Yöntem makalesi

Dokuz Günlük Fare Yenidoğanlarında Ekstrahepatik Safra Kanalı ve Safra Kesesi Diseksiyonu

2.5K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/64424

⸱

23 Ağustos 2022

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pediatric Surgery, University Medical Center Hamburg-Eppendorf, 2Research Laboratory for Pediatric Surgery, 3Research Animal Facility, University Medical Center Hamburg-Eppendorf

Bu makalede

Özet

Murin neonatal safra kanalı bozukluklarının gözlenmesi için sağlam bir safra kanalı ve etkili bir hazırlık gereklidir. Bu nedenle, murin yenidoğanlarda tüm ekstrahepatik safra kanalı sisteminin izole edilmesi için safra kanalının bütünlüğünü korurken başarılı bir şekilde yeni bir yaklaşım geliştirilmiştir.

Özet

Murin neonatal safra kanallarının diseksiyonu zor olarak tanımlanmıştır. Tarif edilen standart çalışma prosedürünün temel amacı, fare yenidoğanlarında ekstrahepatik safra kanalının (EBD) hazırlık sırasında safra kanalına zarar vermeden izole edilmesidir. Kolanjiyositler hücre hattına kıyasla son derece yakın preparasyonu ve tüm ekstrahepatik safra kanalı sisteminin (EBDS) toplanması nedeniyle, tarif edilen yaklaşım, biliyer atrezi gibi yenidoğan safra kanalı bozukluklarının hayvan modellerinin araştırılmasında son derece yararlıdır. Ötanaziden sonra periton boşluğuna erişildi ve safra kanalı sistemi, duodenum ve karaciğer benzersiz En-bloc-Rezeksiyon (EbR) ile ekstrakte edildi. Ekstrakte edilen numune bir köpük paspas üzerine yerleştirilir ve EBD, gerekli dokunuş olmadan atravmatik olarak kirletici hücrelerden diseke edilir. EBDS'nin tamamının diseksiyonu bu yöntemin önemli bir avantajıdır. Safra kanalı dokusunun küçük boyutu ve miktarı nedeniyle dikkatli olunmalıdır. Tarif edilen tekniği kullanarak, kolanjiyositlere zarar verilmez. Ayrıca, tekniğin saflığı tekrarlanabilir (n = 10). Bu nedenle, optimum şekilde karşılaştırılabilir numuneler toplanabilir. Ayrıca, safra kanalı dokusu zarar görmez, çünkü safra kanalı sistemi ile herhangi bir temas, hazırlık sırasında önlenebilir ve safra sıvısı safra kesesi içinde bırakılır. En önemlisi, son safra kesesi ve safra kanalı diseksiyonu yapılırken, safra kanalının sadece biraz yanalında sıkılmadan atravmatik mikroaletler kullanıldı. Bu, temiz ve sağlam bir numunenin anahtarıdır ve daha fazla histolojik araştırma veya kolanjiyositlerin izolasyonu için gereklidir. Özetlemek gerekirse, açıklanan yenilikçi diseksiyon tekniği, EBDS'yi mümkün olduğunca temiz bir şekilde izole etmek için gerekli ekipmana sahip özellikle deneyimsiz operatörlere olanak tanır.

Giriş

Biliyer atrezi, primer sklerozan kolanjit (PSK) ve primer biliyer kolanjit (PBK) gibi kolanjiyopatilerin oluşumu ve progresyonu bilinmemekte veya tamamlanmamıştır 1,2. Bu hastalıkların kökeni ve ilerlemesinin sınırlı bir şekilde anlaşılması, tedavi seçeneklerinin azlığına yol açmaktadır3. Yenidoğan safra yolu hastalıklarının incelenmesindeki en zor engel, patofizyolojinin moleküler olarak anlaşılmasını sağlamaktır. Moleküler patolojinin daha iyi anlaşılmasının temel anahtarlarından biri, etkilenen dokunun mümkün olan en iyi şekilde gözlemlenmesidir. Biliyer atrezi4'ün potansiyel viral etiyolojisini gözlemlemek gibi araştırmalar arasındaki karşılaştırılabilirliğin ve tutarsızlıkların azalmasını önlemek için, gerçekleştirilen diseksiyon tekniklerinin mümkün olan en iyi şekilde hazırlanması ve paylaşılması ihtiyacı ortaya çıkmaktadır. Hedef dokunun saf bir şekilde hazırlanması, daha sonraki mikroskobik araştırmalar veya üreme hücresi ve 3D organoid kültürleri için gereklidir. Bununla birlikte, murin yenidoğan bozukluklarında, doku örnekleri nadirdir ve çok küçük boyut nedeniyle sadece az miktarda ortaya çıkar. Safra yolu bozuklukları ile ilgili olarak, murin yenidoğanlarda safra kanallarının temiz bir şekilde hazırlanmasındaki zorluklar tanımlanmıştır5. Gelişimin yenidoğan aşaması nedeniyle, doku farklılaşması aşırı derecede gelişmiş değildir, bu da hazırlığı zorlaştırır ve yetişkin örneklerin hazırlanmasına kıyasla zorluğu arttırır. Bu nedenle, işletme çalışma grubu, EBDS'yi yenidoğan fare modelinde hazırlamak için yeni bir strateji araştırdı. Bu çalışmada, teknik her numunenin verimli bir şekilde diseksiyonuna izin vermektedir.

Safra kanalı sistemi, karaciğerden kaynaklanan sağ üst karın bölgesine intraperitoneal olarak yerleştirilir. Safra kesesi, karaciğerin sağ lobunun viseral yüzeyinin altında bulunur. Safra kanalı, portal ven ve hepatik arter ile birlikte, hepatoduodenal ligamente gömülüdür. Karaciğer ve duodenuma doğrudan katılır ve safra sıvısını duodenum6'ya boşaltır. Anatomik olarak, safra kanalı sağ ve sol hepatik kanallara, ortak hepatik kanala, kistik kanala ve kistik kanal ile ortak hepatik kanalın7'nin birleşmesiyle oluşan Ductus choledochus'a ayrılır. Bu sonunda safra sıvısını ve tükürüğü pankreas kanalından Vater'in Ampulla'sı aracılığıyla duodenuma boşaltır.

Kolanjiyositler safra kanalını intra- ve ekstrahepatik olarak hizalar, safra üretimine ve homeostaza yardımcı oldukları karmaşık bir anatomik niş içindebulunurlar 8. Safra sıvısı bu özel epitel hücrelerini günlük olarak yüksek konsantrasyonlarda geçirir. Özellikle, HCO3- şemsiye bakımı, safra asidi toksisitesine karşı korunmak için çok önemlidir9. Kolanjiyositler, hepatobiliyer sistemde, örneğin luminal mikroorganizmalara karşı ilk savunma hattıdır10. Kolanjiyositlerin toksik saldırılara karşı savunma etkinliği genetik yatkınlık nedeniyle zayıflayabilir. Toksik bir aşırı yük hasar ve yıkıma neden olur ve bu nedenle kolanjiyopatilere yol açabilir. Ayrıca, gelişmekte olan safra kanalı tüm kendini koruyucu mekanizmalara tamamen sahip değildir ve bu da yenidoğan safra kanallarında çevresel toksinlere karşı daha yüksek bir duyarlılığa yol açar11.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Etik onayı takiben (N045/2021), erkek ve dişi C57BL/6 fare yenidoğanları 9 günlük olana kadar gözlendi. Hayvanlar, Hamburg, Almanya'daki Hamburg-Eppendorf Üniversitesi Tıp Merkezi'nin hayvan tesisi tarafından deneysel amaçlar için doğdu ve sağlandı. Yenidoğanlar, ebeveyn hayvanlarıyla birlikte bir kafese yerleştirildi. Çevre koşulları sıcaklık (20-24 °C), 12:12 saat açık-karanlık döngüsü ve %40-%70 bağıl nem oranlarında kontrol edildi.

1. Deneysel hazırlık

  1. Makas, forseps vb. dahil olmak üzere cerrahi operasyon için gerekli ekipmanı hazırlayın (bkz.
  2. Dezenfekte edilmiş ve otoklavlanmış aletleri ameliyat masasının yanındaki steril bir yüzeye yerleştirin.
  3. P9 yaşındaki bir yenidoğan faresini, çalışan bir makasla kafasını keserek hızlı bir şekilde ötenazileştirin. Ötanize edilmiş yenidoğan faresinin gövdesini steril bir operasyon alanına yerleştirin. EBDS'leri 9 günlük fare yenidoğanlarında inceleyin (adım 5).
    NOT: Açıklanan diseksiyon prosedürü, herhangi bir bilim insanına EBDS'yi yenidoğan ve yaşlı farelerden çıkarmak için uygun araçları sağlar. Fare ne kadar eski olursa, hazırlık o kadar kolay olur.

2. Peritoneal boşluğa erişim

  1. İdrar kesesinin bulunduğu yerin üzerindeki cildi forseps ile kavrayın. Periton ve altta yatan yapılara zarar vermeden makas kullanarak cilde 2 mm çapında bir delik açın. Sol ön aksiller çizgiyi takip ederek kesimi dekapitasyonun bulunduğu yere genişletin. Atravmatik forseps ile cildi soldan sağ tarafa doğru çıkarın.
  2. Dalağı çevreleyen peritona tutun. Periton çadır benzeri bir yapıya benzeyene kadar yavaşça kaldırın ve merkezde 1 mm çapında bir delik açın. "Peritoneal çadırın" havayla dolmasını bekleyin. Bu ve sonraki adımlar için 10x mikroskobik büyütme kullanın.
  3. Karaciğere, safra kanalı sistemine, mideye, ince bağırsaklara ve kolona tam erişim sağlamak için peritonu, alt kaburgalar, hem lateral karın bölgeleri hem de alt mesane bölgesi tarafından çerçevelenmiş bir pencerede kesin.
    NOT: Karaciğere erişimi iyileştirmek için, ksifoid süreci, falsiform ligamenti, karaciğeri ve safra kanalı yapılarını sağlam bırakırken en düşük üç kaburgayı çıkararak ek bir kesi yapılabilir. Karaciğerin görünümünü elde etmek kolaydır.

3. Safra kesesi ve safra kanallarının incelenmesi

NOT: Aşağıdaki adımların tümü sırasında numuneyi düzenli olarak ıslak tuttuğunuzdan emin olun.

  1. Safra kesesini incelemek için ksifoid süreci kraniyoventral pozisyonda dikkatlice çekin.
    NOT: Falciform ligament üzerindeki gerginlik bu hareketle artar ve bağlı safra kesesi görünür hale gelir.
    1. Safra kesesi kanalının safra kanalı sisteminden yırtılmasına yol açabilecek falsiform ligamentin kontrol edilemeyen yırtılmasını önlemek için sadece hafif bir çekme işlemi yapın. Bir sonraki adımdan önce ksifoid işlemin çekişini serbest bırakın.
  2. Safra kanalı sistemini serbest bırakmak için duodenumu yavaşça aşağı çekin.
    NOT: Hepatoduodenal ligament üzerindeki gerginlik arttıkça, safra kanalı dokusu görünür hale gelir.

4. En-blok-rezeksiyon

  1. Aşağıdaki adımları izleyerek alt en-blok mobilizasyonunu gerçekleştirin.
    1. Safra kanalı sistemini duodenuma bağlayan duodenal papillayı tanımlayın.
    2. Duodenumdan papillanın sağ lateral tarafına yaklaşık 2 cm kesin.
    3. Pilor bölgesinden kesin. Mide içeriğinin, kesme yeri ile duodenal papilla arasındaki pilorik bölgede bulunduğundan emin olun.
      NOT: Bu, oral ve aboral duodenal parçaların doğru yeri için daha sonra oryantasyon güvenliği için önemli bir adımdır.
  2. Üst en-blok mobilizasyonunu gerçekleştirin.
    1. Ksifoid işlemi yavaşça çekin ve falciform ligamente erişin.
    2. Safra kesesi ile ksifoid süreç arasında, ksifoid sürece mümkün olduğunca yakın, falsiform ligamentten 1 cm uzunluğunda bir kesim yapın. Safra kesesine zarar vermediğinizden emin olun.
    3. Karaciğer ve toraks arasındaki aşağıdaki bağlantı yapılarını kesin: yemek borusu, inferior vena kava, torasik aort, karaciğerin çıplak alanını çevreleyen tüm bağlar ve dorsal olarak kalan tüm doku bağlantıları.
      NOT: en-bloc örneği tamamen disseke edilmiştir. Karaciğer, safra kanalı sistemi ve midenin pilorik bölgesi ile bağlantılı duodenal korpus içerir.

5. Son safra kesesi ve safra kanalı diseksiyonu

  1. Aşağıdaki adımları izleyerek brüt hazırlığı gerçekleştirin.
    1. En-blok numunesini genellikle dehidrasyon için kullanılan bir köpük ped üzerine yerleştirin. Bu ve sonraki adımlar için 20x mikroskobik büyütme ve maksimum uç boyutu 6 mm olan iki mikrocerrahi atravmatik forseps kullanın.
    2. Numuneyi köpük ped üzerine monte edin. Numuneyi doğru anatomik konumda yeniden düzenleyin. Duodenumun oral ve aboral kısmını düzleştirerek yumuşak bir hareket gerçekleştirin.
    3. Hareketi duodenal papillada başlatın ve atravmatik forseps kullanarak kesici kenarlara devam edin. Sadece duodenumun oral kısmında ortaya çıkacak olan midenin beyaz hamurlu içeriğini yumuşatın. Olası safra kanalı rotasyonunu dışlamak için duodenumun oral ve aboral kısmını tanımladığınızdan emin olun.
    4. Safra kanalının diseksiyonuna başlamak için büyük karaciğer dokusu kalıntılarını kesin.
  2. Son yalıtımı gerçekleştirin.
    1. Kalan karaciğer dokusunu köpük paspasın gözeneklerine hafifçe bastırın. Kazıma hareketlerinin safra kanalı sisteminden başlayıp karaciğer sınırlarına yol açtığından emin olun.
    2. Çeşitli yönlerde birkaç kazıma hareketinden sonra numuneyi köpük paspas üzerinde daha temiz bir konuma aktarın. EBDS ve istenmeyen hücreler arasında mümkün olan en iyi ayrım için görünümü optimize etmek üzere arka planda daha az sıkılmış karaciğer dokusunun avantajını kullanın. Hepatik dokuyu safra kanalından hiçbir şey kalmayıncaya kadar veya mümkün olduğunca az kalana kadar kazıyın.
    3. İzole EBDS kalana kadar hepatoduodenal ligamenti işleyin. Hepatik arter, portal ven ve küçük kalıntılar gibi intraligamentöz kan damarlarını çıkarın. Bu hassas filamenti, yumuşak bir çekiş ve yüksek özenle sol yanal tarafa çıkarın. Bu diseksiyon adımı, hepatik dokunun önceden çıkarılması sırasında istemeden veya kısmen tamamlanmış olabilir, bu da sonunda aynı sonuca yol açar.
      NOT: Kan damarları, duodenal papillanın oral yoldan yaklaşık 3-5 mm beyaz ve çok hassas bir filament olarak ortaya çıkar ve sol lateral taraftan hepatoduodenal ligamente katılır ve safra kanalı ile glissonian üçlüsüne birikir. Bu adımın tamamlanmasıyla, son numune tamamen izole edilir. Kayıt ihtiyacı varsa, safra kanalı yapılarını anatomik konumlarına göre düzenledikten sonra görüntüler yakalanabilir (Şekil 1). Son hazırlık adımlarının bir köpük paspas üzerinde yapılması önerilir, çünkü numune operasyon alanının yüzeyine çok fazla yapışmayacaktır. Gözenekler ıslaksa, safra kanalı yükselir veya yüzer. Numuneyi hareket ettirirken, operasyon bezi üzerindeki preparatta olduğu kadar sıkı yapışmaz, bu da numuneyi hareket ettirirken yırtılmaya neden olmaz.

6. Histolojik analiz için hazırlık

  1. İzole edilmiş numuneyi, diseksiyondan sonra mümkün olan en kısa sürede tamponlanmış bir çözeltiye, özel bir ortama veya formalin içeren fiksatif maddelere (bakınız Malzeme Tablosu) koyun.
  2. Daha fazla planlanan işleme adımlarına bağlı olarak uygun bir depolama çözümü seçin.
    DİKKAT: Formalin içeren fiksatörleri akut toksisite, aşındırıcılık ve çeşitli sağlık tehlikeleri nedeniyle sadece bir havalandırma deliği altında kullanın.
    NOT: Sunulan çalışmada, EBDS örnekleri paraformaldehit içine yerleştirilmiş, dehidrate edilmiş ve parafin içine gömülmüştür. Oda sıcaklığında saklanmışlar ve bölümlemeden önce soğutulmuşlardır. Bir ısıtma kabininde, 2 μm dilimler gece boyunca tutuldu ve geleneksel hematoksilin ve eozin4 kullanılarak boyandı (bkz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Şekil 1A , tarif edilen teknikle diseke edilen bir murin yenidoğanının EBDS'sini göstermektedir. Mikroskopik olarak, başka karaciğer dokusu görülmez. Hepatik doku, protokolün son izolasyon aşamalarında çıkarılmıştır ve renk ve kıvam açısından safra kanalı dokusundan kolayca ayırt edilebilir. Şekil 1B , milimetre ölçeğine kıyasla izole edilmiş numuneyi göstermektedir. EBD'nin uzunluğu (safra kesesinden duodenal papillaya kadar ölçülür) 10 mm'den azdır. Çok hassas...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu makalede, ötenazi yenidoğan farelerinin EBDS'lerinin çıkarılması için yeni bir cerrahi yaklaşımın oluşturulması ve doğrulanması bildirilmiş ve tartışılmıştır. Mikroskopik ve histolojik bulgular, yaklaşımın EBD'leri hızlı bir şekilde tespit ettiğini ve yenidoğan farelerde bile kanal kenarlarına yakın bir yerde diseke ettiğini ortaya koymaktadır. Tarif edilen protokol için sadece cerrahi aletler ve 20x büyütmeli bir mikroskop gereklidir. Ayrıca, yaklaşım tüm EBDS'nin izolasyonuna izin verir. Teknik son derece verimli, b...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.

Teşekkürler

Yazarlar Johanna Hagens, Pauline Schuppert, Clara Philippi, PD Dr. med Christian Tomuschat, Svenja Warnke, PD Dr. Diana Lindner, Prof. Dr. Dirk Westermann, Miriam Tomczak, Nicole Lüder, Nadine Kurzawa, Dr. rer nat. Laia Pagerols Raluy, Birgit Appl ve Magdalena Trochimiuk'a katkılarından dolayı teşekkür eder. Hans Christian Schmidt, Else Kröner-Fresenius-Stiftung iPRIME Bursu (2021_EKPK.10), UKE, Hamburg tarafından finansal olarak desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Dehidrasyon ajanı olarak kullanılan2-PropanolCHEMSOLUTE11365000
30 G kanülB Braun/Sterican, Melsungen, Almanya4656300numunenin hidrasyonu için kanül
Hava menfeziC + P Mö belsysteme GmbH & Co. KG, Breidenbach, AlmanyaTec-Ononmic AZ 1200bir havalandırma deliğinin kullanılması, formalin içeren fiksatiflerin solunmasını önlemeye yardımcı olur
Aqua ad enjektabilia BraunB, Braun, Melsungen, Almanya2351744salin; Konteyner: Mini-Plasco connect, 20 x 10 mL, steril
Daha büyük mikrocerrahi ForsepsDIADUST von Aesculap, Trossingen DeutschlandFD253Rdüz, 180 mm (7"), platform ucu, yuvarlak sap, genişlik: 0,800 mm, elmas tozu kaplı, steril olmayan, tekrar kullanılabilir gözlem ve son hazırlık hariç her hazırlık aşaması için isteğe bağlı alet; Peritonun derisini bölmek
Kamera " SmartCAM 5 inç  Basler ve Vision Engineering, Send, Birleşik KrallıkEVC131Aisteğe bağlı Lynx Exo kamera modülü: sensör tipi: CMOS, çözünürlük 2560 x 1920 piksel, sensör boyutu: 1/2"; Video prodüksiyonu ve teknik değerlendirme için kullanılır
Dehidrasyon makinesi/Citadel 2000 Doku İşlemcisiFisher Scientific GmbH, Schwerte, Almanya12612613otomatik dehidrasyon için kullanılır, kısa program (yaklaşık 4,8 saat)
Dehidrasyon süngeri Carl Roth, Karlsruhe, AlmanyaTT56.1sünger, inç başına minimum 60 gözenek boyutuna sahip diğer süngerler/köpük pedler de uygundur, gömme kasetlerinin delinmesinden kaymayı önlemek için numuneyi aşağıdan ve yukarıdan kaplamak için gömme kaseti başına iki köpük ped kullanılması önerilir
Dulbecco&akut; s Fosfat Tamponlu Salin (PBS)Gibco14190-144Akut; t Calzium veya Magnezyum içerir, 500 mL
Gömme kasetleriEngelbrecht GmbH, Edermü nde, Almanya17990
EosinMEDITE Medical GmbH, Burgdorf, Almanya41-6660-00boyama solüsyonu, kullanıma hazır
İnce Makas CeramaCutFST, Heidelberg Almanya14959-09İpuçları: Keskin-Keskin, Alaşım / Malzeme: Seramik Kaplı Paslanmaz Çelik, Tırtıklı:, Evet; Özellik: CeramaCut, Uç Şekli: Düz, Kesme Kenarı: 22 mm, Uzunluk: 9 cm; Cilt insizyonu, periton penceresinin insizyonu
Graefe Forseps FST, Heidelberg Almanya11051-10Uzunluk: 10 cm, Uç Şekli: kavisli, tırtıklı, Uç genişliği: 0,8 mm, Uç Boyutları: 0,8 x 0,7 mm, Alaşım / Malzeme: Paslanmaz Çelik
HematoksilenMEDITE Medical GmbH, Burgdorf, Almanya41-5130-00boyama solüsyonu, kullanıma hazır
Highresolotion mikroskobu VizyonMühendisliği, Gönder Birleşik KrallıkEVO503 60x büyütmeye kadar büyütme yeteneğine sahip, sadece 6x ila 20x büyütme kullanıldı 
MikroskopOlympus Optical CO, Ltd., Hamburg, AlmanyaBX60F5
Mikroskop Kapağı GlasesMarienfeld, Lauda-Kö nigshofen, Almanya10124460 mm genişliğinde, SCHOTT D 263 camdan yapılmıştır
Mikroskop SlaytlarıR. Langenbrinck GmbH, Emmendingen, Almanya03-0060
MicrotomeLeica, Nuß loch, AlmanyaSM2010RKesit alma aracı (2 & mikro; m-dilimler) 
Omnifix-F 1 mL şırıngaB Braun, Melsungen, Almanya9161406Vkanülsüz şırınga
ParafinSakura Finetec, Torrance, ABD4511Tissue-Tek Parafin Wax Tek III, DMSO
Parafin gömme makinesiolmadan MEDITE Medical GmbH, Burgdorf, AlmanyaTES 99Bu çalışmada kullanılan gömme makinesi aşağıdaki üç ayrı modülü içeriyordu: TES 99.420, TES 99.250, TES 99.600. Numune, dehidrasyondan hemen sonra Parafine gömülmelidir, buzdolabındaki olası büzülme ve nem nedeniyle buzdolabında ara depolama yapılmamalıdır
Paraformaldehit (PFA)Morphisto1176201000Karaciğer numuneleri için 2 mL Eppendorf konik Tüplerde 1 mL Alikot ve ekstrahepatik safra kanalı örnekleri için 1 mL Eppendorf konik Tüplerde 0,5 mL Alikot hazırlayın, PBS ph 7.4 'de% 4;
Küçük Mikrocerrahi Forseps EPM (Erich Pfitzer Medizintechnik), Bü tthard, Bayern, Almanya(00)165Yuvarlak sap, düz, 0,3 mm uç, gözlem ve hazırlığın her aşamasında kullanılan alet, özellikle son hazırlıkta kullanışlıdır
Paslanmaz Çelik CetvelAgntho'nun AB, Lidingö, İsveç30085-15150mm Metrik ve İnç Mezuniyetler
Cerrahi Makas – Kafa kesme için keskin körFST, Heidelberg Almanya14001-14Kafa kesme cihazı
Isıtma kabiniHaraeus, Hanau, AlmanyaT 6060Dilimlenmiş numuneler, numunenin mikroskop lamlarına yapışmasını sağlamak için ısıtma kabininde tutulmalıdır
Son diseksiyon adımı için

Kaynaklar

  1. Liwinski, T., Schramm, C. Primär sklerosierende Cholangitis. Der Internist. 59 (6), 551-559 (2018).
  2. Kobayashi, H., Stringer, M. D. Biliary atresia. Seminars in Neonatology. 8 (5), 383-391 (2003).
  3. Patman, G. Biliary tract: Newly identified biliatresone causes biliary atresia. Nature Reviews Gastroenterology & Hepatology. 12 (7), 369(2015).
  4. Mack, C. L., Sokol, R. J. Unraveling the pathogenesis and etiology of biliary atresia. Pediatric Research. 57 (5), 87-94 (2005).
  5. Karjoo, S., Wells, R. G. Isolation of neonatal extrahepatic cholangiocytes. Journal of Visualized Experiments. (88), e51621(2014).
  6. Strazzabosco, M., Fabris, L. Functional anatomy of normal bile ducts. The Anatomical Record: Advances in Integrative Anatomy and Evolutionary Biology. 291 (6), 653-660 (2008).
  7. Nakanuma, Y., Hoso, M., Sanzen, T., Sasaki, M. Microstructure and development of the normal and pathologic biliary tract in humans, including blood supply. Microscopy Research and Technique. 38 (6), 552-570 (1997).
  8. Banales, J. M., et al. Cholangiocyte pathobiology. Nature Reviews Gastroenterology & Hepatology. 16 (5), 269-281 (2019).
  9. de Buy Wenniger, L. J., et al. The cholangiocyte glycocalyx stabilizes the 'biliary HCO3- umbrella': an integrated line of defense against toxic bile acids. Digestive Diseases. 33 (3), 397-407 (2015).
  10. Pinto, C., Giordano, D. M., Maroni, L., Marzioni, M. Role of inflammation and proinflammatory cytokines in cholangiocyte pathophysiology. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular Basis of Disease. 1864 (4), 1270-1278 (2018).
  11. Khandekar, G., et al. Coordinated development of the mouse extrahepatic bile duct: Implications for neonatal susceptibility to biliary injury. Journal of Hepatology. 72 (1), 135-145 (2020).
  12. Grundmann, D., Klotz, M., Rabe, H., Glanemann, M., Schäfer, K. -H. Isolation of high-purity myenteric plexus from adult human and mouse gastrointestinal tract. Scientific Reports. 5 (1), 9226(2015).
  13. Ishii, M., Vroman, B., LaRusso, N. F. Isolation and morphologic characterization of bile duct epithelial cells from normal rat liver. Gastroenterology. 97 (5), 1236-1247 (1989).
  14. Kumar, U., Jordan, T. W. Isolation and culture of biliary epithelial cells from the biliary tract fraction of normal rats. Liver. 6 (6), 369-378 (1986).
  15. Vroman, B., LaRusso, N. F. Development and characterization of polarized primary cultures of rat intrahepatic bile duct epithelial cells. Laboratory Investigation. 74 (1), 303-313 (1996).
  16. Paradis, K., Sharp, H. L. In vitro duct-like structure formation after isolation of bile ductular cells from a murine model. Journal of Laboratory and Clinical Medicine. 113 (6), 689-694 (1989).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Fare Yenido anlarSafra Kanal zolasyonuEn Bloc RezeksiyonBiliyer Sistem DiseksiyonuKolanjiyosit zolasyonuHistolojik ncelemeAtravmatik PensHepatoduodenal Ligaman

İlgili makaleler