Farelerde beyin bölgelerini hedeflemek için stereotaksik cerrahi genellikle kafatası kemiklerinden erişimi içerir ve kafatası yer işaretleri tarafından yönlendirilir. Burada, beyin sapı yer işaretlerinin doğrudan görselleştirilmesine dayanan sarnıç magna aracılığıyla kaudal beyin sapı ve üst servikal omuriliği hedeflemek için alternatif bir stereotaksik yaklaşımı özetlemekteyiz.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Farelerde Cisterna Magna ile Kaudal Beyin Sapı ve Üst Servikal Omuriliğin Mikroenjekte Edilmesine Stereotaksik Cerrahi Yaklaşım
Bu makalede
Özet
Özet
Farelerde beyin bölgelerini hedeflemek için stereotaksik cerrahi genellikle kafatası yer işaretleri tarafından yönlendirilir. Erişim daha sonra kafatasından delinmiş çapak delikleri aracılığıyla elde edilir. Bu standart yaklaşım, belirli anatomik zorluklar nedeniyle kaudal beyin sapı ve üst servikal kordondaki hedefler için zorlayıcı olabilir, çünkü bu bölgeler kafatası yer işaretlerinden uzaktır ve belirsizliğe yol açar. Burada, kaudal beyin sapı ve üst servikal kordondaki ayrı ilgi bölgelerini hedeflemek için kullanılan cisterna magna aracılığıyla alternatif bir stereotaksik yaklaşımı özetlemekteyiz. Sarnıç magna, oksipital kemikten atlasa (yani ikinci vertebral kemiğe) kadar uzanır, beyin omurilik sıvısı ile doldurulur ve dura mater ile kaplanır. Bu yaklaşım, anatomik engeller nedeniyle ulaşılması zor olan seçilmiş merkezi sinir sistemi (CNS) yapılarına yeniden üretilebilir bir erişim yolu sağlar. Ayrıca, beyin sapı işaretlerinin hedef bölgelere yakın bir yerde doğrudan görselleştirilmesine izin vererek, kaudal beyin sapı ve üst servikal kordondaki sınırlı ilgi alanlarına küçük enjeksiyon hacimleri verirken doğruluğu arttırır. Son olarak, bu yaklaşım, motor ve sensorimotor çalışmalar için önemli olabilecek beyincikten kaçınmak için bir fırsat sağlar.
Giriş
Farelerde beyin bölgelerini hedeflemek için standart stereotaksik cerrahi1 genellikle kafatasının bir dizi kulak çubuğu ve bir ağız çubuğu kullanılarak sabitlenmesini içerir. Koordinatlar daha sonra referans atlasları 2,3 ve kafatası yer işaretlerine, yani bregma (frontal ve parietal kemiklerin dikişlerinin bir araya geldiği nokta) veya lambda (parietal ve oksipital kemiklerin dikişlerinin bir araya geldiği nokta; Şekil 1A,B). Tahmini hedefin üzerindeki kafatasına bir çapak deliğinden sonra, mikroenjeksiyonların verilmesi veya kanüller veya....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Yazar, protokolün Beth Israel Deaconess Tıp Merkezi'ndeki Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi'nin yönergelerini izlediğini beyan eder.
1. Cerrahi aletlerin ve stereotaksik çerçevenin hazırlanması
NOT: Ameliyat aseptik koşullar altında yapılır. Sterilite steril uç tekniği kullanılarak korunur.
- Stereotaksik kolu, stereotaksik çerçeveye enjekte edilebilir bir seçenek (adeno ilişkili virüs (AAV) veya geleneksel izleyici) ile doldurulmuş bir mikropipet veya şırınga ile takın ve fare adaptörünü hazırlayın (Şekil 2A).
- Otoklavlanmış cerrahi aletl....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Sarnıç magna yaklaşımı, standart stereotaksik yaklaşımlarla ulaşılması zor olan veya tutarsız hedeflemeye eğilimli olan kaudal beyin sapı ve üst servikal kord yapılarını hedeflemeyi mümkün kılar. Sarnıç magnasına ulaşma ameliyatı, cildin insizyonlarını, ince bir trapezius kası tabakasını ve dura materin açılmasını gerektirir ve bu nedenle fareler tarafından iyi tolere edilir. Standart stereotaksik yaklaşımlarda olduğu gibi birden fazla çapak deliğinin delinmesini gerektirmediğinden, birden fazla (uzunlamasına da.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Standart stereotaksik cerrahi, CNS1'deki hedef bölgelerin koordinatlarını hesaplamak için genellikle kafatası işaretlerine dayanır. Hedef bölgelere daha sonra kafatası1'den delinen çapak delikleri aracılığıyla erişilir. Bu yöntem, kaudal beyin sapı için ideal değildir, çünkü hedef bölgeler anteroposterior ve dorsoventral düzlemlerdeki kafatası işaretlerinden uzakta bulunur2 ve kafatası ve üstteki kasların anatomisi6'ya
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyleri yoktur.
Teşekkürler
Bu çalışma R01 NS079623, P01 HL149630 ve P01 HL095491 tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Alkol pedi | Med-Vet International | SKU: cerrahi | alan enfeksiyonunun önlenmesi için MDS090735Z cilt hazırlığı |
| Açılı forseps, Dumont #5/45 | FST | 11251-35 | sadece dura |
| Betadine pedini | Med-Vet International | SKU:PVP-PAD | cerrahi alan enfeksiyonunun önlenmesi için cilt hazırlığı |
| Kolera toksin alt birimi-b, Alexa Fluor 488/594 eşlenik | Thermo Fisher Scientific | 488: C34775, 594: C22842 | Floresan izleyici |
| Clippers | Wahl | Model MC3, 28915-10 | cerrahi alanda kürk tıraş etmek için |
| Köşe kelepçeli elektrot tutucu | Kopf | 1770 | cam pipeti tutmak için |
| Akış ölçer | Gilmont aletleri | model # 65 MM | düzlemde |
| fareye izofluran ve oksijen akışını düzenlemek içinFloresan mikro küreler, polistiren | Thermo Fisher Scientific | F13080 | Floresan izleyici |
| Isıtma yastığı | Çalma | 53800M | termoregülasyon |
| Portu bağlantı kitli indüksiyon odası | Midmark Inc | 93805107 92800131 ilk anestezi sağlayan | |
| İnsülin Şırıngası | Exelint International | 26028 | salin ve analjezik uygulamak için |
| Isoflurane | Med-Vet International | SKU:RXISO-250 | uçucu anestezik |
| İzofluran Matris VIP 3000 buharlaştırıcı | Midmark Inc | 91305430 | inhalan anestezik uygulama için aparat |
| Laminektomi forseps, Dumont #2 | FST | 11223-20 | sadece dura |
| Medical havasını temizlemek için, basınçlı | Linde | UN 1002 | stimülatör ile kullanılır & Hassas çözelti enjeksiyonu için hava sağlamak için PicoPump |
| Meloxicam SR | Zoo Pharm LLC | Lot # MSR2-211201 | analjezik |
| Microhematocrit borosilikat cam önceden kalibre edilmiş kılcal tüp | Globe Scientific Inc | 51628 | malzemenin belirlenen koordinatlara transfeksiyonu için |
| Fare adaptörü | Çalma | 0051625 | Fare cerrahisi için sıçan stereotaksik çerçevenin uyarlanması |
| İğne tutucu, Öğrenci Halsted- Sivrisinek Hemostatları | Dikiş atmak için | FST | 91308-12 |
| Oksijen regülatörü | Yaşam Destek Ürünleri | S/N 909328, lot 092109 | oksijen tankından oksijen seviyelerini düzenler |
| Oksijen tankı, sıkıştırılmış | Linde | USP UN 1072 | izofluran ile birlikte sağlanır anastezi |
| Plastik kart | değil uygulanabilir | uygulanamaz | herhangi bir sert plastik kart, stereotaktik çerçeveye uyacak şekilde kesilmiş (örn. kimlik kartı) |
| Pnömatik PicoPump (veya benzeri) | Dünya Hassas Aletler (WPI) | SYS-PV820 | Hassas çözelti enjeksiyonu için |
| Salin, steril | Mountainside Tıbbi Ekipman | H04888-10 | ameliyat sırasında kaybedilen vücut sıvılarını yerine koymak için |
| Neşter sapı, #3 | FST | 10003-12 | neşter tutun |
| Makas, Wagner | FST | 14070-12 | polipropilen sütür kesmek için |
| Yaylı makas, Vannas 2.5mm beraberindeki kutu ile | FST | 15002-08 | makas sadece dura'yı açmak için, vücudu yükseltmek için kutu |
| Koordinatlara | |||
| Stereotaktik 'U' çerçeve düzeneği ve hücre içi taban plakası | Kopf | 1730-B, 1711 | ameliyat çerçevesi |
| Steril pamuk uçlu aplikatörler | Puritan | 25-806 10WC | cerrahi alandan kan emici |
| Steril fenestre olmayan örtüler | Steril cerrahi alan için | Henry Schein | 9004686 |
| Steril oftalmik merhem | Puralube | P1490 | oküler yağlayıcı |
| Stimülatör & Hassas | çözelti enjeksiyonu için kontrollü ön hava sağlamak için | Çimi Tıbbi Aletler | S44 |
| Cerrahi Bıçak #10 | Med-Vet International | Cilt insizyonu için | 10SS |
| Cerrahi forseps, Cildi tutmak için ekstra ince Graefe | FST | 11153-10 | |
| Cerrahi eldivenler | Med-Vet International | aseptik cerrahi | |
| için MSG2280ZCerrahi alanın | 5X-40X büyütmesi için | Leica | Model M320/ F12 |
| kapatmak için | Sütür 5-0 polipropilen | Oasis | MV-8661 |
| Tegaderm | 3M | 3M ID 70200749250 | steril bariyer sağlar |
| Üniversal Kelepçe ve stand direği | Kopf | 1725 | stereotaktik U çerçeveye ve hücre içi taban plakasına bağlı |
| Yara kancası hartman kanama durdurucular | FST | 18200-09, 13003-10 | kasları ayırmak ve cerrahi pencere sağlamak için |
Kaynaklar
- JoVE. Rodent Stereotaxic Surgery. JoVE Science Education Database. , Neuroscience (2021).
- Paxinos, G., Franklin, K. B. J. The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , Academic Press. (2001).
- Lein, E. S., et al.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
