Bu çalışma, tuzlu su karides öldürücülük testi olarak da tanımlanan Artemia salina öldürücülük biyotahlil prosedürünü değerlendirmeyi ve gözden geçirmeyi amaçlamaktadır. Bu basit ve ucuz yöntem, numunelerin, yani doğal ürünlerin genel toksisitesi (ön toksisite değerlendirmesi olarak kabul edilir) hakkında bilgi verir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Artemia salina L. Kullanarak Öldürücülük Biyotahlili
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Doğal ürünler antik çağlardan beri ilaç üretmek için kullanılmıştır. Günümüzde, doğal kaynaklardan elde edilen ve çok sayıda hastalığa karşı kullanılan birçok kemoterapötik ilaç bulunmaktadır. Ne yazık ki, bu bileşiklerin çoğu sıklıkla sistemik toksisite ve yan etkiler gösterir. Seçilmiş potansiyel biyoaktif örneklerin tolere edilebilirliğini daha iyi değerlendirmek için, tuzlu su karidesi (Artemia salina) genellikle öldürücülük çalışmalarında bir model olarak kullanılır. A. salina testi, çalışılan biyoaktif bileşiklerin larva evrelerinde (nauplii) mikrokabukluları öldürme yeteneğine dayanmaktadır. Bu yöntem, sitotoksisite çalışmaları ve sentetik, yarı sentetik ve doğal ürünlerin genel toksisite taraması için uygun bir başlangıç noktasını temsil eder. Yukarıda belirtilen amaçlar için genellikle uygun olan diğer birçok tahlille (in vitro hücreler veya maya suşları, zebra balığı, kemirgenler) karşılaştırıldığında basit, hızlı ve düşük maliyetli bir tahlil olarak kabul edilebilir; dahası, herhangi bir özel eğitim olmadan bile kolayca gerçekleştirilebilir. Genel olarak, A. salina testi, seçilen bileşiklerin ön toksisite değerlendirmesi ve doğal ürün ekstraktlarının biyo-rehberli fraksiyonasyonu için yararlı bir araçtır.
Giriş
Bitkilerden, hayvanlardan veya mikroorganizmalardan elde edilen doğal ürünler, çeşitli biyolojik ve farmakolojik aktiviteleri nedeniyle yeni biyoaktif moleküllerin geliştirilmesinde yıllar içinde artan bir ilgi alanı olmuştur1. Bununla birlikte, ilişkili yan etkiler, ilaç direnci veya ajanların yetersiz özgüllüğü, özellikle antikanser ilaçları olarak kullanıldığında, etkisiz tedaviye yol açabilecek başlıca faktörleri temsil etmektedir 1,2.
Son birkaç on yılda, bazıları antikanser ajanları olarak kullanılan birkaç bitki kaynaklı sitotoksik ajan keşfedilmiştir<....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. Ekipman hazırlığı
- Ticari olarak temin edilebilen kuluçka ekipmanlarını satın alın. Kuluçka ekipmanını kurmak için uygun bir yer seçin (Şekil 2A). Huni şeklindeki kabı siyah desteğe (sete dahil) yerleştirin ve seviye işaretini ve musluğu görmek için huniyi uygun bir yöne çevirin.
- El yapımı migrasyon ekipmanı yapmak için, 12 cm'lik bir son yükseklik elde etmek için iki adet 0,5 L (5,8 cm çapında) plastik şişenin üstünü kesin. Her şişede alttan 7 cm uzakta bir tarafta 1,5 cm çapında bir delik oluşturun ve iki açıklık arasına 13 cm'lik bir lastik tüp (1,3 cm dış ve 0,9 cm iç çap) yerleştirin. Açıklıklar....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Son zamanlarda grubumuz tarafından incelenen bazı doğal ürünlerin genel toksisitesi, tuzlu su karidesi öldürücülük biyotahlili ile değerlendirilmiştir. Dört ekstrakt (Pa- P. ambigerus; Pb- P. barbatus; Pc- P. cylindraceus; ve antioksidan aktiviteleri ile bilinen Plectranthus cinsinden Pe- P. ecklonii) test edildi (yayınlanmamış sonuçlar). Ek olarak, Plectranthus spp.'den elde edilen iki doğal bileşik (1 ve 2) ve üç yarı sentetik türev (3, 4, 5; Şe.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Son yıllarda, bilimsel topluluk toksisite taramaları için alternatif modellere olan dikkatini artırmıştır21. A. salina öldürücülük biyotahlilinin yanı sıra, diğer metodolojiler genellikle numune tolere edilebilirliğinin değerlendirilmesi için yapılır ve omurgalı biyotahlilleri (kemirgenler gibi), omurgasızlar (zebra balığı gibi), maya suşları veya hücreleri kullanan in vitro yöntemler ve siliko yöntemler22,23,24,25
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar, finansal veya başka türlü hiçbir çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.
Teşekkürler
Profesör Amilcar Roberto'nun anısına.
Bu çalışma, CBIOS ve doktora hibesi SFRH / BD / 018'e (Vera Isca) atfedilen UIDB / 04567/2020 ve UIDP / 04567 / 2020 projeleri kapsamında Fundação para a Ciência e a 137671 Tecnologia (FCT, Portekiz) tarafından finansal olarak desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 24 kuyulu plakalar | Thermo Fisher Scientific, Danimarka | 174899 | Thermo Scientific Nunc Up Cell 24 çok çanaklı |
| Alüminyum folyo | Albal-Süpermarkette | satın alınabilir | |
| Artemio Set | JBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Almanya | 61066000 | Evcil hayvan dükkanlarından satın alınabilir |
| Binoküler mikroskop | Ceti, Belçika | 1700.0000 | Flexum-24AED, 220-240 V, 50 Hz |
| Şişeler | - | 0.5 L Çap: 5.8 cm; Yükseklik: 12 cm | |
| Salamura karides kistleri | JBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Almanya | 3090700 | Evcil hayvan dükkanlarından satın alınabilir |
| Salamura karides tuzu | JBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Almanya | 3090600 | Evcil hayvan dükkanlarından satın alınabilir |
| Dimetil sülfoksit (DMSO) | VWR kimyasalları | CAS: 67-68-5 | % 99 saflık |
| Çözülebilir uçlar | Elmas | F171500 | Hacim aralığı: 100 - 1000 &mikro; L |
| Eppendorf mikrotüpler | MARKA | 7,80,546 | Mikrotüpler, PP, 2 mL, BIO-CERT PCR KALİTESİ |
| Erlenmeyer şişesi | VWR kimyasalları | 4,47,109 | hacim: 100 mL |
| Cam beher | Normax | 3.2111654N | Hacim: 1000 mL |
| Eldiven | Guantes Luna | GLSP3-GraphPad | |
| Prism | GraphPad Software, San Diego, CA, | ABD-Windows | , www.graphpad.com için GraphPad Prism sürüm 5.00, 5 Şubat 2021'de erişildi; Ticari İstatistik analiz yazılımı |
| Ev yapımı A. salina Yetiştirici | - | - | Ev yapımı: bir hortumla bağlanmış iki plastik şişe |
| Sıcak tutkal | Parkside | PHP500E3 | 230 V, 50 Hz, 25 W |
| İnkübatör | : Heidolph Instruments, Danimarka | -Bir | adet Heidolph Unimax 1010 ekipmanı ve bir adet Heidolph Inkubator 1006 |
| Light | Roblan | SKYC3008FE14 | LED ampul |
| Mikropipetler | VWR kimyasalları | 613-5265 | Hacim aralığı: 100 - 1000 &mikro; L |
| Potasyum dikromat (K < alt > 2 < / alt >Cr < alt > 2 < alt > O < alt > 7 < / alt >) | VWR kimyasalları | CAS: 7778-50-9 | |
 | |||
| &derece |
Kaynaklar
- Ntungwe, N. E., et al. Artemia species: An important tool to screen general toxicity samples. Current Pharmaceutical Design. 26 (24), 2892-2908 (2020).
- Cragg, G. M., Newman, D. J. Natural products: A continuing sour....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
