Burada, bir sıçan EVLP modeli oluşturmak için gerekli adımları açıklıyoruz ve perfüze akciğerlerle ilişkili inflamatuar profili gösteriyoruz. Amaç, sıçan EVLP modeli hakkındaki bilgi ve deneyimleri yaymak ve bu devrim niteliğindeki teknikle ilişkili biyolojik tepkilerin bütünsel olarak anlaşılmasını sağlamaktır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Akciğer naklinde translasyonel içgörüler için ex vivo akciğer perfüzyon sıçan modelinin oluşturulması
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Akciğer naklinin ilerlemiş akciğer hastalıkları için terapötik bir strateji olarak kurulmasından bu yana, bilim camiası, bağış süreci için uygun olduğu düşünülen düşük sayıda akciğer sorunuyla karşı karşıyadır. Bununla birlikte, son yıllarda, marjinal akciğerleri değerlendirmek ve yenilemek için bir strateji olarak ex vivo akciğer perfüzyonunun (EVLP) geliştirilmesi göz önüne alındığında, bu senaryo olumlu yönde değişmiştir. EVLP'nin büyük nakil merkezlerinde kurulması, hem akciğer fonksiyonunun tanısal doğruluğunu artırarak hem de akciğer greftlerinin yenilenmesi için etkili bir platform oluşturarak akciğer nakli sayısında bir artışa yardımcı olmuştur. Bu bağlamda, etik ve lojistik konularla karşı karşıya kalmanın yanı sıra, akciğer nakli ile ilişkili immünolojik faktörlerin incelenmesinde, güvenilirlikleri, genetik manipülasyon olasılığı ve daha düşük maliyetleri göz önüne alındığında, kemirgen EVLP modellerinin geliştirilmesi önemli hale gelmiştir. Bu makale, bir sıçan EVLP modeli oluşturmak için bir protokolü açıklar ve perfüze akciğerlerle ilişkili inflamatuar profili gösterir. Bu, sıçan EVLP modeli hakkındaki bilginin yayılmasına yardımcı olacak ve bu devrim niteliğindeki teknikle ilişkili biyolojik tepkileri anlamamızı teşvik edecektir.
Giriş
Akciğer transplantasyonu, son yıllarda cerrahi yöntemlerdeki gelişmeler ve immünsüpresyon ile son dönem hastalıklar için terapötik bir strateji olarak kabul edilmiştir. Yüksek talebe rağmen, kabul edilebilir ölen akciğer donörlerinin sayısı diğer katı organlara göre daha düşüktürve gerçekleştirilen daha düşük akciğer nakli sayısına yakınsar 1,2,3. Donör havuzu eksikliğini gidermek için tıp camiası, akciğer bağışı kriterlerini genişletti ve daha önce cansız olduğu düşünülen organları nakil için potansiyel organlara dönüştürdü. Bununla birlikte....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Hayvan deneyleri, Üniversite Sağlık Ağı'nda Hayvan Bakım Komitesi tarafından onaylanan Hayvan Kullanım Protokolü'ne uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Erkek Lewis sıçanlarına (255-330 g) yiyecek ve suya ad libitum erişim verildi. Daha sonra, 12 saatlik gündüz-gece döngüsü ile kontrollü bir ortamda (18-22 °C) muhafaza edildiler. Bu protokolde kullanılan tüm malzemeler, çözümler ve araçlarla ilgili ayrıntılar için Malzeme Tablosuna bakın.
1. Ex vivo akciğer perfüzyon sisteminin başlatılması
- Tüm dönüştürücülerin izole edilmiş perfüzyon organ ekipm....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
20 dakika ile 18 saat arasında değişen CIT'li tüm akciğerler 4 saat boyunca perfüze edilebilir (Şekil 2)13. Uyum, 4 saatlik perfüzyon perfüzyon periyodu boyunca kademeli olarak azalan 18 saatlik CIT hariç çoğu grupta stabildi (Şekil 2A). Buna rağmen, gruplar arasında vasküler direnç, akciğer greft oksijenasyonu ve glukoz seviyelerinde anlamlı bir fark gözlenmedi (Şekil 2B-D
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu çalışma, bir sıçan EVLP protokolü oluşturmak için gerekli adımları açıklamıştır. Burada, donör akciğerlerinin 4 ° C'de 18 saate kadar soğuk statik korumadan sonra 4 saat boyunca perfüze edilebileceğini gösteriyoruz. Bu, akciğer kompliyansı, pulmoner vasküler direnç, perfüzat glikoz/laktat konsantrasyonu ve P/F oranının değerlendirilmesiyle gösterildi.
EVLP platformunun akciğer fonksiyonunun değerlendirilmesinde ve greft yenilenmesinde önemli bir araç olara.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
MC, Traferox Technologies Inc.'in hissedarı ve Lung Bioengineering Inc.'in danışmanıdır. MC, Beyond Air Inc. ve Synklino'dan araştırma desteği almaktadır. Yazarlar, bu yazıda bildirilen sonucu etkileyebilecek herhangi bir rekabet çıkarı olmadığını beyan etmektedir.
Teşekkürler
Şekil 1 , BioRender.com ile oluşturulmuştur (yayın ve lisans haklarının onayı [Sözleşme: BT25KGSKWF]).
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 14 G intravenöz kateter | BD | 381167 | Orotraçal entübasyon |
| 16 G intravenöz kateter | BD | 381157 | Akciğeri yıkamak için kateter |
| 2-0 Dikiş Sofsilk | Covidien | S-305 | Trakeal tüp fiksasyonu |
| 3-0 Dikiş Sofsilk | Covidien | S303 | Arteriyel ve atriyal kanüllerin fiksasyonu |
| Sıçan için IPL-2 Çekirdekli İzole Perfüze Akciğer Sistemi | Harvard Aparatı | 734276 | Ex vivo akciğer perfüzyon (EVLP) sistemi |
| Ketamin (Narketan) | Vetoquinol | 440894 | Sedasyon/anestezi |
| Büyük Akciğer Arteri Kanülü | Harvard Aparatı | 73-0711 | |
| Sol Atriyal Kanül | Harvard Aparatı | 73-0712 | |
| Düşük potasyumlu dekstran glikoz çözeltisi (Perfadex) | XVIVO | 19811 | Koruma çözümü |
| Metilprednizolon sodyum süksinat (SOLU-MEDROL) | Pfizer | 14705 | Anti-inflamatuar |
| Prostaglandin E1 (Prostin VR) | Pfizer | RX297945 | |
| Küçük Hayvan Ventilatörü (Model 683) | Harvard Aparatı | 55-0000 | |
| Sodyum heparin | Leo Pharma | 453811 | |
| Steen Çözümü | XVIVO | 19004 | EVLP sırasında perfüzo akciğerlere tamponlu ekstrasellüler çözeltisi |
| Sugita Aneur klip kıvrımı | Mizuho | 07-940-86 | Trakeal kelepçe |
| Trakeal Kanül | Harvard Aparatı | 73-3384 | |
| Xylazine (Rompun) | Bayer Healthcare | 2169592 | Sedasyon/anestezi |
Kaynaklar
- Chambers, D. C., et al. The International Thoracic Organ Transplant Registry of the International Society for Heart and Lung Transplantation: Thirty-eighth adult lung transplantation report — 2021; Focus on recipient characteristics. The Journal of Heart and Lung Transplantation. 40
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
