Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

İnvaziv Drosophila suzukii için Umut Verici Bir Biyolojik Kontrol Ajanı olan Parazitoid Ganaspis brasiliensis'i Yetiştirme Yöntemleri

4.5K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/63898

⸱

2 Haziran 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Research and Innovation Centre, Fondazione Edmund Mach, 2Beneficial Insects Introduction Research Unit, Agricultural Research Service, United States Department of Agriculture, 3Center for Agriculture, Food and Environment, University of Trento, 4Department of Environmental Science, Policy and Management, University of California Berkeley, 5Department of Agriculture, Food and Environment, University of Catania, 6Systematic Entomology Laboratory, Agricultural Research Service, United States Department of Agriculture

Bu makalede

Özet

Ganaspis brasiliensis - Drosophila suzukii'nin (küresel istilacı bir meyve mahsulü zararlısı) larva parazitoidi - bu haşerenin biyolojik kontrolü için Avrupa ve Amerika Birleşik Devletleri'ne giriş için onaylanmış veya düşünülmüştür. Bu makale, bu parazitoidin hem küçük ölçekli hem de büyük ölçekli yetiştirilmesi için protokoller sunmaktadır.

Özet

Doğu Asya'ya özgü benekli kanatlı drosophila, Drosophila suzukii (Matsumura) (Diptera: Drosophilidae), son on yılda Amerika, Avrupa ve Afrika'nın bazı bölgelerinde yaygın olarak yerleşmiş ve işgal altındaki bölgelerinde çeşitli yumuşak tenli meyvelerin yıkıcı bir zararlısı haline gelmiştir. Biyolojik kontrolün, özellikle kendi kendini sürdüren ve uzmanlaşmış parazitoidler aracılığıyla, bu son derece hareketli ve polifagot zararlının sürdürülebilir alan çapında yönetimi için uygun bir seçenek olması beklenmektedir. Ganaspis brasiliensis Ihering (Hymenoptera: Figitidae), Doğu Asya'da yaygın olarak dağılmış bir larva parazitoididir ve D. suzukii'nin en etkili parazitoidlerinden biri olduğu bulunmuştur.

Etkinliğinin ve potansiyel hedef dışı risklerinin titiz giriş öncesi değerlendirmelerini takiben, bu türün daha konakçıya özgü genetik gruplarından biri (G1 G. brasiliensis) yakın zamanda Amerika Birleşik Devletleri ve İtalya'da giriş ve saha sürümü için onaylanmıştır. Doğu Asya'da D. suzukii'ye saldırdığı yaygın olarak bulunan başka bir genetik grup (G3 G. brasiliensis), yakın gelecekte giriş için düşünülebilir. Şu anda G. brasiliensis'in araştırma için yetiştirilmesine veya D. suzukii'ye karşı saha salınımı için seri üretime büyük ilgi var. Bu protokol ve ilgili video makalesi, bu parazitoid için hem araştırma için küçük ölçekte hem de seri üretim ve saha salınımı için büyük ölçekte etkili yetiştirme yöntemlerini açıklamaktadır. Bu yöntemler, bu Asya yerli parazitoidinin bu küresel istilacı haşere için umut verici bir biyolojik kontrol ajanı olarak daha uzun vadeli araştırmalara ve kullanımına fayda sağlayabilir.

Giriş

Doğu Asya'ya özgü benekli kanatlı drosophila, Drosophila suzukii (Matsumura) (Diptera: Drosophilidae), Amerika, Avrupa ve Afrika'nın bazı bölgelerinde yaygın olarak kurulmuştur 1,2. Sinek son derece polifagustur, doğal ve istila edilmiş bölgelerinde yumuşak ve ince derili çeşitli ekili ve yabani meyveleri kullanabilen 1,2,3. Bu haşere için mevcut yönetim stratejileri, hassas meyveler olgunlaşırken mahsul tarlalarındaki yetişkin sinekleri hedef alan böcek öldürücülerin sık kullanımına büyük ölçüde dayanmaktadır. Tekrarlanan spreyler, muhtemelen rezervuar sineği popülasyonlarının mahsul dışı habitatlardan tutarlı bir şekilde yayılması ve işgal edilen bölgelerde yaşayan etkili doğal düşmanların bulunmaması nedeniyle sıklıkla kullanılır 1,4. Biyolojik kontrol, özellikle kendi kendini sürdüren özel parazitoidler aracılığıyla, peyzaj düzeyinde sinek popülasyonlarının bastırılmasına yardımcı olabilir ve bu son derece hareketli ve polifagot haşereninsürdürülebilir alan çapında yönetimi için kritik bir rol oynayabilir 4,5,6.

Son on yılda, araştırmacılar, sineğin Doğu Asya 7,8,9'daki doğal aralıklarında Drosophila suzukii'nin birlikte evrimleşmiş parazitoidlerini ve ayrıca sineğin Amerika ve Avrupa'daki istila edilmiş bölgelerinde etkili ancak yeni ilişkili parazitoidleri keşfetme çabalarına odaklandılar 4,5,6. Sineğin yeni istila edilen bölgelerinde, yaygın olarak ortaya çıkan larva Drosophila parazitoidleri, Asobara c.f. tabida (Nees) (Hymenoptera: Braconidae), Leptopilina boulardi (Barbotin ve ark.) ve L. heterotoma (Thompson) (Hymenoptera: Figitidae), sineğin güçlü bağışıklık direnci nedeniyle D. suzukii'den gelişemez veya düşük parazitizm seviyelerine sahip olamazlar10. Kuzey Amerika ve Avrupa'da Pachycrepoideus vindemiae (Rondani) (Hymenoptera: Pteromalidae) ve Trichopria drosophilae (Perkins) (Hymenoptera: Diapriidae) ve Güney Amerika'daki Trichopria anastrephae Lima gibi sadece bazı kozmopolit ve genelci pupa parazitoidleri bu sinek4'ten kolayca gelişebilir. Buna karşılık, Doğu Asya'daki keşifler, D. suzukii 4,5,6'dan bir dizi larva parazitoidi keşfetti. Bunlar arasında, Asobara japonica Belokobylskij, Ganaspis brasiliensis Ihering ve Leptopilina japonica Novković & Kimura, baskın larva parazitoidleri 7,8,9,11'dir. Özellikle, iki figitid (L. japonica ve G. brasiliensis), ağırlıklı olarak D. suzukii ve / veya doğal bitki örtüsündeki diğer yakından ilişkili drosofilidler tarafından istila edilen taze meyvelerde bulunan başlıca parazitoidlerdi7,8,9. Bu üç Asya larva parazitoidi, ABD ve Avrupa'daki karantina tesislerine ithal edildi ve göreceli verimlilikleri 12,13,14,15,16,17, iklimsel adaptasyon kabiliyeti18, potansiyel interspesifik rekabetçi etkileşimler 19 ve en önemlisi konakçı özgüllüğü 8,20,21 açısından değerlendirildi. ,22.

Karantina değerlendirmeleri, Ganaspis brasiliensis'in Drosophila suzukii'ye test edilen diğer Asya larva parazitoidlerinden daha fazla konakçı spesifik olduğunu, ancak muhtemelen farklı konakçı özgüllüğüne sahip farklı biyotiplerden veya şifreli türlerden oluştuğunu göstermiştir 8,21,22,23,24. Nomano ve ark.22, mitokondriyal sitokrom oksidaz I gen fragmanının moleküler analizlerine dayanarak, farklı coğrafi bölgelerden Ganaspis bireylerini beş genetik gruba (G1-G5 olarak adlandırılır) gruplandırmıştır. G2 ve G4 grupları sadece birkaç güney Asya tropikal bölgesinden bildirilmiştir ve G5 grubu Asya'dan ve diğer bölgelerden (örneğin, Arjantin, Brezilya, Hawaii ve Meksika) bilinmeyen konakçılardan (Buffington, kişisel gözlem) bildirilmiştir. Güney Kore7, Çin8 ve Japonya'da D. suzukii tarafından istila edilen yabani meyvelerin tarla koleksiyonları 9,23,25, tek başına G1'i veya G1 ve G3 gruplarını temsil eden örneklerin bir karışımını buldu. İki grup simpatrik gibi görünüyor ve D. suzukii ve diğer yakından ilişkili konakçı sineklerin yaşadığı aynı konakçı bitkilerde bir arada bulunuyor. Bununla birlikte, iki grup arasında bazı farklılıklar gözlenmiştir; G1, görünüşte D. suzukii'ye G3'ten daha yüksek bir konakçı veya konakçı habitat özgüllüğüne sahiptir, ancak her ikisi de karantina testlerinde21,22 ile yakından ilişkili bir dizi türe saldırmaktadır. Daha ayrıntılı moleküler analizler, özellikle G1 ve G3 grupları için türlerin durumunu belirlemeye yardımcı olabilir. Bu çalışma onları G1 G. brasiliensis ve G3 G. brasiliensis olarak adlandırmaktadır. Bazı erken çalışmalar ayrıca G1 G. brasiliensis'i G olarak adlandırdı. Bkz. brasiliensis 14,21,22. G1 G. brasiliensis yakın zamanda ABD ve İtalya'da D. suzukii'ye karşı saha sürümü için onaylanmıştır (diğer bazı Avrupa ülkeleri de şu anda tanıtımını düşünmektedir), G3 G. brasiliensis ise yakın gelecekte sahada serbest bırakılması düşünülebilir. Son zamanlarda yapılan anketler ayrıca British Columbia, Kanada26 ve Washington Eyaleti, ABD'de hem L. japonica hem de G1 G. brasiliensis'in maceracı popülasyonlarını (Beers ve ark., yayınlanmamış veriler) ve İtalya'nın Trento eyaletindeki maceracı L. japonica popülasyonlarını buldu27.

Drosophila suzukii yönetimi için biyolojik kontrol programlarının geliştirilmesine olan önemli ilgi ve Ganaspis brasiliensis'in maceracı ve kasıtlı tanıtımlarının önemli biyolojik kontrol potansiyeli göz önüne alındığında, gelecekteki uzun vadeli araştırmalar ve / veya saha salınımı için bu larva parazitoidi için verimli yetiştirme yöntemleri geliştirmeye ihtiyaç vardır. Bu protokol ve ilgili video makalesi, bu parazitoid için iki yetiştirme yöntemi setini açıklamaktadır: (1) D. suzukii kültürü için konakçı meyve (yaban mersini) ve yapay diyet karışımı kullanılarak şişelerde küçük ölçekli laboratuvar yetiştiriciliği. Yöntemler, orijinal olarak Kunming, Çin8'den toplanan G3 materyali kullanılarak geliştirilmiştir. (2) D. suzukii kültürü için konakçı meyve (yaban mersini) kullanılarak büyük kafeslerde tarla salınımı için kütle yetiştiriciliği. Büyük ölçekli yetiştirme için kullanılan genetik grup, Tokyo, Japonya 9,22 menşeli G1 stoğu idi. Her iki grup için şişeler veya küçük kaplar kullanmak gibi diğer yetiştirme yöntemleri ölçekleri de kısaca tartışılmaktadır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

1. G3 Ganaspis brasiliensis'in küçük ölçekli laboratuvar yetiştiriciliği için yöntemler

  1. Ev sahibi diyetini hazırlayın.
    1. 1.500 mL'lik bir cam kaba 600 mL damıtılmış su ekleyin ve suyu sıcak bir tabakta ısıtın.
    2. Ticari olarak temin edilebilen 88.6 g kuru diyet ekleyin (agar, bira mayası, mısır unu, metil paraben ve sakarozdan yapılmış) veya Dalton ve ark.28 tarafından yayınlanan formülü kullanarak diyet hazırlayın (bkz. adım 2.1.2).
    3. Kuru diyete 300 mL damıtılmış su ekleyin ve diyet karışımını iyice karıştırın.
    4. Karışımı kaynar suya ekleyin.
    5. Sıcak plakadaki sıvı diyetin 10 dakika kaynamasına izin verirken, yanmasını önlemek için karışımı periyodik olarak karıştırın.
    6. Diyetin oda sıcaklığında 30 dakika soğumasına izin verirken, ısı salınımını eşit olarak dağıtmak ve diyetin yüzeyde katılaşmasını önlemek için ara sıra karıştırın.
    7. Bir kapta 6,7 mL% 95 EtOH ve başka bir kapta 3,5 mL 1 M propiyonik asit çözeltisi ölçün.
    8. Diyet soğuduktan sonra, EtOH'yi ve ardından propiyonik asit çözeltisini ekleyin, her eklemeden sonra iyice karıştırın.
    9. Yaban mersini (yerel pazardan satın alınan) soğuk suda, daha sonra sodyum hipoklorit ağartıcı çözeltisinde (% 5'e kadar seyreltilmiş) ve tekrar soğuk suda durulayarak hazırlayın.
    10. Meyveyi bir kağıt havluyla kurutun ve her meyvenin derisi kırılana ve meyvenin meyve suları ve eti açığa çıkana kadar elle ezin.
    11. Her 250 mL şişeye 25-30 g yaban mersini püresi ekleyin. Şişenin iç tabanının eşit bir yaban mersini püresi tabakasıyla kaplandığından emin olmak için şişenin kenarlarına dokunun.
    12. Hazırlanan diyeti her şişeye dökün, böylece sadece yaban mersini püresinin üstünü kaplar.
    13. Şişelerin boyunlarına köpük tıpalar ekleyin ve diyetin oda sıcaklığında katılaşmasına izin verin (Şekil 1).
    14. Diyet katılaştıktan sonra, hemen kullanın veya 3 haftaya kadar 5 ° C'de saklayın.
  2. Arka ev sahibi Drosophila suzukii.
    1. Saklanan diyeti buzdolabından çıkarın ve ortam oda sıcaklığına dengelenmesine izin verin veya taze yapılmış diyet kullanın.
    2. Bir parça emici kağıt havluyu kesin (örneğin, 5 cm x 20 cm) ve ortasına doğru döndürün. Kağıt havlunun bükülmüş orta kısmını şişeye yerleştirin (Şekil 1).
    3. Nemi korumak için kağıt havluyu ve diyetin yüzeyini damıtılmış suyla ıslatın.
    4. Cinsel olarak olgun yetişkin sinekleri, mevcut koloni sinek şişelerinden, eski şişedeki durdurucuyu dikkatlice çıkararak ve şişeyi hızlı bir şekilde ters çevirerek ve eski şişenin açıklığını yeni şişeyle hizalayarak yeni bir diyet şişesine aktarın.
    5. Sineklerin yeni şişeye düşmesini sağlamak için eski şişenin yan tarafına hafifçe dokunun. Yeni şişede ~ 25-30 çiftleşme çifti D. suzukii olduğundan emin olun. Yeni şişede yeterince sinek olduğunda, eski şişeyi hızlı bir şekilde dik çevirin ve her iki şişedeki tıpaları değiştirin.
    6. Eski şişelerde sinek kalmayana kadar sineklerin transferlerini tekrarlayın. Gerekirse, şişe başına yeterli sinek (20-30 çift) olduğundan emin olmak için birden fazla eski şişedeki sinekleri yeni bir şişede birleştirin veya toplayın.
    7. Yeni şişeleri, yetişkin sineklere uygun koşullarda (21 °C, 16 L: 8 D fotoperiyot,% 60-% 80 bağıl nem [% RH%]) bir hafta maruz kaldıktan sonra, sineklerin ortaya çıkması için 3 hafta boyunca bir çevre odasında tutun.
  3. Konakçı larvaları parazitoidlere maruz bırakın.
    1. Herhangi bir yetişkin sineği ve bükülmüş kağıt havluyu şişeden çıkardıktan sonra sinek yumurtaları ve larvaları içeren bir şişe alın (bkz. adım 1.2.7).
    2. Bir parça emici kağıt havluyu ikiye katlayın ve parazitli larvalar için bir yavru substrat olarak şişeye koyun.
    3. Her şişeye altı adet dişi ve erkek G3 G. brasiliensis çifti aspire edin (Şekil 1). Köpük tıpanın dibine ince bir bal tabakası çizin.
    4. Parazitoidleri şişede 5 gün bekletin.
    5. 5 günlük bir maruziyetten sonra, parazitoidleri çıkarın ve şişeleri, beklenen yaban arısı ortaya çıkana kadar 35 gün boyunca bir çevre odasında yukarıda açıklanan koşullar altında tutun.
  4. Yetişkin parazitoidleri toplayın ve saklayın.
    1. Kuluçkanın ikinci ve üçüncü haftalarında, şişeleri erken konakçı ortaya çıkması için haftalık olarak kontrol edin ve yetişkin sinekleri çıkarın.
    2. Yetişkin parazitoidler ortaya çıkmaya başladığında, haftada üç kez aspire edin ve drosophila şişelerinde tutun (örneğin, 2.5 cm x 9.5 cm) (Şekil 1).
    3. Şişenin dibine nemlendirilmiş, ancak doymamış küçük bir kağıt havlu parçası yerleştirin.
    4. Her şişeye ~ 60 parazitoid ekleyin ve şişeyi ortaya çıkış tarihleriyle etiketleyin. Köpük tıpanın dibine haftada iki kez ince bir bal tabakası çizin. Şişeleri, daha önce kullanılmadığı takdirde çevre odasında yukarıda açıklanan koşullar altında yetişkin parazitoidlerle birlikte bir aya kadar saklayın.
    5. Kağıdı şişede her 4-7 günde bir nemlendirin veya küf belirtileri varsa kağıt havluyu değiştirin.

2. G1 Ganaspis brasiliensis'in büyük ölçekli yetiştirilmesi için yöntemler

  1. Ev sahibi Drosophila suzukii'nin büyük ölçekli bir yetiştiriciliğini uygulayın.
    1. Arka D. suzukii , her biri 1.500-2.000 cinsel olarak olgun yetişkin sinek içeren büyük, örme örgü kaplı kafesler (örneğin, 50 cm x 50 cm x 100 cm) içinde (cinsiyet oranı 50:50) (Şekil 2).
    2. Standart Drosophila Medium'u (SDM), tüm malzemeleri (6 g bakteriyolojik agar, 75 g mısır unu, 17 g besin mayası, 15 g sakaroz, 10 g soya fasulyesi unu, 10 mL propiyonik asit) 1 L damıtılmış suda 10 dakika kaynatarak hazırlayınve karışımı 28 dakika boyunca periyodik olarak karıştırın.
    3. Karışımı 5 dakika soğumaya bırakın ve 5 g askorbik asit ekleyin.
    4. Taze pişmiş SDM'yi 9 cm'lik Petri kaplarına dökün ve plakaları kapatmadan önce ortamın oda sıcaklığında katılaşmasını bekleyin.
    5. SDM Petri tabaklarını üst üste koyun, yığını alüminyum folyo ile sarın ve bulaşıkları 4 °C'de 2 haftaya kadar saklayın.
    6. Her yetiştirme kafesinin içine, suya batırılmış pamuklu bir tabak ve SDM'li dört ila altı Petri kabı yerleştirin (Şekil 2).
    7. Haftada iki kez, istila edilmiş SDM Petri yemeklerini taze olanlarla değiştirin.
    8. İstilamış SDM Petri kaplarını kapaksız olarak ayrı ayrı plastik kaplara (13,3 cm çapında veya 800 mL) yerleştirin, her bir bardağı ince bir ağ (<0,5 mm) kaplamasıyla kapatın ve 23 ° C ve% 75 RH'de 12-15 gün boyunca inkübe edin (Şekil 2).
    9. Yeni yumurtadan çıkan D. suzukii yetişkinlerini plastik bardaklardan yetiştirme kafeslerine aktarın.
  2. Konakçı larvaları hazırlayın.
    1. Yaban mersini 1 dakika soğuk suda durulayın ve meyveleri 3 dakika boyunca bir ağartıcı çözeltisi (% 5'e seyreltilmiş) ile doldurulmuş bir havzaya batırın.
    2. Ağartıcı çözeltisini boşaltın ve yaban mersini durulamak için havzayı soğuk suyla doldurun. En az 30 saniye boyunca elle hafifçe karıştırın.
    3. Ağartıcı kalıntılarını ve meyvede bulunabilecek diğer eklembacaklıları (örneğin, akarlar, thrips) gidermek için 2.2.2 adımını tatlı suyla en az üç kez tekrarlayın.
    4. Meyveyi birkaç kat emici kağıt havlu içeren bir tepsiye yerleştirin ve tepsiyi dikkatlice ileri geri eğin, meyveleri kurutmak için yuvarlayın.
    5. Birkaç 9 cm'lik Petri kabı hazırlayın (üst veya alt yarım, yukarı bakacak şekilde) ve her birini yıkanmış yaban mersini ile doldurun (meyve büyüklüğüne bağlı olarak tabak başına 15-25 meyve).
    6. Öğleden sonra geç saatlerde, Petri bulaşıklarını konakçı yetiştirme kafesleri içindeki cinsel olarak olgun yetişkin sineklere maruz bırakın (bkz. adım 2.1) ve gece boyunca bırakın.
    7. Ertesi sabah, Petri bulaşıklarını, meyvelerdeki sinekleri yerinden çıkarmak için hafifçe üfleyerek veya üzerlerine dokunarak konakçı yetiştirme kafeslerinden çıkarın ve istila edilmiş meyveyi parazitoidlerin yetiştirilmesi için kullanın (bkz. adım 2.4).
  3. Büyük ölçekli bir parazitoid yetiştirme uygulayın.
    1. Parazitoidi desteklemek için iki tür kafes kullanın: biri parazitizm için, diğeri yaban arısı ortaya çıkması için.
    2. Parazitizm kafesinin kübik olduğundan (örneğin, her iki tarafta 45 cm), böcek aktivitesini gözlemlemek için ön tarafta şeffaf bir plastik panel, böceklerin eklenmesi veya çıkarılması ve gıda malzemesinin değiştirilmesi için ön panelde iki adet 18 cm'lik manşon açıklığı ve havalandırma için üst ve yanlarda ince polyester ağ (örneğin, 96 x 26 ağ) bulunduğundan emin olun.
    3. Çıkış kafesini daha küçük hale getirin (örneğin, her iki tarafta 30 cm), iki zıt tarafta tek bir kol açıklığı ve görünürlük için ön tarafta şeffaf bir plastik panel (Şekil 2).
    4. Her iki kafes tipinin de tavanın altında asılı olan ve bir ila birkaç besleyiciyi askıya alabilecek ince bir ipe sahip olduğundan emin olun (Şekil 2).
      NOT: Bir besleyici, dağınık bal damlacıkları ile kaplı büyük bir silindirik köpük tıpadan (9 cm çapında) oluşur ve kafes zeminine yerleştirilebilir veya kafes tavanına asılabilir (Şekil 2).
    5. Her kafesin içinde, RH'ye bağlı olarak her 5-7 günde bir selüloz asetat tapası (2,5 cm çapında) ile kapatılmış düz duvarlı bir drosophila şişesinde (2,5 cm x 9,5 cm) su sağlayın. Şişeyi kafes tavanından baş aşağı asın (Şekil 2).
  4. Konakçı larvaları parazitoidlere maruz bırakın.
    1. Petri bulaşıkları içindeki konakçı istilasına uğramış meyveyi, D. suzukii gece istilasından hemen sonra G1 G. brasiliensis'e maruz bırakın (bkz. adım 2.2.7).
    2. 10-15 Petri istila edilmiş meyve tabağını 2-3 gün boyunca 1.500-2.000 eşekarısı içeren parazitasyon kafesinde bırakın.
    3. Parazitlenmiş konakçıları içeren meyveleri toplamak için altta emici kağıt katmanları bulunan plastik bardaklar (13.3 cm çapında veya 800 mL) kullanın (Şekil 2).
    4. Açık bardakları eklozyon kafesine yerleştirin ve 21 ° C'de ve% 65 RH'de en az 28 gün boyunca inkübe edin (Şekil 2).
    5. Kuluçkanın ikinci ve üçüncü haftalarında, kafesi erken konakçı eklosyonu için haftalık olarak kontrol edin ve parazitoidlerin art arda toplanmasını kolaylaştırmak için yetişkin sinekleri çıkarın.
    6. Kuluçkanın dördüncü haftasının sonunda, kafese bir besleyici ve bir su kaynağı ekleyin.
  5. Yetişkin parazitoidleri toplayın ve saklayın.
    1. Parazitoid ortaya çıkmaya başladığında, yetişkinlerin bir kısmını (% 10-% 15) toplayın ve eski verimsiz bireylerin yerini almak için parazitizm kafesine geri aktarın.
    2. Kalan parazitoidleri plastik kaplarda (13,3 cm çapında veya 800 mL) toplayın ve saklayın (Şekil 3A).
    3. Bardağın dibine suyla doldurulmuş ve bir diş pamuklu rulo (1 cm x 3,8 cm) ile kapatılmış bir tüp (2 mL) yerleştirin (Şekil 3A).
    4. Bardağı, besleyici substrat olarak çıkarılabilir bir köpük tıpa (3,5 cm çapında) ve havalandırma için ağ kaplı bir delik ile donatılmış modifiye edilmiş bir kapakla kapatın (Şekil 3B).
    5. Her bardağa 700 yetişkine kadar ekleyin (cinsiyet oranı 50:50), bardağı ortaya çıkış tarihi ile etiketleyin ve kullanılana kadar veya 1 aya kadar bir çevre odasında (17 ° C; % 65 RH) saklayın (Şekil 3B).
  6. Yetişkin parazitoidleri gönderin.
    1. Yetişkin parazitoidleri göndermek için konik tüpler (50 mL) kullanın.
    2. Kapaktaki bir havalandırma deliğini (8 mm çapında) delin ve ince bir ağ ile örtün (Şekil 3C).
    3. Kapağın iç kısmına bir selüloz asetat besleme halkası ekleyin (Şekil 3C).
    4. Damıtılmış su kullanarak doymuş bir sakkaroz çözeltisi hazırlayın, besleme halkasına birkaç damla uygulayın ve sıvıyı emmesine izin verin.
    5. Tüpün içine fan şeklinde bir emici kağıt havlu parçası yerleştirin (Şekil 3D).
    6. Her tüpe ~ 200 yetişkin parazitoid ekleyin ve tüpleri buz paketleriyle birlikte yalıtımlı bir nakliye kabına yerleştirin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Şekil 4, USDA-ARS Faydalı Böcekler Giriş Ünitesi'nin (Newark, Delaware) karantina tesisinde iki farklı parazitoid yoğunluk (altı veya 10 çift) ve iki farklı maruz kalma süresi (5 veya 10 gün) kullanılarak G3 Ganaspis brasiliensis'in küçük ölçekli laboratuvar yetiştirmesinin temsili sonuçlarını göstermektedir. Her parazitoid yoğunluk ve maruz kalma süresi kombinasyonu için 14 replika vardı. Toplamda, 64 şişe,% 49,5 ±% 1,9 dişi yavru ile 4.018 eşekarısı (şişe başına 71.7 ± 4.9 yavru) ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bir biyolojik kontrol ajanının uzun süreli araştırmaları ve müteakip saha salınımları, etkili ve ekonomik yetiştirme tekniklerinin mevcudiyetine bağlıdır. Bu çalışmada açıklanan yöntemlerin, Ganaspis brasiliensis'in hem küçük ölçekli hem de büyük ölçekli yetiştirilmesi için etkili protokoller olduğu kanıtlanmıştır. Küçük ölçekli yetiştirme protokolü, işgücü miktarını optimize etmek ve parazitoid ve konakçı kolonileri aynı anda korumak için gereken özel ekipmanı azaltmak için birkaç yıl içinde geliştirilmiştir. L...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacağı bir çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

Yazarlar, Lukas Seehausen ve Marc Kenis'e (CABI, İsviçre) G1 G. brasiliensis'i nazik bir şekilde sağladıkları için teşekkür eder. İtalya'daki fonlar, Provincia Autonoma di Trento, Trento, İtalya ve ABD'de Ulusal Gıda ve Tarım Enstitüsü, USDA Özel Mahsuller Araştırma Girişimi ödülü (#2020-5118-32140), USDA Hayvan ve Bitki Sağlığı Denetim Hizmeti (Farm Bill, fon 14-8130-0463) ve USDA ARS CRIS temel fonları (proje 8010-22000-033-00D) tarafından sağlanmıştır. USDA, eşit fırsat sağlayıcısı ve işverendir ve bu yayında belirtilen ürünleri onaylamaz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Aktif kuru mayaFleischmanns Mayası, Cincinatti, OH, ABDYokKüf oluşumunu azaltmak ve sineklere karşı frui çekiciliğini artırmak için meyveyi kaplamak için kullanılır
Bakteriyolojik agarMerk Life Science S.r.l., Milano, İtalyaA1296 - 5KGStandart Drosophila Orta Çamaşır Suyu çözeltisini hazırlamak için kullanılır
Clorox Company, Oakland, CA, ABDYokEtli meyveleri
dezenfekte etmek için kullanılırMavi tıpaAzer Scientific, Morgantown, PA, ABDES3837Böcekler için havalandırmaya izin verirken tüpü sızdırmaz hale getirmek için kullanılır
Yaban mersiniBakkal, Newark, DE, ABDYokSinekler için konukçu meyve olarak sağlanır (çeşitli başka meyveler de kullanılabilir)
BugDorm böcek yetiştirme kafesi (G24,5 x D24,5 x Y63,0 cm)Mega View Science Co. Ltd., Taichung, Tayvan4E3030Parazitoit yetiştirmek için kullanılır (parazitizm kafesi)
BugDorm böcek yetiştirme kafesi (W32.5 x D32.5 x H32.5 cm)Mega View Science Co. Ltd., Taichung, Tayvan4E4590Sinek yetiştirmek için kullanılır
BugDorm böcek yetiştirme kafesi (W32.5 x D32.5 x H32.5 cm)Mega View Science Co. Ltd., Taichung, Tayvan4E4545Parazitoitlerin yetiştirilmesinde kullanılır (eclosion kafesi)
Tavuk teli (0,64 cm, 19 gauge)Everbilt, OH, ABD308231EBMaksimum parazitoid yumurtlamasına izin vermek için meyveyi kaldırmak için kullanılır
MısırBakkal, Trento, TN, İtalyaYokStandart Drosophila Medium Dental pamuk rulosunu hazırlamak için kullanılır
(1 x 3,8 cm)Gima S.p.A., Gessate, MI, İtalya35000Saklama kabı içindeki parazitoitlere su sağlamak için kullanılır
Drosophila diyetiFrontier Scientific, Newark, DE, ABDTF1003Arka sinekler için kullanılan özel diyet
Drosophila flakon dar, Polistiren (2,5 x 9,5 cm)VWR International, LLC., Radnor, PA, US75813-160Kafes içindeki parazitoitlere su sağlamak için kullanılır
Drosophila flakon tapaları, Selüloz asetat (2,5 cm)VWR International, LLC., Radnor, PA, US89168-886Kafes içindeki parazitoitlere su sağlamak için kullanılır
Erlenmeyer şişesi (250 mL)Carolina Biological, Burlington, NC, ABD731029Sinek ve parazitoit yetiştirmek için kullanılır
Falcon tarzı santrifüj tüpü (50 mL)VWR International, LLC., Radnor, PA, USVWRI525-0611Yetişkin parazitoitleri göndermek için modifiye edildi
Köpük tıpaJaece Industries, North Tanawanda, NY, ABDL800-CBöcekler için havalandırmaya izin verirken şişeleri sızdırmaz hale getirmek için kullanılır
BalBakkalı, Newark, DE, ABDYokParazitoidler için gıda olarak sağlanır
Identi-Plug plastik köpük tıpaFisher Scientific Company, LLC, Pittsburg, PA, US14-127-40EParazitoidler için besleyici olarak ve saklama kabını kapatmak için kullanılır
Endüstriyel kağıt havluBakkal, Newark, DE, ABDYokPupa ve azaltılmış nem için bir pupa substratı olarak sağlanır
Mikron örgü kumaş (250 mL)Endüstriyel Ağ, Maple Grove, MN, ABDWN0250-72Böcekler için havalandırma kapağı yapmak için kullanılır
Besin mayası (gevreği)Bakkal, Trento, TN, İtalyaYokStandart Drosophila Medium
Kağıt bardak altlığını hazırlamak için kullanılır (10,2 cm)Hoffmaster, WI, ABD35NG26Sinekler ve parazitlenmiş pupalar
için pupa substratı olarak kabul edilirPlastik bardak (Ø 13.3 cm, 800 mL)Berry Superfos, Taastrup, DanimarkaUnipak 5134Yetişkin parazitoidleri saklamak için modifiye edilmiştir
Plastik kapak (Ø 13.3 cm)Berry Superfos, Taastrup, DanimarkaPP 2830Yetişkin parazitoitleri depolamak için modifiye edilmiştir
Propiyonik asitMerk Life Science S.r.l., Milano, İtalyaP1386 - 1LStandart Drosophila Orta Sakkaroz'u
hazırlamak için kullanılırBakkal, Trento, TN, İtalyaYokStandart Drosophila Orta Boy
Kapaklı Çorba bardağı hazırlamak için kullanılır (475 mL)StackMan, VietnamDC1648pupa etmek için parazitlenmiş larvalar için kullanılır
Bakkal, Trento, TN, İtalyaYokStandart Drosophila Medium
Beyaz keçe yıkayıcıyı hazırlamak için kullanılır (0,64 cm kalınlığında, 5 mm İç Çap x 20 mm Dış Çap)Quiklok, Lincoln, NH, ABDWFW/.25 x 5 x 20 mmParazitoidler için besleme halkası olarak kullanılır
unu Soya fasulyesi ununu

Kaynaklar

  1. Asplen, M. K., et al. Invasion biology of spotted wing drosophila (Drosophila suzukii): a global perspective and future priorities. Journal of Pest Science. 88 (3), 469-494 (2015).
  2. Tait, G., et al. Drosophila suzukii (Diptera: Drosophilidae): A decade of research towards a sustainable integrated pest management program. Journal of Economic Entomology. 114 (5), 1950-1974 (2021).
  3. Kirschbaum, D. S., Funes, C. F., Buonocore-Biancheri, M. J., Suárez, L., Ovruski, S. M. The biology and ecology of Drosophila suzukii (Diptera: Drosophilidae). Drosophila suzukii management. Garcia, F. R. M. , Springer. Cham. 41-92 (2020).
  4. Wang, X. G., Lee, J. C., Daane, K. M., Buffington, M. L., Hoelmer, K. A. Biological control of Drosophila suzukii. CAB Reviews. 15, 054(2020).
  5. Lee, J. C., et al. Biological control of spotted-wing drosophila (Diptera: Drosophilidae): Current and pending tactics. Journal of Integreated Pest Management. 10 (1), 13(2019).
  6. Wang, X. G., Lee, J. C., Daane, K. M., Hoelmer, K. A. Biological control of spotted-wing drosophila: An update on promising agents. Drosophilia suzukii management. Garcia, F. R. M. , Springer. Cham. 143-167 (2020).
  7. Daane, K. M., et al. First exploration of parasitoids of Drosophila suzukii in South Korea as potential classical biological agents. Journal of Pest Science. 89 (3), 823-835 (2016).
  8. Giorgini, M., et al. Exploration for native parasitoids of Drosophila suzukii in China reveals a diversity of parasitoid species and narrow host range of the dominant parasitoid. Journal of Pest Science. 92 (2), 509-522 (2019).
  9. Girod, P., et al. The parasitoid complex of D. suzukii and other fruit feeding Drosophila species in Asia. Scientific Reports. 8 (1), 11839(2018).
  10. Kacsoh, B. Z., Schlenke, T. A. High hemocyte load is associated with increased resistance against parasitoids in Drosophila suzukii, a relative of D. melanogaster. PLoS ONE. 7 (4), 34721(2012).
  11. Buffington, M. L., Forshage, M. Redescription of Ganaspis brasiliensis (Ihering, 1905), new combination (Hymenoptera: Figitidae), a natural enemy of the invasive Drosophila suzukii (Matsumura, 1931)(Diptera: Drosophilidae). Procedings of the Entomoogical Society of Washington. 118 (1), 1-13 (2016).
  12. Biondi, A., et al. Innate olfactory responses of Asobara japonica (Hymenoptera: Braconidae)towards fruits infested by the invasive spotted wing drosophila. Journal of Insect Behavior. 30 (5), 495-506 (2017).
  13. Biondi, A., Wang, X. G., Daane, K. M. Host preference of three Asian larval parasitoids to closely related Drosophila species: implications for biological control of Drosophila suzukii. Journal of Pest Science. 94 (2), 273-283 (2021).
  14. Girod, P., Rossignaud, L., Haye, T., Turlings, T. C. J., Kenis, M. Development of Asian parasitoids in larvae of Drosophila suzukii feeding on blueberry and artificial diet. Journal of Applied Entomology. 142 (5), 483-494 (2018).
  15. Wang, X. G., Nance, A. H., Jones, J. M. L., Hoelmer, K. A., Daane, K. M. Aspects of the biology and reproductive strategy of two Asian larval parasitoids evaluated for classical biological control of Drosophila suzukii. Biological Control. 121, 58-65 (2018).
  16. Wang, X. G., Biondi, A., Daane, K. M. Functional responses of three candidate Asian larval parasitoids evaluated for classical biological control of Drosophila suzukii. Journal of Economic Entomology. 113 (1), 73-80 (2020).
  17. Wang, X. G., et al. Assessment of Asobara japonica as a potential biological control agent for the spotted wing drosophila, Drosophila suzukii. Entomologia Generalis. 41, 1-12 (2021).
  18. Hougardy, E., Hogg, B. N., Wang, X. G., Daane, K. M. Comparison of thermal performances of two Asian larval parasitoids of Drosophila suzukii. Biological Control. 136, 104000(2019).
  19. Wang, X. G., Hogg, B. N., Hougardy, E., Nance, A. H., Daane, K. M. Potential competitive outcomes among three solitary larval endoparasitoids as candidate agents for classical biological control of Drosophila suzukii. Biological Control. 130, 18-26 (2019).
  20. Daane, K. M., Biondi, A., Wang, X. G., Hogg, B. A. Potential host ranges of three Asian larval parasitoids of Drosophila suzukii. Journal of Pest Science. 94 (4), 1171-1182 (2021).
  21. Girod, P., et al. Host specificity of Asian parasitoids for potential classical biological control of Drosophila suzukii. Journal of Pest Science. 91 (4), 1241-1250 (2018).
  22. Seehausen, M. L., et al. Evidence for a cryptic parasitoid species reveals its suitability as a biological control agent. Scientific Reports. 10 (1), 19096(2020).
  23. Nomano, F. Y., et al. Genetic differentiation of Ganaspis brasiliensis (Hymenoptera: Figitidae) from East and Southeast Asia. Applied Entomology and Zoology. 52 (3), 429-437 (2017).
  24. Kasuya, N., Mitsui, H., Ideo, S., Watada, M., Kimura, M. T. Ecological, morphological and molecular studies on Ganaspis individuals (Hymenoptera: Figitidae) attacking Drosophila suzukii (Diptera: Drosophilidae). Applied Entomology and Zoology. 48 (1), 87-92 (2013).
  25. Matsuura, A., Mitsui, H., Kimura, M. T. A preliminary study on distributions and oviposition sites of Drosophila suzukii (Diptera: Drosophilidae) and its parasitoids on wild cherry tree in Tokyo, central Japan. Applied Entomology and Zoology. 53 (1), 47-53 (2018).
  26. Abram, P. K., et al. New records of Leptopilina, Ganaspis, and Asobara species associated with Drosophila suzukii in North America, including detections of L. japonica and G. brasiliensis. Journal of Hymenoptera Research. 78, 1-17 (2020).
  27. Puppato, S., Grassi, A., Pedrazzoli, F., De Cristofaro, A., Ioriatti, C. First report of Leptopilina japonica in Europe. Insects. 11 (9), 611(2020).
  28. Dalton, D. T., et al. Laboratory survival of Drosophila suzukii under simulated winter conditions of the Pacific Northwest and seasonal field trapping in five primary regions of small and stone fruit production in the United States. Pest Managagement Science. 67 (11), 1368-1374 (2011).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Parasitoid Yeti tirmeK tle Yeti tirme Y ntemleriKonuk u Diyeti Haz rlamaParazitizm KafesiYaban Ar s kstilac Zararl larla M cadeleYumu ak Meyve Zararl lar
İnvaziv Drosophila suzukii için Umut Verici Bir Biyolojik Kontrol Ajanı olan Parazitoid Ganaspis brasiliensis'i Yetiştirme Yöntemleri
Bize ulaşın
Kütüphaneye tavsiye et

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Telif hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.