Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
* These authors contributed equally
Bu protokol, kemik metastatik hücre hatlarının ve primer kemik tümörlerinin 5-aminolevulinik asit aracılı fotodinamik tedaviye (PDT) maruz bırakılması için adım adım metodolojik bir yaklaşım sunar. PDT maruziyetini takiben hücre göç potansiyeli / invazivliği, canlılık, apoptoz ve yaşlanma potansiyeli üzerindeki etkiler de analiz edilir.
Kemik metastazları, etkilenen hastalar için kötü prognoz ve düşük yaşam kalitesi ile ilişkilidir. Fotodinamik tedavi (PDT), lokal metastatik kemik lezyonlarını hedefleyebilen noninvaziv bir tedavi olarak ortaya çıkmaktadır. Bu makale, yapışık hücre hatlarında PDT etkisini incelemek için in vitro bir yöntem sunmaktadır. Bu amaçla, hem primer (dev hücreli kemik tümörü) hem de insan kemiği metastatik kanser hücre hatlarını (primer invaziv duktal meme karsinomu ve renal karsinomdan türetilen) 5-aminolevulinik asit (5-ALA) aracılı PDT'ye tabi tutmak için adım adım bir yaklaşım gösteriyoruz.
5-ALA-PDT ışınlamasından 24 saat sonra (mavi ışık dalga boyu 436 nm), terapötik etki hücre göç potansiyeli, canlılık, apoptotik özellikler ve hücresel büyüme durması (yaşlanma) açısından değerlendirildi. 5-ALA-PDT ışınlamasından sonra, kas-iskelet sistemi kaynaklı hücre hatları aynı dozlara ve PDT'ye maruz kalmaya farklı yanıt verir. PDT maruziyeti ile tetiklenen hücresel hasarın derecesine bağlı olarak, apoptoz ve yaşlanma olmak üzere iki farklı hücre kaderi kaydedildi. Farklı kemik kanseri hücre hatları arasında PDT tedavisine değişken duyarlılık, klinik ortamlarda daha uygun PDT ayarlarının seçilmesi için yararlı bilgiler sağlar. Bu protokol, kas-iskelet sistemi neoplastik hücre hatları bağlamında PDT kullanımını örneklemek için tasarlanmıştır. PDT'nin çeşitli kanser hücre hatları ve çeşitli ışığa duyarlılaştırıcılar ve ışık kaynakları üzerindeki terapötik etkisini araştırmak için ayarlanabilir.
Kemik metastazları için tedavi seçenekleri, onkolojik tedavideki devam eden gelişmelere rağmen hala sınırlı ve zordur. Mevcut standart yöntem, lokal eritem, iç organlara toksisite1 ve yetersiz kırık2 gibi komplikasyonlarla ilişkili olan radyoterapidir. Kemik metastazı olan hastalar sıklıkla ağrı, hiperkalsemi ve nörolojik semptomlardan muzdarip olduklarından, hareket kabiliyetinin bozulması ve yaşam kalitesinin düşmesi nedeniyle alternatif antineoplastik tedavilere ihtiyaç vardır3. Son bulgular, PDT'nin kemik lezyonlarını doğrudan hedeflemek için tek başına veya r....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Üç farklı hücre hattı tipi kullanıldı: renal hücreli karsinomun kemik metastazlarından kaynaklanan bir hücre hattı olan "MAM", invaziv duktal meme karsinomunun kemik metastazları olan "MAC" ve dev hücreli bir kemik tümörü olan "17-1012". Kontrol grubu olarak kemik iliği kaynaklı mezenkimal kök hücreler (MSC'ler) kullanıldı. Çalışma başlamadan önce kurumsal ve etik onay alınmıştır (proje no: 008/2014BO2-kanser hücre hatları için ve MSC'ler için proje no: 401/2013 BO2).
1. Hücre kültürü
NOT: Kültür ortamı önceden hazırlanabilir. MAM ve 17-1012 için kültür ortamı, %10....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
5-ALA PDT maruziyetini takiben, MSC kontrol grubu 5-ALA PDT ışınlamasını takiben migrasyon açısından kayda değer bir etki göstermedi (Şekil 2A, i, v, ix). Buna karşılık, MAC hücreleri (Şekil 1B ve Şekil 2A, iii, vii, xi) ve 17-1012 (Şekil 1B ve Şekil 2A, ii, vi, x) hücreleri, hem 300 s hem de 2.000 s ışığa maruz kalma için .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Mevcut tedavi seçeneklerine rağmen, kanser terapötik yanıtı değişkendir ve başlangıç doku yapısını korurken kemik metastazlarını tedavi etmek için yeni yaklaşımlar ve hatta kombinasyon tedavileri lehine savunur. Bu bağlamda, PDT umut verici bir alternatiftir. Basit bir bakış açısıyla, PDT iki temel bileşenden oluşur: (1) ışığa duyarlılaştırıcı (PS) olarak adlandırılan toksik olmayan ışığa duyarlı bir boya ve (2) PS'nin absorpsiyon spektrumuna uyan ve onu aktive eden uygun dalga boyuna sa.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarların açıklanacak herhangi bir çıkar çatışması yoktur.
Orijinal yayınlardan ortak yazarlarımıza yardımları ve destekleri için teşekkür ederiz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| IlluminOss Medical Inc., East Providence, Rhode Insland, ABD | 300 s ölçülü kart | n/a | http://www.illuminoss.com |
| 5-aminolevulinik asit (5-ALA) ışığa duyarlılaştırıcı | Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, ABD | A7793 | 10 mg |
| 6 Kuyulu plakalar | Greiner Bio-One, Frickenhausen, Almanya | 657160 | |
| 8 Kuyu Odası Kaydırağı | SARSTEDT AG & Co. KG, Münih, Almanya | 94.6140.802 | |
| 96 Kuyu plakaları (F-buttom) | Greiner Bio-One, Frickenhausen, Almanya | 655180 | |
| CellTiter 96 Sulu Bir Çözelti Hücre Proliferasyonu Testi (MTS-Testi) | Promega, Fitchburg, Wisconsin, ABD | G3580 | |
| Hücresel Yaşlanma Testi | Biotrend Chemikalien GmbH, Kö ln, Almanya | CBA-231 | Kantitatif yaşlanma ile ilişkili ß-galaktosidaz testi |
| Coomassie Brilliant Blue R250 | Sigma-Aldrich, St Louis, Missouri, ABD | 35055 | %0.5 (w/v) |
| Kültür Ekleri 2Well | ibidi GmbH, Grä felfing, Almanya | 80209 | |
| DMEM (1x) + GlutaMax-I | Yaşam Teknolojileri, Carlsbad, Kalifornien, ABD | 31966-021 | |
| Fetal sığır serumu (FBS) | Sigma-Aldrich, St Louis, Missouri, ABD | F7524 | |
| Floresan mikroplaka okuyucu | Promega, Madison, Wisconsin, ABD | GlowMAx®, GM3510 | |
| Hemositometre | Hecht Yardımcısı, Sondheim, Deutschland | 4042 | |
| ImageJ | Ulusal Sağlık Enstitüleri, Be-thesda, Maryland, ABD | ImageJ (sürüm: 1.53a) | Bilimsel görüntüleri işlemek ve analiz etmek için yazılım; https://imagej.net/ |
| Ters faz kontrast mikroskobu | Leica, Wetzlar, Almanya | DM IMBRE 100 | |
| Metanol AnulaR Normapur | VWR, Fontenay-Sous-Bois, Fransa | 20847.307 | |
| Paraformaldehid | Sigma-Aldrich, St Louis, Missouri, ABD | 158127 | Tozu,% 95 saflıkta |
| PDT cihazı (ışık kutusu ve aksesuarları) | IlluminOss Medical Inc., East Providence, Rhode Insland, ABD | n/a | Mavi ışık 436 nm, 36 J/cm2 http://www.illuminoss.com |
| Penisilin-Streptomisin | Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, ABD | 15140-122 | 10.000 U/mL Penisilin 10.000 μ g/mL Streptomisin |
| Fosfat tamponlu salin (PBS) | Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, ABD | 10010-015 | |
| RPMI 1640 | Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, ABD | 21875034 | |
| Spektrofotometri / mikroplaka okuyucu | BioTek Instruments GmbH, Bad Friedrichshall, Almanya | EL800 | |
| Tripan Mavi boya %0.4 | Sigma-Aldrich, St Louis, Missouri, ABD | T8154 | |
| Tripsin-EDTA 10x | Sigma-Aldrich, St Louis, Missouri, ABD | T4174 |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu makale yayımlandı
Video yakında