Mevcut protokol, tortricid haşere böceklerinin laboratuvarlarda yetiştirilme yöntemini açıklamaktadır. Böceklerin cinsiyetini ayırt etme ve yüksek verimli dizileme için nükleik asitleri çıkarma prosedürleri, iki tortricid zararlısı kullanılarak oluşturulmuştur.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Tortricidae Zararlı Böceklerinde Kütle Yetiştirme ve Moleküler Çalışmalar
Bu makalede
Özet
Özet
Genellikle tortrix veya yaprak silindiri güveleri olarak bilinen Tortricidae (Lepidoptera), ciddi tarımsal kayıplara neden olan birçok tarım ve ormancılık zararlısını içerir. Bu tür haşere güvelerinin biyolojisini anlamak için, temel teknikler yüksek talep görmüştür. Burada, kütle yetiştirme, gözlemler ve moleküler çalışmalar için yöntemler iki çay tortrix, Homona magnanima ve Adoxophyes honmai (Lepidoptera: Tortricidae) kullanılarak geliştirilmiştir. Böcekler dilimlenmiş yapay diyetle kitlesel olarak yetiştirildi ve biyolojik özellikleri göz önünde bulundurularak 100'den fazla kuşak boyunca akrabalık yoluyla sürdürüldü. Böceklerin çeşitli cinsiyet dimorfizmleri vardır; bu nedenle, sonraki tahlilleri önleyen gelişim aşamalarında cinsiyeti ayırt etmek zordur. Bu çalışma, tortrisid larvalarının cinsiyetinin, kadına özgü W kromozomunu görselleştirmek için testislerin veya laktik-asetik orsin boyamasının gözlemlenmesiyle belirlenebileceğini vurgulamıştır. Ayrıca, cinsiyet belirleme yöntemlerini kullanarak, bu çalışma cinsiyet tarafından belirlenen embriyolardan nükleik asit ekstraksiyonlarını ve yüksek verimli dizilemeye doğru uygulamayı mümkün kılmıştır. Bu ipuçları diğer haşere böcekleri için geçerlidir ve daha fazla morfolojik ve genetik çalışmayı kolaylaştıracaktır.
Giriş
Lepidopteran böcekleri, tanımlanan tüm canlı türlerinin %10'undan fazlasını temsil eder1 ve bazı takson türleri bitkilerde ciddi hasara ve ciddi tarımsal kayıplara neden olur 2,3. İpekböceği Bombyx mori4,5 gibi model böcekler kullanılarak moleküler ve genetik çalışmalar geliştirilmiş olmasına rağmen, haşere böcekleri, kısmen 6,7 yetiştirme ve idare etme zorlukları nedeniyle araştırılmamıştır. Bu nedenle, bu tür model olmayan haşere böceklerinin biyolojisini anlamak için temel çalışmalar ve teknikler gereklidir.
Genellikle tortrix veya yaprak silindiri güveleri olarak bilinen Tortricidae (Lepidoptera), birçok tarım ve ormancılık zararlısını içerir8. Böcek taksonlarından, oryantal çay tortrix Homona magnanima Diakonoff ve yaz meyvesi tortrix Adoxophyes honmai Yasuda, Doğu Asya'daki çay ağaçlarına zarar verdiği bilinen ciddi polifagot zararlılardır7. İki tür, maternal sekresyonlarla kaplı ince, yumuşak ve kırılgan yumurtalardan oluşan düz ve oval ölçek benzeri yumurta kümeleri (veya yumurta kütleleri) bırakır. Her ne kadar embriyogenez aşamaları böcek gelişimi ve cinsiyet tayini için çok önemli olsa da9, yumurtaların yapıları daha fazla analizin böceklerin biyolojisini anlamasını engellemektedir. Bu tür karmaşık yumurta kütlesini ortaya çıkaran zararlılar üzerinde daha fazla çalışma için zorlukların üstesinden gelmek önemlidir.
Burada, tortrisidlerin biyolojisini anlamak için, kitle yetiştirme yöntemleri, gözlemler ve moleküler çalışmalar A. honmai ve H. magnanima kullanılarak geliştirilmiştir. İlk olarak, kütle yetiştirme yöntemleri, her iki tortricidi de 100 nesil boyunca yetiştirilerek korur. Yumurtaların birleştirilmiş ölçek benzeri yumurta kütlesinden ayrılması, daha önce sineklerde kullanılan tekniklerden geliştirilen alkali ve organik çözücüler kullanılarak tortrisidlerin embriyogenez gözlemini kolaylaştırdı10. Ek olarak, bu çalışma, laktik-asetik orsin 11 kullanılarak lepidopteran dişilerin cinsiyet kromatininin boyama yöntemlerini geliştirerek küçük embriyoların cinsiyet ayrımcılığını ortayakoymuştur. Bu yöntemler birleştirilerek, cinsiyete göre belirlenmiş embriyolardan yüksek kalitede ve miktarda nükleik asitler çıkarıldı, aksi takdirde kurulması zor olan6. Ekstrakte edilen RNA, yeni nesil dizileme için kullanıldı. Toplu olarak, burada sunulan yöntemler diğer lepidopteran böceklerine ve diğer böcek taksonlarına uygulanır.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. Böcek toplama ve kütle yetiştiriciliği
- Daha önce yayınlanmış Referanslar 8,12'yi takip eden alanlardan tortrisid böcekleri toplayın.
NOT: H. magnanima ve A. honmai larvaları hasarlı çay yapraklarından toplanır (Şekil 1A); yetişkinler 4 W taşınabilir UV ışığı kullanılarak çekilir (365 nm dalga boyu, bakınız Malzeme Tablosu, Şekil 1B). - Toplanan larvaları (Şekil 1C, D) yetişkin eklozyona kadar 2-3 hafta boyunca 1/2 oz'luk bir bardakta bir yapay diyet parçası üzerinde ayrı ayrı destekleyin (Şekil 1E, F). Pupa ve yetişkinlerin cinsiyetini morfolojik özelliklerle doğrulayın (Şekil 1G, I).
- Erkekleri ve dişileri plastik bir kutuda (30 cm x 20 cm x 5 cm) bir parafin kağıdı üzerinde yumurta kütlelerini ovipozite etmek için eşleştirin (Şekil 1J-L). Bir dişi ve iki erkeği, bir matrilin oluşturmak için bir parça parafin kağıdı ile 120 mL'lik plastik bir kaba yerleştirin.
NOT: Parafin kağıdı üzerinde kırışıklıklar yapmak önemlidir. H. magnanima için, parafin kağıdının kasanın altında olması gerekir. Bu arada, A. honmai için, çay yapraklarının üst tarafındaki H. magnanima oviposit yumurta kütlesinden yumurta toplamak için kasa tavanına bir kağıt koyun (Şekil 1L), ancak A. honmai yaprakların alt tarafına yumurta bırakır8. Prosedürler diğer tortrisid türlerinde de doğrulanmıştır ve hedef türün ekolojisi ve davranışı açıklığa kavuşturulmuşsa, her iki tarafa da kağıtlar yerleştirmek daha iyidir. - Parafin kağıdı üzerindeki yumurta kütlelerini (yumurta kütlesi başına yaklaşık 100-200 yumurta12, Şekil 1M) makasla kesin. Yumurtaları 5-7 gün boyunca dökülmüş kağıtla 1/2 oz bardağa koyun.
NOT: Olgunlaşmış embriyo siyah nokta kapsülü sergiler (Şekil 1N). Embriyogenez dönemleri tortrisid türlerine çeşitli şekillerde atfedilir, ancak genellikle H. magnanima için yumurtlamadan 5 gün sonra (dpo) ve A. honmai için 4 dpo 25 ° C'de% 60 bağıl nem, 16 saat ışık / 8 saat karanlık döngüler7. - Siyah kafa kapsülleri gösteren yumurta kütlelerini 7 gün boyunca 4-8 ° C'de saklayın.
- Kitle yetiştiriciliği için bir rende kullanarak ~ 60 g yapay diyetleri dilimleyin. Olgunlaşmış embriyolarla doldurulmuş yumurta kütlesini dilimlenmiş yapay diyete plastik bir kaba (23 cm x 16 cm x 8 cm) yerleştirin. Dilimlenmiş diyetlerle yumurta kütlesi üzerine parafin kağıtları yerleştirin (Şekil 10).
NOT: %30'un altında bağıl nem aşırı kuru kabul edilirken, %70'in üzerinde çok nemli olduğu kabul edilir. Plastik kabın kapağında delikler oluşturmak, daha iyi havalandırma sağlamak için daha iyidir. Küçük larvaların kaçışını önlemek için delikleri pamukla doldurun. - Yumurtalardan yüzey kirleticilerini ortadan kaldırmak için, yumurta kütlesini sırasıyla 5 dakika boyunca% 3 formalin ve% 0.2 Benzalkonyum klorür çözeltisine batırın,12. Bağırsak veya hücre içi bakterileri yok etmek için, normal bir yapay diyet yerine% 0.05 (w / w) Tetrasiklin hidroklorür veya% 0.06 (w / w) rifampisin ile desteklenmiş yapay bir diyet kullanın (bkz.
NOT: Bu adım isteğe bağlıdır. Tutarlılık için Silk Mate 2S ve% 0.05 (w / w) Tetrasiklin hidroklorür veya% 0.06 (w / w) rifampisin yoğurmak önemlidir. - Pupaları plastik kaptan toplayın ve cinsiyeti morfolojik12 özelliğe göre ayırt edin (Şekil 1G-I).
NOT: Genel olarak, tortrisidler yavru12'ye kadar 5-6 instar sunar. H. magnanima ve A. honmai larvaları, yavrulaşmaya kadar yumurtadan çıktıktan sonra sırasıyla 3 hafta ve 2 hafta sürer. - 25 °C, 16 L/8 D ile çiftleşmek için 15 erkek ve 10 dişi plastik bir kutuya (30 cm x 20 cm x 5 cm, Şekil 1K) yerleştirin. her nesil için.
NOT: Daha sonraki analizler için yeni yumurtalanmış yumurta kütlelerinin toplanması gerekiyorsa, karanlık dönemin başlangıcını ve sonunu ayarlayın, örneğin sabah 9'dan akşam 5'e kadar. Bu durumda, H. magnanima ve A. honami genellikle 5 saat (14:00) sonra yumurtaları oviposit eder.
2. Fiksasyon, geçirgenlik ve boyama için yumurta ve fazat larvalarının yumurta kütlelerinden ayrılması
- Yumurtaları ayırmak için yumurta kütlesini 10 dakika boyunca 1.000 μL% 1.2 sodyum hipoklorit sulu çözeltisine veya 30 dakika boyunca 1.000 μL 5 M potasyum hidroksit sulu çözeltisine batırın.
- Ayrılmış yumurtaları, daha önceyayınlanan rapor 7'yi takiben, 1.000 μL PBSt (137 mM NaCl, 8.1 mM Na 2 HPO 4,2.68mM KCl,1.47 mM KH2PO 4,% 0.05 Polioksietilen (20) Sorbitan Monolaurat [Ara-20] pH7.4, bkz.
- Yumurtaları 500 μL% 100 heptan ve 500 μL% 4 paraformaldehit-PBSt çözeltisi (w / v) karışımına batırın. Bir vorteks mikseri kullanarak 1.500 rpm'de 10 dakika boyunca karıştırın.
- Yumurtaları 500 μL% 100 heptan ve 500 μL% 100 metanol karışımına batırın. 1.500 rpm'de 10 dakika boyunca karıştırın.
- Yumurtaları 1.000 μL% 100 metanol ile iki kez yıkayın ve 4 ° C'de% 100 metanol içinde% 100 metanol içinde saklayın (Şekil 2A).
NOT: Yumurtalar 4 °C'de en az 1 yıl saklanabilir. - Daha önce yayınlanan rapor7'yi takiben hidrofilizasyon için yumurtaları sırasıyla% 99,% 70,% 50 etanol ve PBSt'ye 5 dakika bekletin.
- Yumurtaları PBSt ile yıkayın, yumurtaları 5 dakika boyunca 1 μg / mL DAPI çözeltisine batırın ve ardından yumurtaları iki kez 1x PBS ile yıkayın. Çekirdekler parlak kırmızı bir renk sergileyene kadar heterokromatini görselleştirmek için yumurtaları %1,25 (w/w) laktik-asetik orsin çözeltisinin 20 μL'sine batırın (bkz. Malzeme Tablosu)11 (bu 5-60 dakika arasında değişir) (Şekil 2B,C).
NOT: Laktik-asetik orcein boyama dönemleri sıcaklık ve neme bağlıdır. 4x-10x büyütmeli bir mikroskop kullanarak uygun boyama olup olmadığını kontrol etmek daha iyidir. - Vitray yumurtaları pipet kullanarak cam bir slayta aktarın. Lekeli yumurtaları antifade reaktifi (bakınız Malzeme Tablosu) ve bir kapak camı7 ile kapatın.
- Forseps kullanarak yumurta kütlelerinden H. magnanima ve A. honmai larvalarını (yumurtlamadan 4-5 gün sonra (dpo)) farate çıkarın (Şekil 2D). Cam bir slayt üzerinde bisekt larvaları (Şekil 2E).
- Herhangi bir dokuyu (örneğin, subözofageal ganglion, torasik gangliyon, malpighian tübül, vb.) 5 dakika boyunca 1:3 (v / v)% 99.7 asetik asit / % 100 metanol karışımı ile sabitleyin. Çekirdekler lekeleninceye kadar% 1.25 (w / w) laktik-asetik orcein çözeltisi11 olanları lekeleyin (bu, sıcaklığa ve neme bağlı olarak 5-60 dakika sürebilir).
- Mikroskop altında heterokromatinin (W kromozomu, Şekil 2F, G) varlığını (dişi) veya yokluğunu (erkek) gözlemleyerek her bir örneğin cinsiyetini belirleyin.
NOT: Cinsiyet, cinsiyet kromatini görselleştirerek belirlenir. Her hücre, cinsiyet kromatinini11,12 dişilerinde bir nokta olarak temsil ederken, fazat larva dokularının kalan kısmı (sabit değil) derhal hücre lizis tamponu 12'ye (10 mM Tris-HCl, 100 mM EDTA ve% 1 SDS, pH 8.0) veya DNA veya RNA ekstraksiyonu için fenol içeren RNA ekstraksiyon reaktiflerine daldırılmalıdır. Diseksiyonlardan önce, reaktiflerin 20 μL'sini önceden 0.2 mL PCR tüplerine dağıtın (Şekil 3A). Daha fazla ekstraksiyona kadar numuneleri -80 ° C'de daldırın ve saklayın. Numuneler en az 3 ay saklanabilir, ancak nükleik asitlerin bozulmasını önlemek için aşağı akış deneylerine devam etmek daha iyidir.
3. Cinsiyetten DNA ve RNA ekstraksiyonları fazat larvalarını belirledi
- 12 cinsiyet tarafından belirlenen erkek veya dişi fazat larvalarını (5 dpo embriyo) havuzlayın ve 1.5 mL'lik bir tüpe hücre lizis tamponu veya RNA ekstraksiyon reaktifleri (bkz. adım 2.11 ve Malzeme Tablosu) ekleyin.
NOT: DNA ekstraksiyonu için 3.2-3.7 adımlarını ve RNA ekstraksiyonu için 3.8-3.11 adımlarını izleyin. - Hücre lizis tamponunun 600 μL'sinde (10 mM Tris-HCl, 100 mM EDTA ve %1 SDS, pH 8.0) dokuları homojenize edin ve numuneleri 4 °C'de 5 dakika boyunca 10.000 x g'de santrifüj edin.
- Bir pipet kullanarak süpernatantı (500 μL) toplayın ve 50 ° C'de 1,5 μL Proteinaz K (20 mg / mL, Malzeme Tablosuna bakınız) ile bir ısı bloğu üzerinde 5 saat boyunca inkübe edin.
- Numuneleri 30 dakika boyunca 37 °C'de 1.0 μL 10 mg/mL RNaz çözeltisi (bkz. Malzeme Tablosu) ile işleyin.
- 7 tüplerine 200 μL protein çökeltme çözeltisi (Malzeme Tablosuna bakınız) ekleyin, ardından 4 ° C'de 10 dakika boyunca 17.000 x g'de bir santrifüj ekleyin.
- Süpernatantı (500 μL) 500 μL% 100 izopropanol ile karıştırın ve ardından 4 ° C'de 10 dakika boyunca 20.400 x g'de santrifüj yapın.
- Pelet edilmiş DNA'yı 1.000 μL% 70 etanol ile iki kez yıkayın. Daha sonra, hava ile kurutun (oda sıcaklığında 5-10 dakika), DNA'yı 10 mM Tris-Cl tamponunun 30 μL'sinde (pH 8.5) çözün.
- Dokuları 600 μL RNA ekstraksiyon reaktiflerinde homojenize edin ve tüpe 240 μL ultra saf damıtılmış su ekleyin. Tüpleri 4 °C'de 15 dakika boyunca 12.000 x g'de santrifüj yapın.
- Süpernatantı (600 μL) 600 μL% 100 izopropanol ile karıştırın ve karışımı bir silika spin kolonuna aktarın (bkz. Tüpleri 4 ° C'de 1 dakika boyunca 17.900 x g'de santrifüj yapın.
- Kolonu 750 μL% 70 etanol ile yıkayın ve sütunu 4 ° C'de her biri 1 dakika boyunca 17.900 x g'de iki kez santrifüj yapın.
- Kolona 15 μL Ultra saf damıtılmış su yükleyin. RNA'yı süzmek için tüpleri 17.900 x g'de 4 ° C'de 1 dakika boyunca santrifüj yapın.
- UV tabanlı bir spektrofotometre kullanarak DNA ve RNA'nın kalitesini ve miktarını hesaplayın ve doğrulayın. A260/A280 (Nükleik asitler/protein) ve A260/A230 (Nükleik asitler/tuzlar ve diğer kirleticiler) oranlarını kullanarak nükleik asitlerin saflığını değerlendirin13.
NOT: RNA ekstraksiyonu için, daha önce yayınlanmış prosedür12 izlendi ve bu da fenol kontaminasyonu ile sonuçlandı (Tablo 1). Tek bir embriyo veya farat larvasından ekstrakte edilen DNA ve RNA, düşük miktarda ve düşük kaliteli örnekler verir. Tipik olarak, 12 fazat larvasından DNA ekstraksiyonu 100-600 ng verirken, mevcut yöntemi kullanan RNA ekstraksiyonu, Tablo 1'de gösterildiği gibi 900-1.500 ng üretir.
NOT: Adım 3.13-3.15, yüksek verimli dizilemelerin daha fazla tahlili için isteğe bağlıdır. - Floresan bazlı spektrofotometre kullanarak DNA ve RNA miktarlarını hesaplayın.
NOT: RNA miktarlarının oranı (UV bazlı konsantrasyon (ng/μL)/floresan bazlı konsantrasyon (ng/μL)) daha ileri deneysel uygulamaların kalitesini değerlendirmek için hesaplanmıştır. Örneğin, UV ve floresan bazlı konsantrasyonlar sırasıyla 80 ng / uL ve 60 ng / uL olduğunda, oran 1.5 (80/60) olacaktır. Genellikle, 1,5'in altındaki oranlar, yüksek verim sıralaması13 kullanan aşağı akış uygulamaları için yeterli saflığı gösterir. - Mikroçip elektroforezi kullanarak RNA'nın kalitesini analiz edin14.
- Bir RNA kütüphanesi hazırlama kiti kullanarak RNA kütüphanesini hazırlamak için nitelikli RNA'ları kullanın (bakınız Malzeme Tablosu). Hazırlanan kütüphaneler için uygun bir platform kullanarak kütüphaneleri sıralayın.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Ana hatların kurulması ve bakımları
Tarlada toplanan larvaların yaşayabilirliği, tarla konumuna, mevsimlere ve yetiştirme koşullarına farklı şekilde atfedilir (örneğin, Arai ve ark.12'de gösterildiği gibi, Tayvan, Taoyuan'daki canlılığın% 90'ı). Çiftlerin yaklaşık% 30-50'si her zamanki gibi yeni nesli üretecektir. H. magnanima ve A. honmai için, matrilinler 100'den fazla kuşak boyunca akrabalık yoluyla korunmuştur.
Morfoloji...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Tortricid çeşitli tarım ve ormancılık zararlılarından oluşur; Bu çalışmada tortriksin nesiller boyunca arka plana çıkarılması, böceklerin embriyogenezini ve cinsiyetinin gözlemlenmesi ve olgunlaşmış embriyolar kullanılarak moleküler analiz yapılması için yöntemler sunulmuştur.
Haşere böcek çalışmasının önündeki engellerden biri, yetiştirme yöntemleri oluşturmaktır. Özellikle akrabalık bazen türlerin uygunluğunu olumsuz yönde etkiler. Akrabalık depresyonu olarak adlandırılan inbreed tarafından ...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyleri yoktur.
Teşekkürler
Yazarlar, Japonya Bilimi Geliştirme Derneği (JSPS) Genç Bilim İnsanları için Araştırma Bursu'nun desteğini kabul etmek istemektedir [Hibe Numarası 19J13123 ve 21J00895].
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 1/2 ons su bardağı | FP CHUPA | CP070009 | böcek yetiştiriciliği; |
| https://www.askul.co.jp/p/6010417/ 1/2 ons fincan kapağı | FP CHUPA | CP070011 | böcek yetiştiriciliği; |
| https://www.askul.co.jp/p/6010434/?int_id=recom_DtTogether %99,7 asetik asit | FUJIFILM Wako Chemicals Co., Osaka, Japonya | 36289 | sabitleme; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01ALF036289.html |
| Agilent 2100 Biyoanalizör | Agilent Technologies | gösterilmedi | Nükleik asit miktarının belirlenmesi; https://www.agilent.com/en/product/automated-electrophoresis/bioanalyzer-systems/bioanalyzer-instrument |
| Agilent RNA6000 nano kiti | Agilent Technologies | 5067-1511 | Nükleik asit miktar tayini; https://www.agilent.com/cs/library/usermanuals/Public/G2938-90034_RNA6000Nano_KG |
| benzalkonyum klorür çözeltisi | Nihon Pharmaceutical Co., Ltd | No.4987123116046 | Sterilizasyon; https://www.nihon-pharm.co.jp/consumer/products/disinfection.html |
| Pamuk | AOUME | 8-1611-02 | böcek yetiştiriciliği; https://item.rakuten.co.jp/athlete-med/10006937/?scid=af_pc_etc&sc2id=af_113_0_1 |
| DAPI çözeltisi | Dojindo, Tokyo, Japonya | 340-07971 | boyama; https://www.dojindo.co.jp/products/D523/ |
| Disodyum Hidrojenfosfat | FUJIFILM Wako Kimyasallar A.Ş. | 4.98748E + 12 | Na2HPO4; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0119-0286.html |
| dsDNA HS miktar tayin kiti | Invitrogen | Q33231 | Nükleik asit miktar tayini; https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/Q33230?SID=srch-srp-Q33230 |
| Econospin RNA II sütunu | Epoch Life Science Inc. | EP-11201 | RNA ekstraksiyonu; http://www.epochlifescience.com/Product/SpinColumn/minispin.aspx |
| Etanol | FUJIFILM Wako Chemicals Co., Osaka, Japonya | 4.98748E + 12 | fiksasyonu; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0105-0045.html |
| Etilendiamin-N, N, N ', N'-tetraasetik Asit Tetrasodyum Tuzu Tetrahidrat (4NA) | FUJIFILM Wako Kimyasallar A.Ş. | 4.98748E + 12 | Hücre lizis tamponu (EDTA); https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01T02N003.html |
| Glassine kağıdı | HEIKO 2100010 | böcek yetiştiriciliği; https://www.monotaro.com/p/8927/0964/?utm_id=g_pla& utm_medium=cpc& utm_source= Adw | |
| ısı bloğu WSC-2620 PowerBLOCK | ATTO, Tokyo, Japonya | 4002620 | inkübasyon; https://www.attoeng.site/ |
| heptan | FUJIFILM Wako Chemicals Co., Osaka, Japonya | 4.98748E + 12 | fiksasyonu; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0108-0015.html |
| INSECTA LF | Nosan Co., Ltd | gösterilmemiştir | Yapay diyet; https://www.nosan.co.jp/business/fodder/ist.htm |
| ISOGENII | Nippon Geni | 311-07361 | RNA ekstraksiyonu; https://www.nippongene.com/siyaku/product/extraction/isogen2/isogen2.html |
| izopropanol | FUJIFILM Wako Kimyasallar A.Ş. | 4.98748E + 12 | nükleik asit ekstraksiyonu; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0232-0004.html |
| Laktik asit | FUJIFILM Wako Kimyasallar A.Ş. | 4.98748E+12 | Boyama; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0112-0005.html |
| metanol | FUJIFILM Wako Chemicals Co., Osaka, Japonya | 4.98748E+12 | fiksasyonu; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0113-0182.html |
| MSV-3500 girdap | Biosan | BS-010210-TAK | Voltex karıştırıcı; https://biosan.lv/products/-msv-3500-multi-speed-vortex/ |
| Nano Fotometre NP 80 | Implen | gösterilmemiş | Nükleik asit miktarı; https://www.implen.de/product-page/implen-nanophotometer-np80-microvolume-cuvette-spectrophotometer/tech-specs/ |
| Doğal paket genişliğinde | Inomata kimyasal | 1859 | böcek yetiştiriciliği; %https://www.monotaro.com/g/03035766/?t.q=%E3%83%8A%E3%83%81%E3%83%A5%E3 %83 A9%E3%83%AB%E3%83%91% E3%83%83%83%%82%AF%E3%83% AF%E3% %82 A4%E3%83%89 |
| New England BioLabs | E7770S | için NEBNext Ultra II RNA Kütüphanesi Hazırlık Kiti | Kütüphane hazırlığı; https://www.nebj.jp/products/detail/2039 |
| orcein | FUJIFILM Wako Kimyasallar A.Ş. | 4.98748E + 12 | Boyama; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0115-0094.html |
| Paraformaldehit | FUJIFILM Wako Kimyasallar A.Ş. | 160-16061 | fiksasyon; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0116-1606.html |
| Polioksietilen(20) Sorbitan Monolaurat | FUJIFILM Wako Kimyasallar A.Ş. | 4.98748E+12 | Ara-20; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0116-2121.html |
| Taşınabilir UV Siyah Işık (4W, 365nm dalga boyu) | Southwalker Co., Ltd., Kanagawa, Japonya | gösterilmiyor | Böcek koleksiyonu; http://www.southwalker.com/shopping/?pid=1364614057-467328 |
| Potasyum Klorür | FUJIFILM Wako Kimyasallar A.Ş. | 4.98748E+12 | KCl; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0116-0354.html |
| Potasyum Dihidrojen Fosfat | FUJIFILM Wako Kimyasallar A.Ş. | 4.98748E+12 | KH2PO4; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0116-0424.html |
| ProLong Elmas Antifade Mountant | Invitrogen, MA, ABD | P36965 | antifade; https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/P36965 |
| Proteinaz K Çözeltisi | Merck | 71049-4CN | DNA ekstraksiyonu; https://www.merckmillipore.com/JP/ja/product/Proteinase-K-Solution-600-mAU-ml,EMD_BIO-71049 |
| protein çökeltme çözeltisi | Qiagen | 158912 | DNA ekstraksiyonu; https://www.qiagen.com/us/products/discovery-and-translational-research/lab-essentials/buffers-reagents/puregene-accessories/?cmpid=PC_DA_NON_ BIOCOMPARE_ProductListing_ 0121_RD_MarketPlace_ProductC |
| Qubit V4 | Invitrogen | Q33238 | Nükleik asitlerin miktar tayini; https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/Q33238 |
| rifampisin | FUJIFILM Wako Chemicals Co., Osaka, Japonya | 4.98748E + 12 | sterilizasyon; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0118-0100.html |
| RNA HS miktar tayin kiti | Invitrogen | Q32855 | Nükleik asitlerin miktar tayini; https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/Q32852 |
| RNase çözeltisi | Nippon Geni | 313-01461 | RNA ekstraksiyonu; https://www.nippongene.com/siyaku/product/modifying-enzymes/rnase-a/rnase-s.html |
| İpek Mate 2S | Nosan Co., Ltd | gösterilmemiş | Yapay diyet; https://www.nosan.co.jp/business/fodder/ist.htm |
| Sodyum Klorür | FUJIFILM Wako Kimyasallar A.Ş. | 4.98748E+12 | NaCl; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0119-0166.html |
| Sodyum Dodesil Sülfat | FUJIFILM Wako Kimyasallar A.Ş. | 4.98748E+12 | Hücre lizis tamponu (SDS); https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0119-1398.html |
| sodyum hipoklorit sulu çözeltisi | FUJIFILM Wako Chemicals Co., Osaka, Japonya | 4.98748E+12 | yumurta ayırma; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0119-0220.html |
| Tetrasiklin Hidroklorür | FUJIFILM Wako Chemicals Co., Osaka, Japonya | 4.98748E+12 | Sterilizasyon; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0120-1656.html |
| Tris-HCl | FUJIFILM Wako Kimyasallar A.Ş. | 4.98748E + 12 | Hücre lizis tamponu; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0120-1536.html |
| ultra saf damıtılmış su | İnvitrojen | 10977023 | RNA ekstraksiyonu; https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/10977015 |
Kaynaklar
- Gaston, K. J. The magnitude of global insect species richness. Conservation Biology. 5 (3), 283-296 (1991).
- Pogue, M. A world revision of the genus Spodoptera Guenée (Lepidoptera: Noctuidae). Memoirs of the American Entomological Society. 43, 1(2002).
- Matsuura, H., Naito, A. Studies on the cold-hardiness and overwintering of Spodoptera litura F. (Lepidoptera: Noctuidae): VI. Possible overwintering areas predicted from meteorological data in Japan. Applied Entomology and Zoology. 32 (1), 167-177 (1997).
- Mita, K., et al. The construction of an EST database for Bombyx mori and its application. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100 (24), 14121-14126 (2003).
- Kawamoto, M., et al. High-quality genome assembly of the silkworm, Bombyx mori. Insect Biochemistry and Molecular Biology. 107, 53-62 (2019).
- Fukui, T., et al. In vivo masculinizing function of the Ostrinia furnacalis Masculinizer gene. Biochemical and Biophysical Research Communications. 503 (3), 1768-1772 (2018).
- Arai, H., Ishitsubo, Y., Nakai, M., Inoue, M. N. A simple method to disperse eggs from lepidopteran scale-like egg masses and to observe embryogenesis. Entomological Science. 25 (1), 12497(2022).
- vander Geest, L. P., Evenhuis, H. H. Tortricid pests: their biology, natural enemies and control. , Elsevier Science Publishers. Amsterdam. (1991).
- Kiuchi, T., et al. A single female-specific piRNA is the primary determiner of sex in the silkworm. Nature. 509 (7502), 633-636 (2014).
- Rand, M. D., Kearney, A. L., Dao, J., Clason, T. Permeabilization of Drosophila embryos for introduction of small molecules. Insect Biochemistry and Molecular Biology. 40 (11), 792-804 (2010).
- Kageyama, D., Traut, W. Opposite sex-specific effects of Wolbachia and interference with the sex determination of its host Ostrinia scapulalis. Proceedings of the Royal Society B. 271 (1536), 251-258 (2004).
- Arai, H., Lin, S. R., Nakai, M., Kunimi, Y., Inoue, M. N. Closely related male-killing and nonmale-killing Wolbachia strains in the oriental tea tortrix Homona magnanima. Microbial Ecology. 79 (4), 1011-1020 (2020).
- Schalamun, M., et al. Harnessing the MinION: An example of how to establish long-read sequencing in a laboratory using challenging plant tissue from Eucalyptus pauciflora. Molecular Ecology Resources. 19 (1), 77-89 (2019).
- Winnebeck, E. C., Millar, C. D., Warman, G. R. Why does insect RNA look degraded. Journal of Insect Science. 10 (1), 159(2010).
- Ivey, C. T., Carr, D. E., Eubanks, M. D. Effects of inbreeding in Mimulus guttatus on tolerance to herbivory in natural environments. Ecology. 85 (2), 567-574 (2004).
- Saccheri, I., et al. Inbreeding and extinction in a butterfly metapopulation. Nature. 392 (6675), 491-494 (1998).
- Crnokrak, P., Roff, D. A. Inbreeding depression in the wild. Heredity. 83 (3), 260-270 (1999).
- Keller, L. F., Waller, D. M. Inbreeding effects in wild populations. Trends in Ecology & Evolution. 17 (5), 230-241 (2002).
- Margaritis, L. H., Kafatos, F. C., Petri, W. H. The eggshell of Drosophila melanogaster. I. Fine structure of the layers and regions of the wild-type eggshell. Journal of Cell Science. 43 (1), 1-35 (1980).
- Sugimoto, T. N., Ishikawa, Y. A male-killing Wolbachia carries a feminizing factor and is associated with degradation of the sex-determining system of its host. Biology Letters. 8 (3), 412-415 (2012).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
