Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Doğurganlığın Korunması için Yumurtalık Dokusu Oosit-In Vitro Maturasyonu

2.4K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/65255

⸱

17 Mayıs 2024

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Brussels IVF, University Hospital Brussels, Vrije Universiteit Brussel, 2Follicle Biology Laboratory (FOBI), Vrije Universiteit Brussel

Bu makalede

Özet

Burada, yumurtalık dokusu kriyoprezervasyonuna ihtiyaç duyan hastalara gerçekçi ek doğurganlık koruma seçenekleri sunan bir tıbbi yardımlı üreme (MAR) laboratuvarında erişilebilir bir teknik olan yumurtalık dokusu oosit-in vitro olgunlaşması (OTO-IVM) sunulmaktadır.

Özet

Olgun oosit vitrifikasyonu, infertilite riski taşıyan kadınlarda fertiliteyi korumak için standart bakımdır. Bununla birlikte, yumurtalık dokusu kriyoprezervasyonu (OTC), acilen gonadotoksik tedaviye başlaması gereken kadınlarda veya prepubertal çocuklarda doğurganlığı korumak için hala tek seçenektir. Kriyoprezervasyon için yumurtalık korteksi hazırlığı sırasında, medüller doku çıkarılır. Büyüyen antral foliküller, yumurtalığın korteks-medüller arayüzünün sınırında bulunur ve bu işlem sırasında kırılır ve kümülüs-oosit kompleksini (COC) serbest bırakır. Orta ve parçalanmış medüller dokuyu derinlemesine inceleyerek, bu olgunlaşmamış kümülüs-oosit kompleksleri, OTC prosedürüne müdahale etmeden tanımlanabilir. Yumurtalık dokusundan elde edilen olgunlaşmamış oositler , in vitro olarak başarılı bir şekilde olgunlaştırılabilir ve doğurganlığın korunması için ek bir gamet kaynağı oluşturur. OTC, bir tıbbi yardımlı üreme laboratuvarı içinde veya yakınında gerçekleştirilirse, gerekli tüm in vitro matürasyon (IVM) ve oosit vitrifikasyon araçları elinizin altında olabilir. Ayrıca, remisyon ve çocuk isteği üzerine, hastanın doğurganlık restorasyonu için birden fazla seçeneği vardır: yumurtalık dokusu nakli veya vitrifiye / ısıtılmış oositlerin tohumlanmasından sonra embriyo transferi. Bu nedenle, yumurtalık dokusu oosit-in vitro olgunlaşması (OTO-IVM) değerli bir ek doğurganlık koruma tekniği olabilir.

Giriş

Gonadotoksik tedavi, cinsiyet değiştirme tedavisi için planlanan kadınlar veya erken yumurtalık yetmezliği için genetik yatkınlığı olan kadınlar için doğurganlığın korunması (FP) seçenekleri, hastanın sağlığına ve yaşına, mevcut zaman dilimine, tedavi türüne, hastanın tercihine ve tercih edilen doğurganlık merkezinde mevcut olan FP prosedürlerine bağlıdır. Gonadotropinlerle yumurtalık stimülasyonu ve tıbbi yardımlı üreme (MAR) laboratuvar döngüsünde oosit toplanmasından sonra elde edilen olgun oositlerin vitrifikasyonu, FP 1,2 için tercih edilen seçenek olarak kabul edilir. Bununla birlikte, prepubertal kızlar, acil gonadotoksik tedavi veya gonadektomi başlanması gereken kadınlar veya gonadotoksik tedaviye bağlı kalıcı amenore riski yüksek olan kadınlar için, gonadotropinlerle yumurtalık stimülasyonu döngüsü mümkün değildir ve FP 1,2 için kabul edilen ve geçerli bir teknik olan yumurtalık dokusu kriyoprezervasyonu (OTC), 3, tek seçenektir. OTC'nin amacı, yumurtalık korteks dokusundaki binlerce uykuda olan ilkel folikülü kriyoprezervasyon yapmaktır, bu da donmuş / çözülmüş dokunun kalan yumurtalığa nakledilmesinden sonra veya temsili doku fragmanlarında minimal rezidüel hastalığın dikkatli bir şekilde taranmasından sonra bir periton cebinde büyümeye devam edebilir.

Kriyoprezervasyona uygun 1-2 mm kalınlığında kortikal parçalar elde etmek için yumuşak medüller dokunun çıkarılması gerekir. Bu medüller doku tipik olarak, büyümelerine ve genişlemelerine izin vermek için sert yumurtalık korteksinden kaçan çeşitli gelişim aşamalarında büyüyen folikülleri gerektirir4. Uzun yıllardır, birkaç laboratuvar, yumurtalık dokusu oosit IVM (oto-IVM) olarak adlandırılan in vitro maturasyon (IVM)5,6,7 kullanılarak yumurtalık kortikal fragmanı hazırlandıktan sonra kalan medüller dokuda bulunan foliküllerden elde edilen bu oositlerin potansiyelini araştırmaktadır. Antral foliküller, çapı 6 mm'den küçük olanlar bile, bir IVMsistemi 8,9 kullanarak olgunlaşabilen, döllenebilen ve sağlıklı bebeklere dönüşebilen kümülüs hücreleriyle çevrili olgunlaşmamış oositler içerir. IVM, polikistik over sendromu (PCOS) hastaları gibi yumurtalık hiperstimülasyon sendromu (OHSS) riski taşıyan kadınlar için standart bakım olarak kabul edilir. Bununla birlikte, FP alanında, yumurtalık stimülasyonu için kontrendikasyon olan durumlarda IVM için sınırlı veri mevcuttur; Transvajinal olarak toplanan oositlerin IVM'si hala yenilikçi olarak kabul edilmektedir ve OTO-IVM deneysel olarak kabul edilmektedir 2,10. Bununla birlikte, OTO-IVM 11,12,13'ten sonraki ilk canlı doğumların raporları,14 numaralı hastalarda FP için OTC gerektiğinde OTO-IVM'nin bir eklenti tekniği olarak kullanılma potansiyelini vurgulamaktadır.

Bu çalışma, MAR laboratuvarında OTO-IVM'nin benimsenmesi için teknik detaylar sunmakta ve elde edilen sonuçları tek bir merkezde göstermektedir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

OTO-IVM ile ilgili mevcut çalışma, UZ-Brüksel yerel Etik Komitesi tarafından onaylanmıştır (proje 2008/068 ve proje 2022/303 eki). Tüm hastalar yazılı bilgilendirilmiş onam imzaladı. Her hasta, hastanın tercihleri dikkate alınarak optimal FP tedavi planını oluşturmak için üreme tıbbı uzmanı bir doktor, navigatör hemşire ve sevk eden onkolog tarafından ayrı ayrı değerlendirildi14. Kısacası, OTC için uygun olan hastalar acil FP ihtiyacı içindedir ve 36 yaşından küçüktür14. OTC'yi OTO-IVM ile birleştirmek için, OTC'den önceki 6 ay içinde kemoterapi veya radyoterapi uygulanmış olamaz.

1. Laboratuvar ortamı ve personeli

  1. OTC'yi A Sınıfı laminer akış kabininde gerçekleştirin.
  2. OTC'yi iki operatörle gerçekleştirin: biri laminal akış kabininde aseptik olarak çalışıyor ve ikincisi steril olmayan tüm malzemeleri bakterisit ve sporisit dekontaminan sprey ile temizliyor ve malzemeleri ve malzemeleri aseptik olarak ilk operatöre teslim ediyor. Yumurtalık korteksini tezgah üstü soğutucu bir kapakta (± 4 °C) işleyin.
  3. Kümülüs-oosit kompleksi (COC) aramasını, ısıtılmış bir aşamada (37 ° C) bir MAR laboratuvarında stereomikroskop ile ikinci bir laminer akış kabininde gerçekleştirin.
  4. Medullar kalıntılardan COC'nin alınmasını gerçekleştirin (bölüm 3 ve 4) ve IVM sürecini başlatın (bölüm 5). Bu, üçüncü bir operatör tarafından yapılır.

2. Medya hazırlığı

NOT: Bu prosedür için beş tür ortam kullanılır (aşağıda ayrıntılı olarak açıklanmıştır): OTC işleme ortamı, OTC dondurma ortamı, Arama ortamı, LAG ortamı ve IVM ortamı. Ortam hazırlarken, bölüm 1'de ayrıntılı olarak açıklandığı gibi akış kabininde aseptik olarak çalışın. Her prosedür için yeni, açılmamış reaktifler kullanın ve üretilen ortamın sterilitesini belirlemek için kullanılan tüm tek kullanımlık malzemelerin sterilitesini koruyun.

  1. OTC işleme ortamı
    1. Leibovitz'in L15 ortamını 4 mg / mL insan serum albümini (HSA), 100 U / mL penisilin ve 100 μg / mL streptomisin ile destekleyin (bkz.
    2. OTC işleme ortamını kullanıma kadar buzdolabında saklayın (en fazla 2 gün).
      NOT: Yumurtalık dokusunu durulamak ve işlemek için OTC işleme ortamı kullanın ve soğuk (0-4 °C) kullanın.
  2. OTC dondurma ortamı
    1. Leibovitz'in L15 ortamını 1.5 M dimetil sülfoksit (DMSO) ve 4 mg / mL HSA ile destekleyin.
    2. OTC dondurma ortamını kullanıma kadar buzdolabında saklayın (en fazla 2 gün).
  3. Arama ortamı
    NOT: Arama ortamı (oosit kullanımı için HEPES tamponlu bir ortam) ticari olarak temin edilebilir (Malzeme Tablosuna bakınız) ve kullanıma hazırdır. Medulla parçaları arasında COC ararken filtreyi durulamak ve COC'yi toplamak için Arama ortamını kullanın (bölüm 4).
    1. Altı adet 14 mL yuvarlak tabanlı, steril tüpü 6 mL Arama ortamı ile doldurun.
    2. 350 μL yağ ile kaplanmış 500 μL Arama ortamı ile 4 oyuklu bir tabak hazırlayın (bkz. Malzeme Tablosu).
    3. Yumurtalık dokusu gelmeden önce tüpleri ve 4 oyuklu tabağı en az 1 saat boyunca 37 ° C'de ısıtın. HEPES tamponlu ortam CO2 inkübasyonu gerektirmez.
  4. LAG orta
    NOT: Ticari olarak temin edilebilen IVM sistemi (Malzeme Tablosuna bakınız) iki farklı ortamdan oluşur: LAG ortamı ve IVM ortamı, aşağıda ayrıntılı olarak açıklandığı gibi desteklenmesi gerekir. LAG ortamı, COC'leri durulamak için kullanılır, ancak IVM sisteminin eklenmesi tarafından önerildiği gibi, IVM ortamında IVM'den önce 2-3 saatlik bir inkübasyon süresi için de kullanılabilir.
    1. Piyasada bulunan, kullanıma hazır LAG ortamını kullanın (bkz. Malzeme Tablosu).
  5. IVM ortamı
    1. Ticari olarak temin edilebilen IVM ortamını 10 mg / mL HSA, 75 mIU / mL folikül uyarıcı hormon (FSH) ve 100 mIU / mL insan koryonik gonadotropin (hCG) ile destekleyin.
    2. Bir oyuklu LAG ortamı ve üç oyuklu takviyeli IVM ortamı içeren 4 oyuklu bir kültür kabı hazırlayın: 350 μL yağ tabakası ile kaplanmış 500 μL ortam.
    3. Çanağı gece boyunca bir inkübatörde 37 °C'de %6CO 2 ve %20 O2 içinde dengeleyin, bu da IVM kültürü için en uygun ortamdır.

3. Yumurtalık korteksi hazırlığı

NOT: Laparoskopik tüm over çıkarılması Jadoul ve ark.15 tarafından tarif edildiği gibi gerçekleştirildi.

  1. Yumurtalık laboratuvara geldikten sonra, yumurtalığı OTC işleme ortamı ile 100 mm'lik bir Petri kabına aktararak OTC işleme ortamında (adım 2.1) iki kez yıkayın.
  2. Bir neşter ile yumurtalığı uzunlamasına ikiye bölün (Şekil 1A).
  3. Taze bir neşter ile medüller dokuda hem dikey hem de yatay olarak birkaç kesi yapın. Kortekse zarar vermekten kaçının. OTC işleme ortamındaki foliküler sıvıyı serbest bırakmak için medulla içindeki çeşitli boyutlardaki sert antral folikülleri neşter ile nazikçe delin.
  4. Yumuşak medulla dokusunu cerrahi makasla küçültün (Şekil 1B). Bu prosedür birkaç dakika sürebilir.
  5. Budama işlemi sırasında yumurtalık kabuğunu taze OTC işleme ortamı olan yeni bir tabağa koyun.
  6. COC'leri aramaya başlamak için çanağı medüller fragmanlar ve serbest bırakılan foliküler sıvının (Şekil 1C) ikinci akış kabinine aktarın.
  7. İstenilen korteks dokusu kalınlığı (1-2 mm) elde edilene kadar 3.4 ila 3.6 arasındaki adımları tekrarlayın.
  8. Korteksi yaklaşık 8 mm x 5 mm'lik parçalar halinde dilimleyin.
  9. Parçaları, 100 mm'lik Petri kaplarında yaklaşık 25 mL OTC dondurma ortamında (adım 2.2) 10 dakika boyunca art arda 3x inkübe edin.
  10. Bir parçayı bir kriyoviyalde 800 μL OTC dondurma ortamına yerleştirin.
  11. Bir sıcaklık kontrolörü tarafından kontrol edilen bir kriyo odasında yavaş bir dondurma protokolü kullanarak yumurtalık dokusunu dondurarak saklayın (Malzeme Tablosuna bakınız): -2 °C/dk'da 4 °C ila -7 °C, -7 °C'de manuel tohumlama, -0,3 °C/dk'da -7°C ila -40 °C, -10 °C/dk'da -40 °C ila -100 °C, ve -100 °C'de kriyoviyalleri sıvı nitrojene daldırın ve saklayın.

4. COC'leri arayın

  1. COC araması için laminer akış kabinini hazırlayın.
    1. 60 mm'lik kültür kaplarını laminer akış kabinindeki stereomikroskop altında ısıtılmış aşamada ısıtın.
    2. 6 mL önceden ısıtılmış Arama ortamı (adım 2.3.1) ile 14 mL tüpleri ısıtılmış bir bloğa ve Arama ortamı ile önceden ısıtılmış 4 oyuklu çanağı laminer akış kabininde mikroskop altında ısıtılmış aşamaya koyun.
    3. Steril bir filtre (hücre süzgeci, 70 μm ağ boyutu; Malzeme Tablosuna bakınız) aşağıdan aşağıya bir kültür kabına yerleştirin.
    4. Kullanım için 290-310 μm'lik bir cam kılcal damar alın: oosit-kümülüs hücre bağlantısına zarar vermemek için 290-310 μm'den daha küçük kılcal damarlar kullanmayın.
    5. 1 mL filtre ucu ve 1 mL pipetin mevcut olduğundan emin olun.
  2. OTC laminer akış kabininden (4 °C) medüller parçalarla ilk kabı alın ve tabağı mümkün olan en kısa sürede IVM laminer akış kabinindeki ısıtılmış aşamaya (37 °C) koyun.
    NOT: Medullar fragmanlar ve foliküler sıvının ilk tabağı, kanla dolu yumurtlanmış foliküllerden veya yumurtalığın damar sisteminden gelen kanla kontamine olabilir. Kırmızı kan hücreleri net görüşü bulanıklaştırır ve COC arayışını zorlaştırır. Kırmızı kan hücrelerini yıkamak için kontamine ortam uzaklaştırılmalıdır (bkz. adım 4.3).
  3. Aşağıdaki adımları izleyerek kan hücresi kontaminasyonunu giderin.
    1. Membranı ıslatmak için filtre membranının (70 μm hücre süzgeci) üzerine 2 mL Arama ortamı pipetleyin ve ortamı yakalayan kabı ısıtılmış aşamada bir kenara koyun.
    2. Filtreyi ters çevirin ve sapı yeni bir kültür kabının kenarına gelecek şekilde yerleştirin ve filtrenin alt kısmı ile bir eğim oluşturun.
    3. 1 mL'lik bir uç kullanarak medüller fragmanlar arasında kanla kontamine olmuş ortamı toplayın ve kontamine ortamda bulunan COC'leri yakalamak için filtre zarının üzerine hafifçe üfleyin (Şekil 1D).
    4. Kanla kirlenmiş ortamın çoğu giderilene kadar adım 4.3.3'ü tekrarlayın.
    5. COC'yi her zaman kültür ortamında asılı tutmak için medüller parçaların üzerine hemen taze Arama ortamı dökün.
    6. Filtre zarındaki kırmızı kan hücrelerini durulamak için eğimli filtre zarını 2 mL Arama ortamı ile nazikçe durulayın.
    7. Filtreyi aşağıdan aşağıya doğru yeni bir kaba yerleştirin ve COC'yi filtre zarından tabağı dolduran ortama atmak için filtreye 3-4 mL Arama ortamı dökün. Filtreyi çıkarın. Filtre membranının kurumamasını (ve henüz dışarı atılmamış olası COC'leri) sağlamak için, filtreyi ilk kez ıslatmak için kullanılan ilk kabın içine filtreyi aşağıdan aşağıya daldırın.
    8. 10x-50x büyütme ile stereo mikroskop altında görsel inceleme ile COC'ler için dışarı atılan ortamı hemen inceleyin. Koyu renkli, kompakt çevreleyen kümülüs hücrelerinden oluşan bir kenara sahip berrak yarı saydam oositleri arayın (Şekil 1E). Ortamı tabağın içinde döndürün ve ortamı tekrar inceleyin.
    9. Filtreyi yeni bir kapta ikinci kez durulayın ve dışarı atılan ortamı COC'ler açısından inceleyin.
    10. Kalan COC'ler için filtrenin daldırıldığı çanaktaki ortamı inceleyin.
    11. COC'leri bir cam kılcal damar ile Arama ortamını içeren 4 oyuklu tabağa aktarın (Şekil 1E). Bulaşıkları her zaman ısıtılmış sahnede tutun.
  4. Kontamine edici kan hücrelerini medüller fragmanlarla tabaktan çıkardıktan ve tabağı berrak Arama ortamı ile doldurduktan sonra medüller fragmanlar arasında COC'ler için arama yapın. Meduler parçaların etrafında hareket etmek için cam kılcal damarı kullanın ve COC'leri bulmak için ortamı tabakta döndürün. Bir oosit varlığından şüpheleniliyorsa, 1 mL'lik bir şırınga üzerinde tüberkülin iğneleri ile büyük medüller parçaları ayırın.
  5. Arama ortamı ile 4 oyuklu tabaktaki tüm sağlam COC'leri toplayın.
    NOT: Tipik bir OTC prosedüründe, korteks dokusu, yumurtalık kabuğunun taze besiyeri olan yeni bir tabağa taşındığı ve kalıntıların COC araması için IVM akışına aktarıldığı üç ardışık 100 mm'lik tabak kullanılarak medulladan ayrılır. Genellikle, sadece ilk yemek kan hücrelerinin çıkarılmasını gerektirir; ikinci ve üçüncü çanaklarda daha az medüller fragman bulunur ve doğrudan fragmanlar arasında ve besiyerinde COC araması yapılır.

5. COC'lerin IVM'si

  1. COC'leri Arama ortamı ile temiz bir kuyuda durulayın.
  2. Önceden dengelenmiş IVM kültür kabını (bir kuyucuklu LAG ortamı ve üç kuyucuklu IVM ortamı içeren 4 oyuklu çanak) inkübatörden IVM akış kabinindeki ısıtılmış aşamaya taşıyın.
  3. COC'leri içeren IVM kültür kabını hasta bilgileriyle etiketleyin.
  4. COC'leri LAG ortamında (2-3 sn) durulayın ve bunları takviye edilmiş IVM ortamı olan üç kuyucuktan birine yerleştirin. COC'leri kuyu başına yaklaşık 10 COC'lik gruplar halinde kültürleyin. Gelişimsel potansiyellerini ciddi şekilde tehlikeye atmış oldukları bilindiğinden, bağlı kümülüs hücrelerinden yoksun çıplak oositleri kültürden çıkarın.
  5. Çanağı 30 saat boyunca 37 °C, %6CO2 ve %20 O2'de bir inkübatöre yerleştirin.

6. Olgun oositlerin ele alınması

  1. 80 IU hyaluronidaza kısa bir süre maruz bırakarak ( Malzeme Tablosuna bakınız) ve 30 saatlik IVM'den sonra hafif mekanik pipetleme ile çevredeki kümülüs hücrelerinin oositlerini soyun.
  2. İlk polar cismin ekstrüzyonu ile olgun oositleri tanımlayın.
  3. Hastanın tercihine bağlı olarak olgun oositleri vitrifikasyon veya dölleyin.
    NOT: 30 saatlik IVM'den sonraki olgunlaşma kontrolü kabul edilebilir çalışma saatlerinin dışında kalırsa, IVM süresi 28 saate kadar kısaltılabilir veya 42 saate kadar uzatılabilir. 30 saat sonra sadece birkaç olgun oosit elde edilirse, olgunlaşmamış oositler, kümülüs hücrelerinden yoksun orijinal IVM kuyucuğunda gece boyunca ek olarak kültürlenebilir ve ertesi sabah olgunlaştığında vitrifikasyon veya intrasitoplazmik sperm enjeksiyonu (ICSI) için kullanılabilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Son on yılda, OTC için ooferektomi veya yumurtalık biyopsisi yapılan 98 hastaya da OTO-IVM önerildi. Burada sunulan sonuçlar, 7,13'ten önce yayınlanan klinik programın bir güncellemesidir. Yumurtalık dokusunun işlenmesi sırasında elde edilen olgunlaşmamış oositler, ağırlıklı olarak 30 saat boyunca in vitro olarak olgunlaştırıldı. Bununla birlikte, pratik nedenlerle veya 28-42 saat arasında değişen düşük olgunlaşma nedeniyle daha esnek bir olgunlaşma süre...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

FP prosedürünün önceliği her zaman yumurtalık korteksini klinikte doğrulanmış standart çalışma protokolüne göre manipüle etmek ve dondurmaktır. FP'deki bir dezavantaj, OTC ve OTO-IVM ile ilgili yayınlanmış literatürde standart bir protokolün bulunmamasıdır. Klinik ortamda dondurma/vitrifikasyon ve çözme/ısınma arasında büyük bir zaman aralığı olduğu için tekniklerin ve uyarlamaların etkinliğini ve geçerliliğini değerlendirmek zordur. OTO-IVM'nin verimliliğini artırmak için OTC protokolün...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların rekabet eden hiçbir mali çıkarı yoktur.

Teşekkürler

Bu çalışma, Brüksel IVF'nin IVF laboratuvarında, VUB, Universitair Ziekenhuis, Brüksel'de gerçekleştirildi. Yazarlar, bir MAR laboratuvarı içinde bir doğurganlık koruma birimi kurmak için gereken yüksek becerileri, doğrulukları ve esneklikleri için tüm Brüksel IVF laboratuvar ekibi üyelerine teşekkür eder.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
1000 ve mikro; L filtre uçlarıEppendorf / VWR International613-6780COC arama
Tezgah Üstü SoğutucuFisher Scientific15-350-54Tezgah Üstü Soğutucu kapak, dokuyu hazırlamak için kullanılır, dondurucu ortam soğutmalı kriyovialleri tutmak için Tezgah Üstü Soğutucu tüp tutucu kullanılır
Corning Hücre kültürü kabı, işlenmemiş, 100 mmCorning/VWR International430591Yumurtalık dokusu hazırlığı için
CryoSure-DMSOWAK Chemicals0482Yumurtalık dokusu kriyoprezervasyonu için kriyoprotektan
KümülazOrigio/CooperSurgical16125000Asonrası kümülüs hücresinin çıkarılması için rekombinant insan hyaluronidaz enzimi
: SuproxMedipure LTDMP016Bakterisit ve sporisit etkisi ile aseptik kullanım için dezenfekte edici çözelti
Tek kullanımlık neşterlerSwann-Morton0511Yumurtalık dokusu hazırlığı
Falcon 14 mL Yuvarlak Tabanlı Polistiren Test Tüpü, Geçmeli Kapaklı, SterilFalcon/VWR InternationalBDAA352057Orta boy kap 
Falcon Hücre süzgeci 70 & mFalcon / VWR International352350Kırmızı kan hücresi kontaminasyonunun giderilmesi ve COC araması için filtre
Donma kontrolü Ampul Kriyoodası ve Sıcaklık Kontrol CihazıKriyolojikCL-8800i ve nbsp;   CC60ASYavaş dondurma makinesi
FSH: Menopur 75 IUFerringBE197504Folikül Uyarıcı Hormon: IVM ortamı için takviye
Pipet 290-310 ve mikro; mVitrolife15538COC araması: oosit-kümülüs hücre bağlantısına zarar vermeden COC'nin nazikçe aktarılması
hCG: Brevactid 5000 IEFerring5008001036İnsan Koryonik Gonadotropin: IVM ortamı için takviye
Yüksek güvenlikli tüpCryoBioSystem022252kriyoviyal, güvenli kriyodepolama için ısı yalıtımlı
HSA çözümüVitrolife10064İnsan serumu Albümini: IVM ortamı için takviye
Leibovitz'in L-15 ortamıYaşam Teknolojileri Avrupa31415-029Yumurtalık dokusu hazırlığı için işleme ortamı
MediCult IVM sistemiOrigio/CooperSurgical82214010hem LAG hem de IVM ortamı içeren IVM için ortam. IVM ortamının protokolde ayrıntılı olarak açıklandığı gibi desteklenmesi gerekir
METZENBAUM fino makas 140 mmKirurjik BakımVIZ08280314İlk medulla çıkarılması için orta boy makas
IVF için Nunc 4 kuyulu tabaklarNunc/VWR International144444COC araması ve IVM kültürü sırasında COC toplanması
Nunc Invitro fertilizasyon Bacalı Kapaklı Petri Kabı, 60 mm, Pirojenik Olmayan, SterilTermo COC araması için Bilimsel/VWRNUNC150270Kabı
Oosit işleme ortamı: Heparin ile yıkama ortamıOrigio/CooperSurgical10765060COC araması için arama ortamı
IVM kültürü içinOvoilVitrolife10029
Penisilin / Streptomisin karışımıYaşam Teknolojileri Avrupa15140-148OTC işleme ortamı için ek
Makas, kavisli, 150 mm uzunluğunda, 20 mm bıçakChirurjik BakımVIREBST999-SCArtık medulla çıkarılması için küçük boyutlu makas
IVM Dekontaminasyon spreyi yağı

Kaynaklar

  1. Practice Committee of the American Society for Reproductive Medicine. Fertility preservation in patients undergoing gonadotoxic therapy or gonadectomy: a committee opinion. Fertility and Sterility. 112 (6), 1022-1033 (2019).
  2. Anderson, R. A., et al. ESHRE guideline: female fertility preservation. Human Reproduction Open. 2020 (4), (2020).
  3. Karavani, G., et al. Chemotherapy-based gonadotoxicity risk evaluation as a predictor of reproductive outcomes in post-pubertal patients following ovarian tissue cryopreservation. BMC Women's Health. 21 (1), 201(2021).
  4. Fiorentino, G., et al. Biomechanical forces and signals operating in the ovary during folliculogenesis and their dysregulation: implications for fertility. Human Reproduction Update. 29 (1), 1-23 (2023).
  5. Revel, A., et al. Oocyte collection during cryopreservation of the ovarian cortex. Fertility and Sterility. 79 (5), 1237-1239 (2003).
  6. Fasano, G., Moffa, F., Dechène, J., Englert, Y., Demeestere, I. Vitrification of in vitro matured oocytes collected from antral follicles at the time of ovarian tissue cryopreservation. Reproductive Biology and Endocrinology. 9, 150(2011).
  7. Segers, I., et al. In vitro maturation (IVM) of oocytes recovered from ovariectomy specimens in the laboratory: a promising "ex vivo" method of oocyte cryopreservation resulting in the first report of an ongoing pregnancy in Europe. Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 32 (8), 1221-1231 (2015).
  8. Guzman, L., et al. Developmental capacity of in vitro-matured human oocytes retrieved from polycystic ovary syndrome ovaries containing no follicles larger than 6 mm. Fertility and Sterility. 98 (2), e1-2 (2012).
  9. Mackens, S., et al. Outcome of in-vitro oocyte maturation in patients with PCOS: does phenotype have an impact. Human Reproduction. 35 (10), 2272-2279 (2020).
  10. Practice Committees of the American Society for Reproductive Medicine, the Society of Reproductive Biologists and Technologists, and the Society for Assisted Reproductive Technology. In vitro maturation: a committee opinion. Fertility and Sterility. 115 (2), 298-304 (2021).
  11. Prasath, E. B., et al. First pregnancy and live birth resulting from cryopreserved embryos obtained from in vitro matured oocytes after oophorectomy in an ovarian cancer patient. Human Reproduction. 29 (2), 276-278 (2014).
  12. Uzelac, P. S., Delaney, A. A., Christensen, G. L., Bohler, H. C. L., Nakajima, S. T. Live birth following in vitro maturation of oocytes retrieved from extracorporeal ovarian tissue aspiration and embryo cryopreservation for 5 years. Fertility and Sterility. 104 (5), 1258-1260 (2015).
  13. Segers, I., et al. Live births following fertility preservation using in-vitro maturation of ovarian tissue oocytes. Human Reproduction. 35 (9), 2026-2036 (2020).
  14. Delattre, S., et al. Combining fertility preservation procedures to spread the eggs across different baskets: a feasibility study. Human Reproduction. 35 (11), 2524-2536 (2020).
  15. Jadoul, P., et al. Laparoscopic ovariectomy for whole human ovary cryopreservation: technical aspects. Fertility and Sterility. 87 (4), 971-975 (2007).
  16. Vilela, J. dM. V., Dolmans, M. M., Amorim, C. A. Ovarian tissue transportation: a systematic review. Reproductive Biomedicine Online. 42 (2), 351-365 (2021).
  17. Vanhoutte, L., Cortvrindt, R., Nogueira, D., Smitz, J. Effects of chilling on structural aspects of early preantral mouse follicles. Biology of Reproduction. 70 (4), 1041-1048 (2004).
  18. Arav, A., Zvi, R. Do chilling injury and heat stress share the same mechanism of injury in oocytes. Molecular and Cellular Endocrinology. 282 (1-2), 150-152 (2008).
  19. Nikiforov, D., et al. Improving the maturation rate of human oocytes collected ex vivo during the cryopreservation of ovarian tissue. Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 37 (4), 891-904 (2020).
  20. Vuong, L. N., et al. Live births after oocyte in vitro maturation with a prematuration step in women with polycystic ovary syndrome. Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 37 (2), 347-357 (2020).
  21. Kirillova, A., et al. Improved maturation competence of ovarian tissue oocytes using a biphasic in vitro maturation system for patients with gynecological malignancy: a study on sibling oocytes. Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 38 (6), 1331-1340 (2021).
  22. Segers, I., et al. In Vitro Maturation (IVM) culture conditions: the effect of oxygen tension and medium volume. Human Reproduction. 32, 126-127 (2017).
  23. De Munck, N., Santos-Ribeiro, S., Stoop, D., Van de Velde, H., Verheyen, G. Open versus closed oocyte vitrification in an oocyte donation programme: a prospective randomized sibling oocyte study. Human Reproduction. 31 (2), 377-384 (2016).
  24. Anderson, R. A., McLaughlin, M., Wallace, W. H. B., Albertini, D. F., Telfer, E. E. The immature human ovary shows loss of abnormal follicles and increasing follicle developmental competence through childhood and adolescence. Human Reproduction. 29 (1), 97-106 (2014).
  25. Karavani, G., et al. Age-dependent in vitro maturation efficacy of human oocytes-is there an optimal age. Frontiers in Cell and Developmental Biology. 9, 667682(2021).
  26. Bourg, M., et al. Is in vitro maturation of oocytes retrieved ex vivo from ovarian tissue an effective fertility preservation technique in the presence of organic ovarian cysts. European Journal of Obstetrics and Gynecology and Reproductive Biology. 281, 87-91 (2023).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

Over Yumurtalık Dokusu KriyoprezervasyonuKumulus Oosit KompleksiAntral FoliküllerOosit VitrifikasyonuOver Korteksi HazırlığıOver Dokusu TransplantasyonuEmbriyo Transferi

Bu makale yayımlandı

Video yakında

Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.