Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

6-Hidroksidopamin Kaynaklı Yetişkin Zebra Balığı Bazlı Parkinson Hastalığı Modelinin Lokomotor Değerlendirmesi

3.9K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/63355

⸱

28 Aralık 2021

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Collaborative Drug Discovery Research (CDDR) Group and Brain Degeneration and Therapeutics Group, Faculty of Pharmacy, Universiti Teknologi MARA (UiTM), Cawangan Selangor, Kampus Puncak Alam, 2Department of Medicine, Faculty of Medicine, Universiti Malaya

Bu makalede

Özet

Bu protokol, yetişkin zebra balıklarının ventral diensefalonda (Dn) nörotoksik 6-hidroksidopamin (6-OHDA) ile intraserebroventriküler (ICV) enjeksiyonunu ve bir video izleme yazılımı kullanılarak analizin eşlik ettiği açık tank testi kullanılarak yüzme davranışı postlezyonunun bozulmasının ve daha sonra iyileşmesinin değerlendirilmesini açıklamaktadır.

Özet

Parkinson hastalığında (PD) dopaminerjik nöronal kaybı geciktirmede mevcut tedavilerin sınırlamaları, bu nöronları geri yükleyebilecek alternatif tedavilere olan ihtiyacı artırmaktadır. Şu anda preklinik in vivo modeller kullanılarak nörorejenerasyonun daha iyi anlaşılması için çok çaba sarf edilmektedir. Bununla birlikte, kendi kendini onarmak için bu rejeneratif yetenek, memelilerde verimsizdir. Zebra balığı gibi memeli olmayan hayvanlar, sürekli kendini yenileme ve insanlara yakın bir beyin homolojisine sahip olma kabiliyeti nedeniyle mükemmel bir nörorejeneratif model olarak ortaya çıkmıştır. İn vivo nörorejenerasyonda yer alan hücresel olayları aydınlatma çabalarının bir parçası olarak, 6-hidroksidopamin (6-OHDA) kaynaklı yetişkin zebra balığı bazlı PD modelini kurduk. Bu, zebra balığı beyninin ventral diensefalonunda (Dn) dopaminerjik nöronları (DpN) spesifik olarak ablate etmek için 99.96 mM 6-OHDA'nın optimize edilmiş intraserebroventriküler (ICV) mikroenjeksiyonu ile elde edildi. İmmünofloresan, postlezyonun üçüncü gününde DpN ablasyonunun %85'inden fazlasını ve lezyonlu bölgede 30 günlük postlezyonda DpN'nin tam restorasyonunu gösterdi. Bu çalışma, lezyonu takiben zebra balığı yüzme davranışının bozulmasını ve ardından iyileşmesini, kat edilen mesafe (cm) ve ortalama hız (cm / s) olmak üzere iki parametrenin ölçüldüğü açık alan testi kullanılarak belirlemiştir. Hareket, video izleme yazılımı kullanılarak her grubun (n = 6) ayrı balıklarının kayıtlarını analiz ederek değerlendirildi. Bulgular, lezyonlu zebra balıklarının 3 gün postlezyonunda (p) shamile kıyasla hızlarında (cm / s) ve kat edilen mesafede (cm) anlamlı bir azalma (p < 0.0001) gösterdi. Lezyonlu zebra balığı, 30 gün sonra yüzme davranışının tamamen iyileştiğini gösterdi. Mevcut bulgular, 6-OHDA lezyonlu yetişkin zebra balığının, PD'de nörorejenerasyonun incelenmesini kolaylaştırmak için tekrarlanabilir kalitede mükemmel bir model olduğunu göstermektedir. nörorejenerasyonun altında yatan mekanizmaların yanı sıra süreci modüle eden içsel ve dışsal faktörler üzerine gelecekteki çalışmalar, PD'ye karşı yeni hücre replasman tedavi stratejileri hakkında önemli bilgiler sağlayabilir.

Giriş

Parkinson hastalığı (PD), kas sertliği, istirahat titremesi ve bradikinezi ile belirgin bir şekilde karakterize bir hastalık, dünyada en hızlı büyüyen nörolojik hastalıktır1,2. Özellikle 50 yaş ve üzeri bireylerde PD riski ve prevalansı yaşla birlikte hızla artmaktadır3. PH'nin etiyolojisi ve patogenezi bugüne kadar tam olarak anlaşılamamıştır. Bu genellikle PD'nin erken başlangıcını tanı konmamış bırakmıştır. Şu anda, PD hastalarında dopamin eksikliği ve dopaminerjik nöronların (DpN) kaybı, motor semptomların tezahürü ile güçlü bir şekilde bağlantılıdır4. Bu ilişkiden yararlanarak, doğrudan dopamin replasmanı (yani levodopa) olarak hareket etmek veya DpN kaybını (yani derin beyin stimülasyonu) telafi etmek için çeşitli tedaviler tasarlanmıştır. Bu tedaviler semptomatik faydalar sağlasa da, hastalığın kötüleşen seyrini değiştirmez5. Bu önemli zayıflık göz önüne alındığında, hücre replasman tedavisi önerilmiştir. Bununla birlikte, bu yaklaşımın etkinliği, greft hazırlama, hücre büyüme kontrolü ve fenotip instabilitesinin zorlukları göz önüne alındığında tutarsızdır. Etik kaygıları artıran hücre replasman tedavisi, beyin tümörlerini ve istenmeyen bağışıklık reaksiyonlarını tetikleme riskini de beraberinde getirmektedir6,7.

Mevcut terapötik stratejilerin sınırlılıkları, PD tedavisinde potansiyel bir yaklaşım olarak DpN'nin rejenerasyonuna daha fazla vurgu yapılmasına yol açmıştır. DpN veya nörorejenerasyonun rejenerasyonu, sadece yeni bir terapötik yöntem olarak potansiyeli nedeniyle değil, aynı zamanda hastalığın mekanizmasını anlama aracı olarak da PD'nin yönetiminde umut verici atılımlardan biri olarak ortaya çıkmıştır8, 9. Bu yaklaşım, farklılaşma, migrasyon ve mevcut progenitör hücrelerin lezyonlu devreye entegrasyonu yoluyla nöronal fonksiyonun restorasyonuna odaklanmaktadır10. Nörorejenerasyonu daha fazla araştırmak için, çeşitli in vivo çalışmalar yapılmıştır. Memeliler, amfibiler ve sürüngenler gibi omurgalıların yaralanma sonrası yeni beyin hücreleri ürettikleri bulunmuştur11,12. Omurgalılar arasında, memeli hayvanlar, insanlara genetik benzerlikleri nedeniyle daha çok aranmaktadır. Bununla birlikte, memeliler, merkezi sinir sisteminde (CNS) bir beyin lezyonunu takiben yetişkinliğe kadar sürebilen sınırlı ve zayıf onarıcı kapasite sergilerler13. Genel olarak, memeliler, üretilen düşük sayıda nöronun PD'de gözlenen hasarlı sinir devrelerini restore etmek için yeterli olmayacağı göz önüne alındığında, nörorejenerasyonu anlamak için hayvan modelleri olarak uygun değildir. Bu nedenle, özellikle zebra balıklarında teleost tabanlı model, yüksek proliferatif oranı, sürekli kendini yenileme kabiliyeti ve insanlarla beyin homolojisini kapatma kabiliyeti nedeniyle büyük ölçüde tercih edilmektedir14,15.

Zebra balığı en yaygın olarak PD16'daki düzensiz hareketi incelemek için kullanılır. Zebra balığı bazlı PD modeli genellikle 1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridin (MPTP) ve 6-hidroksidopamin (6-OHDA)17 içeren nörotoksinler tarafından indüklenir. Spesifik DpN kaybını ve dopamin seviyelerinin azalmasını indüklemede etkili olmasına rağmen, MPTP tabanlı modeller, DpN kaybı yalnızca CNS18 ile sınırlı olmadığından PD koşullarını yakından taklit etmez. 6-OHDA'nın kan-beyin bariyerini geçememesi, intramüsküler olarak değil, intrakraniyal olarak uygulandığında beyindeki hücresel ve fonksiyonel değişiklikler üzerindeki etkilerini kısıtlamıştır19. 6-OHDA'nın periferik uygulaması, sinir sistemi boyunca dopamin seviyelerinin küresel olarak azalmasına neden olmuştur20. 6-OHDA'nın beyin omurilik sıvısına uygulanması, CNS21 boyunca DpN'nin ablasyonuna neden olurken, PD'de görüldüğü gibi durumu taklit etmez, bu sayede DpN kaybı özellikle insan beyninin substantia nigra'sında meydana gelir. 6-OHDA'nın ICV uygulaması, aksine, zebra balığı beynindeki ventral Dn bölgesinde, substantia nigra22'ye çok benzeyen DpN'nin önemli ablasyonunu spesifik olarak indükledi. İlginçtir ki, DpN'nin iyileşmesi 6-OHDA kaynaklı lezyondan 30 gün sonra bildirilmiştir ve bu nöronlar yaşam boyunca hayatta kalmıştır23,24. DpN'nin fonksiyonel geri kazanımı, 6-OHDA kaynaklı yetişkin zebra balığı bazlı PD modeli 22 kullanılarak kat edilen mesafenin (cm) ve ortalama hızın (cm/s) lokomotor değerlendirmesi ile gösterilmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Bu çalışma, Hayvan Araştırma ve Etiği Komitesi (CARE), Universiti Technologi MARA (UiTM) [Referans No: UiTM CARE 346/2021, 7 Mayıs 2021 tarihli] tarafından onaylanmıştır.

NOT: Standart hayvancılık ve 6-OHDA lezyonlu yetişkin zebra balığı PD modelinin bakımı için yayınlanmış protokoller22,25,26 kullanılmıştır. Deneyler, standart uzunluğu 3.2-3.7 cm olan beş aylıktan daha eski yetişkin erkek zebra balığı (Danio rerio) ile yapılmıştır.

1. Zebra balığı bakımı ve ICV öncesi mikroenjeksiyon preparatları

  1. Balıkları havalandırılmış bir su tankında 28 ± 1.0 ° C kontrollü bir sıcaklık altında tutun. Zebra balığı yetiştiriciliği ve bakımı için, deney boyunca ticari deniz tuzu (1 g / L) ile mineralize edilmiş damıtılmış su kullanın27.
  2. 45 L tank başına maksimum 25 balık veya 1.8 L su başına bir balık barındırın ve bunları 14 saat ışık ve 10 saat karanlık fotoperiyot programına maruz bırakın. Balıkları günde en az iki kez, dondurularak kurutulmuş solucanlarla desteklenmiş yiyecek topaklarıyla besleyin.
  3. 250 mL damıtılmış suda 2.5 g MS-222 ve 5 g sodyum bikarbonatı çözerek konsantre bir trikain metansülfonat (MS-222) stok çözeltisi hazırlayın. 200 mL çalışma anestezi çözeltisi üretmek için 2 mL stok çözeltisini seyreltin.
  4. İlk önce 0.2 mg askorbik asidi 1 mL% 0.9 w / v steril filtrelenmiş NaCl içinde çözerek 99.96 mM 6-OHDA hazırlayın. Çözeltiye toz halinde 25 mg 6-OHDA eklemeden önce çözeltiyi 0.2 mikron filtre ile filtreleyin. Her enjeksiyondan önce çözeltiyi taze olarak hazırlayın ve 4 ° C'de karanlıkta saklayın.
    DİKKAT: Uygun kişisel koruyucu ekipman (eldiven, laboratuvar önlüğü ve yüz maskesi) giyin ve kimyasalları kullanırken iyi laboratuvar uygulamalarını uygulayın. Kimyasalların tüm elleçlemesi bir biyogüvenlik kabini içinde yapılmalıdır.

2. Zebra balıklarının anestezi ve ICV enjeksiyonu

  1. Anestezi sırasında yetersizliği önlemek için balıkları 24 saat boyunca hızlandırın. Balığı, yaklaşık 1 dakika boyunca veya tüm görünür kas hareketleri durana kadar% 0.01 w / v MS-222 çözeltisi içeren bir kaba batırarak anestezi yapın.
  2. Anestezi uygulanan balıkları, stereomikroskop altına yerleştirilmiş suya batırılmış bir sünger üzerine yerleştirin ve balıkları düzenli olarak ıslatın.
  3. Zebra balığı beyninin frontal ve parietal kafatasını birbirine bağlayan metopik sütür (MS), koronal sütür (CS) ve sagital sütür (SS) arasındaki kesişime dayanarak enjeksiyon pozisyonunu tanımlayın.
  4. Zebra balığı kafatası üzerindeki spesifik anatomik pozisyon tarafından yönlendirilen kafatasında keskin bir 27 G iğne kullanarak 1,0 mm2 alanda küçük bir delik açın (Şekil 1A,B).
  5. Zebra balığı kafatasının kafatası çatısından 1.200 μm derinliğe ulaşana kadar mikrokapiler enjektörü 60° açıyla indirin (Şekil 1C). Konumu düzeltmek için Z sınırına basın.
  6. İlk enjeksiyon basıncını 4000 hPa'ya ve kompanzasyon basıncını 10 hPa'ya ayarlayın. Enjeksiyon süresini 0,3 sn'ye ayarlayın. Sonraki her enjeksiyonda enjeksiyon yoğunluğunu azaltın.
  7. 0.5 μL 99.96 mM nörotoksin 6-OHDA (veya sahte kontrol grubu için% 0.9 w / v salin) enjekte edin ve mikrokılcal damarın 20 s dinlenmesine izin verin. Kurumasını önlemek için enjeksiyon işlemi boyunca balıkları damıtılmış suyla ıslatmaya devam edin.
  8. Mikrokılcal damarı yavaşça çıkarın ve balıkları akan damıtılmış su altında yeniden canlandırın. Balıkları izole edilmiş bir kurtarma tankına yerleştirin ve kurtarma işlemini potansiyel olarak bozabilecek dikkat dağıtıcı unsurları giderin.
  9. Tıkanıklığı gidermek ve enjeksiyon yoğunluğunun istenen 0.5 μL 6-OHDA hacmini elde etmek için yeterli olduğundan emin olmak için bir sonraki enjeksiyondan önce mikrokılcal damarı yıkayın.

figure-protocol-1
Şekil 1: Nörotoksin enjeksiyon bölgesi, 6-OHDA. (A) Mikrokapiller giriş noktası, zebra balığı beyninin frontal ve parietal kafatasını birbirine bağlayan metopik sütür (MS), koronal sütür (CS) ve sagital sütür (SS) arasındaki kesişme ile yönlendirilir (plan görünümü). (B) Zebra balığı kafatasının ve beyninin şematik bir çizimi (plan görünümü), doğrudan habenula'nın (Hab) üzerine indirilen mikrokılcal damarı ve yarımküreler arasındaki kesişme noktasındaki giriş noktasını gösterir. (C) Zebra balığı beyninin şematik bir çizimi (sagital bölüm), enjeksiyon açısını ve penetrasyon derinliğini gösterir. Siyah nokta, hedeflenen bölgenin, ventral diensefalonun üzerinde yer alan lezyonlu bölgeyi temsil eder. Kısaltmalar: 6-OHDA: 6-hidroksidopamin, CS: koronal sütür, Dn: diensefalon, Hab: habenula, Hyp: hipotalamus, MS: metopik sütür, OB: koku alma ampulü, POA: preoptik alan, PT: posterior tüberkül, SS: sagital sütür, Tec: tektum ve Tel: telensefalon. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

3. Lokomotor değerlendirmesi

NOT: Zebra balıklarının lokomotor değerlendirmesi (n = altı / grup; sahte vs lezyonlu), 6-OHDA lezyonu sonrası üçüncü günde ve 30. günde yerleşik protokoller28,29 kullanılarak açık tank testi ile bireysel olarak değerlendirildi.

  1. Video kaydı
    1. Deney tankını (uzunluk 20 cm, genişlik 11,5 cm, yüksekliği 13 cm) duvarları beyaz kağıtla kaplı olarak yükseltilmiş bir platform üzerine yerleştirin (Şekil 2A).
    2. Bir ışık kaynağı kullanarak tankı alttan aydınlatın. Depoyu damıtılmış suyla doldurun (% 80 -% 90 dolu) ve sıcaklığı 28 ± 1.0 ° C'de tutun. Bir termometre kullanarak sıcaklığı ölçün ve ticari bir akvaryum ısıtıcısı kullanarak düzenleyin.
    3. En az 2 dakikalık iklimlendirmeden sonra, 5 dakika boyunca bir video kamera kullanarak balık yüzme davranışını deney arenasının 2 boyutlu (2D) düzleminde bir plan görünümünden kaydedin (Şekil 2B). Önceki ve son kayıt grubunun yüzme davranışında tutarsızlık olmasını önlemek için, iklimlendirmeyi 10 dakika 30 aşmayın.
    4. Her konunun kat edilen mesafesini (cm) ve ortalama hızını (cm / s) elde etmek için açık tank protokolü ile video izleme yazılımı kullanarak videoları analiz edin.

figure-protocol-2
Şekil 2: Zebra balığı lokomotor davranışının değerlendirilmesi için açık tank testinin deneysel kurulumu . (A) Deney tankı (önden görünüm), aşağıdan aydınlatılan yükseltilmiş bir platforma yerleştirilir. Tankın dört duvarı beyaz kağıtla kaplanmış ve kayıtlar eksenel olarak yakalanmıştır. Sıcaklık bir termometre kullanılarak ölçülür ve ticari bir akvaryum ısıtıcısı kullanılarak 28 ± 1.0 ° C'de düzenlenir. (B) Kurulum kullanılarak yakalanan video kaydının ekran görüntüsü (plan görünümü). Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

  1. Veri analizi
    1. Video izleme yazılımını açmak için simgeye çift tıklayın. Dosya sekmesine tıklayın ve Yeni Boş Deneme Oluştur'u seçin. Bu, kullanıcının deneme parametrelerini araştırmanın amaçlarına göre özelleştirmesine olanak tanır.
    2. Protokol sekmesine tıklayın, Video Kaynakları'nı seçin ve Yeni Video Kaynağı Ekle'ye tıklayın. Mevcut açılır listeye tıklayın ve Video Dosyası seçeneği. Bu, ilgilenilen video kayıtlarının seçilebileceği dosyaya göz atma açılır penceresini ister.
    3. Aparat alt sekmesine tıklayın ve aparatı ayarlamak için Dikdörtgen simgesini seçin. Tüm deneysel arenayı kaplamak için dikdörtgen simgeyi sürükleyin. Ölçek çubuğunu buna göre ayarlayın ve cetvel bölümünün uzunluğunda kullanılan ölçek ölçümünün sayısal değerini girin. Bu deney, açık tank testi için 10 mm'lik bir ölçek kullandı.
    4. Hayvanlar Cihaz Arka Planından Daha Koyu'nu seçerek hayvan rengini ayarlayın. İzleme'deki diğer kullanılabilir seçenekleri önceden ayarlanmış varsayılan ayarlara bırakın.
    5. Bölgeler alt sekmesinde, önceden çizilmiş aygıta tıklayın. Bu bölge, tüm testler için pozisyonunun aynı olduğu standart bölge olarak ayarlanır.
    6. Test zamanlama ve test verileri raporu altında aşağıdaki seçenekleri belirleyin: Test Süresi, Kat Edilen Toplam Mesafe ve Ortalama Hız. Listedeki diğer mevcut testler isteğe bağlıdır ve araştırmacının araştırmacı ilgisine bağlıdır.
    7. Deney sekmesinde, Ad bölümünün altındaki grup adını ve Hayvan Sayısı bölümüne grup başına düşen hayvan sayısını yazarak hayvanları test gruplarına göre atayın.
    8. Denemeyi çalıştırmak için Testler sekmesine geçin. Testi Başlat simgesine tıklayın ve tüm videolar analiz edilene kadar bekleyin.
    9. Lokomotor verilerini metin rapor formunda görüntülemek için Sonuçlar sekmesinde Raporu Görüntüle simgesine tıklayın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Bu deney, 6-OHDA ile ICV mikroenjeksiyonunu takiben yetişkin zebra balığı yüzme davranışındaki değişiklikleri değerlendirdi. 6-OHDA'nın tercih edilen nörotoksin olarak kullanılmasının nedeni, ilgilenilen ventral diensefalon (Dn) 16 alanında DpN'nin spesifik ve hedefli ablasyonunu üreten kan-beyin bariyerini geçememesinden kaynaklanıyordu. Buradaki DpN alt popülasyonu, insanın substantia nigra pars compacta31'indeki DpN alt popülasyonuna anatomik benzerlik göstermektedir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu çalışma, kurulan 6-OHDA kaynaklı, yetişkin zebra balığı bazlı PD modelinin lokomotor değerlendirmesini başarıyla göstermiştir. Tüm deney üç ana adımdan oluşuyordu: ICV öncesi mikroenjeksiyon preparatları, zebra balıklarının ICV mikroenjeksiyonu ve lokomotor değerlendirme. ICV mikroenjeksiyon prosedürünü takiben yetişkin zebra balıklarının sağlıklı bir şekilde iyileşmesini ve iyi deneysel sonuçları sağlamak için, bu çalışmada her adım için bazı iyi uygulamalar önerilmiştir.

ICV öncesi mikroe...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.

Teşekkürler

Bu çalışma, Malezya Yüksek Öğretim Bakanlığı tarafından Temel Araştırma Hibe Programı [600-IRMI / FRGS 5/3 (033/2019)] kapsamında desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Malzemeler< / güçlü >
6-Hidroksidopamin (6-OHDA)Sigma-Aldrich, Missouri, ABD162957
Askorbik asitThermo Fisher Scientific, Kaliforniya, ABDFKC # A / 8882/53
Tek kullanımlık pastör pipeti, 3 mLThermo Fisher Scientific, California, ABDFB55348
Mikrosantrifüj tüpü, 0.2 mLEppendorf, Hamburg, Almanya30124332
Güzel konik şişe, 100 mLEvergreen Mühendislik & Kaynaklar, Semenyih, MalezyaSumYau0200
Fosfat tamponlu salin (PBS)Sigma-Aldrich, Missouri, ABDP4417
Sodyum bikarbonatSigma-Aldrich, Missouri, ABDS5761
Sodyum klorürMerck, Darmstadt, Almanya106404
StereomikroskopNikon, Tokyo, JaponyaSMZ745
Trikain metansülfonat (MS-222)Sigma-Aldrich, Missouri, ABDE10521
Equipment
ANY-labirent yazılımıStoelting Co., Illinois, ABD-sürüm7.0; video izleme yazılımı
Cubis II Micro Lab BalanceSartorius, Gö ttingen, AlmanyaSE 2
FemtoJet IV mikroenjektörEppendorf, Hamburg, Almanya5192000035
Femtotip II, steril enjeksiyon kılcaldamar Eppendorf, Hamburg, Almanya5242957000
InjectMan 4 mikromanipülatörEppendorf, Hamburg, Almanya5192000027
LED Portatif LambaMR. DIY, Selangor, Malezya 902325120 mAh
PELCO Pro Superalloy, ofset, ince uçlarTed Pella, California, ABD5367-12NM
Shanda akvaryum ısıtıcısıYek Fong Akvaryumu, Selangor, MalezyaSDH-228
TermometreSera Precision, Heinsberg, Almanya52525
Video kameraNikon, Tokyo, JaponyaD3100

Kaynaklar

  1. Dorsey, E. R., et al. regional, and national burden of Parkinson's disease, 1990-2016: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2016. Lancet Neurology. 17 (11), 939-953 (2018).
  2. Maserejian, N., Vinikoor-Imler, L., Dilley, L. Estimation of the 2020 global population of Parkinson's Disease (PD). Movement Disorder Council. 35 (1), 198(2020).
  3. Hirsch, L., Jette, N., Frolkis, A., Steeves, T., Pringsheim, T. The Incidence of Parkinson's Disease: A Systematic Review and Meta-Analysis. Neuroepidemiology. 46 (4), 292-300 (2016).
  4. Przedborski, S. The two-century journey of Parkinson disease research. Nature Review Neuroscience. 18 (4), 251-259 (2017).
  5. Cookson, M. R. Disease-Modifying Targets in Neurodegenerative Disorders. , Academic Press. Ch. 6 157-174 (2017).
  6. Jamebozorgi, K., et al. Cellular and molecular aspects of Parkinson treatment: Future therapeutic perspectives. Molecular Neurobiology. 56 (7), 1-13 (2018).
  7. Parmar, M., Grealish, S., Henchcliffe, C. The future of stem cell therapies for Parkinson disease. Nature Review Neuroscience. 21 (1), 1-13 (2020).
  8. Foltynie, T. Can Parkinson's disease be cured by stimulating neurogenesis. Journal of Clinical Investigation. 125 (3), 978-980 (2015).
  9. Winner, B., Winkler, J. Adult neurogenesis in neurodegenerative diseases. Cold Spring Harbour Perspect Biology. 7 (4), 021287(2015).
  10. Huang, C., et al. Nerve guidance conduits from aligned nanofibers: improvement of nerve regeneration through longitudinal nanogrooves on a fiber surface. ACS Applied Materials & Interfaces. 7 (13), 7189-7196 (2015).
  11. Alunni, A., Bally-Cuif, L. A comparative view of regenerative neurogenesis in vertebrates. Development. 143 (5), 741-753 (2016).
  12. Dietz, V., Schwab, M. E. From the rodent spinal cord injury model to human application: promises and challenges. Journal of Neurotrauma. 34 (9), 1826-1830 (2017).
  13. La Rosa, C., Bonfanti, L. Brain plasticity in mammals: An example for the role of comparative medicine in the neurosciences. Frontiers in Veterinary Science. 5 (274), 1-8 (2018).
  14. Ferretti, P., Prasongchean, W. Neural Stem Cells in Development, Adulthood and Disease. , Springer. 1-21 (2015).
  15. Vijayanathan, Y., et al. Adult endogenous dopaminergic neuroregeneration against Parkinson's Disease: Ideal animal models. Neurotoxicity Research. 39 (2), 504-532 (2021).
  16. Vaz, R. L., Outeiro, T. F., Ferreira, J. J. Zebrafish as an animal model for drug discovery in Parkinson's disease and other movement disorders: a systematic review. Frontier Neuroscience. 9, 347(2018).
  17. Nie, S., et al. Small molecule TrkB agonist deoxygedunin protects nigrostriatal dopaminergic neurons from 6-OHDA and MPTP induced neurotoxicity in rodents. Neuropharmacology. 99, 448-458 (2015).
  18. Schober, A. Classic toxin-induced animal models of Parkinson's disease: 6-OHDA and MPTP. Cell Tissue Research. 318 (1), 215-224 (2004).
  19. Betarbet, R., Sherer, T. B., Greenamyre, J. T. Animal models of Parkinson's disease. Bioessays. 24 (4), 308-318 (2002).
  20. Anichtchik, O. V., Kaslin, J., Peitsaro, N., Scheinin, M., Panula, P. Neurochemical and behavioural changes in zebrafish Danio rerio after systemic administration of 6-hydroxydopamine and 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine. Journal of Neurochemistry. 88 (2), 443-453 (2004).
  21. Fiametti, L. O., Correa, C. N., Castro, L. M. d Peptide profile of zebrafish brain in a 6-OHDA-induced Parkinson model. Zebrafish. 18 (1), 55-65 (2021).
  22. Vijayanathan, Y., et al. 6-OHDA-lesioned adult zebrafish as a useful Parkinson's disease model for dopaminergic neuroregeneration. Neurotoxicity Research. 32 (3), 496-508 (2017).
  23. Caldwell, L. J., et al. Regeneration of dopaminergic neurons in adult zebrafish depends on immune system activation and differs for distinct populations. Journal of Neuroscience. 39 (24), 4694-4713 (2019).
  24. Zupanc, G. K., Hinsch, K., Gage, F. H. Proliferation, migration, neuronal differentiation, and long-term survival of new cells in the adult zebrafish brain. Journal of Comparative Neurology. 488 (3), 290-319 (2005).
  25. Lawrence, C. The husbandry of zebrafish (Danio rerio): a review. Aquaculture Research. 269 (1-4), 1-20 (2007).
  26. Reed, B., Jennings, M. Guidance on the Housing and Care of Zebrafish Danio rerio. Royal Society for the Prevention of Cruelty to Animals (RSPCA). , 7-53 (2011).
  27. Avdesh, A., et al. Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (69), e4196(2012).
  28. Altenhofen, S., et al. Tebuconazole alters morphological, behavioral and neurochemical parameters in larvae and adult zebrafish (Danio rerio). Chemosphere. 180, 483-490 (2017).
  29. Bridi, D., Altenhofen, S., Gonzalez, J. B., Reolon, G. K., Bonan, C. D. Glyphosate and Roundup alter morphology and behavior in zebrafish. Toxicology. 392, 32-39 (2017).
  30. Wright, D., Krause, J. Repeated measures of shoaling tendency in zebrafish (Danio rerio) and other small teleost fishes. Nature Protocols. 1 (4), 1828-1831 (2006).
  31. Pienaar, I. S., Götz, J., Feany, M. B. Parkinson's disease: insights from non-traditional model organisms. Progress in Neurobiology. 92 (4), 558-571 (2010).
  32. Becker, T., Becker, C. G. Axonal regeneration in zebrafish. Current Opinion in Neurobiology. 27, 186-191 (2014).
  33. Collymore, C., Tolwani, A., Lieggi, C., Rasmussen, S. Efficacy and safety of 5 anesthetics in adult zebrafish (Danio rerio). Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 53 (2), 198-203 (2014).
  34. Katz, E. M., et al. The stability and efficacy of tricaine methanesulfonate (MS222) solution after long-term storage. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 59 (4), 393-400 (2020).
  35. Thiele, S. L., Warre, R., Nash, J. E. Development of a unilaterally-lesioned 6-OHDA mouse model of Parkinson's disease. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (60), e3234(2012).
  36. Neiffer, D. L., Stamper, M. A. Fish sedation, analgesia, anesthesia, and euthanasia: considerations, methods, and types of drugs. Institute for Laboratory Animal Research. 50 (4), 343-360 (2009).
  37. Barbosa Júnior, A., et al. Zebrafish Protocols for Neurobehavioral Research. 66, Springer. 323-330 (2012).
  38. Cocchiaro, J. L., Rawls, J. F. Microgavage of zebrafish larvae. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (72), e4434(2013).
  39. Stewart, A., et al. Modeling anxiety using adult zebrafish: a conceptual review. Neuropharmacology. 62 (1), 135-143 (2012).
  40. Sykes, D. J., Suriyampola, P. S., Martins, E. P. Recent experience impacts social behavior in a novel context by adult zebrafish (Danio rerio). PLOS ONE. 13 (10), 0204994(2018).
  41. Collymore, C., Tolwani, R. J., Rasmussen, S. The behavioral effects of single housing and environmental enrichment on adult zebrafish (Danio rerio). Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 54 (3), 280-285 (2015).
  42. Grossman, L., et al. Characterization of behavioral and endocrine effects of LSD on zebrafish. Behavioural Brain Research. 214 (2), 277-284 (2010).
  43. Stewart, A., et al. Homebase behavior of zebrafish in novelty-based paradigms. Behavioural Processes. 85 (2), 198-203 (2010).
  44. Abozaid, A., Tsang, B., Gerlai, R. The effects of small but abrupt change in temperature on the behavior of larval zebrafish. Physiology and Behavior. 227, 113169(2020).
  45. Sekhar, M., Singh, R., Bhat, A., Jain, M. Feeding in murky waters: acclimatization and landmarks improve foraging efficiency of zebrafish (Danio rerio) in turbid waters. Biology Letters. 15 (7), 1-5 (2019).
  46. Valcarce, D. G., Martínez-Vázquez, J. M., Riesco, M. F., Robles, V. Probiotics reduce anxiety-related behavior in zebrafish. Heliyon. 6 (5), 03973(2020).
  47. Tunbak, H., Vazquez-Prada, M., Ryan, T. M., Kampff, A. R., Dreosti, E. Whole-brain mapping of socially isolated zebrafish reveals that lonely fish are not loners. eLife. 9, 55863(2020).
  48. Shams, S., Seguin, D., Facciol, A., Chatterjee, D., Gerlai, R. Effect of social isolation on anxiety-related behaviors, cortisol, and monoamines in adult zebrafish. Behavioral Neuroscience. 131 (6), 492-504 (2017).
  49. Burghardt, G. M., et al. Perspectives - Minimizing observer bias in behavioral studies: A review and recommendations. Ethology. 118 (6), 511-517 (2012).
  50. Kalueff, A. V., et al. Towards a comprehensive catalog of zebrafish behavior 1.0 and beyond. Zebrafish. 10 (1), 70-86 (2013).
  51. Franco-Restrepo, J. E., Forero, D. A., Vargas, R. A. A review of freely available, open-source software for the automated analysis of the behavior of adult zebrafish. Zebrafish. 16 (3), 223-232 (2019).
  52. Beal, M. F. Parkinson's disease: a model dilemma. Nature. 466 (7310), 8-10 (2010).
  53. Jha, U., Thirumalai, V. Neuromodulatory selection of motor neuron recruitment patterns in a visuomotor behavior increases speed. Current Biology. 30 (5), 788-801 (2020).
  54. Reimer, M. M., et al. Dopamine from the brain promotes spinal motor neuron generation during development and adult regeneration. Developmental Cell. 25 (5), 478-491 (2013).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

Zebrafish Parkinson Modeli6-Hidroksidopamin EnjeksiyonuDopaminerjik Nöron AblasyonuNörorejenerasyonİntraserebroventriküler EnjeksiyonAçık Alan TestiYüzme Davranışı AnaliziVideo Takip YazılımıVentral Diyensefalon
6-Hidroksidopamin Kaynaklı Yetişkin Zebra Balığı Bazlı Parkinson Hastalığı Modelinin Lokomotor Değerlendirmesi
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.