Bu protokol, çay bahçelerindeki PA üreten yabani otlardan alınan çay örneklerinde pirolizidin alkaloidlerinin (PA'lar) kontaminasyonunu açıklamaktadır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Bu protokol, çay bahçelerindeki PA üreten yabani otlardan alınan çay örneklerinde pirolizidin alkaloidlerinin (PA'lar) kontaminasyonunu açıklamaktadır.
Çay örneklerinde insan sağlığı için tehdit oluşturan toksik pirolizidin alkaloidleri (PA'lar) bulunur. Bununla birlikte, çay örneklerinde PA kontaminasyonunun kaynağı ve yolu belirsizliğini korumuştur. Bu çalışmada, Ageratum conyzoides L., A. conyzoides rizosferik toprak, taze çay yaprakları ve kurutulmuş çay örneklerinde 15 PA'yı belirlemek için UPLC-MS / MS ile birleştirilmiş bir adsorban yöntemi geliştirilmiştir . Ortalama iyileşmeler %78-%111 arasında değişirken, göreceli standart sapmalar %0,33-%14,8 arasında değişmiştir. Çin'in Anhui Eyaleti'ndeki Jinzhai çay bahçesinden on beş çift A. conyzoides ve A. conyzoides rizosferik toprak örneği ve 60 taze çay yaprağı örneği toplandı ve 15 PA için analiz edildi . Taze çay yapraklarında, intermedine-N-oksit (ImNO) ve senecionine (Sn) hariç, 15 PA'nın tümü tespit edilmemiştir. ImNO'nun (34.7 μg / kg) içeriği Sn'ninkinden (9.69 μg / kg) daha büyüktü. Ek olarak, hem ImNO hem de Sn, çay bitkisinin genç yapraklarında yoğunlaşırken, içerikleri yaşlı yapraklarda daha düşüktü. Sonuçlar, çaydaki PA'ların çay bahçelerinde PA üreten yabani otlar-toprak-taze çay yaprakları yolundan aktarıldığını göstermiştir.
İkincil metabolitler olarak, pirolizidin alkaloidleri (PA'lar) bitkileri otoburlara, böceklere ve patojenlere karşı korur 1,2. Şimdiye kadar, dünya çapında 6.000'den fazla bitki türünde farklı yapılara sahip 660'tan fazla PA ve PA-N-oksit (PANO) bulunmuştur 3,4. PA üreten bitkiler esas olarak Asteraceae, Boraginaceae, Fabaceae ve Apocynaceae 5,6 familyalarında bulunur. PA'lar, güçlü elektrofilisiteye sahip olan ve DNA ve proteinler gibi nükleofillere saldırabilen kararsız dehidropirolizidin alkaloidlerine kolayca oksitlenir, bu da karaciğer hücresi nekrozu, venöz tıkanıklıklar, siroz, asit ve diğer semptomlarla sonuçlanır 7,8. PA toksisitesinin ana hedef organı karaciğerdir. PA'lar ayrıca akciğer, böbrek ve diğer organ toksisitesine ve mutajenik, kanserojen ve gelişimsel toksisiteye neden olabilir 9,10.
Birçok ülkede, PA içeren geleneksel bitkilerin, takviyelerin veya çayların yutulmasından veya süt, bal veya et gibi gıdaların dolaylı kontaminasyonundan (PA'lar içeren meraların yutulmasından kaynaklanan toksik) insan ve hayvan zehirlenmesi vakaları bildirilmiştir11,12,13. Avrupa Gıda Güvenliği Otoritesi (EFSA) bulguları, (bitkisel) çay gibi maddelerin, insanların PA'lara / PANO'lara maruz kalmasının önemli bir kaynağı olduğunu göstermektedir14. Çay örnekleri PA üretmezken, PA üreten bitkiler çay bahçelerinde yaygın olarak bulunur (örneğin, Emilia sonchifolia, Senecio angulatus ve Ageratum conyzoides)15. Daha önce çayın, toplama ve işleme sırasında üretim tesislerinden PA'larla kontamine olabileceğinden şüpheleniliyordu. Bununla birlikte, bazı elle toplanan çay yapraklarında da PA'lar tespit edilmiştir (yani, PA üreten bitkiler yoktur), bu da başka kirlilik yolları veya kaynakları olması gerektiğini düşündürmektedir16. Ragwort (Senecio jacobaea) ile melissa (Melissa officinalis), nane (Mentha piperita), maydanoz (Petroselinum crispum), papatya (Matricaria recutita) ve nasturtium (Tropaeolum majus) bitkileriyle birlikte yetiştirme deneyi yapıldı ve sonuçlar tüm bu bitkilerde PA'ların tespit edildiğini gösterdi17. PA'ların gerçekten de toprak yoluyla canlı bitkiler arasında aktarıldığı ve değiş tokuş edildiği doğrulanmıştır18,19. Van Wyk ve ark.20, rooibos çayının (Aspalathus linearis) yabani ot bakımından zengin bölgelerde ciddi şekilde kirlendiğini ve aynı tip ve oranda PA'lar içerdiğini bulmuşlardır. Bununla birlikte, yabancı otsuz bölgelerde rooibos çayında PA tespit edilmemiştir.
Günümüzde, yüksek seçicilik ve duyarlılığa sahip ultra yüksek performanslı sıvı kromatografisi tandem kütle spektrometresi (UPLC-MS / MS), tarım ürünleri ve gıdalardaki PA'ların kalitatif ve kantitatif analizinde yaygın olarak kullanılmaktadır21,22. Numune işleme yöntemi genellikle katı faz ekstraksiyonu (SPE) veya QuEChERS (Hızlı Kolay Ucuz Etkili Sağlam Güvenli) kompleks gıda matrisleri ekstraktlarının temizlenmesinden oluşur ve bu da mümkün olan en yüksek hassasiyeti elde edebilir12,19. Bununla birlikte, toprak, yabani otlar ve taze çay yaprakları gibi karmaşık matrislerde PA'ların tespit edilmesine ve nicelleştirilmesine izin veren sağlam analitik yöntemler hala eksiktir.
Bu çalışma, kurutulmuş çay örnekleri, taze çay yaprakları, yabani otlar ve yabancı ot rizosferik toprak örneklerinde 15 PA'yı bir adsorban saflaştırma yöntemi ile birleştirilmiş UPLC-MS / MS ile analiz etmiştir. Ayrıca, Çin'in Anhui Eyaleti'ndeki Jinzhai çay bahçesindeki beş örnekleme alanından 15 eşleştirilmiş yabani ot ve yabancı ot rizosferik toprak örneği ve 60 taze çay yaprağı örneği toplandı ve 15 PA için analiz edildi. Bu sonuçlar, çayın kalitesini ve güvenliğini sağlamak için bir anket yöntemi ve çay numunelerindeki PA'ların (kontaminasyon) kaynağı ve rotası hakkında bazı bilgiler sağlayabilir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu çalışma için aşağıdaki yabancı ot türleri toplanmıştır: Ludwigia prostrata Roxb., Murdannia triquetra (Wall. ex C. B. Clarke) Bruckn., Ageratum conyzoides L., Chenopodium ambrosioides, Trachelospermum jasminoide (L.) Lem., Ageratum conyzoides L., Emilia sonchifolia (L.) DC, Ageratum conyzoides L. ve Crassocephalum crepidioides (Benth.) S. Moore. Taze çay yaprakları Longjing 43 # çay ağaçlarının çeşitliliğinden toplandı ve kurutulmuş çay örnekleri, yeşil çay üretim sürecine göre işlenmiş ticari olarak temin edilebilen çaylardı (bkz.
1. Örnek toplama
2. Örnek işleme
3. Enstrümental analiz
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Kurutulmuş çay numunelerinde, taze çay yapraklarında, yabancı otlarda ve toprakta 15 PA'nın optimize edilmiş adsorban saflaştırma ve analiz yöntemi oluşturulmuş ve SPE kartuşu kullanılarak yaygın olarak kullanılan saflaştırma yöntemiyle karşılaştırılmıştır. Sonuçlar, SPE kartuşu kullanılarak kurutulmuş çay örnekleri, yabani ot ve taze çay yapraklarındaki 15 PA'nın geri kazanımlarının% 72 -% 120 iken, adsorban saflaştırma kullanımının% 78 -% 98 olduğunu göstermiştir (Şekil 1). Adsorban saflaş...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu çalışma, çay numunelerindeki PA'ların kontaminasyon yollarını ve kaynaklarını ve ayrıca çay bitkilerinin farklı bölgelerindeki PA'ların dağılımını araştırmak için etkili ve hassas bir yöntem geliştirmek üzere tasarlanmıştır. Bununla birlikte, bu çalışmada, kromatografik sütun üzerinde sadece 15 PA başarıyla ayrılmıştır, bu dabitki türleri 3,4'teki çok sayıda alkaloitle karşılaştırıldığında çok küçük bir sayıdır. Bu sadece kolonun kendisinin paketleme özellikle...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.
Bu çalışma, Çin Ulusal Doğal Bilim Vakfı (32102244), Ulusal Tarım Ürünleri Kalite ve Güvenlik ve Risk Değerlendirme Projesi (GJFP2021001), Anhui Eyaleti Doğal Bilimsel Vakfı (19252002) ve USDA (HAW05020H) tarafından desteklenmiştir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Asetonitril (% 99,9) | Tedia Company,Inc. | 21115197 | CAS No: 75-05-8 |
| Amonyak (% 25 -% 28) | Wuxi Zhanwang Kimyasal Reaktif Co, Ltd | 181210 | CAS No: 1336-21-6 |
| Amonyum format (% 97.0) | Anpel Laboratuvar Teknolojileri (şangay) | G0860050 | CAS No: 540-69-2 |
| Karbon-GCB | CNW | B7760030 | 120-400 MESH, 10g. kutu başına |
| Santrifüj Z 36 HK | HERMLE | Z36HK | 30000 rpm (min:10 rpm), Boyutlar (G x Y x D): 71,5 cm ve kez; 42 cm ve kez; 51 cm |
| Piyasada bulunan çay ürünü | Lvming, Qingshan, Luyuchun, Changling, Huixing, Wuyunjian, Heshengchun | gevşek çay | Yeşil çay |
| Europine N-oxid (EuNO) (98.0%) | BioCrick | 323256 | CAS No:65582-53-8 |
| Europine (Eu) (%98,0) | BioCrick | 98222 | CAS No:570-19-4 |
| Format (%98,0) | Aladdin | E2022005 | CAS No:64-18-6 |
| HC-C18 | CNW | D2110060 | 40-63 & mu; m,100g.kutu başına |
| Heliotrine (He) (% 98.0) | BioCrick | 906426 | CAS No: 303-33-3 |
| Heliotrine-N-oksit (HeNO) (% 98.0) | BioCrick | 22581 | CAS No: 6209-65-0 |
| Yüksek hızlı santrifüj TG16-WS | cence | 203158000 | Maks: 16000 dev/dak, 330 & kez; 390 & kez; 300 mm (L ve kez; W ve zamanlar; H), Kapasite: 6 ve kez; 50 mL |
| HSS T3 kolon | Suları | 186004976 | ACQUITY UPLC HSS T3 (2.1 & kez; 100 mm 1.8 & mu; m) |
| Intermedine (Im) (% 98.0) | BioCrick | 114843 | CAS No: 10285-06-0 |
| Intermedine-N-oxide (ImNO) (% 98.0) | BioCrick | 340066 | CAS No: 95462-14-9 |
| Jacobine (Jb) (% 98.0) | BioCrick | 132282048 | CAS No: 6870-67-3 |
| Jacobine-N-oxide (JbNO) (% 98.0) | ChemFaces | CFN00461 | CAS No: 38710-25-7 |
| Metil Alkol (% 99.9) | Tedia Şirketi, Inc. | 21115100 | CAS No: 67-56-1 |
| PSA | Agela | P19-00833 | 40-60 & mu; m, 60 & Aring; 100g.kutu başına |
| Retrorsine (Re) (% 98.0) | BioCrick | 5281743 | CAS No: 480-54-6 |
| Retrorsine-N-oksit (ReNO) (% 98.0) | BioCrick | 5281734 | CAS No: 15503-86-3 |
| Senecionine (Sc) (% 98.0) | BioCrick | 5280906 | CAS No: 130-01-8 |
| Senecionine-N-oksit (ScNO) (% 98.0) | BioCrick | 5380876 | CAS No: 13268-67-2 |
| Senesifilin N-okside (SpNO) (% 98.0) | BioCrick | 6442619 | CAS No: 38710-26-8 |
| Senesifilin (Sp) (% 98.0) | BioCrick | 5281750 | CAS No: 480-81-9 |
| Senkirkine (Sk) (% 98.0) | BioCrick | 5281752 | CAS No: 2318-18-5 |
| SPE PCX | Agilent Technologies | 12108206 | Katyon Karışık Mod, 6 mL |
| Sülfürik asit (% 97) | Wuxi Zhanwang Chemical Reagent Co., Ltd. | 1003019 | CAS No: 7664-93-9 |
| Trisodyum sitrat | Sinpharm Kimyasal Reaktif Co., Ltd. | 20121009 | CAS No: 6132-04-3 |
| Ultrasonik temizleyici | Supmile | KQ-600B | İç yuva boyutu: 500 ve kez; 300 kez; 150 mm; Kapasite: 22,5 L |
| UPLC-xevoTQMS | Waters | ZPLYY-003 | Üçlü dört aşamalı çubuk kütle analizörü, Waters Alliance 2695/Waters ACQUITY UPLC Sıvı Faz Sistemi |
| Su banyosu termostat osilatörü | Guoyu enstrümanı | SHY-2AHS | Salınım süreleri: 60-300 kez/dak, Sabit sıcaklık aralığı: oda sıcaklığı 100 °C; Ç |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.