Bu çalışma, embriyonik zebra balığı beyninin radyal glia progenitörlerinin bölünmesinde soy içi Notch / DeltaD sinyalini görüntülemek için bir antikor alım testi geliştirmektedir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Zebra Balığı Radyal Glia Progenitörlerinin Asimetrik Bölünmesi Sırasında Çentik / Delta Endositozunu İzlemek için Antikor Alım Testi
Bu makalede
Özet
Özet
Farklı kaderlere sahip iki yavru hücre üreten asimetrik hücre bölünmesi (ACD), hücresel çeşitlilik oluşturmak için temeldir. Hem omurgasızların hem de omurgalıların gelişmekte olan organlarında, asimetrik olarak bölünen progenitörler, bir Notchhi kendini yenileyen ve bir Notchlo farklılaştırıcı kızı üretir. Embriyonik zebra balığı beyninde, radyal glia progenitörleri (RGP'ler) - başlıca omurgalı nöral kök hücreleri - çoğunlukla bir RGP ve bir farklılaştırıcı nöron doğurmak için ACD'ye maruz kalırlar. Zebra balığı embriyolarının optik netliği ve kolay erişilebilirliği, ACD sırasında Çentik sinyalizasyonunun asimetrisinin nasıl ve ne zaman kurulduğunu doğrudan görselleştirmek için in vivo hızlandırılmış görüntüleme için idealdir. Son zamanlarda yapılan çalışmalar, Notch ligand DeltaD'nin dinamik endositozunun ACD sırasında hücre kaderinin belirlenmesinde çok önemli bir rol oynadığını ve sürecin evrimsel olarak korunmuş polarite düzenleyicisi Par-3 (Pard3 olarak da bilinir) ve dinein motor kompleksi tarafından düzenlendiğini göstermiştir. Mitotik RGP'lerde Notch sinyal endozomlarının in vivo kaçakçılık paternlerini görselleştirmek için, bu antikor alım testini geliştirdik. Tahlil kullanarak, RGP bölünmesi sırasında DeltaD içeren endozomların dinamiğini ortaya çıkardık.
Giriş
Çentik sinyalizasyonu, metazoalarda1 gelişim sırasında hücre kaderi kararını ve modellemesini kontrol eder ve son çalışmalar, kök hücre bölünmesinde Çentik sinyallemesinin esas olarak endositik kaçakçılığa bağlı olduğunu göstermiştir 2,3. Endositozlu Çentik / Delta, çekirdekteki Çentik sinyallemesini aktive edebilir ve Çentik hedef genlerinin transkripsiyonunu artırabilir 4,5,6. Yönlü Çentik/Delta endozomal kaçakçılığı ilk olarak asimetrik hücre bölünmesi (ACD) sırasında Drosophila duyu organı öncüsü (SOP) hücrelerinde gözlendi ve pIIa'da pIIb 7,8'den daha yüksek bir Notch sinyal aktivitesi ile sonuçlandı. Mitotik SOP hücrelerinde endositik süreci izlemek için anti-Delta ve anti-Notch antikorları ile antikor alım testleri uygulanmıştır. Çentik/DeltaD endozomları, sitokinez sırasında bir kinesin motor proteini ile birlikte merkezi iş miline doğru hareket eder ve hücre bölünmesi 3,8'in son anında asimetrik merkezi milin antiparalel dizisi nedeniyle asimetrik olarak pIIa hücresine translokasyona uğrar. Bu çalışmalar, Drosophila SOP hücrelerinde asimetrik bölünmeyi düzenleyen moleküler mekanizmalara ışık tutmuştur, ancak omurgalı radyal glia progenitörlerinde (RGP'ler) benzer endositik süreçlerin meydana gelip gelmediği belirsizdir.
Ayrıca, omurgalı RGP bölünmesi sırasında asimetrik Çentik / DeltaD sinyallemesini düzenleyen moleküler mekanizmalar iyi anlaşılmamıştır. Zebra balıklarında, Çentik ve Delta'nın etkileşiminin DeltaD ligand9'un endositozunu kolaylaştırdığı bildirilmiştir. DeltaD endositozunun gelişmekte olan omurgalı beynindeki yavru hücrelerin hücre kaderi seçimini etkileyip etkilemediği bilinmemektedir. Son zamanlarda yapılan çalışmalar, floresan olarak konjuge edilmiş anti-DeltaD antikorlarının nöral tüpe enjekte edilmesinin, Sara endozomlarını spesifik olarak nöroepitel hücrelerinde etiketleyebileceğini ve Sara endozomları içeren anti-DeltaD'nin tercihen çoğalan yavru hücrelere ayrıldığını göstermektedir10. Endozomlardan gelen Notch sinyallerinin yavru hücre kaderini düzenleyebileceği öne sürülmüştür. Önceki sonuçlar, gelişmekte olan ön beyindeki zebra balığı RGP hücrelerinin çoğunun ACD'ye maruz kaldığını ve yavru hücre kaderinin belirlenmesinin intralineage Notch / DeltaD sinyallemesine bağlı olduğunu göstermiştir11. Zebra balığı RGP'lerinde soy içi Çentik / DeltaD sinyallemesinin doğasını aydınlatmak için, zebra balığı gelişmekte olan beyinde anti-DeltaD antikor alım testini geliştirdik. Bu protokolü kullanarak, mitotik RGP'lerde DeltaD endositik kaçakçılığının canlı etiketlemesini ve görüntülemesini başarıyla gerçekleştirdik.
Floresan olarak etiketlenmiş anti-DeltaD-antikoru, ön beyin ventrikülü boyunca RGP'lere etkili bir şekilde içselleştirilir. Asimetrik olarak bölünen RGP'ler12,13'te DeltaD endozomlarının yönlü kaçakçılığının keşfedilmesini büyük ölçüde kolaylaştırmıştır. Drosophila notum kültürleri ve zebra balığı omuriliği 10 için geliştirilen önceki antikor alım protokolleriyle karşılaştırıldığında, bu protokol beyin ventrikül hücre tabakasında, özellikle10 nL'den az mikroenjeksiyonlu antikor karışımı ile uzun ömürlü ve yüksek etkili anti-DeltaD etiketlemesi sağlamıştır. Arka beyin ventrikül enjeksiyonu, gelişmekte olan beyinde antikor alım testini uygulamak için çok uygundur, çünkü arka beyin ventrikülü zebra balığı embriyolarında iyi genişlemiş ve erken gelişim aşamasında beyin omurilik sıvısı ile doldurulmuştur14. Antikor karışımını herhangi bir önemli gelişmekte olan dokuya zarar vermeden arka beyin ventrikülüne enjekte ederek, protokol ön beyindeki görüntüleme bölgesine olası hasarı mümkün olduğunca en aza indirmiştir. Enjekte edilen primer antikorun azaltılmış dozu, endojen Delta-Notch sinyallemesine in vivo müdahale etmenin potansiyel yan etkilerinden de kaçınmıştır. Bu protokol, diğer farmakolojik veya genetik bozulmalarla kolayca birleştirilebilir, farklı gelişim aşamalarında kullanılabilir ve muhtemelen yetişkin beynine ve insan pluripotent kök hücre kaynaklı 2D / 3D beyin organoidlerine uyarlanabilir. Birlikte ele alındığında, protokol ACD sırasında Notch sinyal asimetrisinin nasıl ve ne zaman kurulduğunu anlamayı mümkün kılmıştır. Bu protokolün başarılı bir şekilde uygulanmasındaki temel zorluk, spesifik deneysel koşullara dayanarak uygun antikor konsantrasyonlarının hassas bir şekilde verilmesini sağlamaktır.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Çalışma için AB vahşi tip çizgisini ve transgenik çizgi Tg [ef1a:Myr-Tdtomato] kullanılmıştır. Tüm hayvan deneyleri, Kaliforniya Üniversitesi, San Francisco, ABD'deki Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır (Onay Numarası: AN179000).
1. Zebra balığı embriyolarının hazırlanması
- Öğleden sonra saat 17:00'den önce, her tankta ayırmak için bölücüler kullanarak bir dişi vahşi tip balık ve bir erkek Tg [ef1a:Myr-Tdtomato] balığı ile balık geçiş tankları kurun.
- Ertesi sabah saat 11:00'den önce bölücüleri tüm geçiş tanklarından çıkarın. Sessiz olun ve çiftleşirken balıkları rahatsız etmeyin. Yumurtlama tipik olarak bölücüleri çıkardıktan sonra 30 dakika içinde gerçekleşir. Döllenmiş yumurtalar tankın dibinde kalır.
- Döllenmiş yumurtaları bir ağ filtresi ile tanklardan toplayın. Yumurtaları yumurta suyuyla dolu bir Petri kabına yıkayarak aktarın ve embriyoları diseksiyon mikroskobu altında 10x ila 20x büyütmede inceleyin.
- Döllenmiş embriyoları, büyük delikli cam Pasteur pipetlerle yaklaşık 20 mL embriyo ortamı (100 mL 1.000x stok çözeltisi 29.4 g NaCl, 1.27 g KCl, 4.85 g CaCl 2.2H 2 O ve 8.13 g MgSO4.7H 2O içerir) içeren temiz bir Petri kabına aktarın. Embriyoları 28 °C'de tutun. Petri kabı başına 50 döllenmiş embriyoyu, 28.5 ° C'de 30 mL embriyo ortamı ile tutun.
NOT: Bir çift balık normalde 100-300 embriyo üretir ve sağlıklı embriyoların döllenme ve hayatta kalma oranı her çiftleşme için% 95'in üzerindedir. - Ertesi sabah, embriyolar döllenme sonrası ~ 18-20 saatlik (hpf) gelişim aşamasına ulaştığında, embriyoları sabah 8: 00'de inkübatörden çıkarın. Onları ilk başta beyaz ışık kullanarak 20x büyütmede bir epifloresan mikroskobu altında gözlemleyin. O zaman, zebra balığı embriyoları 20 somit aşamasındadır.
- Bulutlu veya yırtılmış ölü embriyoları mikroskop altında bir cam pipet kullanarak atın.
- Floresan lambayı açın ve mikroskobun RFP filtre ayarını seçin. Ardından, güçlü kırmızı floresansı olan embriyoları seçin ve yumurta suyuyla yeni bir kaba aktarın.
- Embriyoları beyaz ışık altında iki ince forseps (forseps uçları keskin ve hasarsız olmalıdır) ile manuel olarak dekoryonlayın (Malzeme Tablosu).
- Koryonu bir çift forseps ile tutun ve diğer forsepslerle koryonda bir yırtılma yapın. Forsepsleri kullanarak gözyaşını dikkatlice açın ve embriyoyu diğer forsepslerin uçlarıyla hafifçe iterek embriyonun geçmesi için yeterince büyütün.
- Mikroenjeksiyondan önce hızlı bir durulama için dekoryonlanmış embriyoları taze embriyonik ortama sahip yeni bir Petri kabına aktarın.
2. Mikroenjeksiyonun hazırlanması
- Bir çektirme üzerine ince enjeksiyon iğneleri çekmek için kılcal damarları (1,2 mm OD, 0,9 mm ID, filamentli) kullanın. Çekme programını el kitabına göre tasarlayın ve optimize edin.
- İğnenin ucunu stereo diseksiyon mikroskobu altında forseps ile açın. Ucun çapını 10 μm civarında ve konik açısını 30° civarında yapın.
- Enjeksiyondan önce fare monoklonal anti-Dld antikorunu anti-Mouse-IgG-Atto647N ile konjuge edin.
- Her enjeksiyon deneyi için, 5-10 kez pipetleme yaparak 0,5 μL anti-Dld antikoru (0,5 mg/mL) ile 2 μL anti-Mouse-IgG-Atto647N antikoru (1 mg/mL) karıştırın. Ardından, oda sıcaklığında en az 30 dakika (veya 2-3 saat boyunca buz üzerinde) inkübe edin.
- İnkübasyondan sonra, antikor karışımına 2,5 μL bloke edici tampon (10 mg/mL fare IgG) ve 0,5 μL% 0,5 fenol kırmızısı ekleyin ve karışımda kalan konjuge edilmemiş antikorları bloke etmek için iyice karıştırmak için 10x pipet ekleyin.
NOT: Her deneme için, anti-Dld antikoru olmadan ekstra bir karışım hazırlayın ve kontrol olarak kullanın.
- Embriyo ortamında% 1 düşük erime noktası agarozu hazırlayın. Agaroz içeren karışımı, karışım şeffaflaşana kadar 70 ° C'de ısıtın.
- 2 mL mikrosantrifüj tüplerinde agaroz çözeltisini aliquot. Alikotları ~ 40 ° C'de bir ısı bloğunda tutun.
- Embriyoyu% 1 düşük erime noktası agaroz içeren tüpte 3 saniye boyunca durulayın.
- Embriyoyu, Şekil 1'de gösterildiği gibi her embriyoyu ayrı ayrı kapağa monte etmek için ayrı ayrı agaroz damlaları (~ 30-40 μL) ile birlikte ters çevrilmiş plastik bir Petri kabı kapağına yerleştirin. Embriyoları agarozun içine yanal olarak düz bir şekilde yerleştirin ve agaroz oda sıcaklığında katılaşana kadar bu pozisyonu koruyun.
- 12 embriyoyu yukarıdaki gibi birer birer üç sıraya monte edin. Agarozdaki tüm monte edilmiş embriyoları yumurta ortamı ile örtün.
3. Mikroenjeksiyon
- Gömülü embriyoları stereomikroskop altına koyun ve agarozu yumurta suyuyla örtün.
- Hava basıncı enjektörünü mikromanipülatörlerle birlikte ayarlayın ve Şekil 1'de gösterildiği gibi mikroskoplara yakın yerleştirin. Hava kaynağı olarak yüksek basınç altında gaz halinde azot (N2) içeren çelik gaz tüpünü kullanın.
- Gaz valfini ancak embriyolar agaroza monte edildikten sonra açın. Daha sonra, mikroenjektörün ön doldurma modülünü kullanırken, hazırlanan cam iğneyi, Şekil 1'de gösterildiği gibi, mikromanipülatöre 2 μL antikor karışımı ile önden yükleyin.
- Giriş basıncını ~80-90 psi'ye ve enjeksiyon basıncını ~20 psi'ye ayarlayın.
- Daha önce açıklandığı gibi mikroskop altında bir mikrometre kullanarak enjeksiyon hacmini kalibre edin15. İğne açıklığının boyutuna göre ayar süresini 10 ms ile 120 ms arasında olacak şekilde ayarlayın. Küreğe dokunarak her enjeksiyon darbesini iletin. Her teslimatın enjeksiyon hacmini ~ 4-5 nL'ye ayarlayın.
- Mikroenjeksiyon iğnesinin ucunu arka beynin arka çatı plakasından r0/r1 menteşe noktasına doğru dürtün ve beyin dokusuna çarpmadan yaklaşık 10 nL (iki veya üç darbe) antikor karışımı enjekte edin. Beyin ventrikülündeki kırmızı sıvıların akışını gözlemleyin.
NOT: Arka beyin ventrikülü, orta beyin arka beyin sınırının arkasındadır. Enjekte edilen fenol kırmızısı içeren antikor karışımı, beyin omurilik sıvısı ile yayılarak beyin ventrikülünü arka beyinden ön beyne hemen doldurur. - Enjeksiyondan sonra, mikromanipülatörün düğmesini döndürerek iğnenin ucunu embriyodan hızlı bir şekilde çıkarın. Başarılı bir enjeksiyon için, enjekte edilen karışımın kırmızı boyası, etraftaki agaroza sızmadan beyin ventrikülünde stabil bir şekilde kalır.
- Montaj plakasını mikroskop altında hareket ettirerek başka bir monte edilmiş embriyoyu tekrarlar için uygun bir konumda bulun.
- Altı ila sekiz embriyo enjekte ettikten sonra, embriyoları gömülü agarozdan serbest bırakmak için agarozu mikrocerrahi bir bıçakla soyun. Mikroenjeksiyonlu embriyoları 30 mL embriyo ortamına sahip taze bir kaba aktarın ve sonraki adımlar için oda sıcaklığına yerleştirin.
4. Montaj ve hızlandırılmış canlı görüntüleme
- 30 dakika sonra, seçilen embriyoları 10 mL embriyo ortamına aktarın. Embriyoları uyuşturmak için 10 mL embriyo ortamına 420 μL trikain stoğu (4 mg / mL) ekleyin.
- Embriyoları monte etmek için, tüpte aynı konsantrasyonda trikain içeren% 0.8 düşük erime noktalı agaroz hazırlayın. Alikotları ~ 40 ° C'de bir ısı bloğunda tutun.
- Enjekte edilen embriyoları 3 s boyunca sıcak agaroza batırmak için bir cam pipet kullanın. Daha sonra, embriyoları hemen aynı cam pipetle agarozdan çıkarın ve embriyoları tüpten bir damla agaroz ile 35 mm cam tabanlı kültür kaplarının ortasına yerleştirin. Camın üzerine damla başına sadece bir embriyo yerleştirin.
- Embriyonik beynin dorsal tarafını cam tabana mümkün olduğunca yakın tutmak için embriyoları bir lif probu veya yükleme ucu ile nazikçe yönlendirin. Agaroz yavaş yavaş katılaştıkça embriyoyu kıvrılmadan uzatmak için embriyo pozisyonunu yavaşça ayarlayın.
- Daha sonra, cam alt kabı ters çevirerek embriyo pozisyonunu kontrol edin. Doğru şekilde monte edilmiş embriyolara sahip tüm dorsal ön beynin mikroskop altında görülebildiğinden emin olun.
- Embriyoyu örtmek için trikain içeren 28.5 °C önceden ısıtılmış embriyonik ortamdan 2-3 mL ekleyin. Çanağı, Şekil 1'de gösterildiği gibi, konfokal mikroskobun sıcaklık kontrollü aşamasına düzgün bir şekilde yerleştirin. Görüntüleme odasının sıcaklığını 28,5 °C'de olacak şekilde ayarlayın. Embriyo artık görüntüleme için hazırdır.
- 40x suya daldırma hedefini kullanarak sabit bir zaman aralığıyla hızlandırılmış canlı görüntüleme gerçekleştirin.
- Görüntüleme ve mikroskop kontrol yazılımını kullanın (μMANAGER: https://micro-manager.org/)16.
- Hücredeki MyR-Tdtomato transgenik zebra balığı ve endozomal anti-Dld-Atto647N'nin membran floresansını görüntülemek için 564 nm ve 647 nm görüntüleme kanallarını seçin (Şekil 1).
- Lazer gücünü her iki kanal için de %30'a ayarlayın. Her kanal için z düzlemi başına 200 ms'lik bir pozlama süresi kullanın.
- Takılan her zebra balığı embriyosu için, toplamda 20 z-düzlemi için 1 μm'lik bir tarama z adımı ve 100 zaman diliminde bir tarama döngüsü kullanın.
- Her tarama döngüsü ile tarama modu arasındaki zaman aralığını 20 sn olarak ayarlayın ve kanal, dilim olarak ayarlayın.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Şekil 2A'da, birincil antikora bağlanmadan Atto647N ile enjekte edilen embriyolar, beyin ventrikülünde arka plan floresansı gösterdi. Hücrelerde çok az yutulmuş floresan partikülü gözlenebilir. Anti-Dld-Atto647N enjekte edilen zebra balığı embriyoları, gelişmekte olan ön beynin çoğu hücresinde büyük miktarlarda içselleştirilmiş floresan parçacıkları gösterdi (Şekil 2A, sağ panel). Mitotik RGP'lere odaklanmak için yakınlaştırdıktan sonra, Şek...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Zebra balığı radyal glia progenitörlerinde endozomal Notch / Delta kaçakçılığını yüksek verimlilikle etiketlemek ve görüntülemek için bir antikor alım testi geliştirdik. Drosophila SOP hücreleri 7,8'de etiketli anti-DeltaD antikorunu izlemek için kullanılan önceki yöntemlerle karşılaştırıldığında, yöntemimiz konjuge antikordaki numunelerin inkübasyonu yerine mikroenjeksiyon kullanmıştır. Floresan konjuge anti-Dld antikorları arka beyin ventrikülüne mikroenjekte e...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.
Teşekkürler
Proje, NIH R01NS120218, UCSF Mary Anne Koda-Kimble Tohum İnovasyon Ödülü ve Chan Zuckerberg Biohub tarafından desteklendi.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 35mm cam alt kültür kabı | MatTek şirketi | P35GC-1.5-10-C | |
| hava basıncı enjektörü | Narishige | IM300 | |
| Anti-Fare-IgG-Atto647N | Sigma-Aldrich | 50185 | |
| CaCl2.2H2O | Sigma-Aldrich | C3306 | |
| Kılcal Damarlar, 1,2 mm Dış Çap, 0,9 mm İç Çap, filamentli | World Precision Instruments | 1B120F-6 | |
| CSU-W1 İplik Diski/Yüksek Hızlı Geniş Alan | Nikin | N/A | Nikon CSU-W1 geniş görüş alanına sahip Ti ters floresan mikroskobu konfokal. |
| Dumont Tıbbi Cımbız Stil 5 | Thomas Scientific | 72877-D | |
| Alevli-Kahverengi P897 çektirme | Sutter Aletleri | N/A | https://www.sutter.com/manuals/P-97-INT_OpMan.pdf |
| KCl | Millipore 529552 | ||
| MgSO4.7H2O | Sigma-Aldrich | M2773 | |
| mikromanipülatörler | Dünya Hassas Aletler | WPI M3301R | |
| Fare anti-Dld | Zenon | Thermofisher | |
| Fare IgG engelleme tamponu | |||
| Zeiss | N/A | ||
| Tricaine | Sigma-Aldrich | E10521 | |
| UltraPureTM düşük erime noktalı agaroz | Canlandırıcı | 16520050 |
Kaynaklar
- Baonza, A., Garcia-Bellido, A. Notch signaling directly controls cell proliferation in the Drosophila wing disc. Proceedings of the National Academy of Sciences. 97 (6), 2609-2614 (2000).
- Chitnis, A. Developmental Dynamics. 235 (4), 886-894 (2006).
- Daeden, A., Gonzalez-Gaitan, M. Endosomal trafficking during mitosis and notch-dependent asymmetric division. Progress in Molecular and Subcellular Biology. 57, 301-329 (2018).
- Le Borgne, R., Schweisguth, F. Notch signaling: endocytosis makes delta signal better. Current Biology. 13 (7), 273-275 (2003).
- Chapman, G., et al. Notch1 endocytosis is induced by ligand and is required for signal transduction. Biochimica et Biophysica Acta. 1863 (1), 166-177 (2016).
- Schroeter, E. H., Kisslinger, J. A., Kopan, R. Notch-1 signalling requires ligand-induced proteolytic release of intracellular domain. Nature. 393 (6683), 382-386 (1998).
- Coumailleau, F., Fürthauer, M., Knoblich, J. A., González-Gaitán, M. Directional Delta and Notch trafficking in Sara endosomes during asymmetric cell division. Nature. 458 (7241), 1051-1055 (2009).
- Derivery, E., et al. Polarized endosome dynamics by spindle asymmetry during asymmetric cell division. Nature. 528 (7581), 280-285 (2015).
- Matsuda, M., Chitnis, A. B. Interaction with Notch determines endocytosis of specific Delta ligands in zebrafish neural tissue. Development. 136 (2), 197-206 (2009).
- Kressmann, S., Campos, C., Castanon, I., Fürthauer, M., González-Gaitán, M. Directional Notch trafficking in Sara endosomes during asymmetric cell division in the spinal cord. Nature Cell Biology. 17 (3), 333-339 (2015).
- Dong, Z., Yang, N., Yeo, S. -Y., Chitnis, A., Guo, S. Intralineage directional Notch signaling regulates self-renewal and differentiation of asymmetrically dividing radial glia. Neuron. 74 (1), 65-78 (2012).
- Zhao, X., et al. Polarized endosome dynamics engage cytoplasmic Par-3 that recruits dynein during asymmetric cell division. Science Advances. 7 (24), (2021).
- Zhao, X., Garcia, J., Royer, L. A., Guo, S. Colocalization analysis for cryosectioned and immunostained tissue samples with or without label retention expansion microscopy (LR-ExM) by JACoP. Bio-Protocol. 12 (5), 4336(2022).
- Gutzman, J. H., Sive, H. Zebrafish brain ventricle injection. Journal of Visualized Experiments. (26), e1218(2009).
- Sive, H. L., Grainger, R. M., Harland, R. M. Calibration of the injection volume for microinjection of Xenopus oocytes and embryos. Cold Spring Harbor Protocols. 2010 (12), (2010).
- Edelstein, A., Amodaj, N., Hoover, K., Vale, R., Stuurman, N. Computer control of microscopes using µManager. Current Protocols in Molecular Biology. , Chapter 14, Unit 14.20 (2010).
- Lukinavičius, G., et al. Fluorogenic probes for multicolor imaging in living cells. Journal of the American Chemical Society. 138 (30), 9365-9368 (2016).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
