Bu çalışma, kritik aort darlığı veya hipoplastik sol kalp sendromu gibi konjenital kardiyak defektlerde görüldüğü gibi, endotelyal-mezenkimal geçişe bağlı fibrozun bir hayvan modelini sunar, bu da ayrıntılı histolojik doku değerlendirmesine, düzenleyici sinyal yollarının tanımlanmasına ve tedavi seçeneklerinin test edilmesine olanak tanır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Endotelyal-mezenkimal geçiş çalışması için yenidoğan heterotopik sıçan kalp nakli modeli
Bu makalede
Özet
Özet
Subendokardiyal doku birikimi ile tanımlanan endokardiyal fibroelastoz (EFE), sol ventrikül (LV) gelişimi üzerinde önemli etkilere sahiptir ve konjenital kritik aort darlığı ve hipoplastik sol kalp sendromu (HLHS) olan hastaların küratif anatomik biventriküler cerrahi onarımını engeller. Cerrahi rezeksiyon şu anda mevcut tek terapötik seçenektir, ancak EFE sıklıkla tekrarlar, bazen komşu miyokarda daha da infiltratif bir büyüme paterni ile.
EFE'nin altında yatan mekanizmaları daha iyi anlamak ve terapötik stratejileri araştırmak için klinik öncesi testlere uygun bir hayvan modeli geliştirilmiştir. Hayvan modeli, EFE'nin olgunlaşmamış kalbin bir hastalığı olduğunu ve klinik gözlemlerle desteklendiği gibi akış bozuklukları ile ilişkili olduğunu dikkate alır. Bu nedenle, yenidoğan sıçan donör kalplerinin heterotopik kalp nakli bu modelin temelidir.
Bir yenidoğan sıçan kalbi, bir ergen sıçanın karnına nakledilir ve alıcının infrarenal aortuna ve inferior vena kavasına bağlanır. Koroner arterlerin perfüzyonu donör kalbin canlılığını korurken, LV içindeki akış durgunluğu çok olgunlaşmamış kalpte EFE büyümesini indükler. EFE oluşumunun altında yatan mekanizma, endokardiyal endotel hücrelerinin, kapakların ve septanın erken embriyonik gelişiminin iyi tanımlanmış bir mekanizması olan ve aynı zamanda kalp yetmezliğinde fibrozisin önde gelen nedeni olan mezenkimal hücrelere (EndMT) geçişidir. EFE oluşumu transplantasyondan sonraki günler içinde makroskopik olarak gözlenebilir. Transabdominal ekokardiyografi, greft canlılığını, kontraktilitesini ve anastomozların açıklığını izlemek için kullanılır. Ötenaziyi takiben, EFE dokusu alınır ve HLHS hastalarından alınan insan EFE dokusu ile aynı histopatolojik özellikleri gösterir.
Bu in vivo model, kalpte EFE gelişim mekanizmalarının incelenmesine ve bu patolojik doku oluşumunu önlemek için tedavi seçeneklerinin test edilmesine olanak tanır ve EndMT ile indüklenen fibrozisin daha genel bir incelemesi için fırsat sağlar.
Giriş
Subendokardiyal dokuda kollajen ve elastik liflerin birikmesiyle tanımlanan endokardiyal fibroelastoz (EFE), inci veya opak kalınlaşmış bir endokard olarak ortaya çıkar; EFE, fetal dönemde ve erken bebeklik döneminde en aktif büyümeye uğrar1. Bir otopsi çalışmasında, hipoplastik sol kalp sendromu (HLHS) olan vakaların %70'i EFE2 varlığı ile ilişkilendirilmiştir.
Fibroblastlar için belirteçleri eksprese eden hücreler, EFE'deki ana hücre popülasyonudur, ancak bu hücreler aynı zamanda bu EFE hücrelerinin kökeninin bir göstergesi olan endokardiyal endotelyal belirteçleri de eksprese eder. Grubumuz....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm hayvan prosedürleri Ulusal Araştırma Konseyi'ne uygun olarak yürütülmüştür. 2011. Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu: Sekizinci Baskı. Hayvan protokolleri, Boston Çocuk Hastanesi'ndeki Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından gözden geçirildi ve onaylandı.
Ameliyattan önce, tüm cerrahi aletler buharla otoklavlanır ve nihai konsantrasyonu 22 mmol / L KCl olan modifiye Krebs-Henseleit tamponu kardiyoplejik bir çözelti olarak hazırlanır (Tablo 1). Çözelti filtre ile sterilize edilir ve gece boyunca 4 °C'de saklanır. Heterotopik neonatal sıçan kalp nakli işlemi için cerrahi mikroskop (12.5....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Greft canlılığı ve dayak
Bu çalışmada, tüm klempler çıkarıldıktan sonra greft canlılığı görsel olarak değerlendirildi ve greftin gözlemlenmesi için açık bir karın ile yaklaşık 10-15 dakikalık bir reperfüzyon süresine izin verildi. Greft canlılığını objektif olarak doğrulamak için aynı skorlama sistemi ameliyat sonunda görsel değerlendirme ve POD 1, POD 7 ve POD 14'te ekokardiyografi için kullanıldı.
0 = organ fonksiyonu yok; 1 = (dinlenme) organ fonksiyonu, sadece minimum k.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Yenidoğan donör sıçan kalbinin alıcının karnına heterotopik transplantasyonuna ilişkin bu hayvan modeli, ayrıntılı histolojik doku değerlendirmesi yoluyla EndMT kaynaklı fibrozu inceleme, düzenleyici sinyal yollarını belirleme ve tedavi seçeneklerini test etme imkanı yaratır. EndMT, kalbin fibrotik hastalıklarının altında yatan mekanizma olduğundan, bu model pediatrik kalp cerrahisi alanında ve ötesinde büyük değere sahiptir. Bu modelde, birçok faktör prosedürün sonucunu olumsuz yönde etkileyebilir. Bu nedenle, donör kal.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Hiç kimse.
Teşekkürler
Bu araştırma, Ek Girişimler - Tek Ventrikül Araştırma Fonu (SVRF) ve Tek Ventrikül Genişletme Fonu (I.F.) ve Avusturya Federal Eğitim, Bilim ve Araştırma Bakanlığı BMBWFC (G.G.'ye) tarafından sağlanan fonlardan OeAD-GmbH'nin Marietta Blau bursu tarafından finanse edilmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Kemirgenler İçin Gelişmiş Ventilatör Sistemi, SAR-1000 | CWE, Inc. | 12-03100 | küçük hayvan ventilatörü |
| aSMA | Sigma | A2547 | İmmünohistokimya için |
| Antikor Axio gözlemcisi Z1 | Carl Zeiss | ters mikroskop | |
| Betadine Çözüm | Avrio Sağlık L.P. | ||
| CD31 | Invitrogen | MA1-80069 | İmmünohistokimya için Antikor |
| DAPI | Invitrogen | D1306 | İmmünohistokimya için Antikor |
| DemeLON Naylon siyah 10-0 | DemeTECH | NL76100065F0P | 10-0 Naylon sütür |
| ETFE IV Kateter, 18G x 2 | TERUMO SURFLO | SR-OX1851CA | entübasyon kanülü |
| Mikro Klips 8mm | Roboz Cerrahi Alet A.Ş. | RS-6471 | mikrovasküler kelepçeler |
| Naylon siyah monofilament 11-0 | CERRAHİ ÖZEL A.Ş | AA0130 | 11-0 Naylon |
| OCT Bileşik | Doku-Tek | 4583 | Donmuş doku örneği için gömme ortamı |
| p-SMAD2/3 | Invitrogen | PA5-110155 | İmmünohistokimya için Antikor |
| , Devirme WorkStand | Hallowell EMC. | 000A3467 | entübasyon için eğik raf |
| İpek Sütürler, Emilmeyen, 7-0 | Braintree Scientific | NC9201231 | İpek sütür |
| Sümüklüböcek/Salyangoz | Abcam | ab180714 | İmmünohistokimya için Antikor |
| Boyasız Kaplamalı Vicryl 5-0 P-3 18" | Ethicon | J493G | 5-0 Vicryl |
| Boyasız Kaplamalı Vicryl 6-0 P-3 18" | Ethicon | J492G | 6-0 Vicryl |
| VE-Cadherin | Abcam | ab231227 | İmmünohistokimya için |
| Antikor Zeiss OPMI 6-SFR | Zeiss | Cerrahi mikroskop | |
| Zen, Blue Edition, 3.6 | Zen | Ters Mikroskop Yazılımı |
Kaynaklar
- Lurie, P. R. Changing concepts of endocardial fibroelastosis. Cardiology in the Young. 20 (2), 115-123 (2010).
- Crucean, A., et al. Re-evaluation of hypoplastic left heart syndrome from a developmental and morphological perspective....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
