Yöntem makalesi

Oküler Yüzey Enflamasyonunun İndüklenmesi ve Tutulan Dokuların Toplanması

DOI:

10.3791/63890

⸱

4 Ağustos 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Internal Medicine 3-Rheumatology and Immunology, Friedrich-Alexander-University Erlangen-Nürnberg and Universitätsklinikum Erlangen, 2Deutsches Zentrum für Immuntherapie, Friedrich-Alexander-University Erlangen-Nürnberg and Universitätsklinikum Erlangen

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Oküler yüzey iltihabı oküler yüzey dokularına zarar verir ve gözün hayati fonksiyonlarını tehlikeye atar. Mevcut protokol, oküler inflamasyonu indüklemek ve Meibomian bezi disfonksiyonunun (MGD) bir fare modelinde tehlikeye atılmış dokuları toplamak için bir yöntemi açıklamaktadır.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Oküler yüzey hastalıkları, kornea, konjonktiva ve ilişkili oküler yüzey bezi ağının fonksiyonlarını ve yapılarını bozan bir dizi bozukluğu içerir. Meibomian bezleri (MG), gözyaşı filminin sulu kısmının buharlaşmasını önleyen bir kaplama tabakası oluşturan lipitleri salgılar. Nötrofiller ve hücre dışı DNA tuzakları, alerjik göz hastalığının bir fare modelinde MG ve oküler yüzeyi doldurur. Agrega nötrofil hücre dışı tuzakları (aggNET'ler), MG çıkışlarını tıkayan ve MG disfonksiyonunu koşullandıran hücre dışı kromatinden oluşan ağ benzeri bir matris formüle eder. Burada oküler yüzey inflamasyonunu ve MG disfonksiyonunu indüklemek için bir yöntem sunulmuştur. Kornea, konjonktiva ve göz kapakları gibi oküler yüzeyle ilgili organların toplanmasına yönelik prosedürler ayrıntılı olarak açıklanmaktadır. Her organın işlenmesi için belirlenmiş teknikler kullanılarak, MG disfonksiyonunun başlıca morfolojik ve histopatolojik özellikleri de gösterilmiştir. Oküler eksüdalar, oküler yüzeyin enflamatuar durumunu değerlendirme fırsatı sunar. Bu prosedürler topikal ve sistemik antiinflamatuar girişimlerin preklinik düzeyde araştırılmasını sağlar.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bir gözün her yanıp sönmesi, korneanın üzerine dağılmış pürüzsüz gözyaşı filmini doldurur. Oküler yüzey epitelyası, gözyaşı filminin oküler yüzeydeki dağılımını ve doğru yönlendirilmesini kolaylaştırır. Müsinler, göz yüzeyindeki lakrimal bezlerden gelen gözyaşı filminin sulu kısmının konumlandırılmasına yardımcı olmak için kornea ve konjonktiva epitel hücreleri tarafından sağlanır. Son olarak, MG, gözyaşı filmi 1,2,3'ün sulu kısmının buharlaşmasını önleyen bir kaplama tabakası oluşturan lipitleri salgılar. Bu şekilde, tüm oküler organların koordineli fonksiyonları, oküler yüz....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hayvanları içeren tüm prosedürler, hayvan refahı ile ilgili kurumsal kılavuzlara göre yürütülmüş ve Friedrich-Alexander-University Erlangen-Nuremberg (FAU) hayvan refahı komisyonu tarafından onaylanmıştır (izin numarası: 55.2.2-2532-2-1217). Bu çalışmada 7-9 haftalık dişi C57Bl/6 fareler kullanılmıştır. Fareler ticari kaynaklardan elde edildi ( bakınız Malzeme Tablosu) ve 12 saat gündüz / gece döngüleri ile spesifik patojensiz koşullarda tutuldu.

1. Murin oküler yüzey inflamasyonunun indüksiyonu

  1. Bağışıklama için immünojen preparatı gerçekleştirin.
    1. İmmünojeni, aşılama gününde taze olarak haz....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol, oküler yüzey inflamasyonunun murin modelini oluşturmak için sıralı adımları açıklamaktadır. Protokoller, terapötiklerin lokal olarak nasıl uygulanacağını, oküler eksüdaların nasıl elde edileceğini ve sağlıklı ve iltihaplı göz kapakları (Şekil 2), kornea ve konjonktiva gibi ilişkili aksesuar organların nasıl çıkarılacağını göstermeyi amaçlamaktadır. Konjonktivanın izolasyonu için üst göz kapakları diseke edildiğinde dikkat edilmeli ve korneanın diseksiyonu sırasında 1x PBS'de sak.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Meibomian bezlerinin yağlı salgılanması sağlıklı bir göz için büyük önem taşımaktadır22. Bununla birlikte, bu yağ bezlerinin, her iki göz kapağının tarsal plakalarında bulunan paralel iplikçikler olarak sıralanan toplanmış nötrofil hücre dışı tuzaklar (aggNET'ler) tarafından tıkanması, gözyaşı filmi23'ü bozabilir. Bu bozulma Meibomian bezi disfonksiyonu (MGD)1 ve hızlandırılmış gözyaşı buharlaşması ile sonuçlanır ve oküler yüzeyin hasarını şartlandır.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacağı bir çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma kısmen Alman Araştırma Vakfı (DFG) 2886 PANDORA Projesi-No.B3 tarafından desteklenmiştir; SCHA 2040/1-1; MU 4240/2-1; CRC1181(C03); TRR241(B04), H2020-FETOPEN-2018-2020 Proje 861878 ve Volkswagen-Stiftung (Hibe 97744) tarafından MH'ye.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
1x PBSGibco
Alüminyum HidroksitImject şap Adjuvan7716140 mg / mL < br / > < güçlü > Nihai Konsantrasyon < / güçlü >: in vivo< / em >: 1 mg / 100 & mikro; L
C57Bl / 6 fareler, 7 yaşında– 9 haftaCharles River Laboratuvarları 
KalsiyumCarl rothCN93.11 M
Nihai Konsantrasyon: 5 mM
Kavisli forsepsFST by Dumont İSVİÇRE5/45 11251-35
İnce keskin makasFST Paslanmaz çelik, Almanya15001-08
Laminer güvenlik kabiniHerasafe
Makrofotografi KamerasıCanonEOS6D
Makro Fotoğrafçılık Kamerası (IR filtresi olmadan)NikonD5300
MnaseNew England biolabsM0247S2 x 106 jel U/mL
Çoklu analit akış testi kiti (Özel fare 13-plex paneli)BiolegendCLPX-200421AM-UERLAN
NaCl %0,9 (Tuzlu)B.Braun
Ovalbumin (OVA)Endofit, Invivogen9006-59-110 mg / 200 &mikro; Tuzlu su içinde
L Boğmaca toksini ThermoFisher Bilimsel PHZ117450 ve mikro; g / 500 ve mikro; L in salin < br / > < güçlü > Nihai Konsantrasyon < / güçlü >: in vivo < / em >: 100 & mikro; g / 100 ve mikro; L
PetridishGreiner bio-one628160
NeşterTüyü tek kullanımlık neşterNo. 21 < güçlü > Son Konsantrasyon< / güçlü >: in vivo< / em>:  300 ng / 100 &mikro; L
StereomikroskopZeissStemi508
Şırınga (kornea/iris yıkama)BD Microlane27 G x 3/4 - Nr.20 0,4 x 19 mm
Şırınga (i.p bağışıklama)BD Microlane24 G1"-Nr 17, 055* 25 mm

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Gilbard, J. P., Rossi, S. R., Heyda, K. G. Tear film and ocular surface changes after closure of the meibomian gland orifices in the rabbit. Ophthalmology. 96 (8), 1180-1186 (1989).
  2. Mishima, S., Maurice, D. M. The oily layer of the tea....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Meibomian Gland DysfunctionNeutrophil Extracellular TrapsOcular Exudate CollectionCornea DissectionConjunctiva IsolationEyelid ExcisionInfrared ImagingHistological AnalysisSingle Cell Sequencing

İlgili makaleler