Bu protokol, bir fare sepsis modelinde çekal ligasyon ve ponksiyonun (CLP) operatif ayrıntılarını sunar. CLP, sepsisin hayvan modelini oluşturmak için en yaygın kullanılan tekniklerden biridir. Bu nedenle, güvenilir araştırma sonuçlarının elde edilmesi için standartlaştırılmış bir CLP protokolü gereklidir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Sepsisin Çekal Ligasyonu ve Delinmeye Bağlı Fare Modelinde Güvenilir Bir Biyobelirtecin Değerlendirilmesi
Bu makalede
Özet
Özet
Sepsis, dünya çapında her yıl milyonlarca ölüme neden olan, hayatı tehdit eden ve hızla gelişen ciddi bir hastalıktır. Araştırmacılar, çeşitli hayvan modellerini kullanarak sepsisin patofizyolojisini aydınlatmak için muazzam çaba sarf etmişlerdir; çekal ligasyon ve ponksiyon (CLP) ile indüklenen sepsisin fare modeli laboratuvarlarda yaygın olarak kullanılmaktadır. CLP modelinin ciddiyetini ve tekrarlanabilirliğini etkileyen üç teknik husus, bağlı çekum yüzdesi, çekal ponksiyon için kullanılan iğnenin boyutu ve karın boşluğuna sıkılan dışkı hacmidir. Sepsisin hızlı ve spesifik tanısı sonucu etkileyen çok önemli bir faktördür. Sepsis tanısında altın standart mikrobiyal kültürdür; ancak, bu işlem zaman alıcıdır ve bazen yanlıştır. Sepsise özgü biyobelirteçlerin tespiti hızlıdır, ancak mevcut biyobelirteçler kısa yarı ömür, özgüllük ve yetersiz duyarlılık nedeniyle tatmin edici değildir. Bu nedenle, erken evrelerde güvenilir bir sepsis biyobelirtecine acil ihtiyaç vardır. Önceki yayınlar, sepsiste aşırı nötrofil hücre dışı tuzakların (NET'ler) meydana geldiğini göstermektedir. NET bileşeni olarak sitrülinlenmiş histon H3 (CitH3), hem septik hayvanlarda hem de hastalarda yükselir ve CitH3'ün varlığı sepsisin güvenilir bir tanısal biyobelirtecidir. Bu çalışmada CLP kaynaklı sepsisin standartlaştırılmış fare modelini tanımlamayı ve sepsisin güvenilir bir kan biyobelirtecini oluşturmayı amaçlamıştır. Çalışmalarımız gelecekte sepsisin erken ve doğru teşhisine katkıda bulunabilir.
Giriş
Sepsis, enfeksiyon1'e karşı düzensiz konakçı yanıtının neden olduğu hayatı tehdit eden organ disfonksiyonu olarak tanımlanır ve septik şok, ciddi sepsis2 vakalarında önde gelen ölüm nedenidir. Sepsis ve septik şok her yıl dünya çapında milyonlarca ölüme nedenolmaktadır 3. Sepsisli hastaların sonuçlarını iyileştirmenin anahtarı, antibiyotik4 gibi tedavilerin derhal başlatılmasıdır. Sepsis tanısında altın standart yöntem mikrobiyal kültürdür; Bununla birlikte, mikrobiyal kültür zaman alıcıdır ve klinik önemi büyük ölçüde sınırlayan yanlış pozitif ve yanlış negatif sonuçlara y....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm hayvan deneyleri, Xiangya Hastanesi ve Central South Üniversitesi'ndeki Hayvan İnceleme Komitesi (No. 202103149) tarafından onaylanan kılavuzlara uygun olarak gerçekleştirilmiştir.
1. Hazırlık
- Erkek C57BL/6J farelerini (ağırlık: 20-25 g; yaş: 8-12 hafta) seçin ve herhangi bir işlem yapmadan önce 3 gün boyunca evde konaklayın.
- Fareyi tartın.
- Fareyi soluyarak% 1.5 izofluran ile uyuşturun ve anestezi derinliğini kontrol etmek için ayak parmaklarını sıkıştırın.
- Fareyi ısıtma yastığına sabitleyin. Karnına tüy dökücü krem uygulayın ve kremi ve saçları çıkarmadan önce 1 dakikadan fazla b....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Şekil 2A'da gösterildiği gibi, batı lekelenmesi ile sahte grupta CitH3 tespit edilmemiştir. CLP'den sonra serum CitH3 konsantrasyonu önemli ölçüde artmıştır ve bu artış, bir PAD inhibitörü10 olan YW3-56'nın uygulanması yoluyla NET oluşumunun inhibisyonu ile bloke edilmiştir. Şekil 2B, ELISA tarafından belirlenen serumCitH3 konsantrasyonlarını göstermektedir. CLP'den 24 saat sonra, CLP gruplarında CitH3'ün serum konsantrasyonu, sa.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
CLP, preklinik bir sepsis modeli oluşturmak için karın içine patojenler sokar. CLP yaparken, eksojen bakterilerin girişimini ortadan kaldırmak ve doğru anestezik dozajlarını kullanmak için steril koşullar kullanmak önemlidir16. CLP'nin sepsis modelinin ciddiyetini ve tekrarlanabilirliğini etkileyen üç teknik yönü, bağlı çekumun yüzdesi, çekal ponksiyon için kullanılan iğnenin büyüklüğü ve karın boşluğuna sıkılan dışkı hacmidir. Çekumun yaklaşık% 75'inin bağlanması şiddetli sepsis ile,% 50 ligasyon.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Çıkar çatışması ilan edilmedi.
Teşekkürler
Profesör Wang Wei ve Doktor Liu Shuai'ye deneylere yardımcı oldukları için teşekkür ederiz. Bu çalışma, Xiangya Hastanesi, Central South University Genç Araştırma Fonu (No. 2019Q10), Hunan Eyaleti Ulusal ve Bilim Vakfı'ndan (No. 2020JJ4902) ve Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı'ndan (No. 82202394) hibelerle finanse edilmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 21G iğne | |||
| 3,3 ', 5,5'-tetrametilbenzidin ve nbsp; | Ar-Ge D Systems Inc | DY999 | |
| anti-CitH3 monoklonal antikor | laboratuvarı kendi geliştirdiği | ||
| anti-CitH3 poliklonal antikor | Abcam | ab5103 | |
| anti-tavşan ikincil antikoru | Jackson ImmunoResearch | 111-035-003 | |
| C57BL / 6 fare | Xiangya Tıp Fakültesi, Orta Güney Üniversitesi | ||
| Cl-amidin | Sigma Aldrich | SML2250 | |
| tüy dökücü krem | |||
| Dnase I | Sigma Aldrich | 11284932001 | |
| izofluran | Sigma-Aldrich | 26675-46-7 | |
| ketoprofen | Sigma Aldrich | PHR1375 | |
| ipek sütürler (4-0 & 6-0) | |||
| cerrahi aletler ve nbsp; | |||
| YW3-56 | GLPBIO | GC48263 |
Kaynaklar
- Singer, M., et al. The third international consensus definitions for sepsis and septic shock (Sepsis-3). JAMA. 315 (8), 801-810 (2016).
- Shankar-Hari, M., et al.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
