İmmünohistokimya ve Dijital Görüntü Analizine Dayalı Endometrial İmmün Hücrelerin Kantitatif Tespiti Platformu

Cong Chen; Chunyu Huang; Yaya Wu; Zhihong Li; Shuyi Yu; Xiaoyan Chen; Ruochun Lian; Rong Lin; Lianghui Diao; Yong Zeng; Yuye Li

doi:10.3791/65643

Yöntem makalesi

İmmünohistokimya ve Dijital Görüntü Analizine Dayalı Endometrial İmmün Hücrelerin Kantitatif Tespiti Platformu

DOI:

10.3791/65643

⸱

13 Ekim 2023

Cong Chen¹ , Chunyu Huang¹^,² , Yaya Wu¹ , Zhihong Li¹ , Shuyi Yu¹ , Xiaoyan Chen¹ , Ruochun Lian¹ , Rong Lin¹ , Lianghui Diao¹^,² , Yong Zeng¹^,² , Yuye Li¹^,²

¹Shenzhen Key Laboratory of Reproductive Immunology for Peri-implantation, Shenzhen Zhongshan Institute for Reproduction and Genetics, Fertility Center, Shenzhen Zhongshan Urology Hospital, ²Shenzhen Jinxin Medical Technology Innovation Center, Co., Ltd.

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada, implantasyon penceresinde tekrarlayan düşükleri olan hastaların endometriyal immün hücrelerini kantitatif olarak analiz etmek için bir dijital immünohistokimya görüntü analiz platformu geliştirildi ve doğrulandı.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tekrarlayan düşüklü (RM) hastaların endometriyal immün mikroçevresini değerlendirmek için, orta luteal faz sırasında endometriyal immün hücreleri kantitatif olarak analiz etmek için bir dijital immünohistokimya görüntü analiz platformu geliştirildi ve doğrulandı. Tüm endometrium örnekleri menstrüel siklusun orta luteal fazında toplandı. Parafine gömülü endometrial dokular 4 μm kalınlığında lamlar halinde kesitlere ayrıldı ve CD56+ uNK hücreleri, Foxp3+ Treg'ler, CD163+ M2 makrofajları, CD1a+ DC'ler ve CD8+ T hücreleri dahil olmak üzere endometriyal immün hücreleri saptamak için immünohistokimya (IHC) boyaması yapıldı. Panoramik slaytlar dijital slayt tarayıcı kullanılarak taranmış ve kantitatif analiz için ticari görüntü analiz sistemi kullanılmıştır. Endometrial immün hücrelerin yüzdesi, toplam endometriyal hücrelerdeki immün hücre sayısının bölünmesiyle hesaplandı. Ticari görüntü analiz sistemi kullanılarak, konvansiyonel görüntü analizi ile analiz edilmesi zor veya imkansız olan endometriyal immün hücrelerin kantitatif değerlendirmesi kolay ve doğru bir şekilde analiz edilebilmektedir. Bu metodoloji, bağışıklık hücreleri arasındaki etkileşim ve farklı üreme yetmezliği hastaları için heterojenliği dahil olmak üzere endometriyum mikro çevresini kantitatif olarak karakterize etmek için uygulanabilir. Endometriyal immün hücrelerin kantitatif değerlendirilmesi platformu, RM hastalarının tanı ve tedavisi için önemli klinik öneme sahip olabilir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tekrarlayan düşük (RM), iki veya daha fazla ardışık gebeliğin kaybıdır ve son yıllarda klinisyenlerin dikkatini çeken kompleks bir hastalıktır. Doğurganlık çağındaki kadınlarda RM görülme oranı %1-%5'tir ¹. Önceki çalışmaların sonuçları, immün faktörlerin RM ^2,3,4,5 patogenezi ile yakından ilişkili olduğunu göstermektedir. Embriyo implantasyonu ve gelişimi için maternal-fetal arayüzde immün homeostazın sürdürülmesi gereklidir. Endometriyal bağışıklık hücreleri, bu homeostazı sürdürmek için trofoblast istilasını teşvik....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Araştırma içeriği ve protokolü, Shenzhen Zhongshan Üroloji Hastanesi araştırma etik komitesi tarafından etik olarak gözden geçirilmiş ve onaylanmıştır. Çalışmaya katılan tüm kadınlar (20-40 yaş) numune toplama ve kullanım için bilgilendirilmiş onam verdi.

1. Patolojik doku kazanımı

Doku toplama için ölçme cetveli, cımbız, gömme kaseti, gömme kağıdı ve kağıt mendil sepeti gibi araçları hazırlayın.
Pipelle kateteri ile standart bir yaklaşım kullanılarak toplanan endometriyal doku miktarının (maş fasulyesinden daha büyük) yeterli olup olmadığını gözlemleyin.
Endometrial dokuyu formalinden gömme ka....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Endometrial immün hücrelerin kantitatif olarak değerlendirilmesi ve insan kaynaklı operasyonel hataların neden olduğu kararsızlığın azaltılması için otomatik immünohistokimyasal tespit ve dijital kantitatif değerlendirme sistemi kullanılarak endometrial immün hücreler için dijital kantitatif analiz platformu kuruldu. İmmünohistokimya görüntü analiz platformu, tekrarlayan düşük (RM) olan hastaların endometriyal immün hücrelerini implantasyon penceresinde kantitatif olarak analiz etmek için kuruldu. Tüm endometrium dokular.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol, RM hastalarının endometriyal immün hücrelerini kantitatif olarak analiz etmek için bir dijital immünohistokimya görüntü analiz platformu oluşturmuştur. Burada, RM hastalarında endometriyal immün mikroçevreyi değerlendirmek için altı endometriyal immün belirteç tespit edildi.

Orta luteal fazda alıcı bir endometriyum, başarılı implantasyon ve hamilelik için anahtardır^27,28. Bu nedenle, endometriyal immün hücrelerin yüzdesini.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar, bu çalışma için rıza gösteren ve örnek bağışlayan tüm kadınlara minnettardır.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
Ad	Şirket	Katalog numarası
Otomatik lamel	Sakuraus	DRS-Prisma-P-JCS& Film-JC2
CD163	GrowGn Biyoteknoloji	NCL-L-CD163
CD1a	Gen Teknolojisi	GM357129
CD56	Gen Teknolojisi	GT200529
CD8	Novocastra	NCL-L-CD8-4B11
Kurutucu	Thermo Fisher	Excelsior ES
Dijital patoloji ve	Indica laboratuvarları	HALO
Foxp3	YILIFANG biyolojik	14-477-82
IHC boyayıcı	Leica	BOND III
Görüntü analiz platformu	Indica labs	HALO
Slayt Tarayıcı	Olympus yaşam bilimleri	VS200

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Practice Committee of the American Society for Reproductive. Evaluation and treatment of recurrent pregnancy loss: a committee opinion. Fertility and Sterility. 98 (5), 1103-1111 (2012).
Dimitriadis, E., Menkhorst, E., Saito, S., Kutteh, W. H., Brosens, J. J. Recurrent pregnancy loss.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Immunohistochemistry Analysis Recurrent Miscarriage Endometrial Tissue Sectioning Immune Cell Quantification Panoramic Slide Scanning Image Analysis Software Immune Cell Markers Tissue Classifier

İmmünohistokimya ve Dijital Görüntü Analizine Dayalı Endometrial İmmün Hücrelerin Kantitatif Tespiti Platformu

Bu makalede

Özet

Özet

Giriş

Protokol

Sonuçlar

Tartışma

Açıklamalar

Teşekkürler

Malzemeler

Kaynaklar

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

İlgili makaleler