Burada, farelerde retinopatinin tanısını ve kantitatif ölçümünü kolaylaştırmak için optik koherens tomografi kullanan bir in vivo görüntüleme tekniğini tanımladık.
Method Article
Burada, farelerde retinopatinin tanısını ve kantitatif ölçümünü kolaylaştırmak için optik koherens tomografi kullanan bir in vivo görüntüleme tekniğini tanımladık.
Optik koherens tomografi (OKT) retinopati tanısında noninvaziv bir yöntem sunmaktadır. OCT makinesi, retina kalınlığının hesaplanabileceği retinal kesitsel görüntüleri yakalayabilir. OCT klinik pratikte yaygın olarak kullanılmasına rağmen, temel araştırmalardaki uygulaması, özellikle fareler gibi küçük hayvanlarda yaygın değildir. Göz kürelerinin küçük boyutu nedeniyle, farelerde fundus görüntüleme incelemeleri yapmak zordur. Bu nedenle, küçük hayvanlarda OCT görüntülemeyi yerleştirmek için özel bir retinal görüntüleme sistemi gereklidir. Bu makalede, OCT muayene prosedürleri için küçük hayvanlara özgü bir sistem ve görüntü analizi için ayrıntılı bir yöntem gösterilmektedir. Çok düşük yoğunluklu lipoprotein reseptörü (Vldlr) nakavt fareleri ve C57BL/6J farelerin retinal OCT incelemesinin sonuçları sunulmuştur. C57BL / 6J farelerinin OCT görüntüleri retina tabakalarını gösterirken, Vldlr nakavt farelerininki subretinal neovaskülarizasyon ve retina incelmesi gösterdi. Özetle, OCT muayenesi fare modellerinde retinopatinin noninvaziv tespitini ve ölçümünü kolaylaştırabilir.
Optik koherens tomografi (OKT), 1,2,3,4,5,6,7,8 dokusu için, özellikle retinadaki noninvaziv inceleme için in vivo yüksek çözünürlüklü ve kesitsel görüntüleme sağlayabilen bir görüntüleme tekniğidir 9,10,11,12 . Ayrıca retina kalınlığı ve retina sinir lifi tabakası kalınlığı gibi bazı önemli biyobelirteçleri ölçmek için de kullanılabilir. OCT'nin prensibi, bir numuneden yansıyan ışığın tutarlılığından kesitsel doku bilgisini elde eden ve bir bilgisayar sistemi aracılığıyla grafik veya dijital bir forma dönüştüren optik tutarlılık reflektometrisidir7. OKT, retina hastalıkları olan hastaların tanısı, takibi ve yönetimi için gerekli bir araç olarak oftalmoloji kliniklerinde yaygın olarak kullanılmaktadır. Ayrıca retina hastalıklarının patogenezi hakkında fikir verebilir.
Klinik uygulamalara ek olarak, OCT hayvan çalışmalarında da kullanılmıştır. Patoloji morfolojik karakterizasyonun altın standardı olmasına rağmen, OKT noninvaziv in vivo görüntüleme ve uzunlamasına takip avantajına sahiptir. Ayrıca, OKT'nin retinopati hayvan modellerinde histopatoloji ile iyi ilişkili olduğu gösterilmiştir 11,13,14,15,16,17,18,19,20. Fare, biyomedikal çalışmalarda en sık kullanılan hayvandır. Bununla birlikte, küçük göz küreleri farelerde OCT görüntüleme yapmak için teknik bir zorluk oluşturmaktadır.
İlk olarak farelerde retinal görüntüleme için kullanılan OCT21,22 ile karşılaştırıldığında, küçük hayvanlarda OCT artık donanım ve yazılım sistemlerine göre optimize edilmiştir. Örneğin, OCT, izleyici ile birlikte, sinyal-gürültü oranını önemli ölçüde azaltır; OCT yazılım sistemi yükseltmeleri, daha fazla retina katmanının otomatik olarak algılanmasını sağlar; ve entegre DLP beamer, hareket artefaktlarını azaltmaya yardımcı olur.
Çok düşük yoğunluklu lipoprotein reseptörü (Vldlr), endotel hücrelerinde bulunan bir transmembran proteinidir. Retinal vasküler endotel hücreleri, retinal pigment epitel hücreleri ve dış sınırlayıcı membran23,24 çevresinde eksprese edilir. Subretinal neovaskülarizasyon, Vldlr nakavt fareleri23'ün fenotipidir. Bu nedenle, Vldlr nakavt fareleri, subretinal neovaskülarizasyonun patogenezini ve potansiyel tedavisini araştırmak için kullanılır. Bu makalede, küçük hayvan modellerinde retinopati araştırması için bazı teknik referanslar sağlamayı umarak, Vldlr nakavt farelerinde retinal lezyonları tespit etmek için OCT görüntülemenin uygulanması gösterilmektedir.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Operasyonlar, Görme ve Oftalmoloji Araştırmaları Derneği'nin Oftalmik ve Görme araştırmalarında Hayvanların Kullanımına İlişkin Bildirisi'ni takiben gerçekleştirildi. Deneysel tasarım kurumsal hayvan etik komitesi (JSIEC, EC Tıbbi Etik Komitesi, EC 20171213(4)-P01) tarafından onaylanmıştır. Bu çalışmada iki aylık C57BL/6J fareler ve Vldlr nakavt fareleri kullanılmıştır. Her grupta, hepsi dişi olan ve 20 g ila 24 g ağırlığında olan 7 fare vardı.
1. Deneysel koşullar
2. Bilgi kayıtları
3. Cihaz başlatma ve test etme
4. Anestezi
5. Mydriatic damlaların uygulanması
6. Farenin yerleştirilmesi
7. Konfokal Taramalı Lazer Oftalmoskop (cSLO)
8. Optik koherens tomografi (OKT)
9. Deneyin sonu (OCT muayenesinden sonra)
10. Görüntü analizi
11. Retinal tabakalaşma düzeltmesi
12. Retinal laminasyon kalınlığı
13. Tam retina kalınlığının ölçülmesi
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
OCT'nin yüksek çözünürlüklü taramaları sayesinde, fare retinasının katmanları gözlemlenebilir ve anormal yansımalar ve bunların tam konumları belirlenebilir. Bu çalışmada Vldlr nakavt fareleri ve C57BL/6J farelerin retinal OCT görüntüleri karşılaştırıldı. Tüm C57BL/6J farelerinin OCT görüntüleri, farklı yansıtıcılığa sahip çeşitli retina tabakaları gösterdi ve sınır açıktı (Şekil 8D). Buna karşılık, tüm Vldlr nakavt fareleri, OCT görüntülerinde anormal, hiperreflektif lezyo...
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Bu çalışmada, Vldlr nakavt farelerinde eksik posterior vitreus dekolmanı, subretinal neovaskülarizasyon ve retina kalınlığında incelme gösteren retinal değişiklikleri değerlendirmek için küçük hayvan retinal görüntüleme sistemi kullanılarak OCT görüntüleme uygulanmıştır. OKT, retinanın durumunu in vivo olarak incelemek için kullanılan noninvaziv bir görüntüleme yöntemidir. Çoğu OCT cihazı insan gözü muayenesi için tasarlanmıştır. Donanım ekipmanının boyutu, odak uzaklığının ayarı, sistem parametrelerini...
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Yazarlar potansiyel bir çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.
Proje Kaynağı: Guangdong Eyaleti Doğa Bilimleri Vakfı (2018A0303130306). Yazarlar, finansman ve materyaller için Oftalmik Araştırma Laboratuvarı, Shantou Üniversitesi Ortak Shantou Uluslararası Göz Merkezi ve Hong Kong Çin Üniversitesi'ne teşekkür eder.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
|---|---|---|---|
| 100-Dpt kontakt lens | Volk Optical,Inc, Mentor, OH | RETImap'e ait aksesuar | |
| Çift asferik 60 Dpt cam mercek | Volk Optical,Inc, Mentor, OH | RETImap'e ait aksesuar | |
| Elektrikli ısıtma battaniyesi | POPOCOLA | CW-DRT-01 | 50 x 35 cm |
| Enjeksiyon şırıngası (1 mL) | Kaile | 0.45 x 16RWLB | |
| Levofloksasin Hidroklorür Göz Jeli | EBE PHARMACEUTICAL Co.LTD | 5 g: 0.015 g | |
| Tıbbi sodyum hyaluronat jel | Alcon | 16H01E | |
| Mikrolitre şırıngalar | Şangay yüksek güvercin sanayi ve ticaret co., LTD | Q31/0113000236C001-2017 | 50 & L |
| Povidone iyot çözeltisi | Guangdong medihealth pharmaceutical Co., LTD | 100 mL | |
| RETImap | ROLAND CONSULT | 19-99_50-2.1_1.2E | cSLO/ERG/VEP/FA/OCT/GFP |
| Küçük hayvan kulak çıtçıtları | OSMO POCKET OT110 | INS1005-1S | |
| Santen Pharmaceutical Co., LTD | 5 mg / mL | ||
| Ksilazin | Sigma | X1251-5G | 5 g |
| Zoletil 50 | Virbac.S.A | 7FRPA | Tiletamin 125 mg + Zolazepam 125 mg |
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request Permission