.45x13mm)DISPO VAN, Hindistan30722D
37° Ayarlanabilir nem yüzdesi ile C yumurta kuluçka makinesiGentek, HindistanGL-100
37 & derece; C laboratuvar inkübatörüSCIENCE TECH, HindistanCB 101-14
3-Metiladenin (3-MA)Sigma Aldrich, ABDM9281
3 mL Mera PipetiTARSONS, Hindistan940050
50 mL BeherTARSONS,Hindistan-5
mL ŞırıngaDISPO VAN, HindistanIP53
%70 etanolMerck Millipore, Amerika Birleşik Devletleri64-17-5
Yapışkan bant / Çello bandıGündoğumu,Hindistan-Ambra1
astarlarıUygulamalı Biyosistemler, Foster şehir, ABDHs00387943_m1
Anti-fare IgGHücre Sinyal Teknolojisi, ABD7076S
711-035-152
Atg7 Ar-Ge D Systems, ABDMAB6608
Atg7 primerleriApplied Biosystems, Foster city, ABDHs00893766_m1
Otoklav TorbasıTarsons, Hindistan550022
Otoklav MakinesiYerel yapım, Lucknow,
Proteintech, ABD66665-1-IG
Beta AktinImmunoTag, ABDITT07018
Sığır Serumu Albümin Himedia, Mumbai, HindistanTC194
Kalsiyum KlorürHimedia, Mumbai, HindistanGRM534
KatalazImmunoTag, ABDITT5155
Temizleme mendilleriKimberly-Clark, Hindistan370080
Bölünmüş Kaspaz3ImmunoTag, ABDITT07022
di-Sodyum hidrojen fosfat heptahidratHimedia, Mumbai, HindistanGRM39611
Doppler kan akış ölçerMoors enstrümanı, Birleşik KrallıkmoorVMS-LDF1
Yumurta rafı
GAPDH
ImmunoTag, ABDM1000110
GAPDH primerleriUygulamalı Biyosistemler, Foster şehir, ABD
GlycineHimedia, Mumbai, HindistanMB013
Böbrek tepsisiHOSPITO-LC3A
/BHücre Sinyalizasyon Teknolojisi, ABD4108S
MetanolRankem laboratuvarları, Mumbai, HindistanM0252
MikromanipülatörNarishige, JaponyaM-152
N-asetil-L-sistein (NAC)Sigma Aldrich, ABDA7250
NaringeninSigma Aldrich, ABD67604-48-2
NF-k ve beta;Thermo Fisher Scientific, ABD51-0500
NLRP3ImmunoTag, ABDITT07438
Burun pensesiYerel yapım, Lucknow,Hindistan-Oküler
forsepsÇalmak, Almanya52106-40
Oküler irisTufft Cerrahi Aletler, Jaipur, HindistanSert Yaş Vannas Mikro Makas Açılı 8CM / 3 1/8 "
OHP işaretleyici kalemCamlin,
ImmunoTag, ABDITT08329
Sivri keskin kenarlı makasÇalma, Almanya52132-11
Potasyum KlorürHimedia, Mumbai, HindistanMB043
Potasyum fosfat monobazik susuzHimedia, Mumbai, HindistanMB050
Proteaz İnhibitörüAbcam, Amerika Birleşik DevletleriAb65621
SOD-1ImmunoTag, ABDITT4364
Sodyum KlorürFisher Scientific, Mumbai, Hindistan27605
Sodyum dodesil sülfatHimedia, Mumbai, HindistanGRM886
Omurga iğnesi 25GA; 3,50 INÇ (90,51 X 90mm)Ramson, HindistanGS-2029
Stereo Zoom cerrahi mikroskopOlympus, JaponyaSZ2-STU3
Şırınga ıskartaBIOHAZARD882210
Dişli forsepsÇalma, Almanya52102-30
Tris BaseG Biosciences, Amerika Birleşik DevletleriRC1217
Tris Hidroklorik AsitHimedia, Mumbai, HindistanMB030
Tween 20G Biosciences, Amerika Birleşik DevletleriRC1227
Beyaz Leghorn Tavuk 0 günlük yumurtalar-
Z-Val-Ala-Asp (OMe) -FMKMP Biomedicals, LLC, ABDFK009
Çin-1.5mL Anti-Tavşan IgG Jackson İmmüno-Araştırma Laboratuvarları, ABD Hindistan-Beclin-1 - Yumurta rafı - Hs02758991_g1 Hindistan-ORP-150

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Fauzia, E., et al. Chick Embryo: A Preclinical Model for Understanding Ischemia-Reperfusion Mechanism. Frontiers in Pharmacology. 21 (9), 1034(2018).
  2. Eltzschig, H. K., Eckle, T. Ischemia and reperfusion--from mechanism to translation. Nature Med....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Ischemia ReperfusionChick Embryo ModelIn Ovo ModelHook Ischemia ModelDoppler Blood FlowRight Vitelline ArteryWestern BlottingAutophagy MarkersInflammatory CytokinesApoptosis Pathways

Related Articles