Method Article

Saccharomyces cerevisiae'de Haploidlerin Çiftleşme Etkinliğinin Belirlenmesi

DOI:

10.3791/64596

⸱

December 2nd, 2022

 ,  , 
1Department of Chemical Engineering, Indian Institute of Technology Bombay, 2Department of Ecology and Evolutionary Biology, University of Michigan, Ann Arbor

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışmada, maya Saccharomyces cerevisiae'de çiftleşme verimliliğinin ölçülmesi için sağlam bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yöntem, türleşme çalışmalarında zigotik öncesi bariyerlerin nicelleştirilmesi için özellikle yararlıdır.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Saccharomyces cerevisiae, genetik, evrim ve moleküler biyolojide yaygın olarak kullanılan bir model organizmadır. Son yıllarda, türleşme ile ilgili problemleri incelemek için popüler bir model organizma haline gelmiştir. Mayanın yaşam döngüsü hem aseksüel hem de cinsel üreme aşamalarını içerir. Evrim deneylerinin gerçekleştirilmesinin kolaylığı ve organizmanın kısa üretim süresi, üreme engellerinin evriminin incelenmesine izin verir. İki çiftleşme tipinin (a ve α) a / α diploidi oluşturmak için çiftleştiği verimlilik, çiftleşme verimliliği olarak adlandırılır. Haploidler arasındaki çiftleşme verimliliğindeki herhangi bir azalma, zigotik öncesi bir bariyeri gösterir. Bu nedenle, iki haploid arasındaki üreme izolasyonunun derecesini ölçmek için, çiftleşme verimliliğini ölçmek için sağlam bir yöntem gereklidir. Bu amaçla, burada basit ve son derece tekrarlanabilir bir protokol sunulmaktadır. Protokol, haploidleri bir YPD plakasına yamalamak, haploidleri eşit sayıda karıştırmak, tek koloniler için seyreltmek ve kaplamak ve son olarak, bir bırakma plakasındaki kolonilerin sayısına göre verimliliği hesaplamak gibi dört ana adımı içerir. Toksotrofik belirteçler, haploidler ve diploidler arasındaki ayrımı açıkça yapmak için kullanılır.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Genellikle tomurcuklanan maya olarak adlandırılan Saccharomyces cerevisiae, tek hücreli bir ökaryottur. A ve α olmak üzere iki çiftleşme tipi vardır ve hem aseksüel hem de cinsel üreme döngüleri sergiler. A ve α çiftleşme tipleri haploidlerdir ve mayanın aseksüel döngüsünü temsil eden çevredeki diğer çiftleşme tipinin yokluğunda mitotik olarak bölünebilir. İki çiftleşme tipi birbirine yakın olduğunda, mitotik olarak bölünmeyi durdururlar ve bir diploid hücre oluşturmak için kaynaşırlar. Diploid maya, besinler mevcut olduğunda mitotik olarak bölünebilir veya asetat1 gib....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

NOT: Protokol genel olarak aşağıdaki adımları içerir: (1) çiftleşme verimliliği ızgaralarındaki haploidlerin bir YPD plakası üzerinde yamalanması, (2) 24 saatlik inkübasyondan sonra haploidlerin eşit sayıda karıştırılması ve karışık haploidlerin çiftleşmesi için birkaç saat verilmesi (bu çalışmada 7 saat), (3) 30 ° C'de 7 saat sonra tek kolonileri izole etmek için karışık hücrelerin YPD üzerine kaplanması, ve son olarak, (4) öxotrofik belirteçler kullanılarak oluşturulan diploidlerin sayısını belirlemek. Bu adımlar aşağıda ayrıntılı olarak ele alınmıştır (ayrıca bkz. Şekil 2).

1. Çiftleşme verimliliği ız....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

İki çiftleşme tipinin çiftleşme verimliliğinin ölçülmesi
Burada açıklanan protokol, SK1AM a ve SK1AM α arasındaki ve ScAMa ve ScAMα arasındaki iki maya suşu arasındaki çiftleşme verimliliğini ölçmek için kullanılmıştır (Şekil 3A). Bu deneylerde, iki haploid arasındaki çiftleşme en az 12 kez tekrarlandı. Deneyin tekrarlarının her birinde, en az 100 koloni çift bırakma ortamına yerleştirildi. Protokolün sa.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

S. cerevisiae'de çiftleşme verimliliğinin ölçülmesi, çiftleşme yollarında yer alan genlerle ilgili çalışmalar yapmak veya dış çevrenin çiftleşme davranışı üzerindeki etkisini incelemek için gereklidir. Son yirmi yılda, S. cerevisiae, türleşme 14,36,37,38 ile ilgili soruları ele almak için popüler bir model haline gelmiştir. İki çiftleşme tipinin varlığı ve laboratuvar ortamlar.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar bu çalışmada birbiriyle çelişen çıkarları olmadığını beyan ederler. Yazarlar, SK1'den türetilmiş suşları tüm kar amacı gütmeyen kullanım için paylaşmaktan mutluluk duyarlar.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, S.S.P.N.'ye DBT / Wellcome Trust (Hindistan İttifakı) hibesi (IA / 504632S / 19/2 / 504632) tarafından finanse edilmiştir. A.M., Hindistan Hükümeti Bilimsel ve Endüstriyel Araştırma Konseyi (CSIR) tarafından Kıdemli Araştırma Görevlisi olarak desteklenmektedir (09/087(0873)/2017-EMR-I). Yazarlar tartışmalar için Paike Jayadeva Bhat'a teşekkür eder.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
AdeninSigma Yaşam BilimleriA8626
Agar Tozu bakteriyoloji için düzenli sınıfSRL19661 (0140186)
Amonyum Sülfat, Hi-ARHiMediaGRM1273
D - (+) - glikozSigma Life ScienceG8270
Cam Petri plakalarıHiMediaPW008& nbsp; 90 mm x 15 mm boyut
L-ArgininSigma Yaşam BilimleriA8094
L-Aspartik asitSigma Yaşam BilimleriA7219
L-Histidin monoklorür monohidratSigma Yaşam BilimleriH5659
L-İzolösinSigma AldrichI2752
L-LösinSigma Yaşam BilimleriL8912
L-LizinAldrich62840
L-MetioninSigma Yaşam BilimleriM5308
L-FenilalaninSigma Yaşam BilimleriP5482
L-TreoninSigma AldrichT8625
L-TirozinSigma Yaşam BilimleriT8566
L-ValinSigma Yaşam BilimleriV0513
Çiftleşme verimlilik ızgarası1 cm x 1,5 cm Petri plakası üzerine çizilmiş dikdörtgen ızgara
Mikrosantrifüj tüpleriTarsons500010
PeptoneHiMediaRM001
Urasil SigmaLife ScienceU0750
Maya Özü Tozu HiMediaRM027
Maya Azot Bazı, Amino asitler ve Amonyum Sülfat olmadanBD Difco233520

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Neiman, A. M. Sporulation in the budding yeast Saccharomyces cerevisiae. Genetics. 189 (3), 737-765 (2011).
  2. Duina, A. A., Miller, M. E., Keeney, J. B. Budding yeast for budding geneticists: A primer on the Saccharomyces cerevisiae model system. Genetics.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Mating EfficiencySaccharomyces CerevisiaeHaploid MatingYeast SpeciationAuxotrophic MarkersYPD AgarDiploid IdentificationOptical DensityGene FlowReproductive Isolation

Related Articles