Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Küçükbaş Gözde İntravitreal Enjeksiyonlar

3.9K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/63823

⸱

5 Temmuz 2022

 , 
1Faculty of Agriculture and Life Sciences, Lincoln University

Bu makalede

Özet

Koyun gözünde intravitreal enjeksiyonlar, retinaya viral aracılı gen tedavisi vermek amacıyla yapıldı.

Özet

Terapötik ajanların retinaya verilmesi için intravitreal (IVT), subretinal, suprakoroidal, perioküler veya topikal uygulama dahil olmak üzere çeşitli yöntemler vardır. IVT ilaç dağıtımı, gözün arka odasını dolduran ve göz küresinin şeklini koruyan jelatinimsi bir madde olan gözün vitreus mizahına bir enjeksiyon içerir. IVT yolu subretinal doğumdan daha az spesifik olarak hedeflenmiş olmasına rağmen, çok daha az invazivdir ve bir dizi oküler hastalık için klinik ortamlarda yaygın olarak kullanılmaktadır.

Daha önce adeno ilişkili virüs (AAV) aracılı bir gen terapisi ürününün (AAV9) intravitreal olarak verilmesinin etkinliğini göstermiştik. CLN5), doğal olarak oluşan CLN5 nöronal seroid lipofuscinosis (NCL) formuna sahip koyunlarda. Etkilenen koyunların bir gözünde IVT gen terapisi verilirken, diğer tedavi edilmeyen göz iç kontrol görevi gördü. Tedavi edilen gözde tedaviden 15 ay sonrasına kadar retinal yapı ve fonksiyon korunurken, tedavi edilmeyen gözde postmortem muayene sırasında giderek azalan fonksiyon ve ciddi atrofi görüldü. Koyun çalışmalarına dayanarak, CLN5 gen terapisi ürünü, Eylül 2021'de Amerika Birleşik Devletleri Gıda ve İlaç İdaresi tarafından aday bir araştırma yeni ilacı (IND) olarak temizlendi. Bu yazıda IVT'nin küçükbaş göze terapötik viral vektör verilmesi için cerrahi protokol detaylandırılmıştır.

Giriş

Retinaya terapötik ajanlar vermek için intravitreal (IVT), subretinal, suprakoroidal, perioküler veya topikal uygulama dahil olmak üzere çeşitli yöntemler kullanılabilir. Her uygulama yolu, kan-retina bariyeri veya iç ve dış sınırlayıcı membranlar gibi engellerin aşılmasını içerir ve verilen ilaca ve spesifik retinal hedefe bağlı olarak değişen etkinlik oranlarına sahiptir 1,2.

IVT ilaç dağıtımı, gözün arka odasını kaplayan jelatinimsi bir madde olan gözün vitreus mizahına enjeksiyonu içerir. Vitröz mizahın birincil işlevi, göz küresinin şeklini korumak ve lens ve retina gibi oküler dokuları yerinde tutmaktır. Vitröz mizah, az miktarda kollajen, hyaluronik asit ve diğer kollajenöz olmayan proteinler içeren büyük ölçüde sudan oluşur3. IVT enjeksiyonu, yaşa bağlı makula dejenerasyonu, diyabetik makula ödemi, diyabetik retinopati, retinal ven tıkanıklığı ve çeşitli kalıtsal retina distrofileri dahil olmak üzere çok çeşitli oküler durumları tedavi etmek için rutin olarak kullanılan basit ve yaygın bir prosedürdür 4,5.

Nöronal seroid lipofussinozlar (NCL; Batten hastalığı), beyin ve retinada ciddi dejenerasyona neden olan ölümcül lizozomal depo hastalıkları grubudur. Şu anda, ağırlıklı olarak çocukları etkileyen, ancak farklı başlangıç yaşlarına ve hastalık şiddetine sahip olan farklı genlerdeki (CLN1-8, CLN10-14) mutasyonlardan kaynaklanan 13 bilinen NCL varyantı vardır6. NCL'ler, bilişsel ve motor gerileme, nöbetler ve görme kaybı gibi ortak ilerleyici semptomları paylaşır. NCL'nin tedavisi yoktur; Bununla birlikte, beyne yönelik enzim replasman tedavisi şu anda CLN2 hastalığı7,8 için klinik çalışmalardadır ve AAV aracılı gen terapisi, CLN5 gen terapisi için klinik bir araştırmanın 2022'de başlaması beklenen klinik çalışmalarla klinik öncesi çalışmalarda büyük umut vaat etmiştir 9,10.

Diğer birçok tür, kediler, köpekler, koyunlar ve inekler de dahil olmak üzere doğal olarak oluşan NCL formları geliştirir. NCL'nin iki küçükbaş hayvan modeli şu anda Yeni Zelanda'da aktif olarak çalışılmaktadır: Borderdale koyunlarında bir CLN5 hastalık modeli ve Güney Hampshire koyunlarında bir CLN6 hastalık modeli. Etkilenen koyunlar, retina atrofisi ve görme kaybı da dahil olmak üzere insan hastalığının klinik ve patolojik özelliklerinin çoğunu sergiler10,11. CLN5 hastalığı olan koyunlarda beyne yönelik CLN5 gen terapisi beyin atrofisini ve klinik düşüşü önleyebilse veya durdurabilse de, tedavi edilen koyunlar hala vizyonlarını kaybeder9. Bu, görüşü korumak ve daha iyi bir yaşam kalitesini korumak için retinayı tedavi etme ihtiyacını vurguladı ve koyunlarda oküler gen tedavisi için bir protokol oluşturulmasına yol açtı.

Koyun gözü, göz küre boyutları, vitreus hacmi ve retinal yapı10,12,13'teki benzerliği nedeniyle insan gözünün iyi bir modelini temsil eder. Bu yazıda IVT'nin küçükbaş göze küçük hacimli (≤100 μL) terapötik viral vektörün verilmesi için cerrahi protokol detaylandırılmıştır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm deneysel protokoller Lincoln Üniversitesi Hayvan Etiği komitesi tarafından onaylanmıştır ve araştırmalarda hayvanların bakımı ve kullanımı için ABD Ulusal Sağlık Enstitüleri kılavuzları ve Yeni Zelanda Hayvan Refahı Yasası (1999) ile uyumludur. Borderdale koyunlarıdoğum 14'te teşhis edildi ve Lincoln Üniversitesi araştırma çiftliklerinde tutuldu. 3 aylık üç homozigot (CLN5-/-) koyun, sol göze tek bir IVT enjeksiyonu yapıldı ve tedavi edilmeyen sağ göz iç kontrol görevi gördü. Elektroretinografi ve patoloji verileri tarihsel sağlıklı ve etkilenmiş kontrol verileriyle karşılaştırıldı. Bu çalışmada kullanılan viral vektör, tavuk beta etkisi (CBh) promotörü ve kodon ile optimize edilmiş küçükbaş hayvan CLN5 (scAAV9 / CBh-oCLN5opt) içeren, kendi kendini tamamlayan adeno ilişkili bir virüs serotip 9 idi. Viral vektör, Kuzey Carolina Vector Core, NC, ABD Üniversitesi tarafından sağlanmıştır.

1. Ameliyat öncesi

  1. Cerrahi kiti otoklav edin (Şekil 1).
  2. Koyunları ameliyattan önce 24 saat boyunca oruç tutun.
  3. Ameliyattan önce canlı ağırlıkları kaydedin.

figure-protocol-1
Resim 1: İntravitreal cerrahi kit. IVT cerrahisi için gerekli aletler arasında (1) göz kapaklarını açık tutmak için bir spekulum ve (2) bulber konjonktivayı kavramak ve gözü döndürmek için bir çift kavisli burun forseps bulunur. (3) Düz bir burun hemostatı, bulber konjonktivayı kavramak ve göz yörüngesine geri dönmüşse gözü yerinde tutmak için alternatif bir araç olarak da dahil edilir. Bu kit ameliyattan önce otoklavlanır. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

2. Cerrahi prosedür

  1. Hayvanı kısıtlayın ve elektronik makaslar kullanarak, yünü boynun bir tarafından juguler damar üzerinde tıraş edin.
  2. Juguler oluğun tabanına basınç uygulayarak juguler veni tıkayın ve yükseltilmiş damarı görselleştirin.
  3. Uygun miktarda diazepam (0.3 mg / kg) ve ketamin (7.5 mg / kg) steril bir şırıngaya çekin ve steril bir 20 G iğne takın. İğneyi juguler damara yerleştirin ve kanın göbeğe girdiğinden ve iğnenin damarın içinde olduğundan emin olmak için yavaşça pistona geri çekin. Doğrulandıktan sonra, intravenöz (juguler) uygulama yoluyla indükleyin.
  4. İndüksiyondan hemen sonra, hayvanı dorsal yassılığa yerleştirin, boynu uzatın ve larinksi görselleştirmek için bir laringoskop kullanarak dili yukarı ve ileri doğru tutun. Hayvan nefes verirken ses telleri arasına nazikçe bir endotrakeal tüp (koyunun büyüklüğüne bağlı olarak 6.0-9.0 boyutu) yerleştirerek endotrakeal entübasyon yapın. Endotrakeal manşeti hemen şişirin ve tüpü alt çenenin etrafında bir bağ ile sabitleyin. Tüpten hava akışını onaylayın.
  5. Koyunları ameliyat masasına aktarın ve yanal yassılığa yerleştirin.
  6. Endotrakeal tüpü% 100 oksijende izofluran verilmesi için derhal anestezik makinenin hortumlarına bağlayın. Başlangıçta% 3 -% 4 izofluran ile başlayın ve daha sonra bakım için% 2 -% 3'e düşürün. Koyunların kendiliğinden havalandırılmasını gözlemleyin.
  7. İşlem boyunca kalp (nabız) hızını, solunum hızını, oksijen doygunluğunu, son gelgit CO2 seviyelerini ve rektal vücut ısısını izleyin. Anestezi uygulanan koyunlarda bu parametrelerin fizyolojik değerleri için Tablo 1'e bakınız (değişken, ancak kılavuz olarak kullanın).
  8. Cerrahi bir ameliyat arabasına büyük, steril, kare bir örtü yerleştirin, ardından steril aletler yerleştirin.
  9. Steril, federe bir cerrahi örtüyü enjekte edilecek gözün üzerine yerleştirin.
  10. Gözü% 1-5 povidon-iyot çözeltisi ile sulamak için steril bir 20 mL şırınga kullanarak gözü aseptik olarak dezenfekte edin.
  11. Göze lokal anestezik olarak 1-2 damla Alcaine% 0.5 W / V oftalmik solüsyon uygulayın.
  12. Gözü açık tutmak için göz kapaklarına bir Nopa Barraquer-Colibri göz spekulumu (10 mm) takın.
  13. Forseps ile gözün dorsolateral kısmındaki bulber konjonktivayı kavrayın ve göz küresini ventromedial olarak döndürün.
FarkındaAnestezi uygulanmışÖnerilen kritik müdahale noktası
Kalp atış hızı (atım/dak)50-80 (dinlenme) ila 280 (aktif)50-80<50, >100
Solunum hızı (nefes/dk)15-40 (dinlenme) ila 350 (aşırı ısınmış)10-30<8, >40
Oksijen doygunluğu (mm Hg)95-10098-100<90
Son gelgit CO2 (mm Hg)35-4535-45>55
Vücut ısısı (°C)38.5-39.538.5-39.5<36, >40

Tablo 1: Anestezi uygulanan koyunlarda izlenecek parametrelerin fizyolojik değerleri.

3. Viral hazırlık

  1. AAV vektör alikotlarını kullanana kadar -80 ° C'de saklayın.
  2. Ameliyat gününde, buzda IVT teslimatı için gerekli sayıda şişeyi çözün.
  3. Uygulamadan hemen önce, viral vektör aliquot'u vorteksleyin ve içeriği toplamak için 10 s boyunca 400 × g'de santrifüj yapın.
  4. Her viral vektör aliquotunu steril filtrelenmiş 1x fosfat tamponlu salin (PBS) içinde istenen doza 100 μL'lik son hacimde seyreltin. steril filtre pipet uçlarını kullanarak steril 1,5 mL düşük protein bağlayıcı mikrosantrifüj tüpünde vektör seyreltmeleri hazırlayın. Viral vektörle temas eden tüm sarf malzemelerini dezenfektan çözeltisine atın ( Malzeme Tablosuna bakınız).
    NOT: Orijinal yayında15 terapötik ajanın dozu (AAV9. CLN5) 1.9 x 1010 viral genom idi. Önerilen dozaj, uygulanan terapötik ajana bağlı olarak değişecektir; bu nedenle, burada sunulan standart protokole bir dozaj dahil edilmemiştir.
  5. AAV vektör preparatının tam 100 μL'sini, derhal enjeksiyon için iğneye kalıcı olarak tutturulmuş 28 G x 1/2 ile steril, düşük ölü alanlı 1 mL şırıngaya çekin. Hazırlıktan enjeksiyona kadar geçen sürenin 2 dakikadan az olduğundan emin olun.

4. Viral uygulama

  1. İğneyi gözün lateral tarafındaki skleraya yaklaşık 7 mm posterior olarak yerleştirin ve lensten kaçınmak için posterioral olarak açılı olarak yerleştirin (Şekil 2 ve Şekil 3). 100 μL'lik tek enjeksiyonu, retina yüzeyini rahatsız etmeden retinaya mümkün olduğunca yakın bir bolus olarak uygulayın.
  2. Spekulum ve perdenin çıkarılmasından önce gözü yaklaşık 10-15 mL% 1-5 povidon-iyot çözeltisi ve ardından 10 mL salin ile durulayın.
  3. Koyunları ters çevirin ve gerekirse diğer gözle tekrarlayın.

figure-protocol-2
Şekil 2: Göz küresinin ventromedial dönüşü. (A) Bulber konjonktivayı dişsiz forseps ile kavrayın ve (B) enjeksiyon için gözün dorsolateral yüzeyini açığa çıkarmak için ventromedial olarak (yani buruna doğru) döndürün. Kısaltmalar: V = ventral, D = dorsal, M = medial, L = yanal. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

figure-protocol-3
Şekil 3: Enjeksiyon yeri ve derinliği. İğne, göz küresinin dorsolateral yönüne enjekte edilir ve iğne milinin tam uzunluğu (0,5 inç / 12,7 mm) göze yerleştirilir. Lensten kaçınmak için iğnenin gözün arka tarafına doğru açısına dikkat edin ve retinaya mümkün olduğunca yakın enjekte edin. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

5. Postoperatif yönetim

  1. İşlemin tamamlanması üzerine, izofluran gazı inhalasyon anestezisini durdurun, hattı% 100 oksijenle yıkayın, hortumu endotrakeal tüpten ayırın ve koyunları iyileşme odasına aktarın.
  2. Koyunları sternal yassılığa yerleştirin, bacaklar altına sıkışmış olarak ve tamamen iyileşene kadar izleyin. Hayvanın ağzının herhangi bir tıkanıklıktan arındırıldığından emin olun.
  3. Yutma refleksi gözlendiğinde, endotrakeal tüpün manşetini kısmen söndürün ve tüpü ağızdan yavaşça çıkarın.
  4. Arka ekstremitenin biseps femoris kasına, boynun yan tarafında veya omzun arkasında deri altı antibiyotiklere intramüsküler bir nonsteroidal anti-enflamatuar uygulayın ve% 0.5 kloramfenikol göz küresinin yüzeyine düşer.
  5. Koyunlar yardımsız durabildiğinde su ve yiyecek (lucerne peletleri ve saman) sağlayın.
  6. Ameliyat sonrası 7 gün boyunca% 0.5 kloramfenikol göz damlası günde 2-3 damla uygulayın.
  7. Koyunları ameliyattan yaklaşık 24 saat sonra açık hava padokuna dönmeden önce gece boyunca içeride tutun.
  8. 3 hafta boyunca günlük rektal sıcaklıkları kaydedin. Nabız veya solunum hızı, gıda tüketimi, nörodavranış, vücut ısısı, kilo, duruş, göz sağlığı ve klinik hastalık belirtilerindeki değişiklikleri izleyin. Herhangi bir yan etki belirtisi varsa uygun veteriner tedavisi isteyin.

6. İn vivo etkinliğin değerlendirilmesi

  1. IVT enjeksiyonunun amacı görmeyi korumaksa, retina hücre fonksiyonunu değerlendirmek için labirent testi veya elektroretinografi (ERG) veya retina yapısını değerlendirmek için optik koherens tomografi (OCT) gibi yöntemlerle in vivo etkinliği izleyin.
    NOT: Bu etkinlik ölçümleri IVT gen terapisi11,15,16'yı takiben iyi tanımlanmıştır.

7. Postmortem doku analizi

  1. İntravitreal enjeksiyon ameliyatını takiben uygun bir son noktada onaylanmış bir yöntemle koyun ötenazisi uygulayın.
    NOT: İntravenöz veteriner ötenazi ilaçları veya servikal omurgaya nüfuz eden bir esir cıvata ve ardından hızlı ekssanguinasyon gibi önerilen ötenazi yöntemleri, başka bir yerde detaylandırılmıştır15,16.
  2. Cerrahi keskin/künt kavisli makas kullanarak koyun gözü kürelerini hasat edin. Göz yuvası açıklığını arttırmak için lateral ve medial kanthus kesin ve daha sonra göz küresini soketten serbest bırakmak için konjonktival kıvrımları, bağ dokusunu, kasları ve optik siniri sistematik olarak kesin.
  3. Daldırma-sabitleme bozulmamış, enüklee göz küreleri 2 saat boyunca% 10 formalin içinde, ardından Bouin çözeltisinde 4 saat boyunca postfiksasyon ile yeterli perfüzyona izin vermek için sklerada küçük (0.5 cm) bir kesim yapılır. Alternatif olarak, göz kürelerini Davidson'un çözeltisine daldırarak 48 saat boyunca sabitleyin.
  4. Göz dokusunun kesitlerini rutin parafin balmumu gömme ve 3-5 μm'de kesitleme yoluyla işleyin.
    NOT: Hematoksilin ve eozin (H&E) boyama ve immünohistokimyasal analiz için boyama prosedürleri daha önce15,16 olarak tanımlanmıştır.
  5. Postmortem dokudaki etkinliği, toplam retina kalınlığı, retina tabakası kalınlığı, dış nükleer tabaka hücresel sıralarının sayıları ve retinal hücre tipleri, retinal glia veya ilgilenilen proteinler için immünohistokimyasal boyama gibi ölçümlerle değerlendirin.
    NOT: Bu analizlere ilişkin protokoller için öncekiyayınlara bakınız 15,16.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

CLN5 NCL'li koyunlarda retinal disfonksiyon ve dejenerasyonun azaltılmasında bir CLN5 gen terapisi vektörünün IVT verilmesinin etkinliği daha önce bu araştırma grubu15 tarafından gösterilmiştir. Etkilenen koyunlara, bir AAV serotip 9 (AAV9) vektöründe (AAV9) paketlenmiş tek bir 100 μL IVT CLN5 enjeksiyonu yapıldı. CLN5) bir göze, kontralateral göz tedavi edilmemiş bir iç kontrol görevi görür. Görme, enjeksiyon yaşından (3 ay) son dönem hastalığına (18 ay) kadar aylık olarak değerlendirildi. Retina...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

İntravitreal enjeksiyonlar, insan oftalmolojisinde en yaygın cerrahi prosedürlerden biridir ve koyunların retinasına AAV aracılı gen terapilerinin uygulanmasında etkili olduğu kanıtlanmıştır. Daha önce AAV9'un etkinliğini göstermiştik. CLN5 gen tedavisi, CLN5 NCL15 ile koyunlarda retinal disfonksiyon ve dejenerasyonun azaltılmasında intravitreal olarak sağlandı. Bu uygulama yolunun insan NCL hastalarına çevrilmesinin de faydalı olacağı umulmaktadır.

Bir koyun gözüne küç...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacağı bir çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

Yazarlar, bu protokolün oluşturulmasında ve Murray ve ark.15 tarafından tanımlanan enjeksiyonların gerçekleştirilmesinde Dr. Steve Heap'e (BVSc, CertVOphthal) verdiği yardım için teşekkür etmek ister. Yazarlar ayrıca CureKids New Zealand, Canterbury Tıbbi Araştırma Vakfı, Neurogene Inc ve Batten Hastalığı Destek ve Araştırma Derneği'nden gelen fonları da kabul ediyorlar.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Kalıcı olarak takılmış 0,5 inç iğneli 1 mL düşük ölü alan güvenlik şırıngasıFisher Scientific, Auckland, Yeni Zelanda05-561-28Covidien Monoject Tuberculin Güvenlik şırıngası veya benzeri
1,5 mL mikrosantrifüj tüpüSigma AldrichHS4323Kullanmadan önce sterilize etmek için otoklav tüpleri
Gaz tezgahlı ve monitörlü anestezi makinesi Hyvet Anestezi, Christchurch, Yeni Zelanda
Antibiyotikli göz damlası Teva Pharma Ltd, Auckland, Yeni ZelandaTicari adı: Chlorafast (% 0.5 kloramfenikol)
BrightMount artı solma önleyici montaj ortamıAbcam, Cambridge, Birleşik Krallıkab103748
DAPI (4 & prime; , 6-diamidino-2-fenilindol dihidroklorür)Sigma Aldrich, St. Louis, Missouri, Amerika Birleşik Devletleri10236276001
Diazepam yatıştırıcıIlium, Troy Laboratories Pty Ltd, Tauranga, Yeni Zelanda5 mg / mL
Endotrakeal tüplerFlexicare Medical Ltd, Mountain Ash, Birleşik KrallıkStandart, manşetli. Koyun boyutuna bağlı olarak 7, 7.5 veya 8 bedenler
Göz spekulumuCapes Medical Ltd, Tauranga, Yeni ZelandaKP151/14Nopa Barraquer-Colibri (10 mm)
Fenestrated cerrahi örtüAmtech Medical Ltd, Whanganui, Yeni ZelandaDI583Veya benzeri 
Filtre UçlarıInterlab, Auckland, Yeni Zelanda10, 200 ve 1.000 &mikro; L 
Formaldehit çözeltisi (%37)Fisher Scientific, Auckland, Yeni ZelandaAJA809-2.5PL%0,9 NaCl ile damıtılmış suda %10'a kadar oluşturun
Keçi tavşan karşıtı Alexa Fluor 594Invitrogen Carlsbad, CA, ABD&nbsp; A-110121:500
İzofluranAttane, Bayer Hayvan Sağlığı, Auckland, Yeni Zelanda
Ketamin HCl anestezik/analjezikPhoenixPharm Distributors Ltd, Auckland, Yeni Zelanda100 mg/mL
Laringoskop (veteriner)KaWe Medical, DanimarkaMiller C bıçak, boyut 2
İğneler Capes Medical Ltd, Tauranga, Yeni Zelanda302025BD Hipodermik İğneler veya benzeri
Steroid olmayan antienflamatuarBoehringer Ingelheim (NZ) Ltd, Auckland, Yeni Zelanda49402/008Ticari adı: Metacam 20 (20 mg / mL meloksikam)
Dişli olmayan forsepsCapes Medical Ltd, Tauranga, Yeni ZelandaAB864 / 16Veya benzeri 
Dişsiz hemostatCapes Medical Ltd, Tauranga, Yeni ZelandaAA150 / 12Veya benzeri 
Normal keçi serumuThermo Fisher Scientific, Christchurch, Yeni Zelanda16210072
Oksijen (tıbbi)BOC Gazı, Christchurch, Yeni ZelandaD2 silindiri, gaz kodu 180
Fosfat tamponlu salin Thermo Fisher Scientific, Christchurch, Yeni Zelanda10010023Steril, filtrelenmiş
Povidon-İyot çözeltisiCapes Medical Ltd, Tauranga, Yeni Zelanda005835Ticari adı: Betadine (%10 povidon-iyot)
Tavşan önleyici glial fibriler asidik protein (GFAP)Dako, Glostrup, DanimarkaZ03341:2.500
seyreltmede kullanınTavuk beta etki (CBh) promotörü ve kodon için optimize edilmiş küçükbaş hayvan içeren kendi kendini tamamlayan adeno-ilişkili virüs serotipi 9 CLN5University of North Carolina Vector Core, NC, ABD.scAAV9/CBh-oCLN5opt
Sodyum Klorür %0.9 IV ÇözeltiCapes Medical Ltd, Tauranga, Yeni ZelandaAHB1322Ticari adı: Salin solüsyonu 
Subkutan antibiyotiklerIntervet Schering Plough Animal Health Ltd, Wellington, Yeni ZelandaTicari adı: Duplocillin LA (150.000 IU/mL prokain penisilin ve 115.000 IU/mL benzatin penisilin)
Cerrahi keskin künt kavisli makas Capes Medical Ltd, Tauranga, Yeni ZelandaSSSHBLC130
Terumo Şırınga Luer KilidiAmtech Medical Ltd, Whanganui, Yeni ZelandaSH159/SH160Steril şırıngalar; İndüksiyon ilaçlarının hazırlanması için 10 mL, salin hazırlamak için 20 mL
Virkon Dezenfektan TozuEBOS Group Ltd, Christchurch, Yeni Zelanda28461115
anestezik seyreltmede kullanım

Kaynaklar

  1. Himawan, E., et al. Drug delivery to retinal photoreceptors. Drug Discovery Today. 24 (8), 1637-1643 (2019).
  2. Murray, S. J., Mitchell, N. L. Ocular therapies for neuronal ceroid lipofuscinoses: More than meets the eye. Neural Regeneration Research. 17 (8), 1755-1756 (2022).
  3. Bishop, P. N. Structural macromolecules and supramolecular organisation of the vitreous gel. Progress in Retinal and Eye Research. 19 (3), 323-344 (2000).
  4. Grzybowski, A., et al. update on intravitreal injections: Euretina expert consensus recommendations. Ophthalmologica. 239 (4), 181-193 (2018).
  5. Pavlou, M., et al. Novel AAV capsids for intravitreal gene therapy of photoreceptor disorders. EMBO Molecular Medicine. 13 (4), 13392(2021).
  6. Kousi, M., Lehesjoki, A. -E., Mole, S. E. Update of the mutation spectrum and clinical correlations of over 360 mutations in eight genes that underlie the neuronal ceroid lipofuscinoses. Human Mutation. 33 (1), 42-63 (2012).
  7. Wibbeler, E., et al. Cerliponase alfa for the treatment of atypical phenotypes of CLN2 disease: A retrospective case series. Journal of Child Neurology. 36 (6), 468-474 (2021).
  8. Schulz, A., et al. Study of intraventricular cerliponase alfa for CLN2 disease. The New England Journal of Medicine. 378 (20), 1898-1907 (2018).
  9. Mitchell, N. L., et al. Longitudinal in vivo monitoring of the CNS demonstrates the efficacy of gene therapy in a sheep model of CLN5 Batten disease. Molecular Therapy. 26 (10), 2366-2378 (2018).
  10. Murray, S. J., Mitchell, N. L. Natural history of retinal degeneration in ovine models of CLN5 and CLN6 neuronal ceroid lipofuscinoses. Scientific Reports. 12 (1), 3670(2022).
  11. Russell, K. N., Mitchell, N. L., Wellby, M. P., Barrell, G. K., Palmer, D. N. Electroretinography data from ovine models of CLN5 and CLN6 neuronal ceroid lipofuscinoses. Data in Brief. 37, 107188(2021).
  12. Shafiee, A., McIntire, G. L., Sidebotham, L. C., Ward, K. W. Experimental determination and allometric prediction of vitreous volume, and retina and lens weights in Göttingen minipigs. Veterinary Ophthalmology. 11 (3), 193-196 (2008).
  13. Shinozaki, A., Hosaka, Y., Imagawa, T., Uehara, M. Topography of ganglion cells and photoreceptors in the sheep retina. The Journal of Comparative Neurology. 518 (12), 2305-2315 (2010).
  14. Frugier, T., et al. A new large animal model of CLN5 neuronal ceroid lipofuscinosis in Borderdale sheep is caused by a nucleotide substitution at a consensus splice site (c.571+1G>A) leading to excision of exon 3. Neurobiology of Disease. 29 (2), 306-315 (2008).
  15. Murray, S. J., et al. Intravitreal gene therapy protects against retinal dysfunction and degeneration in sheep with CLN5 Batten disease. Experimental Eye Research. 207, 108600(2021).
  16. Ross, M., et al. Outer retinal transduction by AAV2-7m8 following intravitreal injection in a sheep model of CNGA3 achromatopsia. Gene Therapy. , (2021).
  17. Boyd, R. F., et al. Photoreceptor-targeted gene delivery using intravitreally administered AAV vectors in dogs. Gene Therapy. 23 (2), 223-230 (2016).
  18. Dalkara, D., et al. In vivo-directed evolution of a new adeno-associated virus for therapeutic outer retinal gene delivery from the vitreous. Science Translational Medicine. 5 (189), (2013).
  19. Gearhart, P. M., Gearhart, C., Thompson, D. A., Petersen-Jones, S. M. Improvement of visual performance with intravitreal administration of 9-cis-retinal in Rpe65-mutant dogs. Archives of Ophthalmology. 128 (11), 1442-1448 (2010).
  20. Ross, M., et al. Evaluation of photoreceptor transduction efficacy of capsid-modified adeno-associated viral vectors following intravitreal and subretinal delivery in sheep. Human Gene Therapy. 31 (13-14), 719-729 (2020).
  21. Kotterman, M. A., et al. Antibody neutralization poses a barrier to intravitreal adeno-associated viral vector gene delivery to non-human primates. Gene Therapy. 22 (2), 116-126 (2015).
  22. Whitehead, M., Osborne, A., Yu-Wai-Man, P., Martin, K. Humoral immune responses to AAV gene therapy in the ocular compartment. Biological Reviews. 96 (4), 1616-1644 (2021).
  23. Yun, C., Oh, J., Hwang, S. -Y., Kim, S. -W., Huh, K. Subconjunctival hemorrhage after intravitreal injection of anti-vascular endothelial growth factor. Graefe's Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 253 (9), 1465-1470 (2015).
  24. Christensen, L., Cerda, A., Olson, J. L. Real-time measurement of needle forces and acute pressure changes during intravitreal injections. Clinical & Experimental Ophthalmology. 45 (8), 820-827 (2017).
  25. Allmendinger, A., Butt, Y. L., Mueller, C. Intraocular pressure and injection forces during intravitreal injection into enucleated porcine eyes. European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 166, 87-93 (2021).
  26. Ross, M., Ofri, R. The future of retinal gene therapy: Evolving from subretinal to intravitreal vector delivery. Neural Regeneration Research. 16 (9), 1751-1759 (2021).
  27. Henein, C., et al. Hydrodynamics of intravitreal injections into liquid vitreous substitutes. Pharmaceutics. 11 (8), 371(2019).
  28. Park, I., Park, H. S., Kim, H. K., Chung, W. K., Kim, K. Real-time measurement of intraocular pressure variation during automatic intravitreal injections: An ex-vivo experimental study using porcine eyes. PloS One. 16 (8), 0256344(2021).
  29. Willekens, K., et al. Intravitreally injected fluid dispersion: Importance of injection technique. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 58 (3), 1434-1441 (2017).
  30. Peynshaert, K., Devoldere, J., De Smedt, S. C., Remaut, K. In vitro and ex vivo models to study drug delivery barriers in the posterior segment of the eye. Advanced Drug Delivery Reviews. 126, 44-57 (2018).
  31. Kiss, S. Vector Considerations for Ocular Gene Therapy. Adeno-associated virus vectors offer a safe and effective tool for gene delivery. Retinal Physician. 17, 40-45 (2020).
  32. Kleine Holthaus, S. -M., et al. Gene therapy targeting the inner retina rescues the retinal phenotype in a mouse model of CLN3 Batten disease. Human Gene Therapy. 31 (13-14), 709-718 (2020).
  33. Kleine Holthaus, S. -M., et al. Neonatal brain-directed gene therapy rescues a mouse model of neurodegenerative CLN6 Batten disease. Human Molecular Genetics. 28 (23), 3867-3879 (2019).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Retinal İlaç SalınımıGen TedavisiRetinal DejenerasyonElektroretinografi AnaliziRetinal HistolojiGlial Fibriler Asit ProteiniViral Vektör SalınımıNöronal Seroid Lipofuscinosis
Küçükbaş Gözde İntravitreal Enjeksiyonlar
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.