Allojenik deri nakli ana T hücre yanıtları donör antijenleri MHC-birbirinden farklı tahlil için bir standart model. Bu video-makale BALB/c--> C57BL / 6 deri nakli yapmak dahil her adım görsel bir öğretici sağlar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Bu makalede
Özet
Özet
Biri olarak en sıkı ve en teknik açıdan zor modelleri, deri nakli ana T hücre yanıtları donör antijenleri MHC-birbirinden farklı tahlil için standart bir yöntem. Bu video makalenin amacı, fare modeli kullanarak deri nakli adım adım görsel gösteri ile izleyici sağlamaktır. 2) nakli için alıcı hazırlanıyor; 3) deri nakli, 4) bandaj kaldırılması ve greft reddi izlenmesi; 5) yararlı ipuçları 1) hasat donör cilt: 5 ana bileşenleri protokol ayrılmıştır. Bir kez usta, prosedür kendisi gerçekleştirmek için <10 dakika sürer.
Protokol
Deney başlamadan önce:
- IACUC onayını alın
- Cerrahi aletler ve Q-ipuçları sterilize
I. Hasat Donör Doku
- Donör fare Euthanize (kurumun SOP ile uygun)
- Islak saç geri alkol ile kulak baz
- Hasat bağış deri üssünde kulak keserek
- Buz üzerinde plaka koyun doku
- Split kulak: sıçan diş forseps ile kulağının dibinde doku tutam ventral ve dorsal taraf; nazikçe doku ayrı çekin; şamandıra dorsal doku, iç yüzeyi aşağı, PBS içinde buz üzerinde; kollajenöz ventral flep atın
II. Alıcı nakli için hazırlayın
- Anestezisi fare Onaylanan prosedür kullanarak
- Post-op ağrı kesici (yani 0.05-0.1 mg / g Bupernex ip) analjezik Yönetici
- Lateral pozisyonda yerleştirin fare
- Hayvan yeterli sedasyon sağlamak için ayak tutam yapın
- Islak saç ve alkol ile toraks tıraş
- Temiz alan alkollü bez ile silin
III. Deri Nakli
- Sıçan dişli forseps ile çadır cilt ve forseps aşağıdaki ~ 0.25-0.5 cm kesme: ~ 1 cm'lik kesi olun
- PBS bağış deri grefti yatak tepesinde yer (greft yatak karşı karşıya kulak cilt iç yüzeyi ile birlikte) çıkarın ve steril Q-tip aşırı PBS kaldırmak
- Bu nakli (altında greft kenarları kıvrılmış ve greft alıcının gövde cilde akşamdan değildir olduğunu emin olun) greft yatak içinde kesin bir dille yalanlar o kadar dikkatlice uzakta fazla bağış deri Döşeme
- Steril bandaj sarın alıcı (deri grefti üzerine yerleştirilen yapışkanlı olmayan gazlı segment)
- Bu bandaj (hayvan nefes değerlendirmek) çok sıkı değildir sağlanması ve bu silah serbestçe cep
- Güvenli bandaj tek bir 2-0 ipek sütür ile
- Temiz bir kafes yerleştirin hayvan (hayvan kadar ısıtma lambası altında yeterince anestezi kurtarıldı)
- Monitör alıcı sıkıntı belirtileri ve ağrı kesici için gerekli gibi analjezik yönetmek için 1-2/day
IV. Bandaj Kaldırma (6-7 gün transplantasyon sonrası)
- Anestezisi fare Onaylanan prosedür kullanarak
- Ipek sütür kesin ve kaldırma
- Bandaj (greft bozmaya emin) ile dikkatlice kesilerek künt sonunda makas, kullanma ve hafifçe kaldırın
- Temiz kafes fare dön
- Kabuklanma ya da daralma belirtileri için bandaj çıkarıldıktan sonra greft ~ 8 saat kontrol edin. Varsa, greft vascularize başarısız olmuş ve teknik bir başarısızlık olarak kabul edilmelidir.
- Reddedilme işaretleri (genellikle ~% 80 nekroz donör doku olarak tanımlanan) günlük Monitör
- Allojenik deri nakli genellikle d8-12 post-op arasında reddedecektir
V. Yardımcı İpuçları
- Kulak tabanına yakın donör doku Hasat: 1) greft boyutu en üst düzeye çıkarmak, ve 2) bölme kolaylaştırmak dengesiz bir ventral çıkıntı
- Her zaman alıcı tıraş için yeni bir jilet kullanın
- Analjezik ip verilecek ise, (greft kesintiye şansını en aza indirmek) post-op kullanımını en aza indirmek için prosedür nakli için önce yönetmek
- Mümkünse, bandaj uygulamadan önce eldiven çıkarın. Eldiven bandaj sopa ve komplike uygulama eğilimindedir
- Bandaj sonunda tek bir sütür yerleştirilmesi erken kaldırılması en aza indirecektir.
- Sıkı izin ve dikiş yerleştirerek ÖNCE nefes değerlendirmek bandaj sarın. Bandaj çok sıkı ise, hayvan solunum durur. Bandaj çok gevşek ise, hayvan kaldıracak.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu video-makale gösterdiği gibi, deri nakli modeli allojenik T hücre yanıtları izlenmesi için hızlı ve kolay bir yöntemdir. Allojenik deri nakli geniş bir uygulama yelpazesine sahiptir ve tahlil için immünosupresif ajanlar ve tolerans protokolleri yanı sıra araştırmak için çeşitli engelleme antikorların biyolojik etkileri çeşitli verimlilik kullanılmıştır.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların beyan edilecek bir çıkar çatışması yoktur.
Teşekkürler
NIH İmmünoloji Eğitim Hibe T32 AI 60.573 (KBY) ve NIH hibe GM 41.514 (MDC)
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Mikro-diseksiyon penseti (eğri) | Sigma-Aldrich | F4142 | |
| Sıçan diş penseti (1x2 dişli, düz) | Fine Science Tools | 11053-10 | n=2 |
| Şaşılık makası (küt uçlu) | Fine Science Tools | 14074-11 | |
| İris penseti (eğri) | Fine Science Tools | 11065-07 | |
| Yaylı makas (açılı) | Fine Science Tools | 15006-09 | |
| Halsey mikro iğne tutucu | Fine Science Tools | 12500-12 | |
| 10 cm plaklar | Corning | 430167 | |
| PBS | Cellgro | 21-040-CV | |
| Bupernex (Buprenorfini hidroklorür) | Reckitt Benckiser | 517201 | |
| İnsülin şırıngaları (29 Ga) | Monoject | 8881 600145 | |
| Pamuklu çubuklar | Solon Manufacturing Company | 362 | |
| Tek kenarlı jiletler (#9) | Smith & Nephew Inc. | 67-0238 | |
| İpek sütür (2-0; PS-2) | Ethicon Inc. | 583H |
Yeniden basım ve izinler
