Gebelik oluşumu, kompleks embriyo ve uterus çapraz ilişkisini içeren dinamik bir süreçtir. Maternal uterin ortamın bu süreçlere kesin katkıları aktif bir araştırma alanı olmaya devam etmektedir. Burada, bu araştırma sorularını ele almak için in vivo hayvan modellerinin tasarlanmasına yardımcı olacak ayrıntılı protokoller sağlanmaktadır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Yumurtalık Ameliyatlı Fare Modelinde Gebelik Oluşumuna Uterus Katkılarını İnceleme Yöntemleri
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Gebeliğin oluşması için, uygulanabilir bir blastosist, implantasyonu ve plasenta oluşumunu kolaylaştırmak ve devam eden hamileliği sağlamak için alıcı bir uterus astarı (endometriyum) ile başarılı bir şekilde etkileşime girmelidir. Embriyonik defektlerin neden olduğu gebelik başarısındaki sınırlamalar iyi bilinmektedir ve son yıllarda in vitro fertilizasyon (IVF) ve yardımcı üreme teknolojilerinin yükselişiyle büyük ölçüde aşılmıştır. Bununla birlikte, henüz, alan, yetersiz alıcı bir endometriyumun neden olduğu sınırlamaların üstesinden gelmemiştir, bu nedenle IVF başarı oranlarının durgunlaşmasına neden olmuştur. Yumurtalık ve endometriyal fonksiyonlar yakından iç içe geçmiştir, çünkü yumurtalık tarafından üretilen hormonlar endometriyumun adet siklikliğinden sorumludur. Bu nedenle, gebeliğin kemirgen modellerini kullanırken, gözlemlenen bir sonucun yumurtalık veya uterus eksikliğinden kaynaklanıp kaynaklanmadığını belirlemek zor olabilir. Bunun üstesinden gelmek için, gebeliğe uterusa özgü katkıların incelenmesine izin vermek için embriyo transferi veya yapay desidualizasyon ile yumurtalık ameliyatı yapılmış bir fare modeli geliştirilmiştir. Bu makalede, yumurtalık ameliyatının nasıl yapılacağına dair talimatlar verilecek ve sağlıklı donörlerden embriyo transferini takiben başarılı yapay desidualizasyonu veya hamileliği desteklemek için eksojen hormonların temini için çeşitli teknikler hakkında bilgi verilecektir. Bu teknikler arasında deri altı enjeksiyonu, yavaş salınımlı peletler ve ozmotik mini pompalar bulunur. Her yöntemin temel avantajları ve dezavantajları tartışılacak ve araştırmacıların kendi araştırma soruları için en iyi çalışma tasarımını seçmelerini sağlayacaktır.
Giriş
Son yıllarda yardımcı üreme teknolojilerinin kullanımının artmasıyla birlikte, gebe kalmanın önündeki birçok engel aşılmış ve birçok çiftin doğurganlık sorunlarına rağmen aile kurmasına izin verilmiştir1. Oosit veya sperm eksiklikleri genellikle in vitro fertilizasyon veya intrasitoplazmik sperm enjeksiyonu kullanılarak atlanabilir; Bununla birlikte, uterus ve endometriyal alıcılık ile ilgili konular, üreme potansiyelinin zor bir "kara kutusu" olmaya devam etmektedir2.
Hamilelik, yüksek kaliteli bir embriyo alıcı bir endometriyum (uterus astarı) ile başarılı bir şekilde etkileşime gir....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm hayvanlar, sıcaklık kontrollü, yüksek bariyerli tesislerde (Monash Üniversitesi Hayvan Araştırma Laboratuvarı) ücretsiz yiyecek ve su erişimi ve 12 saatlik bir aydınlık-karanlık döngüsü ile barındırıldı. Tüm prosedürler Monash Hayvan Araştırma Platformu Etik Komitesi'nin (#21908, 17971) onayına uygun olarak gerçekleştirilmiş ve hayvanların bakımı ve kullanımı için Ulusal Sağlık ve Tıbbi Araştırma Konseyi Uygulama Kurallarına uygun olarak gerçekleştirilmiştir.
1. Cerrahi hazırlık
- Sert / kuru mal döngüsündeki prosedürler için gerekli tüm cerrahi aletleri, gazlı bezleri ve kağıt havluları 121 ° C'de 30 dakikalık ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
İyi karakterize edilmiş bir yapay desidualizasyon modeli bu protokol belgesinde açıklanmaktadır (Şekil 1A). Burada, genç yetişkin dişi farelere (8 haftalık) bölüm 1 ve bölüm 2'de tarif edildiği gibi cerrahi ovariektomi uygulandı. Fareler daha sonra, endojen yumurtalık hormonlarının, bölüm 3-7 ve bölüm 9'da açıklandığı gibi eksojen hormonlarla desteklenmeden önce dağılmasını sağlamak için 2 hafta dinlendirildi. Yapay desidualizasyon, susam yağının intravajinal enjeksiyon.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu makale, OVX'in nasıl gerçekleştirileceği ve uterusun hamilelik ve doğurganlığa katkılarını anlamaya odaklanan çalışmalar için eksojen hormonların nasıl sağlanacağı konusunda adım adım talimatlar sunmaktadır. Bu yöntemlerin iki deneysel uygulamasında, embriyo transferinin gerçekleştirilmesi ve desidualizasyonun yapay olarak indüklenmesi de dahil olmak üzere iki ayrıntılı protokol sağlanmıştır.
OVX'i gerçekleştirmek başlangıçta zor olsa da - özellikle kemirgen modellerinde yeni olan araştırma.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar rakip finansal veya diğer çıkarları beyan etmemektedir.
Teşekkürler
Bu çalışma, Victoria Eyalet Hükümeti Operasyonel Altyapı Desteği ve Avustralya Hükümeti Ulusal Sağlık ve Tıbbi Araştırma Konseyi (NHMRC) IRIISS aracılığıyla mümkün olmuştur. Bu çalışma, Monash Üniversitesi Tıp Fakültesi, Hemşirelik ve Sağlık Bilimleri Platformu Erişim Hibesi tarafından A.L.W.'ye (Winship-PAG18-0343) Monash Üreme Hizmetleri Platformu'na erişim için desteklenmiştir. A.L.W., Avustralya Araştırma Konseyi'nden (ARC) DECRA fonu DE21010037 tarafından desteklenmektedir. J.N.H. ve L.R.A., Avustralya Hükümeti Araştırma Eğitim Programı Bursu ile desteklenmektedir. L.R.A. Monash Graduate Excellence Bursu ile desteklenmektedir. K.J.H. ARC Future Fellowship FT19010....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| ALZET 1002 mini ozmotik pompalar | BioScientific | 1002 | 0,25 & 14 gün boyunca L / h. Bölüm 7 (Deneysel prosedür - Embriyo transferi) için kullanın. |
| ALZET 1003D mini ozmotik pompalar | BioScientific | 1003D | 1 & 14 gün boyunca L / h. Bölüm 8 için kullanın (Deneysel prosedür - Yapay desidualizasyon). |
| ALZET Reflex 7 mm klipsler | BioScientific | 0009971 | Tercihe bağlı olarak yara kapatma için Refleks klipsler veya Michel klipsler kullanılabilir |
| ALZET Refleks klips aplikatörü | BioScientific | 0009974 | Tercihe bağlı olarak yara kapatma için Refleks klipsleri veya Michel klipsleri kullanılabilir |
| ALZET Refleks klips çıkarıcı | BioScientific | 0009976 | Tercihe bağlı olarak yara kapatma için Refleks klipsler veya Michel klipsler kullanılabilir |
| Bupivicaine enjeksiyonu | Pfizer | NA | Stock% 0.5. Tuzlu |
| su Estradiol Sigma | E8875 | ||
| Meloksikam | Ilium | NA | Aktif bileşen 0.5 mg / mL içinde% 0.05'te kullanın. 400 mL'lik kafes su şişesi başına 3,5 mL veya kurumunuzun veterinerinin reçete ettiği şekilde kullanın. |
| Michel klipsleri | Daniels | NS-000242 | |
| Çok amaçlı dolgu macunu | Dow Corning | 732 | |
| Ameliyatsız embriyo transferi (NSET) cihazı | ParaTechs | 60010 | 6 mm spekulum içerir. Tek kullanımlıktır. |
| Progesteron | Sigma | P0130 | Etanolde çözünür. İçin kullanın bölüm 3 (Hormon hazırlama - deri altı enjeksiyonu) ve bölüm 4 (Hormon hazırlama - yavaş salınan peletler) |
| Progesteron | Sigma | P7556 | Suda çözünür. Bölüm 5 için kullanın (Hormon hazırlama - ozmotik mini pompalar) |
| Göz merhemini yenileyin | Allergan | NA | %42,5 w/v sıvı parafin, %57,3 w/v yumuşak beyaz parafin |
| Rimadyl Carprofen | Zoetis | NA | Stok 50 mg/mL. 1 mg / ml'de kullanın (5 mg / kg doz için) |
| Kauçuk boru | Dow Corning | 508-008 | % 100 etanolde yıkanır ve 1 cm'lik parçalar halinde kesilir. İç çap 1.57 mm ± 0,23 mm; Dış çap 3.18 mm ± 0,23 mm; duvar 0.81 mm. |
| Susam yağı | Sigma | S3547 | |
| Sofsilk İpek sütürler boyut 3-0 | Covidien | GS-832 |
Kaynaklar
- Szamatowicz, M. Assisted reproductive technology in reproductive medicine - Possibilities and limitations. Ginekologia Polska. 87 (12), 820-823 (2016).
- Evans, J., et al. Fertile ground: Human endometrial programming....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
