Method Article

Fekal Mikrobiyota Transplantasyonunun İnterlökin 10 Eksikliği Olan Fare Modelinde Terapötik Değerlendirmesi

DOI:

10.3791/63350

⸱

April 6th, 2022

 ,  ,  , 
1Division of Gastroenterology, Department of Internal Medicine, University of Texas Medical Branch at Galveston, 2Department of Gastroenterology, Xiangya Hospital of Central South University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Genetik duyarlılık, mukozal bağışıklık ve intestinal mikroekolojik ortamın etkileşimi, inflamatuar barsak hastalığının (İBH) patogenezinde rol oynar. Bu çalışmada, IL-10 eksikliği olan farelere fekal mikrobiyota transplantasyonu uygulanmış ve kolonik inflamasyon ve kalp fonksiyonu üzerine etkisi araştırılmıştır.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Son yıllarda mikroekolojinin gelişmesiyle birlikte, bağırsak bakterileri ile inflamatuar bağırsak hastalığı (İBH) arasındaki ilişki oldukça dikkat çekmiştir. Biriken kanıtlar, disbiyotik mikrobiyotanın İBH'de inflamatuar süreci tetiklemede veya kötüleştirmede aktif bir rol oynadığını ve fekal mikrobiyota transplantasyonunun (FMT) çekici bir terapötik strateji olduğunu, çünkü sağlıklı bir mikrobiyotanın İBH hastasına aktarılmasının uygun konakçı-mikrobiyota iletişimini yeniden kurabileceğini göstermektedir. Bununla birlikte, moleküler mekanizmalar belirsizdir ve FMT'nin etkinliği çok iyi belirlenmemiştir. Bu nedenle, IBD'nin hayvan modellerinde daha ileri çalışmalara ihtiyaç vardır. Bu yöntemde, FMT'yi vahşi tip C57BL / 6J farelerden, yaygın olarak kullanılan bir fare kolit modeli olan IL-10 eksikliği olan farelere uyguladık. Çalışma, donör farelerden dışkı peletlerinin toplanması, dışkı çözeltisinin / süspansiyonunun yapılması, dışkı çözeltisinin uygulanması ve hastalığın izlenmesi üzerinde durmaktadır. FMT'nin IL-10 nakavt farelerinde kardiyak bozukluğu önemli ölçüde azalttığını ve IBD yönetimi için terapötik potansiyelinin altını çizdiğini bulduk.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

İnsan bağırsak mikro ekosistemi, sağlıklı bir insanın bağırsağında 1000'den fazla bakteri türü ile son derece karmaşıktır1. Bağırsak florası, bağırsağın normal fizyolojik fonksiyonlarının ve bağışıklık tepkisinin korunmasında rol oynar ve insan vücudu ile ayrılmaz bir ilişkiye sahiptir. Biriken kanıtlar, bağırsak mikrobiyomunun sadece bir grup parazit değil, insan vücudunun bir parçası olan son insan organını oluşturduğunu göstermektedir2. Bağırsak mikrobiyotası, metabolitleri ve erken yaşamda kurulan konakçı bağışıklık sistemi arasındaki 'sağlıklı' simbiyotik bir ilişki, bağırsak homeostazını korumak için kritik öneme s....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hayvanlar üzerinde gerçekleştirilen tüm prosedürler, Galveston'daki Teksas Üniversitesi Tıp Şubesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanmıştır (Protokol # 1512071A).

1. Taze dışkı peletlerinin toplanması

  1. Steril kağıt havlular, künt uçlu forsepsler ve 50 mL konik tüpler hazırlayın.
    1. Bazı kağıt havluları ve forsepsleri ayrı otoklav torbalara koyun ve 30 dakika boyunca kuru ısıda 180 °C'de otoklav yapın. Steril konik tüpler de kullanın. Konik tüpleri tartın ve ağırlıklarını tüplere yazın.
  2. Hayvan odasındaki biyogüvenlik dolabını açın.
  3. Herhangi bir yatak t....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

2 aylık C57BL/6J vahşi tip (WT) ve IL-10 nakavt farelere 3 kez (3 ay boyunca ayda bir kez) sağlıklı donör FMT uyguladık. Yaş uyumlu C57BL / 6J fareler (yaş farkı <2 ay olmalıdır) fekal donör olarak görev yaptı ve her seferinde taze dışkı peletleri kullanıldı. ÇED tahlilleri, IL-10 eksikliği olan farelerin plazmasında BNP'nin belirgin şekilde yükseldiğini ve sağlıklı donör FMT'nin BNP düzeylerindeki artışı önemli ölçüde azalttığını ortaya koymuştur (Şekil 1A, n = 5, p < 0.05). .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yenilikçi bir araştırma tedavisi olarak FMT, kommensal mikrobiyotanın disbiyozunun IBD, obezite, diabetes mellitus, otizm, kalp hastalığı ve kanser dahil olmak üzere birçok insan hastalığının patogenezinde rol oynamasından bu yana son yıllarda çeşitli bozuklukların tedavisinde sıcak bir konu haline gelmiştir26. Mekanizma belirlenmemiş olmasına rağmen, FMT'nin yeni bir biyolojik flora oluşturarak ve artık bakteri kaybını önleyerek çalıştığına inanılmaktadır. Burada sunulan yöntem, oral gavajı doğum.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar, rakip çıkarları olmadığını beyan ederler.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, kısmen, Ulusal Sağlık Enstitüleri'nden (R01 HL152683 ve R21 AI126097'den Q. Li'ye) ve Amerikan Kalp Derneği Grant-in-Aid 17GRNT33460395 (Q. Li'ye) (heart.org) tarafından desteklenmiştir.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
BD Şırınga, 1 mLFisher Scientific14-829-10F
Künt uçlu forsepsKnipex926443
Beyin natriüretik peptit ÇED kitiSigmaRAB0386
C57BL / 6J farelerJackson Lab000664
SantrifüjEppendorf5415R
Konik tüplerThermoFisher339650
Kavisli besleme İğneleriKent ScientificFNC-20-1.5-2
GLH-115 homojenizatörOmni InternationalGLH-115
GliserolMilliporeSigmaG5516
IL-10 nakavt farelerJackson Lab004366
İzofluranPiramal Yoğun bakımNDC66794-017-10
USP normal tuzlusu Grainger6280
BuharlaştırıcıEuthanex Corp.EZ-108SA

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. D'Argenio, V., Salvatore, F. The role of the gut microbiome in the healthy adult status. Clinica Chimica Acta. 451, Pt A 97-102 (2015).
  2. Baquero, F., Nombela, C. The microbiome as a human organ. Clinical Microbiology and Infection. 18, Suppl 4 2-4 (2012).
  3. Haw....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Fecal Microbiota TransplantationInterleukin 10 DeficientInflammatory Bowel DiseaseMouse Colitis ModelOral GavageFecal Suspension PreparationCardiac ImpairmentBiosafety CabinetEnzyme ImmunoassayEchocardiography

Related Articles